OBTENCIÓN DE MUESTRAS

FIJACIÓN

DESHIDRATACIÓN Y ACLARAMIENTO

INCLUSIÓN

CORTE

TINCIÓN DE LOS CORTES

MONTAJE

OBSERVACIÓN

PASOS DE LA TÉCNICA HISTOLÓGICA

OBTENCIÓN DE MUESTRAS

Todas las muestras de tejido, ya sea

obtenidas de materiales quirúrgicos,

necropsias, biopsias deben ser procesadas

adecuadamente para obtener buenos

cortes histológicos.

Se debe obtener toda la

información posible del

material a procesar.

OBTENCIÓN DE MUESTRAS

En caso de ser necesario se debe realizar

un examen y descripción preliminar de los

materiales y su adecuación para un

correcto procesamiento.

OBTENCIÓN DE MUESTRAS

OBTENCIÓN DE MUESTRAS

FIJACIÓN

Tratamiento del tejido con sustancias

químicas que no solo retardan las alteraciones

hísticas posteriores a la muerte, sino que

conservan la configuración normal del tejido.

Fijador:

Sustancia que detiene en forma rápida los

procesos de autólisis y que, al mismo tiempo,

conserva los tejidos, en lo posible, en el estado

en que se encontraban en la vida.

FIJACIÓN

Desecación: Extendidos, líquidos de punciones.

Calor seco: Bacteriología.

Calor húmedo: Microquímica, Zoología.

Frío: No es una verdadera fijación. Detiene los

procesos de autólisis y necrosis, pero cuando deja

de actuar los mismos se reanudan.

TIPOS DE FIJADORES

Físicos:

FIJACIÓN

Aldehídos (no precipitan proteínas y no contrae estructuras) .

Mercuriales (precipitan proteínas y tóxico por sus vapores).

Alcoholes (precipitan proteínas).

Agentes oxidantes (precipitan proteínas y tóxico por sus vapores).

Picratos (precipitan proteínas).

Químicos:

TIPOS DE FIJADORES

FIJACIÓN

Aldehídos (formaldehido/glutaraldehido): Son los más

utilizados. Los tejidos son fijados por uniones

cruzadas en las proteínas, al reaccionar con los

grupos amino.

La Formalina (formaldehido al 40%), se utiliza

normalmente al 10%, en una solución bufferada.

TIPOS DE FIJADORES

Químicos:

FIJACIÓN

FIJACIÓN

Un defecto de fijación no

puede ser subsanado.

Es inútil hacer un estudio

histológico de un material

mal fijado.

No debe olvidarse que:

FIJACIÓN

DESHIDRATACIÓN

Se obtiene por medio de un reactivo anhidro

pero ávido de agua:

Alcohol Etílico.

Alcohol Isopropílico.

Alcohol Butílico.

Acetona

ACLARADO

Se debe embeber la pieza con una sustancia

miscible con el alcohol y la parafina:

Xileno.

Tolueno.

Benceno.

INCLUSIÓN

La parafina penetra en los vasos, en los espacios

intercelulares y también en el interior de las células

embebiendo el tejido y haciendo más fácil la obtención

de cortes con el micrótomo.

Procesador Automático

Procesador Automático

Obtención del bloque de parafina de forma

regular, para ser cortado con el micrótomo.

CONFECCIÓN DEL TACO

CONFECCIÓN

DEL TACO

CORTE

Micrótomo Rotativo.

Micrótomo de Deslizamiento.

Micrótomo de Congelación.

Crióstato.

Micrótomo Rotativo.

Micrótomo Rotativo.

Micrótomo Rotativo.

Crióstato

Crióstato

EXTENSIÓN

Utilizar portaobjetos limpios y

preparados con el adhesivo

adecuado.

Se realiza en agua tibia (38oC).

Precaución: el preparado debe

quedar bien extendido y sin

pliegues.

Rotular.

Luego de escurrir el exceso de

agua llevar a estufa (60 °C) no

más de dos horas.

EXTENSIÓN

TINCIÓN DE LOS CORTES

Los colorantes pueden agruparse en tres clases principales:

Colorantes que diferencian los componentes

básicos y ácidos de la célula (hematoxilina y

eosina).

Colorantes especializados que distinguen los

componentes fibrosos de la matriz extracelular.

Sales metálicas que se precipitan en los tejidos y

forman depósitos de metales en ellos.

HEMATOXILINA

Actúa como un colorante BÁSICO que se asocia y tiñe componentes ÁCIDOS de la

célula como estructuras aniónicas

(que posean fosfatos, sulfatos y/o carboxilos ionizados)

- Heterocromatina y nucléolos

- ARN ribosomal,

- Matriz extracelular (por los sulfatos de los GAGs).

Color: azul o violeta

EOSINAColorante ÁCIDO

(predomina densidad de carga negativa), que se

asocia y colorea estructuras catiónicas (componentes

BASICOS) del citoplasma y matriz extracelular

- Filamentos citoplasmáticos.

- Componentes membranosos intracelulares.

- Fibras extracelulares (por sus aminoácidos básicos ionizados).

Color: rosado

Colorantes empleados con mayor frecuencia en histología:

TINCIÓN DE LOS CORTES

La reacción de los grupos aniónicos con un

colorante básico se denomina BASOFILIA

(que tiene afinidad por lo básico)

La reacción de los grupos catiónicos con un

colorante ácido se denomina EOSINOFILIA

(que tiene afinidad por lo ácido)

Coloración con

HematoxilinaColoración con

Eosina

Coloración

Hematoxilina-Eosina

OBSERVACIÓN

Basófilo

(azul)

Acidófilo

(rosado)