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Introducción al uso del GPHF Minilab®
Taller de Capacitación: Entrenamiento en Pruebas Básicas para el
Monitoreo de Calidad de Medicamentos
Puerto Maldonado, Madre De Dios, Perú 24-28 Septiembre de 2012
Q. B. Lukas Roth Programa de Promoción de la Calidad de Medicamentos
Farmacopea de los Estados Unidos de América
El Control de Calidad (CC) de los medicamentos
se lleva a cabo con el objetivo de verificar que el
producto cumple con las especificaciones de
calidad establecidos durante el registro
Llevar a cabo el CC de acuerdo a las
especificaciones de registro requiere:
– Recursos humanos y financieros
– Personal de laboratorio capacitado
– Equipo caro, reactivos y normas de referencia
– Procesamiento largo de resultados
Racional para uso de Pruebas Básicas
Una alternativa para facilitar el control de calidad
es utilizar metodologías más sencillas y menos
costosas, que no requieran la infraestructura y el
equipo de un laboratorio establecido ni personal
altamente especializado para llevar a cabo los
pruebas de calidad.
Racional para uso de Pruebas Básicas
Pruebas Básicas Análisis no-compendial
Utiliza equipo portátil y descentralizado – Equipo de bajo costo
– Recursos humanos no especializados
Análisis simples
Procesamiento corto de resultados
Costo bajo de análisis
Pruebas Compendiales (LOCM) Análisis compendial
Requiere laboratorio centralizado – Equipo costoso
– Recursos humanos especializados
Análisis complejos
Procesamiento largo de resultados
Costo alto de análisis
Racional para uso de Pruebas Básicas
Equipo fácil de transportar que incluye instrumental e
insumos básicos, estándares de referencia, reactivos
y manuales con metodologías para análisis
Kit de pruebas cromatográficas Kit para reacciones colorimétricas
Global Pharma Health Fund (GPHF) Minilab®
Fácil transportación
GPHF-Minilab®: Variedad de métodos de prueba
1. Inspección física para
verificar el número de lote
y licencia, la dirección, las
especificaciones de los
productos y elementos de
autenticidad
2. Ensayo cromatográfico
para verificar la identidad,
y contenido del
medicamento con respecto
a lo impreso en la etiqueta.
Puede también detectar
impurezas.
3. Se puede añadir un kit
para reacciones
colorimétricas específicas
como segunda prueba
independiente para la
identificación del
medicamento (Pruebas
básicas de la OMS, etc.)
4. Prueba simplificada de
desintegración para
verificar los riesgos para la
salud asociados con la
liberación inadecuada del
fármaco debido a malas
formulaciones de tabletas
o cápsulas
Inspección visual y
física
Cromatografía en
capa fina
Reacción
colorimétrica
Desintegración
Un alto porcentaje
de medicamentos
falsificados pueden ser
detectados a este nivel
Esto permite detectar medicamentos falsificados presentes
en envases perfectamente copiados e identificar
riesgos de salud asociados con productos de mala calidad
Portátil
Capacidad de Identificar Medicamentos
Sub-estándar y Falsificados
Fácil de:
– Usar
– Interpretar
Capacidad de Analizar:
– 62 Medicamentos de la Lista Modelo de
Medicamentos Esenciales de la OMS
– Varias Muestras Simultáneamente
Resultados Reproducibles
Bajo Costo de Análisis y Mantenimiento
Global Pharma Health Fund (GPHF) Minilab®
Antimicrobials (17) Antimalarials (17) Anti-TBs (10) Antiretrovirals (7)
Amoxicillin
Ampicillin
Azithromycin
Cefalexin
Cefixime
Cefuroxime
Chloramphenicol
Ciprofloxacin
Cloxacillin
Erythromycin
Levofloxacin
Metronidazole
Moxifloxacin
Phenoxymethylpenicillin
Sulfamethoxazole
Tetracycline
Trimethoprim
Amodiaquine
Artemether
Artesunate
Atovaquone
Chloroquine
Dihydroartemisinin
Halofantrine
Lumefantrine
Mefloquine
Piperaquine
Primaquine
Proguanil
Pyrimethamine
Pyronaridine
Quinine
Sulfadoxine
Sulfamethoxypyrazine
Ciprofloxacin
Cycloserine
Ethambutol
Ethionamide
Isoniazid
Levofloxacin
Moxifloxacin
Prothionamide
Pyrazinamide
Rifampicin
Didanosine
Indinavir
Lamivudine
Nevirapine
Oseltamivir
Stavudine
Zidovudine
Non
Antinfectives (7)
Acetylsalicylic acid
Aminophylline
Furosemide
Glibenclamide
Paracetamol
Prednisolone
Salbutamol
Antifungals (1)
Griseofulvin
Anthelmintics (3)
Albendazole
Mebendazole
Praziquantel
Estándares de Referencia del GPHF Minilab®
Manuales de Metodologías en Español del GPHF Minilab®
Reacciones Colorimétricas Cromatografía de Capa Fina Suplementos Anuales
Inspección Visual y Física
Inspección Visual
La inspección visual del empaque puede
identificar productos falsificados
Foto: GSK 2005
Países desarrollados: EE.UU. 2010
Medicamentos para bajar de peso - Estilo de vida
Foto: GSK/FDA
genuino falso
Sibutramina Alli® (Orlistat)
Medicamentos falsificados
genuino falso
0,0 mg
Países en desarrollo: Africa Oriental 2007
Medicamento para tratamiento de malaria – Salva vidas
Medicamentos falsificados
Foto: M. Sunjio, Bases Thérapeutiques des Inflammations et des Infections, Bordeaux University
Todo puede ser adulterado,
diluido y falsificado:
- Ingredientes activos
- Concentración de las dosis
- Información en empaque
- Fechas de caducidad
- Números de lote
- Números de registro
- Etiquetas de autenticación
- Documentos de embarque En la muestra falsificada está impresa
En la muestra genuina esta grabada
Fotos: GSK & US FDA
Medicamentos falsificados
Muestra auténtica
Muestra falsificada
Todo puede ser adulterado,
diluido y falsificado:
- Ingredientes activos
- Concentración de las dosis
- Información en empaque
- Fechas de caducidad
- Números de lote
- Números de registro
- Etiquetas de autenticación
- Documentos de embarque
falso genuino
Fotos: FDA Vietnam
Medicamentos falsificados
Medicamentos falsificados
Copia casi perfecta Copia casi perfecta
Inspección Física
Características físicas de las muestras de tabletas/cápsulas
Para determinar las características físicas de las muestras de
tabletas/cápsulas, el inspector debe de seguir los siguientes
pasos:
1. Use guantes quirúrgicos para proteger sus manos y tome una
muestra de las tabletas/cápsulas para inspección visual.
2. Use una espátula, cuchara o contador de tabletas/cápsulas para
obtener una muestra de las tabletas/cápsulas del envase original.
3. Ponga 5-25 tabletas/cápsulas en un trozo de papel blanco.
4. Examine un lado de la tableta/cápsula bajo luz artificial normal.
5. Con una espátula, volteé la tableta/cápsula para examinar el/los
otro(s) lado(s).
6. Registre las observaciones de este examen en el formulario de
resultados.
Uniformidad de la forma: Las tabletas/cápsulas deben de
tener una forma uniforme.
Uniformidad del tamaño: Las tabletas/cápsulas deben de
tener un tamaño uniforme.
Uniformidad del color: Las tabletas/cápsulas deben de
tener un color uniforme.
El color de las tabletas/cápsulas en su contenedor (en
caso de un envase de vidrio/botella): Las tabletas/cápsulas
deben de tener un color uniforme.
Recubrimiento (solo en tabletas; puede ser recubrimiento
de película, recubrimiento de azúcar o recubrimiento
entérico): El recubrimiento debe de tener una textura
uniforme.
Inspección Física
Señales (marcas, letras, etc.): Las señales deben de ser
uniformes e idénticas.
Roturas: Las tabletas/cápsulas no deben de tener roturas.
Grietas: Las tabletas/cápsulas no deben de tener grietas.
Manchas incrustadas en la superficie o contaminación
en la superficie: Las tabletas/cápsulas no deben de tener
manchas incrustadas en la superficie o estar contaminadas.
Contaminación por sustancias extrañas: Las
tabletas/cápsulas no deben de tener contaminación por
sustancias extrañas
Inspección Física
Fisuras: Las tabletas/cápsulas no deben de tener fisuras.
Agujeros: Las tabletas/cápsulas no deben de tener
agujeros.
Presencia de cápsulas vacías en una muestra de
cápsulas: La muestra examinada no debe contener
cápsulas vacías.
Presencia de cápsulas abiertas o rotas: La muestra
examinada no debe contener cápsulas abiertas o rotas.
Presencia de puntos débiles en el cuerpo de la
cápsula: La muestra examinada no debe contener cápsula
que evidencien puntos débiles en el cuerpo de las mismas.
Inspección Física
Separación de la tapa y cuerpo de la cápsula: Las cápsulas
de la muestra deben estar intactas y no tener separaciones.
Cobertura o burbujas en tabletas o cápsulas: Las
tabletas/cápsulas no deben tener coberturas o burbujas.
Recubrimiento (tabletas recubiertas en azúcar o película): Las
tabletas deben de tener un recubrimiento uniforme y la base de
las tabletas debe estar totalmente cubierta.
Pulido: Las tabletas/cápsulas deben de estar pulidas
uniformemente y libres de polvo.
Pegajosidad: Las tabletas/cápsulas no deben ser pegajosas.
Evidencia de incrustaciones o adherencias de sustancias
extrañas: Las tabletas/cápsulas deben de estar libres
incrustaciones o adherencias de sustancias extrañas.
Inspección Física
Desintegración
Esta prueba determina si la cápsulas o
tabletas se desintegran en agua en treinta
minutos.
Desintegración
Para los propósitos de esta prueba, la
desintegración no implica la disolución completa
de la unidad ni de su ingrediente farmacéutico
activo (API, por sus siglas en inglés).
Se define la desintegración como aquel estado en
el cual cualquier residuo de la unidad, excepto
fragmentos de la cubierta insoluble o cuerpo de la
cápsula, es una masa suave que no tiene un
núcleo firme palpable.
Desintegración
Desintegración
Todas las formulaciones de liberación rápida
deben cumplir con el tiempo de
desintegración completa.
Desintegración
Excepciones
Las tabletas cubiertas de azúcar pueden
cumplir las especificaciones de la prueba de
desintegración, pero ésta no es requerida.
Sólo las tabletas y cápsulas de liberación
modificada o con cubierta entérica pueden
desviarse del tiempo de desintegración
completa.
Desintegración
Cromatografía en Capa Fina
La cromatografía en capa fina (TLC, por sus siglas en inglés) es una herramienta analítica útil para:
– Identificación y cuantificación de sustancias – Detección de impurezas y degradación de los
medicamentos – Seguimiento de las reacciones químicas
Cromatografía en capa fina (TLC)
Algunas de las ventajas de la TLC:
– Equipos sencillos y de bajo costo
– Varias muestras se pueden analizar simultáneamente
– Gran flexibilidad en términos de fases estacionarias y
móviles
– No hay problemas de detección en el caso de no-
elución, inestabilidad térmica, etc. (HPLC, GC)
– Fácil de interpretar
Cromatografía en capa fina (TLC)
¿Qué necesitamos para realizar una TLC?
– Muestra del medicamento
– Sustancia de referencia
– Placa cromatográfica (placas de aluminio recubiertas de
gel de sílice)
– Mezcla de solventes = revelador
– Cámara cromatográfica (tanque) con tapa
– Detector (mezcla de productos químicos o lámpara UV)
– Accesorios: microcapilares, pistilo, papel de aluminio,
botellas de vidrio, pipetas, papel de filtro, etc.
Cromatografía en capa fina (TLC)
Paso 1: Preparación del solvente para la
extracción de principios activos farmacéuticos
(API, por sus siglas en inglés)
– Methanol – sulfadoxina y pirimetamina, artesunato,
etambutol, pirazinamida, rifampicina, isoniazida
– Agua – amodiaquina clorhidrato, fosfato de cloroquina
– Acetona – lumefantrina/arteméter
Cromatografía en capa fina (TLC) – Procedimiento
Paso 2: Preparación de estándares y muestras
Soluciones
– Todos los sólidos se trituran usando un mortero y una
lámina de aluminio
– Los sólidos son, a continuación, disueltos en un
volumen conocido de solvente de extracción
Cromatografía en capa fina (TLC) – Procedimiento
Paso 3: Preparación de la solución reveladora
– Mezclar los reactivos como se indica en el
procedimiento
– Transferir la solución reveladora a la cámara, añadir
papel de filtro y dejar que se equilibren durante al
menos 15 minutos
– Mantener la cámara cerrada
Cromatografía en capa fina (TLC) – Procedimiento
¡Advertencia!
Todos los solventes son tóxicos.
No utilice la boca para pipetear
Paso 4: Aplicación de los puntos (depositar una
solución en la placa cromatográfica)
– Utilizar nuevos capilares o enjuagar el capilar utilizado
tres veces con solvente de extracción antes de aplicar
la siguiente muestra en el lugar
– Secar los puntos antes de iniciar el revelado de la placa
cromatográfica
– Los microcapilares aplican 2 µl
– Comprobar la uniformidad de todos los puntos con UV
de 254 nm
Cromatografía en capa fina (TLC) – Procedimiento
Paso 5: Revelado de la placa cromatográfica
– Colocar la placa en la cámara de revelado,
sumergiendo el borde inferior de la placa, pero no los
puntos de muestreo
– Sustituir la cubierta y permitir que el solvente ascienda
al punto de 3/4 de la longitud de la placa (generalmente
requiere de 10 a 20 minutos)
– Retirar la placa de la cámara y marcar el frente del
solvente
– Secar la placa (ventile o caliente la placa si es
necesario)
Cromatografía en capa fina (TLC) – Procedimiento
Paso 6: Detección
– El detector puede ser una mezcla de productos químicos o
simplemente luz UV
• Artesunato: exposición al ácido sulfúrico
• Arteméter (lumefantrina/arteméter): exposición al ácido
sulfúrico
– Si el procedimiento indica el uso de detector químico, a
continuación, mezclar los reactivos como se indica mientras
la placa se encuentra en el revelador
– Luz UV 254 nm: todos los puntos sensibles a esta luz se
tornarán visibles
– Marcar los puntos para evaluación adicional utilizando el
lápiz
Cromatografía en capa fina (TLC) – Procedimiento
¡Advertencia! No mirar directamente a la fuente de luz UV
Cromatografía en capa fina (TLC) – Procedimiento
Factor de retención (Rf)
El factor de retención se define como la distancia
recorrida por el compuesto dividido por la
distancia recorrida por el solvente
El valor Rf debe estar entre 0,0 (el punto no se
movió de la línea de inicio) y 1,0 (el punto se
movió con el frente de solvente) y es sin unidades
frente del solvente
nueva posición del
compuesto
origen
RF = 2,1/2,8 = 0,75
2,1 cm
2,8 cm
Verificación de la identidad
del medicamento con
respecto a lo impreso en la
etiqueta
principio activo
adulterado
sin principio activo
Ejemplos de
medicamentos
antipalúdicos falsificados
(caso quinina)
Cromatografía en capa fina (TLC) – Ejemplo de Identidad 1
Verificación del
número de activos en
productos combinados
de dosis fija con
respecto a lo impreso
en la etiqueta
Ejemplos de
medicamentos
antirretrovirales
Cromatografía en capa fina (TLC) – Ejemplo de Identidad 2
6,25 5,0 3,75 2,5 2,0 1,5 1,0 0,5 0,25 0,12 0 0,12 0,25 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,75 5,0 6,25
μg quinolona/punto
Ejemplo de medicamentos antituberculosos
de segunda línea
UV 254 nm
UV 366 nm
A la luz del día después de la tinción
Verificación del contenido de medicamento con
respecto a lo impreso en la etiqueta
Fuente: B. Singh, D.V. Parwate , S.K. Shukla / RTM University, Nagpur (India)
Cromatografía en capa fina (TLC) – Ejemplo de contenido