LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

María Isabel Durango lozano

Rol del Laboratorio de microbiología

• Apoyo en el diagnóstico de las enfermedades infecciosas

1. Identificación del agente etiológico: selección del mejor examen y de la mejor muestra.

2. Informe de susceptibilidad a antimicrobianos.

3. Contribuir al control de la resistencia bacteriana

4. Implementación de tecnología moderna: tiempo de respuesta, sensibilidad y especificidad.

Métodos de diagnóstico microbiológico

• Mayor

rapidez• Alta calidad• Costo/benefici

o

• Observación c/s tinciones

• Cultivos: Identificación/sensibilidad

• Detección de antígenos

• Detección de anticuerpos: serología

• Detección de ácidos nucleicos

Tinción de Gram• Se debe solicitar siempre

• De bajo costo y gran utilidad: 1.Orientación diagnóstica rápida 2. Características inflamatorias 3. infecciones mixtas (anaerobios)

• Sensibilidad analítica: 100.000 bacterias/ml muestra

Baciloscopía

•Se debe solicitar en TODO paciente con síntomas respiratorios.

• De bajo costo y gran utilidad: 1. Rápida 2. Fácil disponibilidad 3. Indice de infectividad

• Sensibilidad analítica: 5.000 a 10.000 bacilos por ml de muestra.

Tinción de Ziehl Neelsen

Tinciones para Hongos

• Diagnóstico de infecciones invasoras en muestras clínicas es difícil.

• Blanco de calcoflúor es una tinción específica para hongos (quitina).

• Mejora la sensibilidad

Cultivos

• Se considera el método de referencia porque permite la

confirmación de género y especie y la determinación de la

susceptibilidad a drogas.

• En el caso de bacterias y hongos la automatización ha

permitido disminuir los tiempos de respuesta (mejores

sistemas de detección).

Cultivos bacterianos y de hongos• Requiere bacterias y hongos viables

• Requieren medios de transporte, especialmente anaerobios

• Medios líquidos son más sensibles que los sólidos

• Una buena alternativa en punciones y muestras líquidas es la inoculación en botellas de hemocultivos

Diferentes plazos de entrega: Cultivo corriente: 48 horas

Cultivo anaeróbico: 7 días

Cultivo de hongos: 7 días a 4

semanas

Cultivo de Micobacterias: 8

semanas

• Diagnóstico macroscópico y microscópico• Identificación y sensibilidad a drogas

Cultivos bacterianos y de hongos

Susceptibilidad bacteriana

• La resistencia bacteriana es un problema emergente

Staphylococcus aureus R a meticilina Streptococcus pneumoniae R a penicilina Enterococcus R a Vancomicina E. coli y K. pneumoniae R a todos los -lactámicos (ESBL)

• Test de susceptibilidad: Estandarización de AAM ensayados e informados Depende de complejidad de los pacientes y patrones locales de R Resultado requiere reporte selectivo e interpretación adecuada

Kirby-Bauer S -I - R

Susceptibilidad bacteriana Concentración inhibitoria

mínima

2 4 8 16

2 4 8 16

2 4 8 16

2 4 8 16

2 4 8 16

CIM 2 S 2

CIM = 4 I 4

CIM = 8 I 8

CIM = 16 R16

CIM 16 R 16

Métodos: Dilución en agar

Ej. Cefazolina, Escherichia coli

Cortes : Sensible= 2 g/ml Intermedio =4- 8 g/ml

Resistente: 16

microbiología

Cumplimiento de la fase pre analítica Adecuada muestra Medios de cultivos atemperados Libres de agua de condensación. Trabajar en una campana de bioseguridad muestras. Uso de mecheros o incinerador

Fernández y cols. 2005. Gestión de calidad en el laboratorio Clínico.

•Recogida de muestras• Responsabilidad y supervisión facultativa• Normas de asepsia• Muestra representativa del proceso• Cantidad/Recipiente/Identificación correcta•Evitar contaminación con flora saprófita• Retrasar tratamiento•Transporte rápido (refrigeración)

ORINA•Frasco de boca ancha y tubo con vacío•Porción media de 1ª orina de la mañana• Limpieza escrupulosa de genitales•La bolsa (niños) se cambiará cada hora • Volumen mínimo 10 ml para cultivo bacterias y Levaduras •50 ml para tuberculosis

HECES (coprocultivo)•No se admitirán heces formes• Frasco de boca ancha•2-5 g de heces recientes (pus, moco, sangre)•Remitir rápidamente al laboratoriomantener a 4ºC si se demora el envío

Exudados /Abscesos Limpiar la superficie con suero

fisiológico y gasa Recoger el pus mediante jeringa y

aguja aspirando de las zonas profundas Cuando sea necesario instilar suero y

aspirarlo nuevamente Sólo cuando lo anterior no sea posible

se utilizaran escobillones enviando

FASE ANALITICA

microbiología

Uso de asas calibradas ( recuento de microorganismos ).

Buena siembra en estría. ( trabajar con colonias perfectamente aisladas ).

Elston D. 2008. Clin Lab Med 28:173-177

Medios de cultivo

Selección de medios de cultivo Generales, selectivos, selectivos-

diferenciales. Necesidades particulares de cada

hospital Comunicación laboratorio – área

clínica . Realización de tablas de siembra.

2007. Clinical Microbiology Procedures Hanbook 2nd Edition . ASM

Identificación de microorganismos

PRIMERA ETAPA : Observación de

la colonia. Ahorro de tiempo

y dinero en el Dx.

Morfología, color Interacción con

el medio ( hemolisis )

Segunda etapa : Diagnostico presuntivo

Medios cromogénicos Sensibilidad a antibióticos: S. pneumoniae S opt S. pyogenes S bac Pruebas complementarias: Oxidasa,catalasa,coagulasa Aglutinación con antisueros

específicos.

Tercera etapa: dx. confirmativo

Basa en realización pruebas bioquímicas

A partir de cultivos puros. Bioquímicas: manuales o por sistemas

semi automatizado.

Control de calidad en el laboratorio microbiológico

Toma de muestra y adecuado transporte.

Manipulación de la muestra rigurosamente.

Control de material y equipos:

Temperatura estufas, refrigeradores Campanas de incubación Pipetas automáticas: calibración Sistemas automatizados

CONTROL DE MEDIOS CULTIVO

Esterilidad del medio: se comprobara en cada lote

Eficacia del medio (utilización de cepas ATCC).

Control de reactivos y discos pruebas diferenciales

Los reactivos se controlan cada vez que se preparan o nuevo frasco

Colorantes de tinción, fijadores reveladores de pruebas bioquímicas.

Eficacia se comprueba con microorganismos que dan respuesta positiva y negativa.

Discos para pruebas diferenciales refrigerado con un desecante

Control de discos de antibiograma : cepas cuya sensibilidad conocida: E. coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853.

Control de antisuero y antígenos

Control de resultados intralaboratorios e interlaboratorios.

Fase Postanalítica.

Captura de resultados : manual o automática. Validación de resultados Envió de resultados impresos-

internet Impresión de Diarios de Trabajo.

Indicadores de calidad fase Postanalítica

Tiempo de respuesta del lab para sol urgentes ( min )

Proporción de reediciones diarias de informes ya entregados:

No. reediciones de informes/No. total informes

Proporción de informes reclamados por demoras.

Indicadores herramientas objetivas evaluar las disposiciones establecidas y ver posibilidades de mejora.

Errores en el proceso

AnalíticaProcedimientos técnicos.

Manipulación de muestrasInterpretación

Educación

Post analítica.Revisión y aprobación de

resultados.Envió de reporte

Resultados en el expedienteAlmacenaje de muestras.

Uffff…gracias