Post on 01-Jul-2015
HEMOGRAMA AUTOMATIZADO
Interno CAMILO BECERRA MARTINEZServicio de Hematología General
INEN
HISTORIA
En los últimos 30 años se usaron distintos En los últimos 30 años se usaron distintos equipos que ovolucionaron desde los equipos que ovolucionaron desde los sistemas semiautomatizados de un solo sistemas semiautomatizados de un solo canal hasta los de multiples canales. canal hasta los de multiples canales. Capaces de evluar hasta 20 parámetros Capaces de evluar hasta 20 parámetros hematológicoshematológicos
AUTOMATIZADOS
Los contadores electronicos son más Los contadores electronicos son más precisosque las técnicas manuales.precisosque las técnicas manuales.
Se dispone de varios modelos de equipos.Se dispone de varios modelos de equipos. Miden diversos parámetros hematológicos.Miden diversos parámetros hematológicos. Analizan en forma comparativas las Analizan en forma comparativas las
muestras, rápido y con poco error.muestras, rápido y con poco error.
TIPOS PRINCIPALES
IMPEDANCIA DEL FLUJO ELECTRICOIMPEDANCIA DEL FLUJO ELECTRICO DISPERCIÓN DE LUZ PARA CONTAR DISPERCIÓN DE LUZ PARA CONTAR
LAS CELULASLAS CELULAS
Todo conteo celular comparte tres pasos básicos :
1. Dilución de la sangre2. Toma de muestra de una cantidad medida3. Enumeración de partículas
Ventajas de los métodos electrónicos :
1. Velocidad 2. Precisión3. Cálculo automatizado del Hematocrito y
constantes4. Impresión de resultados
El conteo diferencial manual está sujeto a varios errores Errores en la preparación del frotis Errores en la preparación del frotis Errores en la tinción del frotisErrores en la tinción del frotis Distribución celularDistribución celular Interpretación celularInterpretación celular Número de células contadasNúmero de células contadas
Un buen diferencial automatizado debe ser capaz de :
1. Identificar células normales y anormales2. Resultados reproducibles en conteos repetitivos3. El conteo debe exceder largamente ( 8,000 –
32,000 cel. ) al tradicional conteo manual ( 100 – 200 células )
1. El conteo debe llevarse a cabo en un mínimo lapso de tiempo
1. Se debe tener capacidad de almacenamiento de datos
TECNOLOGIA UTILIZADA Impedancia Eléctrica :
Contaje total de hematíes (RBC) Contaje total de leucocitos (WIC) Contaje total de plaquetas (PLT) VCM y VPM.
El sistema de impedancia eléctrica cuenta y detecta el tamaño de los eritrocitos, plaquetas y leucocitos. Este se basa en la detección de los cambios en la resistencia eléctrica producidos por una partícula suspendida en un diluyente conductor a su paso por una abertura.
TECNOLOGIA UTILIZADA
Colorimetría La medición directa de hemoglobina (HGB), se realiza por el método modificado de la cianmetahemoglobina, utilizando como fuente lumínica un diodo emisor de baja energía, a 540 nm.
TECNOLOGIA UTILIZADA
MPASS (Multi Angle Polarized Scatter Separation) : Contaje total de leucocitos (WOC) Diferencial de 5 poblaciones (fórmula) Reticulocitos El MPASS es un sistema de citometría de flujo y láser He/Ne.
PRINCIPIO DE MEDICIÓN POR EL MÉTODO
DE LA IMPEDANCIA ELÉCTRICA
Apertura
Estos equipos cuentan las células en una abertura pequeña, por registro de la modificación de la resistencia eléctrica provocada por su pasaje. La corriente continua regulada se desplaza entre dos electrodos de platino sumergidos en un diluyente conductor de electricidad, se coloca un puente aislado con una abertura entre los electrodos. Se suspenden as células en el diluyente y se movilizan a través del orificio a velosidad constante
VOLUMETRIA
No se puede obtener el recuento celular absoluto a menos que se conozca el volumen preciso de sangre total diluida que atraviesa la abertura durante el ciclo de recuento
Método de Conteo Celular por Dispersión de la Luz La snagre diluida pasa a través de un La snagre diluida pasa a través de un
detector de flujo celular colocado en el detector de flujo celular colocado en el trayecto de un rayo luminoso de foco trayecto de un rayo luminoso de foco cercano (láser). cercano (láser).
Cada célula provoca un cambio en el rayo y Cada célula provoca un cambio en el rayo y que genera un impulso eléctrico que se que genera un impulso eléctrico que se registra.registra.
Método de Conteo Celular por Dispersión de la Luz En algunos equipos el rayo crea patrones de En algunos equipos el rayo crea patrones de
dispersión que se emplean para definir el dispersión que se emplean para definir el tamaño de la célula, volumen, la tamaño de la célula, volumen, la configuración e indice de refracción.configuración e indice de refracción.
Technicon H-6000 y H-1Technicon H-6000 y H-1
Medida a 0ºMedida a 0º sirve para medir el sirve para medir el tamaño celulartamaño celular
Medida a 10ºMedida a 10ºmide la complejidad mide la complejidad celularcelular
Medida a 90ºMedida a 90º mide la superficie mide la superficie celular y la estructura internacelular y la estructura interna
( granularidad )( granularidad ) Medida a 90ºDMedida a 90ºD midemide
determinados tipos dedeterminados tipos de
granularidad celular granularidad celular
FOCALIZACIÓN DE CORRIENTE HIDRODINÁMICA
A medida que las células A medida que las células penetran en el área de penetran en el área de visualización específica, se visualización específica, se produce la interacción con produce la interacción con el rayo láser con ángulos el rayo láser con ángulos diferentes, que suministran diferentes, que suministran información sobre el tamaño información sobre el tamaño de la célula, la estructura de la célula, la estructura interna, la granularidad y la interna, la granularidad y la morfología de la superficie.morfología de la superficie.
Equipos OrthoEquipos Ortho Indice de RefracciónIndice de Refracción
RADIOFRECUENCIA (Conductividad )
La conductividad de las ondas de radio a través de las células, nos revelan su composición interna
TECNOLOGIA VCS
La tecnología VCS es el mecanismo por la cual los analizadores de hematología COULTER realizan la diferenciación de los diferentes tipos de leucocitos en 5 tipos: Neutrófilos, Linfocitos, Monocitos, Eosinófilos y Basófilos
La muestra (sangre) es mezclada con el rectivo, lo cual produce una rápida lisis de los eritrocitos y reduce los restos celulares sin alterar los leucocitos. Posterior a esta reacción se agrega el preservante de los leucocitos a fin de que resistan en su estado casi nativo las mediciones subsecuentes (Volumen, Conductividad y Scatter)
TECNOLOGIA VCS
PRINCIPIOS VCS
FLOWCELL: FLOWCELL:
La muestra una vez tratada es La muestra una vez tratada es dirigida a una celda de flujo dirigida a una celda de flujo (Flow cell) en la cual por el (Flow cell) en la cual por el diseño hidrodinámico, los diseño hidrodinámico, los leucocitos se alinean y pasan leucocitos se alinean y pasan formados uno a uno y en donde se formados uno a uno y en donde se realizan las siguientes mediciones realizan las siguientes mediciones
PRINCIPIO VCS
VOLUMEN:VOLUMEN:
Mediante impedancia Mediante impedancia de baja frecuencia se de baja frecuencia se determina el volumen determina el volumen de la célula de la célula
PRINCIPIO VCS
CONDUCTIVIDAD: CONDUCTIVIDAD: La conductividad de alta La conductividad de alta frecuencia de frecuencia de Radiofrecuencia (RF) Radiofrecuencia (RF) determina la determina la conductividad interna de conductividad interna de la célula la célula
PRINCIPIOS VCS
SCATTER: SCATTER:
La dispersión La dispersión (scatter) de luz láser (scatter) de luz láser indica la estructura y indica la estructura y forma de la célula forma de la célula
DF1: Volumen vs. Scatter DF1: Volumen vs. Scatter DF2: Volumen vs. DF2: Volumen vs.
Conductividad Conductividad DF3: Volumen vs. DF3: Volumen vs.
Conductividad extrayendo Conductividad extrayendo las señales de Neutrófilos las señales de Neutrófilos y Eosinófilos y Eosinófilos
Las lecturas de estas 3 señales análogas es enviadas al analizador para su amplificación y proceso, luego el sistema genera 3 gráficos
Eosinófilos
NeutrófilosPolinucleados
Linfocítos
MonocítosBasófilos
DF1
DF2
DF3
RF
DC
Centroide inicialDe los granulocitos
Centroide inicial deMonocitos
Centroide inicialDel estroma
CentroideInicial deLinfocitos
PARAMETROPARAMETRO PRINCIPIOPRINCIPIO
WBCWBC ImpedanciaImpedancia
RBC/PLTRBC/PLT Corriente Directa/ enfoque Corriente Directa/ enfoque hidrodinámicohidrodinámico
HGBHGB Lauril Sulfato de sodio (SLS ) Lauril Sulfato de sodio (SLS ) Cianmetahemoglobia. Fotométrico Cianmetahemoglobia. Fotométrico
HCTHCT Acumulación de la altura de los pulsosAcumulación de la altura de los pulsos
LY, MO, GRANLY, MO, GRAN Citometria ( MAPSS ), CD,Citometria ( MAPSS ), CD,
Radiofrecuencia ( RF )- VCSRadiofrecuencia ( RF )- VCS
EOEO CDCD
BASOBASO CDCD
IMIIMI RF, DC, RFRF, DC, RF
Retic %Retic % Citometria de flujo & fluorescenciaCitometria de flujo & fluorescencia
• El MCV es calculado sobre las bases de la sumatoria de la altura de los pulsos de las células rojas y dividido por el conteo de G.R.
• El volumen del paquete celular es calculado del MCV multiplicado por el conteo de células rojas
• El MCH es calculado del valor de la Hemoglobina y el conteo de G.R.
• El MCHC es calculado del valor de Hemoglobina y el Hematocrito
1. La turbidez producida por conteos elevados de células blancas, pueden alterar el valor de la Hemoglobina, MVC, y Hto.
2. En LLC y otras leucemias las células son fácilmente dañadas por laapertura, pudiendo aparecer falsos conteos bajos de leucocitos( WIC / WOC )
3. Títulos altos de aglutininas frías, que agregan los GR a temperaturaambiente, son responsables de macrocitosis y valores altos de MCHM
1. Hematocrito : se mide en % y representa la proporción total de GR en la sangre. no se mide directamente con los citómetros de flujo y se calcula a partir del VCM y en número de GR. Tiene menor presición
2. El hematocrito es medido electrónicamente :“ el pulso que es generado cuando los GR pasan a través de laabertura es proporcional a su volumen “. Se determina comparando elvolumen total o acumulado de GR al volumen total de sangre en los 11.7ul de la dilución 1:500
+ 3%
0%
-3%
HCM
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 +3%
0%
- 3%
+ 3%
0%
-3%
VCM
CCMH
Gráfica de Control de los Indices Eritrocitarios
+ 3%
0%
-3%
+3%
0%
- 3%
+ 3%
0%
-3%
Desplazamiento del VCM yHCM en la misma dirección, signo deobturación parcial del orificio de recuento
VCM
HCM
CCMH
+ 3%
0%
-3%
+3%
0%
- 3%
+ 3%
0%
-3%
VCM
HCM
CCMH
Desviación de la HCM y CCMH en el mismo sentido decreciente,causada por desajustes en la calibración de la Hb o recuento de hematíes
+ 3%
0%
-3%
+3%
0%
- 3%
+ 3%
0%
-3%
VCM
HCM
CCMH
Patrón con un pico de desviación positiva del VCM y HCM, causada por la incorporación de muestras de enfermos con marcada macrocitosis.
10 -
8 -
6 -
4 -
2 -
0 -
-2 -
-4 -
-6 -
-8 -
-10 -
- 12 -
0 0.5 1.0 2.0 4.0 8.0 12.0 24.0 48.0
Effect of specimen storage at room temperature ( 18º - 20ºC ) 0n the completeblood count parameters of the Abbott CD 3500 blood analyzer.
WBC
RBC
HB
MCV
PLT
HCT
Ch
ange
( %
)
Time ( h )
Efecto del almacenamiento a temperatura ambiente ( 18 -20 ºC ) sobre el conteodiferencial de leucocítos, resultados del autoanalizador hematológico Abbott CD 3500
Ch
ange
( %
)
Time ( h )
10
0
-10
-20
-30
-40
-50
-60
20
0 0.5 1 2 4 8 12 24 48
v
Eosinófilos
Monocitos
Basófilos
Neutrófilos
Linfocitos
Sismex SF - 3000
SX - 21
COULTER
CELL DYN 3500 El equipo autoanalizador realiza la medición de 22 El equipo autoanalizador realiza la medición de 22
parámetros hematológicos de la sangreparámetros hematológicos de la sangre.. Utiliza la medición por impedancia y dispersión de Utiliza la medición por impedancia y dispersión de
luz láser.luz láser. Algunos parámetros son medidos directamente y Algunos parámetros son medidos directamente y
algunos son calculados.algunos son calculados. Los leucocitos, hematíes y plaquetas se miden por Los leucocitos, hematíes y plaquetas se miden por
impedancia eléctrica, la fórmula diferencial por flujo impedancia eléctrica, la fórmula diferencial por flujo óptico. La hemoglobina por espectrofotometría.óptico. La hemoglobina por espectrofotometría.
En cada ciclo la muestra es aspirada, diluida y En cada ciclo la muestra es aspirada, diluida y mezclada y se realizan las mediciones de cada mezclada y se realizan las mediciones de cada parámetro.parámetro.
SISTEMA MODULAR TOTALMENTE AUTOMATIZADOCELL DYN 4000, CON EL LAMINADOR SMS – 5H2901
CELL DYN 4000
El Cell-Dyn 4000 es el primer analizados El Cell-Dyn 4000 es el primer analizados hematológico automatizado para ofrecer el análisis hematológico automatizado para ofrecer el análisis de anticuerpos monoclonales. A través del uso de un de anticuerpos monoclonales. A través del uso de un láser de un Ion de Argón.láser de un Ion de Argón.
el CD4000 es único manteniendo el descubrimiento el CD4000 es único manteniendo el descubrimiento fluorescente NRBCs, reticulocítos y viabilidad de fluorescente NRBCs, reticulocítos y viabilidad de WBC. WBC.
Además, el análisis de plaqueta óptico y el linealidad Además, el análisis de plaqueta óptico y el linealidad de WBC extendidode WBC extendido
CELL DYN 4000
La citometría de flujo fluorescenteLa citometría de flujo fluorescente.. el ADN-ARN marcadoel ADN-ARN marcado.. la medida de la impedancia del flujo.la medida de la impedancia del flujo. Los datos automáticamente generados Los datos automáticamente generados
incluyen la nuclealidad en la cuenta de incluyen la nuclealidad en la cuenta de la célula de serie roja, reticulocítos con la célula de serie roja, reticulocítos con la razón de inmadurez y el factor de la razón de inmadurez y el factor de viabilidad celular blanco. viabilidad celular blanco.