Post on 05-Jan-2016
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ESTRUCTURA, PROPIEDADES Y FUNCIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS
TRANSFERENCIA DE MATERIAL GENÉTICO I: CONJUGACIÓN
Composición de los ácidos nucleícos
Purinas
PirimidinasAdenina Guanina
Citosina Uracilo Timina
Polímeros lineales de nucleótidos. Nucleótidos cuyos grupo fosfato unen las posiciones 3’ y 5’ de residuos de azúcar consecutivos.
Los fosfatos de estos polinucleótidos tienen carga negativa a pH fisiológico
DNA
22 to 26 Å ancho
Plásmidos• Fragmentos de ADN extracromosómicos. Los plásmidos o
vectores se replican y transcriben de manera independiente del AND cromosómico.
Algunas características de los plásmidos:
• Confieren resistencia a antibióticos.• Confieren resistencia a metales.
pBR322
• Transformación
• Transducción
• Conjugación
Mecanismos de transferencia horizontal de material genético:
Cambio heredable de una célula u organismo conseguido por DNA exógeno.Sólo algunas bacterias pueden ser transformadas, éstas reciben el nombre de competentes.
• El virus bacteriófago se comporta como un vector intermediario entre dos bacterias.
Fusión temporal de dos organismos unicelulares para el intercambio sexual de material genético
Factor F • Elemento en plásmido que le confiere la capacidad de
ser transferido de una bacteria que lo posee a una bacteria que carece de este factor por conjugación. Este factor es portado en el episoma* F
• * Episoma: elemento genético en bacteria que se puede replicar libre en el citoplasma o puede ser insertado y replicado en el cromosoma bacteriano. Un ejemplo de episoma es el plásmido
Tipos de plásmido de acuerdo al factor F
• Plásmidos conjugativos contienen “tra-genes”, los cuales ejecutan complejos procesos de conjugación, como la transferencia de plásmidos a otra bacteria.
• Plásmidos “movilizables” sólo pueden transferirse en presencia de un plásmido conjugativo.
Plasmido F
- Bacterias F+ : si el factor F se encuentra libre en el citoplasma.
- Bacterias Hfr : si el factor F se encuentra integrado en el cromosoma bacteriano.
-Bacterias F-: carecen del factor F (células receptoras)
CONJUGACIÓN BACTERIANA
Apareamiento entre las bacterias: F+ y F-
Células Hfr (high frequency recombination)Apareamiento entre las bacterias: Hfr y F-
Procedimiento experimentalE. coli JM1452StrR (Receptora) + E. coli W3110/F´KmTn3 en LB (Donadora)Tubo con 1 mL LB, 0.5 mL de JM y 0.2 mL de W3Incubación a 37°C por 1 hora sin agitación.Caja petri LB con 2% estreptomicina
E. coli JM1452Str E. coli W3110/F´KmTn3
Mezcla
Sembrado por estría
Incubación por 24 horas a 37 °C, refrigerar a 4 °CParchar 50 colonias aisladas en LB con 1) Estreptomicina y 2) KanamicinaIncubar 24 h a 37 °CObservar y analizar resultadosReportar % de colonias transconjugantes
Sembrado por estría
Actividades para la siguiente semana
Actividad Fecha
1. Protocolo experimental. Conjugación.
A) Realizar conjugación (lleva máximo 1 h y media) y se deja incubando (24 h).Sembrar por estría
Martes 1 de Octubre
2. Protocolo experimental. Conjugación continuación.
B) Parchar 50 colonias de las cepas aisladas en el paso B e incubar 24 h.
Miércoles 2 de Octubre
3. Actividad: Sacar cajas, Observar crecimiento y determinar el porcentaje de colonias transconjugantes
Jueves 3 de Octubre