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Agares utilizados Agar Salmonella – Shigella (SS) • Medio de siembra selectivo para aislar Salmonella y Shigella, diferencia organismos fermentadores de lactosa de los que no lo hacen e inhiben organismos coliformes. El verde brillante, la bilis de buey y la concentración de citratos y tiosulfato inhiben la flora restante. (Merck, 1994). Agar Sulfito Bismuto (SB) • Es un medio muy selectivo para el aislamiento de S.typhi y otras Salmonellas de heces, orina, aguas residuales y otras matrices donde pueden estarlo. Inhibe organismos Gram positivos (por la presencia de sulfito bismuto) y aumenta la cantidad de patógenos cuando existen bajas cantidades.
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Agares utilizados
Agar Salmonella – Shigella (SS)
• Medio de siembra selectivo para aislar Salmonella y Shigella, diferencia organismos fermentadores de lactosa de los que no lo hacen e inhiben organismos coliformes. El verde brillante, la bilis de buey y la concentración de citratos y tiosulfato inhiben la flora restante. (Merck, 1994).
Agar Sulfito Bismuto (SB)
• Es un medio muy selectivo para el aislamiento de S.typhi y otras Salmonellas de heces, orina, aguas residuales y otras matrices donde pueden estarlo. Inhibe organismos Gram positivos (por la presencia de sulfito bismuto) y aumenta la cantidad de patógenos cuando existen bajas cantidades.
Agares utilizados
Agar Xilosa, Lisina y Desoxicolato (XLD)
• Es un medio selectivo y diferencial de siembra específicamente creado para el aislamiento de Shigella y especímenes la familia Enterobacteriaceae patógenos. Contiene tiosulfato y citrato amónico férrico, además de una solución estéril de Desoxicalato sódico al 10%. La xilosa se emplea como fuente de carbono que es utilizada por estas bacterias para su fermentación, por último, Shigella se diferencia mediante la utilización de la lisina. (DIFCO, 1984).
Agar Verde brillante- Rojo fenol (BPL)
• Es un agar selectivo para aislamiento de Salmonella. Se compone de peptona de carne, cloruro de sodio, lactosa, rojo de fenol, verde brillante, agar-agar. El rojo fenol que actúa como indicador de pH vira a amarillo producto de la degradación de lactosa a ácido. Debido al verde brillante, la flora Gram positivo como S. typhi se inhiben.
Caldos utilizados
Caldo Rappaport Vassiliadis (RV)
• Se utiliza para el aislamiento selectivo de Salmonella en alimentos y otros materiales. Se compone de verde de malaquita, cloruro de magnesio, peptona de harina de soja (concentraciones bajas), cloruro de sodio, hidrogenofosfato di potásico y dihidrogenofosfato potásico. (Merck, 1994).
Caldo Selenito Cistina (SC)
• Se utiliza como medio de enriquecimiento de salmonella par su deteccion en alimentos (como productos lácteos). Se compone de peptona de caseína, L (-)- Cistina, lactosa y fosfato. El selenito inhibe el crecimiento de las bacterias coliformes y enterococcus. El caldo no inhibe a Proteus y Pseudomonas.
Caldo Tetrationato (TT)
• El caldo se compone de peptona de caseína, peptona de carne, mezcla de sales biliares, carbonato cálcico, tiosulfato sódico, aditivos: yoduro potásico, yodo y en menor cantidad verde brillante. (Merck, 1994). El tetrationato y tiosulfato inhiben coliformes y otras bacterias acompañantes.
Muestras a utilizar.
• Muestras de alimentos para detección de Salmonella.
1. Panita de Pollo.
2. Contre de Pollo.
3. Queso fresco.
• Muestras de alimentos para detección de Shigella.
1. Panita de Pollo.
2. Contre de Pollo.
3. Carne Molida.
Metodología.
• Determinación de Salmonella.
Extender por asada c/u de
los caldos en:
Incubar por 24 h
Transferir del homogenizado a caldos
Incubar Homogenizado a 35 C 1 C por 18 a 24 h
Homogenizar 25 a 50gr de muestra en 225 o 450 mL de agua peptonada tamponada
1 mL a tubo con 9 mL con caldo Selenito Cistina
Caldo Selenito Cistina a 35 C 1 C
Agar (XLD)
Agar( BPL)
Agar (SS)
Agar (SB)
1 mL a tubo con 9 mL con caldo Tetrationato
Caldo TT a 43 C 0,2 C (alta carga
microbiana)
a 35 C 1 C (baja carga microbiana)
Agar (XLD)
Agar (BPL)
Agar (SS)
Agar ( SB)
0,1 mL a tubo con 9 mL con caldo Rappaport Vassiliadis
Caldo RV a 42 C 1 C
Agar (XLD)
Agar (BPL)
Agar (SS)
Agar (SB)
Incubar las placas a 35 C 1 C por 24-48h
Observar en las placas la presencia de
colonias sospechosas
Realizar prebas bioqicas (TSI,LIA,MIO)
Fuente: Elaboración Propia, 2016
Fuente: Elaboración Propia, 2016
Figura N°1: Determinación de posible Salmonella.
• Determinación de Shigella.
Confirmación
Contabilizar
Incubar placas
Adicionar
Homogenizar vortex
Pesar eh incubar por 24h a 35 C
25gr de muestra adicionar a matras con 225 mL de agua peptonada tamponada
Preparar disoluciones
0,25 mL de c/ dilución sobre la superficie de cada placa que contiene agar XLD solidificado
a 35 C 1 C durante 24h
25 - 250 C como presuntas Shigellas a las colonias de color rojo , transparentes
De las presuntas Shigellas mediante pruebas Bioquimicas
Fuente: Elaboración Propia, 2016
Fuente: Elaboración Propia, 2016 Figura N°2: Determinación de posible Shigella.
Resultados Posibles. Agar Descripción general Colonias Salmonella específicas
Colonias Shigellas
específicas
Salmonella-Shigella
(SS)
La mayoría de Salmonellas y Shigellas
presentan colonias transparentes,
translúcidas u opacas y lisas.
Algunas Salmonellas son transparentes
con centro negro.
S.typhimurium: Transparente con centro
negro
S.enteritidis: Transparente con centro
negro.
S. flexneri: incoloro
Sulfito Bismuto (SB)
Salmonellas con excepción de S.paratyphi
y S.pollorum tienen centro negro, borde
claro, precipitado negro con brillo
metálico alrededor de las colonias(ojo de
conejo, ojo de pez)
S.typhimurium: negras con brillo metálico.
S.choleraesuis: negras con brillo metálico.
S.arizonae: negras con brillo metálico.
S.typhi: Negro con brillo metálico.
S.enteritidis: negro con brillo metálico.
S. sonnei: no tiene
crecimiento.
S. flexneri: marrón
Xilosa,Lisina
Desoxicalato (XLD)
Salmonellas del mismo color del medio
de cultivo, transparentes y a veces con
centro negro.
Shigella del mismo color que el medio de
cultivo, transparentes.
S.typhi: Anaranjado,ligeramente opaco.
S.typhimurium: Incolora, centro negro.
S.enteritidis: Incolora, centro negro
S. sonnei: Incolora sin centro
negro.
S. flexneri: Incolora sin centro
negro.
Verde brillante- Rojo
fenol (BPL)
Salmonellas colonias rosa palido,
transparente con halo rojo
S.typhimurium: Rosa en medio de cultivo
rojo S.choleraesuis: Rosa en medio de
cultivo rojo
S.enteritidis: Rosa en medio de cultivo rojo
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Fuente: Merck (1994) y DIFCO (1984).
Imágenes de resultados Posibles.
Figura N 3: Colonias de
Salmonella en Agar
Salmonella-Shigella
Figura N 4: Colonias de
Shigella en Agar
Salmonella-Shigella
Imágenes de resultados Posibles.
Figura N 5: Colonias
de Shigella en Agar
XLD.
Figura N 6: Colonias de
Salmonella en Agar XLD.
Imágenes de resultados Posibles.
Figura N 7: Colonias de
Salmonella en Agar Verde
Brillante-Rojo Fenol. (BPLS).
Figura N 8: Colonias de
Salmonella en Agar Sulfito
Bismuto.
Bibliografía
1. DIFCO Laboratories. (1984). Medios de Cultivo Deshidratados y Reactivos para Microbiología. USA.
2. Merck. (1994). Manual de Medios de Cultivo. Alemania.
3. Tabla Posibles Resultados del Instituto de Salud Pública de Chile [En línea]; [Fecha de consulta: 9 de abril de 2016]. Sitio web: http://www.ispch.cl/lab_amb/doc/microbiologia_alimentos/PRT-012.pdf .
