Post on 15-Oct-2015
CURSO:
HISTOLOGIA
TEORIA 1:
METODOS DE ESTUDIO DE LAS
CELULAS Y LOS TEJIDOS
UNIVERSIDAD PERUANA CAYETANO HEREDIA
FACULTAD DE ESTOMATOLOGIA
Roberto Beltrn Neira
Departamento Acadmico de Medicina, Ciruga y Patologa Oral
TIPOS DE CELULAS
EUCARIOTICAS
Ncleo delimitado por doble membrana
Histonas asociadas a DNA
PROCARIOTICAS
Ncleo sin envoltura
No histonas
TOMA DE MUESTRA
JSL
PREPARADOS HISTOLOGICOS
FASES:
1 FIJACION
2 INCLUSION
3 CORTE
4 COLORACION
FIJACION
Evita autodestruccin por enzimas
(autolisis) o por bacterias.
Insolubiliza las proteinas
Endurece el tejido para preservar la
morfologa y la composicin
qumica
FIJACION
Fijadores:
Formaldehido 10%(Aldehido
Frmico, Formol )
FIJACION DOBLE. ME
Glutaraldehido (Aldehido
Glutrico) 2%- 6%
Tetraxido de Osmio
INCLUSION
Deshidratacin
Batera de Alcoholes en
grado creciente
70%, 80%, 90% y Alcohol
Absoluto
Formol Deshidratacin Deshidratado
INCLUSION
Diafanizacion (Aclaramiento)
Lquidos usados: Xilol
Necesidad de un liquido miscible en agua y
parafina
Extrae los lpidos
Tejido se torna Translcido
Deshidratado Aclarado
INCLUSION
Inclusin Propiamente
Da consistencia firme a los tejidos
(cortes finos y uniformes)
Sustancias: Parafina (MO)
Resinas Epoxi:
Epon.(ME)
Muestra en parafina fundida (60
grados C)
La temperatura evapora el Xilol
INCLUSION
Inclusin Propiamente
CORTE
MICROTOMO
ESPESOR: MO => 3 -8 um
ME => 0,02 - 0,1 um
CRIOSTATO
Evita pasos antes de
parafina, la
congelacin no
inactiva las enzimas,
no elimina lpidos
JSL
COLORACION
FASES
Lamina
porta Objetos Muestra
A.- Extensin agua (45grados C)
JSL
COLORACION
Desparafinizacin:
Xilol: Disuelve la
parafina.
Hidratacin:
Bateria de Alcholes
de grado decreciente
Coloracin Propiamente
Coloracin propiamente
El tejido es de por s incoloro
Colorantes: son: - cidos
- bases
Forman sales con los radicales
ionizables
Elementos (organelas,
molculas, etc.)
Basfilo: Elemento que se tie
con colorantes bsicos
Acidfilo: Elemento que se tie
con colorantes cidos
COLORANTES
Colorantes Elementos
Bsicos: Hematoxilina Nucleoprotenas
cidas
Ribosomas
Azul de Metileno
Azul de Toluidina Glicoproteinas
Acidos: Eosina Protenas
Fucsina Acida Citoplasmticas
Orange G
TINCIN CON HEMATOXILINA Y EOSINA
La tcnica bsica en el
laboratorio de Histologa
consta de dos etapas de
tincin: pase por
Hematoxilina y pase por
Eosina.
JSL
ACIDO PERYODICO DE SCHIFF (PAS)
Glicgeno, mucina, y
membranas basalesRojo a purpura
Hongos.Rojo a purpura
Ncleo...Azul
JSL
TRICROMICA DE MASSON
NUCLEO..NEGRO
MUSCULO, CITOPLASMA Y
QUERATINAROJO
COLAGENO...AZUL O VERDE
JSL
SUDAN III
Tejido adiposo:
naranja
JSL
METACROMASIA
Colorantes bsicos de
anilina: Azur A, Azul de
toluidina y Azul de metileno.
Se usan para identificar los
Proteoglucanos.
Presentan metacromasia:
mucina, matriz del cartlago,
y los grnulos de las clulas
cebadas Contenido de los grnulos: - Heparina
- Histamina
Azul de Toluidina
Tie los grnulos de color rojo JSL
PROCESAMIENTO DE TEJIDOS DUROS
DIENTE
Descalcifica con Acido Nitrico al 10% DESGASTE
JSL
HUESO
JSL
Deshidratado de las muestras
A continuacin volvemos a deshidratar los
cortes para preservarlos y hacer
duraderas las muestras
JSL
Montaje de las muestras
Finalmente, cubrimos los "portas" con una
delgada lmina de vidrio (cubreobjetos) en
la cual colocamos una gota de medio
adhesivo
JSL
MICROSCOPIO OPTICO
PARTES: - Mecnica y Optica
Optica
Condensador: Proyecta un cono de luz
sobre el objeto
Objetivo: Proyecta imagen aumentada
sobre el ocular
Determina el Lmite de Resolucin
Ocular: Ampla mas
Proyecta la imagen sobre: La
retina, pantalla, placa
fotogrfica
JSL
MICROSCOPIO OPTICO
Lmite de Resolucin
Mnima distancia que deben existir entre dos puntos
para que aparezcan individualmente, es de 0,2 um
Aumento Total
Aumento del X Aumento del = 1200X
Objetivo Ocular
MICROSCOPIO ELECTRONICO
Posee una elevada resolucion 1,0 nm
UNIDAD REPRESENTACION VALOR
Micrmetro1um = 0,001mm
Nanmetro1nm = 0,001um
Basado en el principio de usar un haz de
electrones en vez de rayos luminosos. JSL
Cromatina Indice de Actividad Celular
Ncleo poco teido
DNA poco condensado
> superficie de contacto
Actividad
Ncleo bien teido
DNA muy condensado
< superficie de contacto
< Actividad
INTERPRETACION DE IMAGENES
JSL