7/25/2019 Biotecnología de proteínas recombinantes

http://slidepdf.com/reader/full/biotecnologia-de-proteinas-recombinantes 1/14

Prof. Carlos Scotto Espinoza

Ronald Aquino Ortega

UNIVERS IDAD NAC IONAL AGRAR IA LA MOL INA

ESCUELA DE POSGRADOMAESTRÍA EN ACUIC ULTURA

Crso !" #iot"cnolo$%a Aplica!a a la Acicltra

7/25/2019 Biotecnología de proteínas recombinantes

http://slidepdf.com/reader/full/biotecnologia-de-proteinas-recombinantes 2/14

INTRODUCCI&N•A través del empleo de las “ómicas” en laactividad acuícola, es posible impactar en lamodifcación y mejoramiento genético para:•

Desarrollo de cepas resistentes a enermedades!•"ejoramiento en la tasa de crecimiento!•#onversión alimenticia!•#ontrol $ormonal de ciclos reproductivos!•%dentifcación y tratamiento de enermedades!

•Desarrollo de vacunas!•Desarrollo sostenible!

7/25/2019 Biotecnología de proteínas recombinantes

http://slidepdf.com/reader/full/biotecnologia-de-proteinas-recombinantes 3/14

#IOTECNOLOGÍA DEPROTEÍNAS RECOM#INANTES

•&sta implicada en el aislamiento, produccióny mejoramiento de las propiedades

biológicas de proteínas específcas a partirde diversas uentes naturales tales comoplantas, animales o microorganismos, parasu posterior aplicación en diversos procesos!

•

'n sistema de e(presión est) conormadopor•'n organismo $ospedero•*ector de e(presión

7/25/2019 Biotecnología de proteínas recombinantes

http://slidepdf.com/reader/full/biotecnologia-de-proteinas-recombinantes 4/14

+&&##%-. D&

+%+/&"AD&&012&+%-

.

7/25/2019 Biotecnología de proteínas recombinantes

http://slidepdf.com/reader/full/biotecnologia-de-proteinas-recombinantes 5/14

VENTA'AS ( DESVENTA'AS DELEVADURAS )OSPEDERAS

7/25/2019 Biotecnología de proteínas recombinantes

http://slidepdf.com/reader/full/biotecnologia-de-proteinas-recombinantes 6/14

PRODUCCI&N DE TRIPSIN&GENORECOM#INANTE DE CAMAR&N #LANCO DEL

PACÍ*ICO Litopenaeus vannamei 

•3bjetivo•3btener una uente pura y $omogénea de tripsinógenoo tripsina para el estudio de sus propiedades y supotencial aplicación en la acuicultura!

•41or 5ué6•1or su importancia en los procesos digestivos delcamarón!

•

1or el gran interés sobre la mayor producción delcultivo!•1or el elevado costo de las dietas!•1or la necesidad de contar con tripsinas puras sin tenerelementos tra7a!

7/25/2019 Biotecnología de proteínas recombinantes

http://slidepdf.com/reader/full/biotecnologia-de-proteinas-recombinantes 7/14

•1roblemas:•Actividad proteolítica contra proteínas endógenas!•%nestabilidad proteica por autodigestión de latripsina!

•&strategia de dise8o:•+e basa en la síntesis de su precursor naturalinactivo!

•&l vector de e(presión elegido debe contar con

promotores regulables, con la fnalidad de inducirla producción de la en7ima!•Debe secretarse al medio!•*ector elegido: Pichia pastoris

PRODUCCI&N DE TRIPSIN&GENORECOM#INANTE DE CAMAR&N #LANCO DEL

PACÍ*ICO Litopenaeus vannamei 

7/25/2019 Biotecnología de proteínas recombinantes

http://slidepdf.com/reader/full/biotecnologia-de-proteinas-recombinantes 8/14

•"&/3D339A•+e utili7ó cD.A para tripsinógeno de L.vannamei

•+e clona y usiona con la secuencia se8al del

actor ; de Saccharomyces cerevisiae. &stausión se inserta en el vector de e(presiónp1%#< del sistema de e(presión de  P. pastoris=1romotor A30>?  p1%#</g

•#epa de P. pastoris: 9+>>@!•"étodo de transormación: /écnica deeseroplastos!

•#omprobación de las células transormadas:

•9enotipicamente: 1or 1#2!•enotipicamente: #recimiento en metanol!

PRODUCCI&N DE TRIPSIN&GENORECOM#INANTE DE CAMAR&N #LANCO DEL

PACÍ*ICO Litopenaeus vannamei 

7/25/2019 Biotecnología de proteínas recombinantes

http://slidepdf.com/reader/full/biotecnologia-de-proteinas-recombinantes 9/14

DIAGRAM

AGENERALDE UN

VECTORDEE+PRESI

&N ENPichia pastoris

7/25/2019 Biotecnología de proteínas recombinantes

http://slidepdf.com/reader/full/biotecnologia-de-proteinas-recombinantes 10/14

7/25/2019 Biotecnología de proteínas recombinantes

http://slidepdf.com/reader/full/biotecnologia-de-proteinas-recombinantes 11/14

•as cepas recombinantes se cultivaron en medio mínimo,con metanol al B!C@!

El"ctrofor"sis SDS,PAGE -D

An)lisis proteico del medio de cultivo!

Carril 1 y 4: Marcador de peso molecular.

Carril 2: Extracto proteico de glándulas digestivas de L. vannamei .Carril 3: Proteínas recominantes por una cepa recominante !"11#

7/25/2019 Biotecnología de proteínas recombinantes

http://slidepdf.com/reader/full/biotecnologia-de-proteinas-recombinantes 12/14

Anlisis !" /"st"rn #lot!"sp0s !" 12 3oras !" in!cci4n con 5"tanol

Carril 1 y $: Marcador de peso molecular

Carril 3 y #: Controles negativos

Carril 2: Extracto proteico de glándulas digestivas de L. vannamei .

Carril 4: Medio de cultivo de ce as de tri sin% eno cultivadas en condiciones de inducci%n

7/25/2019 Biotecnología de proteínas recombinantes

http://slidepdf.com/reader/full/biotecnologia-de-proteinas-recombinantes 13/14

7/25/2019 Biotecnología de proteínas recombinantes

http://slidepdf.com/reader/full/biotecnologia-de-proteinas-recombinantes 14/14

GRACIAS.