Practica # 1

FISIOLOGIA DE LA MEMBRANA SEMIPERMEABLE

FRAGILIDAD OSMÓTICA

Integrantes:

Pillaca Aza, Jairo ArturoSinchi Perez, Gisella

Villaverde Tarrillo, IvánVillaverde Contreras, Flor

León García, RoxanaSilva Salvador, GianmarcoMoran Mariños, Cristian

Illa Sandoval, DarcyTovar Rodriguez, CarlosChumpitazFelix, Miguel

(Profesor a cargo)

12 de Marzo de 2013

Hipótesis

El eritrocito al entrar en contacto con la solución hipotónica va sufrir

hemolisis. La cantidad de eritrocitos destruidos aumentara mientras más hipotónica sea

la solución.

Objetivos específicos

Aprenderemos a reconocer el proceso de hemolisis en los eritrocitos.Registraremos el

nivel de absorbancia de los tubos de ensayo. Observaremos 2 tipos de hemolisis: inicial

y total. Observar la resistencia globular (fragilidad osmótica) frente a una solución

hipotónica. Plasmaremos los registros del nivel de absorbancia con el número de tubo

correspondiente en un papel milimetrado para obtener, en el mejor de los casos, una

curva perfecta.

Fundamento

Los eritrocitos son células sin núcleo, bicóncavos (esta forma facilita su

función de intercambio) y son los encargados de transportar el oxígeno en la sangre. El

eritrocito presenta, entre otros, a la Hemoglobina (Hb) encargada del transporte de

oxígeno y de dar la tonalidad rojiza característica de este tipo de células.

La célula presenta una membrana semipermeable la cual permite el paso de solventes y

solutos de acuerdo a una gradiente (de menor concentración a mayor concentración); a

su vez el eritrocito presenta una resistencia globular la cual es una propiedad de los

eritrocitos de conservarse sin ningún cambio ante determinadas sustancias, las cuales

tienden a destruirlos (hemolisis y crenación).

Se usa una solución hipotónica debido a que esta presenta una

concentración iónica menor al citoplasma celular por lo cual la célula (eritrocito) tiende

a absorber agua de la solución, el paso de agua al interior de la célula esta mediado por

unas proteínas llamadas acuaporinas. Debido a que la célula ha absorbido agua esta se

hinchara hasta el punto en el que estalla y se produce la Hemolisis, la HB es liberada

por los poros de la membrana lo cual le dará una coloración rojiza a la mezcla.

Métodos

El experimento se realizó como se describe en la lección 2 delaGuía de

Practica de Fisiología Humana (UPSJB - 2013). Se usaron 3 pipeta de distinta medida

(1ml, 5ml y 10ml), agua destilada, cloruro de sodio, una jeringa, tubos de ensayo y una

gradilla para colocar las muestras. Se extrajo sangre de un integrante del grupo y se

mezclo con anticoagulante para su posterior uso.

Se agregó agua destilada y cloruro de sodio (NaCl) en 10 tubos de ensayo, luego se

adicionó 0.1ml de sangre más anticoagulante en cada uno de los tubos de ensayo y se

dejo reposar por 10 min para, posteriormente, llevarlo a la centrifuga a 2000 RPM en un

lapso de 10 min. Pasados 5min, después de sacar los tubos de la centrifuga, se llevaron

al Espectrofotómetro para medir el nivel de absorbancia y ser registrados.

Luego se calculó el porcentaje de hemolisis en cada tubo con la fórmula

correspondiente, luego los datos obtenidos se plasmaron en un papel milimetrado para

obtener la curva y determinar si los valores encontrados son normales o patológicos.

Resultados

Se observó que cuando la solución es hipotónica el porcentaje de hemolisis en

los eritrocitos hallado en los tubos de ensayo se ve aumentado; sucede lo contrario con

una solución hipertónica (Tabla 2). En cuanto a la absorbancia hallada de cada uno de

los tubos (Tabla 1) se observó que sucede el mismo mecanismo que con las soluciones,

determinando una relación inversamente proporcional.

Tabla 1: Nivel de absorbancia medido en el espectrofotómetro.

Tubos Nº Nivel de Absorbancia

1 0.2823 0.3325 0.1147 0.0019 0.00311 0.00413 0.00415 0.00517 0.00619 0.333

Tabla 2: Comparación del porcentaje de hemolisis y el porcentaje de NaCl.

Tubos Nº % NaCl de la sol.

Resultante

%HEM=|.|de cada tubo

|.|Standart∗100%

1 0.10%84,68 %=0.282

0.333∗100 %

3 0.25%99.70 %=0.332

0.333∗100 %

5 0.35%34.23 %=0.114

0.333∗100 %

7 0.40%0.30 %=0.001

0.333∗100 %

9 0.45%0.90 %=0.003

0.333∗100 %

11 0.50%1.20 %=0.004

0.333∗100 %

13 0.60%1.20 %=0.004

0.333∗100 %

15 0.70%1.50 %=0.005

0.333∗100 %

17 0.80%1.80 %=0.006

0.333∗100 %

19 0%100 %=0.333

0.333∗100 %

Discusión

Los resultados obtenidos nos indican que la hemolisis está sujeta a la concentración de

cloruro de sodio presente en la solución. Al observar la curva obtenida con los

resultados del experimento se puede apreciar una leve alteración en la curva, la cual está

entre los rangos normales. Cuando el eritrocito se encuentra en una solución hipotónica

necesita obtener un solvente para equilibrar el balance intracelular de líquido por lo cual

se ve obligado a absorber agua del exterior, en este caso la solución formada con agua

destilada y cloruro de sodio (NaCl), por lo cual ocurrirá la hinchazón y posterior

destrucción del eritrocito (hemolisis).

Una de las causas de error que notamos al momento de ejecutar el experimento se debió

a que los cálculos de las medidas tuvieron una variación leve a las indicadas en la guía

práctica. Esto afecto en la obtención de datos debido a que pudo alterar los datos que

esperábamos observar.

Conclusiones

Nuestra hipótesis fue correcta. Encontramos que la hemolisis en los

eritrocitos se ve aumentada mientras más hipotónica es la solución empleada. El

porcentaje de hemolisis fue el más bajo cuando se utilizó una solución al 4%

NaCl/1mLH2O. La hemolisis se incrementó cuando se utilizó una solución al 2,5%

NaCl/1mLH2O, lo cual confirma la veracidad de la hipótesis.

Referencias

Gerhard Thews, Ernest Mutschler, Peter Vaupel. “Anatomía,fisiología y patofisiología

del hombre”. Edición en español 1983. Páginas 127-129

Cecie, Starr, Ralph Taggart. “Biología: la unidad y diversidad de la vida”Página 90-92

HernanVeléz, Willian Rojas, Jaime Borrero y Jorge Restrepo. “Hematología”. Edición

2004. Página 91

Rodak F. B. “Hematología: Fundamentos y aplicaciones clínicas” 2ª ed. Argentina: 2005

http://cienciaexplicada.com/resistencia-globular.html

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003641.htm