Post on 14-Oct-2015
description
5/30/2018 HIDROLISIS QUIMICA Y ENZIMATICA DE LOS DISACARIDOS
Ao de la Promocin de la Industria Responsable y del Compromiso Climtico
Universidad Nacional Mayor de San Marcos
Facultad de Medicina
Escuela Acadmico Profesional de Tecnologa Mdica
Curso: Bioqumica
Informe de Laboratorio N 10
PRACTICA DE LABORATORIO N 12 - 13
HIDROLISIS QUIMICA Y ENZIMATICA DE LOS DISACARIDOS
Mesa N 04
Aguilar Ocaa, Gissel Teresa
Bonifacio Mundaca, Jenny Katherine
De la Cruz Isuiza, Luis Fernando
Mallma Ynga, Piero Luis
Pacheco Santilln, Jos Luis
Snchez Salinas, lvaro Hernando
Docente: Nuez Fonseca, Marco Antonio
5 de Mayo del 2014
5/30/2018 HIDROLISIS QUIMICA Y ENZIMATICA DE LOS DISACARIDOS
INTRODUCCION
Los disacridos son un tipo de glcidos formados por la unin o condensacin de
dos azcares monosacridos iguales o distintos mediante un enlace O-glucosdico
(con prdida de una molcula de agua) pues se establece en forma de ter siendo
un tomo de oxgeno el que une cada pareja de monosacridos, mono odicarbonlico, que adems puede ser o en funcin del -OH hemiacetal o
hemicetal.
Los disacridos ms comunes son
Sacarosa (azcar comn):
- No tiene poder reductor
- Es el resultado de la unin del carbono 1 de la alfa-glucosa y el carbono
2 de la -fructosa con un enlace glucosdico alfa (1-2)
-La hidrlisis de la sacarosa por cidos o por enzimas como la invertasa o
sacarasa, rompe el enlace glucosdico y se obtiene el azcar invertido que es una
mezcla de glucosa y fructosa.
Lactosa (azcar de la leche):
-Tiene poder reductor
-Est constituda por -galactosa y alfa-glucosa, con el enlace glucosdico
(1-4) entre el carbono 1 de la -galactosa y el carbono 4 de la a-glucosa.
-Su hidrlisis se lleva a cabo por la accin de la enzima Lactasa
Maltosa, isomaltosa, trehalosa y celobiosa: Formadas todas por la unin de
dos glucosas, son diferentes dependiendo de la unin entre las glucosas. Todas
ellas tienen poder reductor, salvo la trehalosa.
Maltosa:
-Est formada por dos molculas de alfa-glucosa con el enlace glucosdico
alfa (1-4) entre el carbono 1 de la primera molcula y el carbono 4 de la segunda.
-Es un azcar reductor debido a que reduce el in cprico a in cuproso
cuando se emplea el reactivo de Felhing.
-Se obtiene durante la degradacin o sntesis del polisacrido celulosa
5/30/2018 HIDROLISIS QUIMICA Y ENZIMATICA DE LOS DISACARIDOS
El carcter reductor se da en un disacrido si uno de los monosacridos que lo
forman tiene su carbono anomrico (o carbonlico) libre, es decir, si este carbono
no forma parte del enlace O-glucosdico. Dicho de otra forma, si el enlace O-
glucosdico es monocarbonlico el disacrido resultante ser reductor (maltosa,
celobiosa, etc.), mientras que si el enlace O-glicosdico es dicarbnlico el
disacrido resultante ser no reductor (sacarosa, trehalosa).
El enlace covalente entre dos monosacridos provoca la eliminacin de un tomo
de hidrgeno de uno de los monosacridos y de un grupo hidroxilo del otro
monosacrido, de forma que en conjunto podemos decir que se elimina una
molcula de agua (H2O) que se libera al medio de reaccin.
En la mucosa del tubo digestivo del ser humano existen unas enzimas llamadas
disacaridasas, que hidrolizan el enlace glucosdico que une a los dos
monosacridos, para suabsorcin intestinal.
La maltosa y lactosa son disacridos que poseen un carbonos anomricos libre
por lo que poseen poder reductor y la reaccin con el Reactivo de Benedict es
positiva, en tanto que la sacarosa es un disacrido que no posee carbonos
anomricos libres por lo que carece de poder reductor y la reaccin con el
Reactivo de Benedict es negativa.
Sin embargo, en presencia de HCl y en caliente, la maltosa, lactosa y sacarosa se
hidrolizan, es decir, incorpora una molcula de agua y se descomponen en los
monosacridos que los conforman, glucosa + glucosa, glucosa + galactosa y
glucosa + fructosa, respectivamente, que si son reductores.
OBJETIVOS
- Inducir la hidrolisis de la maltosa, lactosa y sacarosa qumicamente y
enzimticamente.
- Evaluar a los disacridos previos a la hidrlisis con reactivo Benedict y
Selliwanof.
- Evaluar a los disacridos despus de su hidrolisis con reactivo Benedict
y Selliwanof.
5/30/2018 HIDROLISIS QUIMICA Y ENZIMATICA DE LOS DISACARIDOS
PROCEDIMIENTO
HIDRLISIS QUMICA
1. Colocamos agua destilada en el tubo control y en los tubos 1A, 2A, 3A
2. Luego en el tubo 1A 2ml de Maltosa, en el tubo 2A lactosa y el tubo 3A
Sacarosa.
3. Luego echamos 1 ml del reactivo de Benedict a los 3 tubos.
5/30/2018 HIDROLISIS QUIMICA Y ENZIMATICA DE LOS DISACARIDOS
4. Llevamos a calentar a bao mara los tubos y observamos los cambios.
5. Luego para observar la hidrlisis procedemos a hacer de nuevo el
procedimiento 1 y 2 y echamos 1ml de HCl 4M lo llevamos a bao Mara
para hidrolizar los disacridos.
5/30/2018 HIDROLISIS QUIMICA Y ENZIMATICA DE LOS DISACARIDOS
6. Luego que hidrolizamos echamos 1ml de NaOH 4M y 1ml del reactivo de
Benedict y lo llevamos a bao Mara, observamos los resultados.
7. Los mismos procedimientos se hacen pero para observar si hay fructuosa
pero usamos el reactivo de Seliwanoff.
5/30/2018 HIDROLISIS QUIMICA Y ENZIMATICA DE LOS DISACARIDOS
HIDRLISIS ENZIMTICA
1. En un beacker de 50 ml diluir y homogenizar 2.5g de levadura en 20ml de
agua destilada.
2. Dejar reposar durante 15 min y filtrar.
3. Posteriormente colocar el extracto de levadura segn el cuadro de
temperatura mostrado anteriormente. Y lo separamos en levadura crudo a
37C y hervido a 100C
5/30/2018 HIDROLISIS QUIMICA Y ENZIMATICA DE LOS DISACARIDOS
4. Hacemos los mismos procedimientos que en la hidrlisis qumica pero solo
con la sacarosa vertiendo levadura crudo en el tubo control y tubo 1B y
levadura hervido en el tubo 2B.
5. Dejamos que pase 10 min a 37C en bao mara.
5/30/2018 HIDROLISIS QUIMICA Y ENZIMATICA DE LOS DISACARIDOS
6. Luego echamos 1ml de reactivo de Benedict.
7. Llevamos a bao Mara y observamos los resultados.
8. Hacemos el mismo procedimiento con el reactivo de Seliwanoff para
observar fructuosa.
5/30/2018 HIDROLISIS QUIMICA Y ENZIMATICA DE LOS DISACARIDOS
RESULTADOS
HIDROLISIS QUMICA
-Antes de la hidrolisis:
Tubo control Tubo 1A Tubo 2A Tubo3ABenedict
Seliwanoff
Despus de la hidrolisis
Tubo control Tubo 1B Tubo 2B Tubo3BBenedict
Seliwanoff
5/30/2018 HIDROLISIS QUIMICA Y ENZIMATICA DE LOS DISACARIDOS
HIDROLISIS ENZIMTICA
Tubo control Crudo Hervido
Benedict
Seliwanoff
5/30/2018 HIDROLISIS QUIMICA Y ENZIMATICA DE LOS DISACARIDOS
INTERPRETACION DE RESULTADOS
-En la hidrolisis qumica s necesitan altas temperaturas y cidos concentrados
para romper los enlaces glucosidicos.
-El que diera positivo la prueba de seliwanoff en el tubo de sacarosa antes de la
hidrolisis debe ser que la botella con agua destilada estaba contaminada con
monosacridos.
-Con la prueba de Benedict se comprueba que la hidrolisis se produjo y formo
monosacridos reductores y con la prueba de seliwanoff se comprueba que en la
hidrolisis de la sacarosa existe cetosas, en este caso la fructuosa.
-En la hidrolisis enzimtica de la sacarosa se produjo sin necesidad de altas
temperaturas como en el caso de el extracto de levadura crudo y sin utilizarcidos, esto se debe a que las enzimas necesitan menor energa de activacin y
necesita menos tiempo que en la hidrolisis qumica.
DISCUSION
En la presente prctica se realizaron dos hidrolisis una qumica y la otra
enzimtica, en el caso de la hidrolisis qumica existi un problema al momento de
realizar la hidrolisis a la sacarosa debido a que esta fue un poco contaminada y
por tanto luego de llevar haber agregado el HCl y puesto a T 100C, se tio de uncolor medio amarillo, lo cual indico el error al momento de pipetear la sacarosa con
una pipeta usada para otro disacrido.
En lo que respecta a la hidrolisis enzimtica los resultados para la prueba de
Selivanof debieron de ser negativo en el tubo donde se mezcl la sacarosa con el
extracto de levadura hervido, pero este tubo no estuvo el suficiente tiempo a T
de 100C por tanto no se desnaturalizo la enzima completamente y esta sigui
realizando su accin catalizadora lo que indica que el resultado con Selivanof es
positivo ya que se hidrolizo la sacarosa en fructuosa y glucosa, y este reactivo
reconoce a la fructuosa.
Por tanto para poder realizar esta prctica experimental se requiere un aislamiento
de contaminacin, ya sea del medio as como de los instrumentos a utilizar como
es en este caso las pipetas, los tubos de ensayo, los frascos contenidos con
disacridos y reactivos. Adems de mantener la T necesaria para cada
experimento practico.
5/30/2018 HIDROLISIS QUIMICA Y ENZIMATICA DE LOS DISACARIDOS
CONCLUSIONES
Por medio de esta prctica se lograron reconocer algunas de las propiedades de
los carbohidratos, como lo es su propiedad reductora.
Se realiz la hidrlisis 3 disacrido, de los cules se comprob esta reaccin por
medio de pruebas qumicas con reactivos que ayudan a la identificacin de los
compuestos que se forman despus de estas reacciones para determinar y
comprobar que se realiz bien el procedimiento.
La hidrlisis de los disacaridos se puedo evidenciar con dos pruebas:
Prueba de Benedict, evidencio la aparicin de azucares reductores.
Prueba de selliwanof, sirve para distinguir entre la aldosa y la cetosa, Las cetosas
generalmente producen un color rojo.
En cambio despus de la hidrlisis de la sacarosa con la prueba de benedict
observamos que su color era diferente por la presencia de fructosa y glucosa, su
color era ms oscuro y un poco verdoso.
En la prueba de selliwanof antes y despus de la hidrlisis dio positivo slo en la
sacarosa.
BIBLIOGRAFIA
https://docs.google.com/document/d/1nJKakJFJdmKwfHoteIeU-
kXNs7JQcaTeDXQmRSU6lS0/edit
http://quimica-csfisicas.blogspot.com/2012/05/hidrolisis-de-disacaridos-o.html
https://docs.google.com/document/d/1nJKakJFJdmKwfHoteIeU-kXNs7JQcaTeDXQmRSU6lS0/edithttps://docs.google.com/document/d/1nJKakJFJdmKwfHoteIeU-kXNs7JQcaTeDXQmRSU6lS0/edithttps://docs.google.com/document/d/1nJKakJFJdmKwfHoteIeU-kXNs7JQcaTeDXQmRSU6lS0/edithttp://quimica-csfisicas.blogspot.com/2012/05/hidrolisis-de-disacaridos-o.htmlhttp://quimica-csfisicas.blogspot.com/2012/05/hidrolisis-de-disacaridos-o.htmlhttp://quimica-csfisicas.blogspot.com/2012/05/hidrolisis-de-disacaridos-o.htmlhttps://docs.google.com/document/d/1nJKakJFJdmKwfHoteIeU-kXNs7JQcaTeDXQmRSU6lS0/edithttps://docs.google.com/document/d/1nJKakJFJdmKwfHoteIeU-kXNs7JQcaTeDXQmRSU6lS0/edit