Transferencia de material genético II

Transformación

Código génetico

Es el conjunto de normas por las que la información codificada en el material genético (secuencias de ADN o ARN) se traduce en proteínas.

Está organizado en tripletes o codonesEs degenerado: un mismo aminoácido puede estar determinado por más de un triplete o codónEl triplete de inicio es AUG.Existen tres tripletes sin sentido o de terminación que no codifican para ningún aminoácido: UAA (ocre), UAG (ambar) y UGA.

Plásmido o vector de clonación

Son cadenas dobles de DNA circular de 1 kb a 200 kb que se pueden encontrar en las bacterias.

Características

1. ORIGEN DE REPLICACIÓNCapaz de hacer copias exactas de si mismo independiente del cromosoma del hospedero

2. MARCADORES DE SELECCIÓN

Permite aislar a las células que poseen el gen deseado, generalmente resistencia a un antibiótico

3. SITIO DE CLONACIÓN MULTIPLE (SCM) Sitios de enzimas de restricción en regiones no esenciales. Permite abrir al plásmido e insertar DNA.

Enzimas de restricción

Permiten cortar DNA de hebra doble en enlaces fosfodiester donde reconocen secuencias palindrómicas.

Nomenclatura Ejemplo Corresponde a:E Escherichia Género de la bacteriaco coli Especie de la bacteriaR RY13 Cepa de la bacteriaI La primera enzima identificada Orden de identificación de la enzima

TRANSFORMACIÓN

Es la introducción y expresión de material genético externo (DNA)

En bacterias, generalmente se introduce mediante un choque térmico o por electroporación.

CHOQUE TÉRMICO

Las bacterias (hospederas) son pretratadas con agentes como como CaCl2 (células competentes) y sometidas a un choque de temperatura que ocasiona un incremento en la permeabilidad membranal y facilita la entrada del plásmido.

ELECTROPORACIÓN Aumento de la conductividad electrica y la permeabilidad de la membrana causado por un campo eléctrico aplicado externamente, formando poros.

Proceso de transformación bacteriana

Células competentesHielo

45 s

1-5 uL plásmido

Resistencia a antibiótico

PlásmidoBacteria30 min hielo Selección

Sin Antibiotico

Con Antibiotico

Microinyección permite introducir DNA en el núcleo celular (Ej. microinyección de DNA en óvulos fecundados para obtención de animales transgénicos)

En Eucariontes…..

ORGANISMO TRANSGÉNICO

Cualquier planta, animal o bacteria que tiene información genética de otra especie introducida mediante ingenieria genética.

ORGANISMO TRANSGÉNICO

Producción de Proteínas Recombinantes de uso médico• Insulina: para diabéticos • Factor VIII: para pacientes con hemofilia A • Factor IX: para hemofilia B • Hormona del crecimiento humana: enanismo • Eritropoyetina: para el tratamiento de anemias • Interferón: defensa contra infecciones • Antígeno de superficie de hepatitis B: vacunas • Activador del plasminógeno tisular: disolución de coágulos