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7/26/2019 Extraccin y Anlisis de ARN
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Extraccin y anlisis de ARN
Gentica Molecular - 2016 Universidad de Morn
Porcentajes de ARN en una clula
ARN mensajero: 1-5% ARN ribosomal: 80% ARN transferencia: 10-15%
La sntesis de ARNm es una expresin dinmica delgenoma de un organismo y es esencial para el flujo deinformacin en una clula
Para que investigar un ARNm?
- Tamao: para examinar presencia de intrones y splicingdiferencial
- Secuencia: predecir el producto proteico- Abundancia: medicin de niveles de expresin- Dinmica de la expresin: en el tiempo, momento de
desarrollo, tipo de tejido
Aislamiento de ARN Aislamiento de ARN
- ARN total a partir de una muestra iol!ica"
1 - con solventes or!#nicos
2 - cromato!ra$%a de a$inidad &'it(
- ARN mensa)ero" a partir de una muestra iol!ica o
de ARN total
* - cromato!ra$%a de a$inidad &'it(
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1 +,traccin con solventesenta)as"
- ers#til" compatile con una !ran variedad de
tipos de muestras
- +scalale. se pueden procesar peueos o
!randes volmenes de muestra
- ecnolo!%a estalecida
- +conmico
3esventa)as"- Uso de solventes or!#nicos &ries!o de salud
descarte complicado(
- No adecuado para muestras mltiples
- 5ontaminacin de ARN con A3N !enmico
2 +,traccin de ARN total con 'it
enta)as "
- +limina el uso de solventes or!anicos
- 5ompatile con di$erentes tipos de muestras
- +l tratamiento con A3Nasa elimina la
contaminacin con A3N !enmico
- Alta purea e inte!ridad
- 7encillo 8 r#pido pueden procesarse muc9as
muestras en paralelo
3esventa)as"
- M#s caro ue e,traccin con solventes
2 +,traccin de ARN total con 'it * Aislamiento de ARNm
- :as molculas de ARNm tienen una colita poliA en su
e,tremo *
- 7e pueden usar oli!onucleotidos oli!o &d( unidos a una
matri" el ARNm 9iridia con el oli!o &d( 8 ueda retenido
- 7e elu8e el ARNm de la matri usando a!ua o un u$$er dea)a $uera inica
- Aislamiento de ARNm a partir de una muestra de ARN total"
permite el procesamiento de muestras ma8ores puede
9aer ma8or rendimiento pero lleva mas tiempo
- Aislamiento de ARNm a partir de una muestra iol!ica" mas
r#pido pero 9a8 una limitacin del tamao de muestra
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* Aislamiento de ARNm
Estimacin de la calidad del ARN en
espectrofotmetro
7e mide la asorancia de la muestra de ARN en un
espectro$otometro a 260 2;0 8 2*0 nm
- 260 nm" #cidos nucleicos &A3N ARN nucleotidos(
- 2;0 nm" prote%nas
- 2*0 nm" !uanidina
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Nort9ern lot &continuacin( Nort9ern lot &continuacin(
Tcnicas de anlisis de ARN
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@
+)emplo
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Microarre!los Microarre!los
Microarre!los Microarre!los
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- :os datos de microarre!los se veri$ican muc9as veces con R-