Índice de prácticas

Práctica No. 1Biometría hemática (serie blanca)

---------------------------------------------------------------------------- pág. 3- Preparación del frotis para las tinciones

--------------------------------------------------------- pág. 3- Método con la tinción de Giemsa

------------------------------------------------------------------ pág. 8- Método con la tinción de Wright

---------------------------------------------------------------- pág. 13

Práctica No. 2Examen general de orina (EGO)

---------------------------------------------------------------------------- pág. 19

Práctica No. 3Métodos coproparasitoscópicos

----------------------------------------------------------------------------- pág. 34- Método directo

--------------------------------------------------------------------------------------- pág.34

- Método de amiba en fresco ------------------------------------------------------------------------ pág. 38

- Método de Faust ------------------------------------------------------------------------------------ pág. 41

- Método de Ritchie ---------------------------------------------------------------------------------- pág. 45

- Método de copas ------------------------------------------------------------------------------------ pág. 51

- Método de Kato ------------------------------------------------------------------------------------- pág. 55

- Método de Willis ------------------------------------------------------------------------------------ pág. 58

- Método de Stoll-------------------------------------------------------------------------------------- pág. 61

- Método de Conatín --------------------------------------------------------------------------------- pág. 64

Práctica No. 4Exámenes inmunológicos

------------------------------------------------------------------------------------- pág. 70

Índice de investigaciones ------------------------------------------------------------------------------------- pág. 84

Práctica No. 3

Biometría hemática (serie blanca)

IntroducciónLa serie blanca es prácticamente la determinación del número de los

diferentes tipos de leucocitos que hay dentro de la sangre, entre los cuales podemos diferenciar 6 tipos que son:- Neutrófilos segmentados- Neutrófilos banda- Eosinófilos- Basófilos- Linfocitos

- Monocitos

ObjetivoEl objetivo de esta práctica es que el alumno aprenda a diferenciar los

diferentes tipos de leucocitos y también a realizar una correcta tinción con los métodos de Wright y Giemsa.

Preparación del frotis para las tincionesUn frotis sanguíneo es un barrido de una gota de sangre sobre un

porta. Es necesario realizar un frotis correctamente, ya que de ello depende el que el análisis de resultados correctos.

Material- Portas- Dos vasos de precipitado- Un tripié con tela de asbesto- Una varilla de vidrio- Unas pinzas para tubo de ensayo- Un mechero de bunsen- Una pipeta Pasteur con chupete- Un trapo que no suelte pelusa

Reactivos- Alcohol de 90º

Biológico- Una muestra sanguínea anticoagulada con EDTA

Metodología1. Lavar muy bien los portas con agua y jabón.

2. Una vez limpios los colocamos dentro de un vaso de precipitado que contenga agua hirviendo durante 5 minutos.

3. Posteriormente los con ayuda de la varilla y las pinzas sacamos los portas y los trasladamos a otro vaso de precipitado que contenga alcohol y los dejamos durante 2 minutos.

4. Luego sacamos los portas del alcohol y los secamos con un trapo que no suelte pelusa.

5. Tomamos un porta y le colocamos una gota de sangre, con ayuda de la pipeta Pasteur, cerca de un extremo.

6. Después agarramos otro porta, llamado porta extensor, formando un ángulo de 45º un poco al frente de la gota de sangre.

7. Deslizamos el porta extensor hacia atrás hasta que alcance la gota y ésta se extienda.

8. Antes de que la gota alcance el extremo del porta, lo deslizamos hacia adelante con un movimiento firme, uniforme y a una velocidad media.

9. Finalmente dejamos secar el frotis y listo, ya esta preparado para ser teñido con los métodos de tinción que mencionaremos más adelante.

Método con tinción de GiemsaEste método es muy tardado y se debe de realizar con tiempos

adecuados y reactivos no tan viejos porque se corre el riesgo de que nuestro frotis se queme.

Material- Un microscopio compuesto- Una cuba hidráulica- Una pipeta de 1, 5 y 10 mililitros- Un tubo de ensayo grande- Una pipeta Pasteur con chupete

Reactivos- Aceite de inmersión- Azul de metileno para Giemsa- Buffer o tampón pH 7.2- Metanol

Biológico- Un frotis sanguíneo

Metodología

1. Colocamos el frotis en el puente de la cuba hidráulica y lo cubrimos con metanol durante 3 minutos.

2. Dejamos secar el frotis al aire.

3. Ahora diluimos en un tubo de ensayo grande 0.2ml de azul de metileno para Giemsa con 2ml de tampón pH 7.2 y lo mezclamos suavemente.

4. Con la pipeta Pasteur cubrimos el frotis con la solución y dejamos actuar durante 35 minutos.

5. Posteriormente escurrimos, lavamos con agua de grifo primero y después con tampón pH 7.2 hasta eliminar los restos de colorante.

6. Dejamos escurrir y secamos en posición vertical.

7. Una vez seco nuestro frotis le colocamos una gota de aceite de inmersión y lo observamos en el microscopio a 100X.

8. Contamos en forma de zigzag los leucocitos hasta llegar a cien.

9. Anotamos nuestros resultados.

C.B.T.I.s NO. 44

Laboratorio de análisis clínicos“Luc Montaigner”

Nombre del paciente: Raimundo Benavides Guzmán Edad: 56 años Sexo: Masculino

Fecha: 4/Septiembre/2009Cuenta diferencial

(Giemsa)

Porcentaje del paciente

Valores normales

N. Segmentado % 40 – 79 %N. Banda % 0 – 11 %Eosinófilos % 0 – 7 %Basófilos % 0 – 3 %Linfocitos % 12 – 46 %Monocitos % 1 – 13 %

Método con tinción de WrightEste método a diferencia del de Giemsa es más rápido y fácil de

hacer, proporcionándonos los mismos resultados, todo es cuestión de gustos.

Material- Un microscopio compuesto- Una cuba hidráulica- Una pipeta de 1, 5 y 10 mililitros- Un tubo de ensayo grande

- Una pipeta Pasteur con chupete

Reactivos- Aceite de inmersión- Azul de metileno para Wright- Buffer o tampón pH 7.2

Biológico- Un frotis sanguíneo

Metodología1. Ponemos el frotis en el puente de la cuba hidráulica y le agregamos

1ml de azul de metileno para Wright durante 1 minuto.

2. Luego lavamos con tampón pH 7.2, dejamos escurrir y secar en posición vertical.

3. En un tubo de ensayo grande diluimos 0.5ml de azul de metileno para Wright junto con 0.5ml de tampón pH 7.2.

4. Con la pipeta Pasteur vertemos la solución sobre el frotis seco y dejamos teñir durante 4 minutos.

5. Posteriormente lavamos con agua de grifo primero y después con tampón pH 7.2.

6. Lo dejamos escurrir y secar en posición vertical.

7. Una vez seco el frotis le colocamos una gota de aceite de inmersión y observamos en el microscopio a 100X.

8. Procedemos a contar los leucocitos en forma de zigzag hasta llegar a cien.

9. Anotamos nuestros resultados.

C.B.T.I.s NO. 44

Laboratorio de análisis clínicos“Luc Montaigner”

Nombre del paciente: Raimundo Benavides Guzmán Edad: 56 años Sexo: Masculino

Fecha: 4/Septiembre/2009Cuenta diferencial

(Wright)

Porcentaje del paciente

Valores normales

N. Segmentado % 40 – 79 %N. Banda % 0 – 11 %Eosinófilos % 0 – 7 %Basófilos % 0 – 3 %Linfocitos % 12 – 46 %Monocitos % 1 – 13 %

ConclusiónHe llegado a la conclusión en esta práctica de que cuanto mayor

tiempo se deje el frotis en el colorante o en el metanol, los leucocitos se van a ir comprimiendo y también se nos quemará el frotis provocando que la tinción se vea muy oscura y no podamos identificar bien los núcleos.

ComentariosEs una práctica que me ha encantado siempre, es una de mis

favoritas no me aburro nunca de llevarla a cabo. Algo que no he logrado hacer con éstos dos tipos de tinciones es dejar a los leucocitos en un tamaño grande como lo hice con la tinción rápida que llevamos a cabo en tercer semestre.

___________________________Jovani Uriel Reyes Moreno

Práctica No. 4

Examen general de orina (EGO)

IntroducciónEl análisis de orina realizado en el laboratorio clínico, puede

proporcionar una información amplia, variada y útil del riñón de un individuo y de las enfermedades sistémicas que pueden afectar este órgano. Por medio de este análisis, es posible elucidar tanto desórdenes estructurales como desórdenes funcionales del riñón y del tracto urinario inferior, sus causas, y su pronóstico. La realización cuidadosa del examen de orina, por parte del laboratorio, ayuda al diagnóstico diferencial de numerosas enfermedades del sistema urinario. Usualmente, los datos de laboratorio obtenidos por medio de este

análisis, se logran sin dolor, daño o tensión para el paciente. Esta es la razón por la cual, la realización e interpretación correcta del análisis de orina, por parte del laboratorio permanecerá siempre como una herramienta esencial más no definitiva de la práctica clínica.

En la actualidad, se practican tres tipos de exámenes de orina: análisis de orina por tira húmeda, empleado generalmente por los médicos en sus consultorios y por los pacientes en sus casas; tamizaje de análisis húmedo de la orina, comúnmente llamado análisis básico o rutinario de orina; y citodiagnóstico de la orina, que es una evaluación citológica especializada del sedimento urinario que correlaciona con los análisis realizados por medio de la tira reactiva.

ObjetivoEsta práctica tiene como objetivo el que nosotros sepamos hacer un

buen examen general de orina, identificar muy bien los sedimentos, interpretar correctamente la tira reactiva y realizar a la perfección el examen físico.

Material- Un microscopio compuesto- Un uro densímetro- Portas y cubres- Una pipeta Pasteur- Una probeta de 250ml- Un cronómetro- Un tubo de ensayo- Una centrifugadora

Reactivos- Cintas o tiras reactivas para EGO (Examen General de Orina)- Un gotero con H2O (agua)

Biológico- Una muestra de orina

Metodología1. Comenzamos con el análisis físico, detectando el olor de la orina, si la

orina huele normal se dice que tiene un olor característico, pero en ocasiones puede oler dulce, amoniacal, etc.

2. Posteriormente de señala el color de la orina y su aspecto observándola, puede tener un color amarillo, amarillo ámbar, rojo, transparente y en cuanto a su aspecto puede ser sin sedimento o con sedimento.

3. Se coloca la muestra en una probeta para medir su volumen.

4. En la probetita del uro densímetro colocamos 25ml de orina.

5. Tomamos el uro densímetro con los dedos pulgar y medio para introducirlo dentro de la probetita y lo giramos un poco.

6. Observamos lateralmente, a nivel, la densidad que marca el uro densímetro.

7. Anotamos los resultados del examen físico realizado.

Examen físicoOlor CaracterísticoColor Amarillo

Aspecto Semiturbio con sedimentoVolumen 46ml.Densidad 1,015

8. Ahora continuamos con el examen químico, lo primero que hay que hacer es introducir en un tubo de ensayo la orina hasta que se llene casi todo, dejaremos como 1cm sin llenar.

9. Procedemos a introducir en el tubo con orina una tira reactiva durante 3 o 2 segundos a modo de que se empapen todos los cuadritos en ella de orina.

10. En el bote de las cintas reactivas vamos viendo el valor de cada uno de los cuadritos esperando a que hagan reacción durante cierto tiempo como se muestra en la tabla.

Pruebas Tiempos de lecturaGlucosa 30 segundosBilirrubina 30 segundosCetona (ácido acetoacético) 40 segundosGravedad específica (densidad) 45 segundosSangre 60 segundospH 60 segundosProteínas 60 segundos

Urobilinógeno 60 segundosNitritos 60 segundosLeucocitos 2 minutos

11. Anotamos los resultados del examen químico que realizamos.

Examen químicoGlucosa NegativoBilirrubina NegativoCetona Negativo

Densidad 1,015Sangre NegativopH 6.0Proteínas NegativoUrobilinógeno Normal (3.2 µmol/L)Nitritos NegativoLeucocitos Bajo (70 caCELULAS/µL)

12. Una vez terminados los exámenes anteriores continuamos con el examen microscópico de sedimento colocando en dos tubos de ensayo la misma cantidad de orina.

13. Colocamos los dos tubos con orina en lados opuestos de la centrifugadora y ponemos a centrifugas durante 5 minutos a 3500 rpm (revoluciones por minuto).

14. Una vez que se terminó de centrifugar nuestra muestra observaremos que ha quedado sedimento en la base del tubo.

15. Con la pipeta Pasteur colocamos una gota del sedimento en un porta, le ponemos una gota de agua y le colocamos un cubre.

16. En otro porta colocamos otra gota de sedimento, una gota de azul de metileno y colocamos el cubre.

17. Analizamos el primer porta sin teñir en el microscopio a 40X y contamos cuantos sedimentos hay por campo.

18. Anotamos los tipos de sedimentos por campo de la preparación en fresco.

Preparación en frescoCélulas epiteliales 3 – 15 por campo

Leucocitos 2 – 3 por campo

19. Lo mismo se hace en el segundo porta teñido con azul de metileno, observamos a 40X los tipos sedimentos por campo.

20. Anotamos los tipos de sedimento por campo de la preparación en azul de metileno.

Preparación en azulCélulas epiteliales 3 – 15 por campo

Leucocitos 1 – 4 por campo

21. Por último unimos todos nuestros resultados en uno sólo elaborando un reporte de nuestros análisis como se muestra a continuación.

C.B.T.I.s NO. 44

Laboratorio de análisis clínicos“Luc Montaigner”

Nombre del paciente: Claudia Edad: 25 años Sexo: Femenino

Fecha: 11/Septiembre/2009

Examen general de orina

(EGO)

Examen físicoOlor Característico

Color AmarilloAspecto Semiturbio con sedimentoVolumen 46 ml.Densidad 1,015

Examen químicoGlucosa Negativo

Bilirrubina NegativoCetona Negativo

Densidad 1,015Sangre Negativo

pH 6.0Proteínas Negativo

Urobilinógeno Normal (3.2 µmol/L)Nitritos Negativo

Leucocitos Bajo (70 caCELULAS/µL)

Examen microscópico (sedimento)Preparación en fresco

Células epiteliales 3 – 15 por campoLeucocitos 2 – 3 por campo

Preparación en azul de metilenoCélulas epiteliales 3 – 15 por campo

Leucocitos 1 – 4 por campo

ConclusionesHe llegado a la conclusión de que si no dejas reaccionar bien a la cinta

reactiva en los tiempos indicados, esta va a mostrar resultados erróneos, también es importante no contaminar a la cinta reactiva con alguna otra sustancia, ya que también se puede interpretar mal el resultado.

Aunque es una práctica muy sencilla, no por eso debemos de darle menor importancia, ya que si nos confiamos demasiado la vamos a hacer mal.

ComentariosEsta práctica me resultó fácil llevarla a cabo a diferencia de las demás

que hemos hecho, pero no por eso significa que no me haya agradado,

al contrario, se me hizo interesante, en especial cuando hice el examen de sedimento.

___________________________Jovani Uriel Reyes Moreno

Práctica No. 3

Métodos coproparasitoscópicos

IntroducciónCuando un paciente sufre de alguna parasitosis, es decir, que se ha

infestado con parásitos debido a una inoculación de los mismos por sus diferentes vectores tales como comida o agua contaminadas, animales, etc. es conveniente realizar un coproparasitoscópico el cual se va a

encargar de analizar el copro del paciente con el fin de encontrar huevecillos dentro de éste, cabe mencionar también que no todos los parásitos se van a encontrar sólo en las heces fecales, hay otros que se encuentran en la sangre, pero eso es otro rollo.

Lo que tratamos de buscar en un coproparasitoscópico principalmente son huevos de helmintos, quistes o larvas con el fin de llegar a un diagnóstico y tratar dicha parasitosis si es que existe.

ObjetivoEl objetivo de esta práctica es que el alumno aprenda a realizar

análisis de copro con cualquiera de los métodos que describiremos a continuación y así poder identificar más fácilmente a los parásitos encontrados.

Método directoEste examen es uno de los más sencillos y frecuentemente utilizados

en los laboratorios, la ventaja de este método es que se observa el copro tal y como está sin ningún colorante, por lo que si se encuentran parásitos vivos podremos observar aún su movimiento.

Material- Un microscopio compuesto- Un tubo de ensayo- Una pipeta Pasteur con chupete- Portas y cubres- Palillos de dientes

Reactivos- Solución fisiológica al 0.9%- Yodo lugol

Biológico- Una muestra de copro

Metodología1. Se coloca una pequeña porción de copro (aprox. 1gr) en un tubo de

ensayo con solución salina (aprox. 3ml) y se agita un poco.

2. Dejamos sedimentar la muestra y procedemos a tomar una porción del sedimento (el que está hasta el fondo) con ayuda de la pipeta Pasteur.

3. Depositamos una gota en un porta, le colocamos un cubre y observamos a 40X para encontrar algún parásito o sus huevos.

4. En otro porta procedemos a colocar un poco de copro con un palillo.

5. Luego le agregamos una gota de yodo lugol y mezclamos con ayuda del palillo.

6. Después le colocamos un cubre y observamos a 40X para encontrar algún parásito o sus huevos.

Método de amiba en frescoEste examen es útil cuando sospechamos de una posible amibiasis en

el paciente, ya que con este método podemos hacer que dicho parásito se reproduzca un poco para poder verlo mejor.

Material- Un microscopio compuesto- Un asa bacteriológica- Un tubo de ensayo- Un mechero bunsen- Un vaso de precipitado- Unas pinzas para tubo de ensayo- Una pipeta de 5ml- Una balanza granataria- Un termómetro- Portas y cubres

Reactivos- Solución salina

Biológico- Materia fecal

Metodología1. En un tubo de ensayo colocamos 5ml de solución salina con ayuda de

la pipeta.

2. Posteriormente agregamos 2gr de materia fecal y mezclamos bien.

3. Tomamos el tubo con las pinzas y lo colocamos dentro del vaso de precipitado, el cual contiene agua a 37ºC, para incubar.

4. Una vez que ya se incubó la muestra, tomamos con nuestra asa el sobrenadante (el que está en la superficie del tubo) y lo ponemos en un porta.

5. Colocamos un cubre y observamos a 40X.

Método de FaustEste es un método basado en el principio de la flotabilidad, que dice

que una masa con menor peso específico tendera a flotar en otra masa de mayor peso específico.

El sulfato de zinc en solución con peso específico de 1.180 ese mayor que algunas formas de parásitos, lo que les permite flotar, además de que esta sustancia no los deforma.

Material- Un microscopio compuesto- Portas y cubres- Un tubo de ensayo- Un vaso de precipitado- Un embudo- Una varilla de vidrio- Una centrifugadora- Una balanza granataria- Gasas

Reactivos- Sulfato de zinc- Yodo lugol- Solución salina

Biológico- Materia fecal

Metodología

1. Colocamos 2gr de materia fecal en un vaso de precipitado junto con 5ml de solución salina y lo mezclamos con ayuda de la varilla de vidrio.

2. Luego pasamos nuestra disolución a través de una gasa colocada en un embudo y se recolecta directamente en un tubo de ensayo.

3. Se centrifuga la muestra durante 1min a 2000rpm.

4. Decantamos el sobrenadante y volvemos a suspender el sedimento con otros 5ml de solución salina para posteriormente volver a centrifugar. Esto se repite 3 veces.

5. Ahora en vez de solución salina vamos a agregar 5ml de sulfato de zinc.

6. Se centrifuga la muestra durante 1min a 2000rpm y luego tomamos la película que queda en la superficie con un asa bacteriológica.

7. Depositamos la muestra en un porta y le agregamos una gota yodo lugol.

8. Colocamos un cubre y observamos en el microscopio a 40X.

Método de RitchieEste método tiene la ventaja de concentrar los quistes, huevos y

larvas, este es un método de sedimentación, el cual resulta más sucio que el de flotación.

Material- Un microscopio compuesto- Portas y cubres- Un vaso de precipitado- Una varilla de vidrio- Un embudo y gasas- Una centrifugadora- Una pipeta Pasteur- Un tubo de ensayo

Reactivos- Solución salina- Éter etílico- Solución de formaldehido al 10%- Yodo lugol

Biológico- Materia fecal

Metodología1. En el vaso de precipitado colocamos 2gr de materia fecal junto con

5ml de solución salina y lo homogenizamos con ayuda de la varilla de vidrio.

2. Luego pasamos nuestra suspensión a través de una gasa colocada dentro de nuestro embudo para filtrarla y recogerla en un tubo de ensayo.

3. Centrifugamos durante 1min a 2000rpm.

4. Decantamos es sobrenadante y volvemos a suspender el sedimento en otros 5ml de solución salina; centrifugamos y repetimos el mismo procedimiento varias veces hasta que el sobrenadante sea claro.

5. Al último sedimento se le añade 5ml de solución de formaldehido, lo mezclamos y dejamos reposar durante 10min.

6. Después de los 10min reposando, agregamos 2.5ml de éter etílico, tapamos el tubo y agitamos durante 30seg.

7. Luego centrifugamos durante 2min a 1500rpm.

8. Cuando terminamos de centrifugar observaremos 4 capas; éter en la superficie, luego un tapón de restos fecales, más abajo estará el formaldehido y en el fondo del tubo habrá sedimento.

9. Introducimos la pipeta Pasteur a través de las tres primeras capas hasta llegar al sedimento y ya en éste se extrae una gota del mismo la cual se colocará en un porta.

10. Añadimos una gota de yodo lugol, homogenizamos, colocamos un cubre y observamos en el microscopio a 40X.

Método de copasEste método es ideal para detectar huevos de helmintos que

generalmente no flotan con las técnicas usuales que utilizan soluciones más densas para tal objeto.

Material- Un microscopio compuesto- Portas y cubres- Tubo de ensayo- Pipeta Pasteur con chupete- Embudo y gasas- Un vaso de precipitado- Varilla de vidrio

Reactivos- Solución de detergente al 5%- Solución de verde de malaquita al 1%

Biológico- Materia fecal

Metodología1. Tomamos más o menos 2 o 3gr de materia fecal y la depositamos en

un vaso de precipitado para homogeneizarla con 100ml de agua de la llave con ayuda del agitador de vidrio.

2. Una vez echa nuestra disolución la hacemos pasar a través de una gasa que estará puesta dentro del embudo para recoger el filtrado directamente en un tubo de ensayo.

3. Posteriormente agregamos 2.5ml de colorante verde de malaquita, agitamos y añadimos 2.5ml de solución en detergente, volvemos a agitar perfectamente.

4. Por último completamos el volumen del tubo de ensayo con agua corriente y dejamos reposar durante 15min.

5. Decantamos el sobrenadante, agregamos más agua mezclando de nuevo y dejamos reposar otros 15min.

6. Decantamos nuevamente el sobrenadante y con una pipeta Pasteur tomamos el sedimento y colocamos una gota en un porta.

7. Ponemos sobre éste un cubre y observamos nuestra preparación a 40X.

Método de KatoÉste método resulta útil en la identificación de huevos de helmintos,

es un frotis grueso que en vez de utilizar un cubre ocupará papel celofán teñido con verde de malaquita.

Material- Un microscopio compuesto- Portas y cubres- Palillos- Papel celofán no resistente a la humedad

Reactivos- Solución de verde de malaquita al glicerol

Biológico- Materia fecal

Metodología1. Tomamos 50mg de materia fecal con un palillo y lo depositamos en

un porta.

2. Una vez que tenemos la muestra sobre el porta procedemos a cubrirla con un cuadro de papel celofán previamente mojado con la solución verde de malaquita al glicerol.

3. Invertimos la preparación sobre una hoja de papel filtro en una superficie lisa y presionamos hasta que la extensión cubra un área de aproximadamente 25mm2.

4. Volteamos nuestra preparación, retiramos el papel filtro y la dejamos reposar durante 1 hora a temperatura ambiente o durante 30min a 37ºC.

5. Una vez que haya pasado la hora de espera observamos la preparación a 40X para tratar de encontrar huevos de helmintos.

Método de WillisÉste se basa en un principio de flotación simple, utilizando una

solución de una densidad entre 1200 y 1250 en la cual los quistes y larvas flotan.

Material- Un microscopio compuesto- Portas y cubres- Un vaso de precipitado- Un tubo de ensayo- Una varilla de vidrio

Reactivos- Salmoera- Yodo lugol

Biológico- Materia fecal

Metodología1. Primero preparamos la salmoera, ésta la elaboraremos llenando el

vaso de precipitado con agua hasta la mitad, iremos agregando poco a poco cloruro de sodio hasta que éste no se pueda disolver más en el agua. Prácticamente la salmoera es una dilución saturada de cloruro de sodio en agua.

2. Luego de haber preparado la salmoera vamos a agregar una pequeña porción de heces fecales dentro de un tubo de ensayo, aproximadamente 2gr y le agregamos un poco de salmoera para homogeneizar.

3. Una vez diluido el copro agregamos salmoera hasta el borde del tubo, le colocamos un cubre un la boca del recipiente de tal manera que esté en contacto con la solución y dejamos reposar durante 15min.

4. Después de esos 15min procedemos a colocarle una gota de yodo lugol a un porta.

5. Tomamos el cubre que dejamos puesto sobre el tubo de ensayo y lo ponemos sobre nuestro porta que contiene la gota de yodo lugol y observamos en el microscopio a 40X.

Método de StollEste método se basa en los principios de saponificación,

homogeneización y aclaración. El hidróxido de sodio .1N al ponerse en contacto con las grasas de la materia fecal se saponifica, es decir, se espesa y se hace como el jabón, esto hace que los huevos de parásitos sean menos pegajosos, desinfecta y desodoriza la muestra.

Material- Un microscopio compuesto- Portas y cubres- Canicas- Una probeta de plástico- Una pipeta Pasteur

Reactivos

- Hidróxido de sodio .1 normal

Biológico- Materia fecal

Metodología1. Colocamos 56ml de hidróxido de sodio .1 normal en la probeta.

2. Añadimos copro poco a poco hasta que suba a la marca de 60ml.

3. Agregamos 20 canicas dentro de la probeta, la tapamos y agitamos vigorosamente de arriba hacia abajo hasta homogeneizar.

4. Una vez que terminamos de agitar se comenzarán a precipitar los huevos y residuos, con la pipeta Pasteur tomamos solución inmediatamente del centro de la disolución y colocamos una gota en un porta.

5. Colocamos un cubre y contamos los huevos a 40X.

Método de ConatínEn este método se va a utilizar el sedimento del método de Ritchie,

sólo que a este lo vamos a teñir para poder observar mejor a los parásitos.

Material- Un microscopio compuesto- Portas y cubres- Un vaso de precipitado- Un tubo de ensayo- Unas pinzas para tubo de ensayo

- Un mechero bunsen- Un tripié con tela de asbesto- Una centrifugadora- Una pipeta Pasteur- Un termómetro

Reactivos- Metanol- Calbolfusina- Ácido sulfúrico al 10%- Verde brillante al 1%- Hidróxido de sodio .2 normal- Aceite de inmersión

Biológico- Materia fecal

Metodología1. Al sedimento obtenido del método de Ritchie le vamos a aforar a 1ml

con agua destilada y agregamos 3ml de hidróxido de sodio .2 normal y agitamos.

2. Luego con las pinzas tomamos nuestro tubo y lo metemos dentro de nuestro vaso de precipitado con agua a 37ºC para incubarlo durante 30min.

3. Una vez incubado lo metemos dentro de la centrifugadora y lo centrifugamos durante 1min a 2000rpm.

4. Lavamos dos veces con solución salina y centrifugamos durante 1min a 2000rpm.

5. Una vez hecho esto realizamos un frotis con una gota de sedimento y teñimos con la técnica de Kink You, que a continuación se explica.

6. Fijamos nuestro frotis con metanol y lo pasamos ligeramente por la flama del mechero.

7. Lo teñimos con calbolfusina durante 3min y luego lo decoloramos con ácido sulfúrico al 10%.

8. Lo contrastamos con verde brillante al 1% durante 30 segundos, lo lavamos y lo dejamos secar.

9. Una vez seco nuestro frotis le colocamos una gota de aceite de inmersión y lo observamos en el microscopio a 100X.

Reporte del coproparasitoscópico

C.B.T.I.s NO. 44

Laboratorio de análisis clínicos“Luc Montaigner”

Nombre del paciente: Alexis Eduardo Reyes Moreno Edad: 13 años Sexo: Masculino

Fecha: 18/Septiembre/2009

Examen coproparasitoscópico

Métodos cuantitativos

Kato5600 huevos de anquilostoma

(h/ml/h)

Stoll320 huevos de anquilostoma por

gr. de heces

Métodos cualitativosDirecto Huevecillos de anquilostomaWillis Negativo

Amiba en fresco NegativoFaust NegativoCopas Huevecillos de anquilostomaRitchie Huevecillos de anquilostomaConatín Huevecillos de anquilostoma

ConclusionesEn esta práctica he llegado a la conclusión de que la uncinaria es uno

de los parásitos que se encuentran con más frecuencia en mis análisis. En cuanto a la ejecución de los métodos mi conclusión fue que los parásitos se verán mejor si se realiza la técnica correcta.

Comentarios

Estuvo muy bonita esta práctica, de hecho ya he hecho más análisis de este tipo y me he dado cuenta de que se encuentran uncinarias con frecuencia.

___________________________Jovani Uriel Reyes Moreno

Práctica No. 4

Exámenes inmunológicos

IntroducciónEn las reacciones febriles se detectan anticuerpos en el suero del

paciente contra: Salmonella, Brucella y Rickettsia.Con el término SALMONELOSIS se engloban cuadros clínicos distintos

como la "Fiebre tifoidea" y las "Salmonelosis no tifoideas". El nivel normal de aglutininas varía en diferentes poblaciones y circunstancias, también puede aumentar en cualquier periodo febril, por lo que el diagnóstico de Salmonelosis se debe basar en la historia clínica, en cultivos de heces y en cultivos de sangre.

La BRUCELOSIS también llamada "Fiebre de malta" o "Fiebre ondulante" se manifiesta inicialmente por fiebre, cefalea, dolor vertebral e inflamación en los ganglios y se diagnostica generalmente con la detección de anticuerpos específicos contra Brucella.

Debido a la dificultad existente para el aislamiento de las Rickettsia sp, el antígeno empleado para la determinación de anticuerpos es el de proteus OX-19.

Las RICKETTSIOSIS (tifus) engloban una amplia gama de padecimientos transmitidos por vectores como piojos, pulgas o garrapatas, y cuyo cuadro clínico se caracteriza por fiebre elevada, exantema y vasculitis.La prueba de aglutinación con proteus OX-19 solo tiene utilidad como prueba de tamisaje por ser inespecífica.

Objetivo

Que el alumno aprenda a realizar correctamente las reacciones febriles.

Material- Palillos y portas- Una placa para pruebas febriles- Tubos de ensayo- Una pipeta Pasteur con chupete y pipetas automáticas de 100µL y

1000µL con puntillas- Una centrifugadora

Reactivos- Antígenos para pruebas febriles- Antígenos para prueba de tipo sanguíneo y Rh- Alcohol de 96º

Biológico- Una muestra sanguínea sin anticoagulante (tubo rojo)- Una muestra sanguínea con anticoagulante EDTA (tubo lila)

Metodología1. Colocamos nuestra muestra sanguínea sin anticoagulante (tubo rojo)

en la centrifugadora y centrifugamos durante 5min a 3500rpm para obtener el suero.

2. En lo que se centrifuga nuestra muestra tomamos nuestra placa de pruebas febriles, la limpiamos con una torunda con alcohol y

observaremos que tiene unos círculos dibujados esparcidos en seis columnas y seis filas, la primer columna comenzando de izquierda a derecha corresponde a los círculos del Tífico O, luego le sigue el Tífico H, Paratífico A, Paratífico B, Brucella y por último encontraremos la columna de círculos de Proteus, dentro de esos círculos llevaremos a cabo las reacciones de aglutinación, cada fila se ocupará para hacer diluciones de concentración diferente, únicamente ocuparemos sólo 3 filas, la primer fila comenzando de arriba hacia abajo la ocuparemos para hacer diluciones 1:80, la segunda para hacer diluciones 1:160 y la tercera para diluciones 1:320.

3. Una vez que se terminó de centrifugar la muestra de sangre procedemos a hacer diluciones 1:80 en la primer fila de nuestra placa con el antígeno correspondiente a cada columna, es decir, en la dilución del tipo 1:80 vamos a agregar dentro de cada círculo de la primer fila 20µL del plasma obtenido junto con una gota del antígeno correspondiente a cada columna.

4. Ahora mezclamos cada dilución con un palillo diferente hasta homogeneizar perfectamente.

5. Tomamos nuestra placa por los extremos derecho e izquierdo y la movemos de tal manera que las diluciones que se encuentran dentro de cada círculo vayan girando para mezclarse bien, cuidando de que no salgan de los círculos marcados. Este movimiento lo mantenemos constante durante 5min.

6. Una vez que pasaron los 5min observaremos muy cautelosamente si alguna dilución aglutina, si no aglutina alguna disolución se dice que esa reacción fue negativa, pero si alguna aglutina procederemos a hacer una dilución 1:160 en la segunda fila sólo de los círculos que aglutinaron, en la cual ahora en vez de colocar 20µL de suero, procederemos a poner 10µL con una gota de antígeno correspondiente. Si en el caso anterior algún circulo sigue aglutinando nos pasaremos a la tercera fila para continuar con una dilución 1:320 de dicho o dichos círculos, en la cual ahora colocaremos 5µL de suero junto con una gota del antígeno correspondiente.

7. Ahora tomaremos una placa pequeña de plástico, la limpiamos con una torunda con alcohol y observaremos que ésta tiene tres columnas y dos filas, en esta placa se puede utilizar cualquier círculo.

8. Colocamos 50µL de suero dentro de un círculo de la placa y le agregamos una gota del antígeno anti-PCR.

9. Mezclamos con un palillo hasta homogeneizar la disolución.

10. Luego tomamos la placa por los extremos derecho e izquierdo y la meneamos de forma similar al paso 5 igualmente durante 5min.

11. Observamos cautelosamente si hubo alguna aglutinación.

12. Para el Factor Reumatoide, VDRL y anti-estreptolisina O seguimos los mismos pasos del 8 al 11, sólo que en vez de agregarle una gota de anti-PCR le vamos a colocar el antígeno específico para cada prueba.

13. Ahora procederemos a sacar el tipo sanguíneo y factor Rh, éste se va a realizar de dos formas: en tubo y en placa, comenzaremos con el

del tubo. Colocaremos 1ml de sangre con anticoagulante EDTA (la del tubo lila) en un tubo de ensayo.

14. Posteriormente le agregamos 3ml de solución salina para después centrifugarlo durante 1min a 2000rpm.

15. Cuando se haya terminado de centrifugar lo decantamos y volvemos a agregar otros 3ml de solución salina para posteriormente volver a centrifugar durante 1min a 2000rpm y decantar nuevamente, a esto se le conoce como lavado de hematíes.

16. En tres tubos colocamos una gota de nuestro lavado de hematíes con ayuda de la pipeta Pasteur.

17. Ahora colocaremos dos gotas de anti-A en un tubo, dos de anti-B en otro y dos de anti-D en el tercer tubo.

18. Los mezclamos suavemente y centrifugamos los tres tubos durante 1min a 2000rpm.

19. Posteriormente observamos cuales tubos aglutinan y cuales no para determinar el tipo sanguíneo y factor Rh.

20. Ahora haremos el tipo y Rh en placa. Tomamos un porta y le agregamos tres gotas de sangre con anticoagulante EDTA (la del tubo lila) separadas a lo largo del porta.

21. A la primera le agregamos una gota de anti-A, a la segunda una gota de anti-B y a la tercera una gota de anti-D.

22. Mezclamos cada una con un palillo diferente.

23. Observamos cuales gotas aglutinan y cuales no para determinar el tipo sanguíneo y factor Rh

Reporte de los exámenes inmunológicos

C.B.T.I.s NO. 44

Laboratorio de análisis clínicos“Luc Montaigner”

Nombre del paciente: Moisés Guzmán Mora Edad: 46 años Sexo: Masculino

Fecha: 2/Septiembre/2009Exámenes inmunológicos

Reacciones febrilesTífico O 1:320Tífico H Negativo

Paratífico A NegativoParatífico B Negativo

Brucella NegativoProteus 1:160

Pruebas inmunológicasProteína C reactiva NegativoFactor reumatoide Negativo

VDRL NegativoAnti-estreptolisina O Negativo

Tipo sanguíneo y factor Rh

TuboGrupo: A Factor Rh:

Positivo (+)

PlacaGrupo: A Factor Rh:

Positivo (+)

Prueba de coombsPositivo (+)

Conclusiones

He llegado a la conclusión de que no se deben de menear muy fuerte las placas porque se salen del círculo y luego se combinan con los demás, lo cual nos conlleva a un desperdicio de reactivos.

ComentariosEstuvo muy padre la práctica, es un poco tardada pero a pesar de

todo es divertida y fácil, es lo que más me encanta.

_________________________Jovani Uriel Reyes Moreno

Índice de investigaciones

Investigación No. 1Examen general de orina (EGO)

---------------------------------------------------------------------------- pág. 85- ¿Qué es el examen general de orina?

------------------------------------------------------------- pág. 85- La glucosa y sus resultados en el EGO

---------------------------------------------------------- pág. 85- La bilirrubina y sus resultados en el EGO

----------------------------------------------------- pág. 85- Las cetonas y sus resultados en el EGO

-------------------------------------------------------- pág. 85- La densidad y sus resultados en el EGO

-------------------------------------------------------- pág. 86- La sangre y sus resultados en el EGO

----------------------------------------------------------- pág. 86- El pH y sus resultados en el EGO

--------------------------------------------------------------- pág. 87- Las proteínas y sus resultados en el EGO

------------------------------------------------------ pág. 87- El urobilinógeno y sus resultados en el EGO

-------------------------------------------------- pág. 88- Los nitritos y sus resultados en el EGO

-------------------------------------------------------- pág. 88- Los leucocitos y sus resultados en el EGO

------------------------------------------------------ pág. 88

Examen general de orina (EGO) ¿Qué es el examen general de orina?

Un examen general de orina es un estudio que se le hace a la orina de un paciente con el fin de ayudar al médico a diagnosticar alguna infección o enfermedad o simplemente como un análisis de control del paciente. Este tipo de estudio es el más común en los laboratorios y se podría decir que son de rutina.

Parámetros de la tira reactivaLas tiras reactivas de orina consisten en unas pequeñas cintas de

plástico rígido, de unos pocos centímetros de longitud y alrededor de medio centímetro de anchura, a las que van pegados unos reactivos, que son diferentes dependiendo de lo que se quiera analizar.

Los reactivos son unos pequeños cuadraditos de un material poroso, de colores suaves. Según las tiras, puede haber diferente número de ellos a lo largo de la misma, en el caso de la tira reactiva que utilizamos

en el laboratorio del C.B.T.is cuenta con 10 parámetros que son: Glucosa, Bilirrubina, Cetonas, Densidad, Sangre, pH, Proteínas, Urobilinógeno, Nitritos y Leucocitos.

La glucosa y sus resultados en el EGO La glucosa es la principal fuente de energía para el metabolismo

celular. Se obtiene fundamentalmente a través de la alimentación, y se almacena principalmente en el hígado, el cual tiene un papel primordial en el mantenimiento de los niveles de glucosa en sangre (glucemia).

Los niveles de glucosa superiores a lo normal pueden ser un signo de:- Diabetes mellitus - Secreción anormal de glucosa de los riñones en la orina

(glucosuria renal)

La bilirrubina y sus resultados en el EGOLa bilirrubina es un pigmento biliar de color amarillo rojizo que resulta

del metabolismo de la hemoglobina. Dicho metabolismo inicia con la descomposición de los glóbulos rojos y luego es transportada por la albúmina en la sangre hasta el hígado.

La bilirrubina es poco soluble en agua. Es sensible a la luz y se descompone en presencia de ésta.

El incremento en los niveles de bilirrubina en la orina puede deberse a:

- Estenosis biliar - Cirrosis - Cálculos en el tracto biliar - Hepatitis con una obstrucción biliar asociada- Trauma quirúrgico que afecta el tracto biliar- Tumores del hígado o de la vesícula biliar

Las cetonas y sus resultados en el EGOLas cetonas (ácido betahidroxibutírico, ácido acetoacético y acetona)

son los productos finales del metabolismo rápido o excesivo de los ácidos grasos.

Un examen positivo puede indicar: - Anomalías metabólicas, incluyendo una diabetes no controlada o

enfermedad de almacenamiento del glucógeno. - Condiciones nutricionales anormales, incluyendo inanición, ayunos,

anorexia, dietas altas en proteínas o bajas en carbohidratos.

- Vómito frecuente durante un período prolongado, incluyendo hiperemesis gravídica (una forma severa de náuseas del embarazo).

- Trastornos de aumento del metabolismo, incluyendo hipertiroidismo, fiebre, enfermedad grave o aguda, quemaduras, embarazo, lactancia (alimentar a un bebé) o afección posquirúrgica.

La densidad y sus resultados en el EGOLa gravedad específica de la orina es un examen de laboratorio que

mide la concentración de partículas en la orina.El aumento en la gravedad específica de la orina puede deberse a:

- Deshidratación - Diarrea- Sudoración excesiva- Glucosuria - Insuficiencia cardíaca (relacionada con la disminución del flujo

sanguíneo a los riñones)- Estenosis de la arteria renal - Síndrome de secreción inadecuada de hormona antidiurética

(SIADH)- Vómitos- Restricción hídrica

La disminución en la gravedad específica de la orina puede deberse a:- Consumo excesivo de líquidos- Diabetes insípida central - Diabetes insípida nefrógena - Insuficiencia renal (es decir, pérdida de la capacidad para

reabsorber agua)- Pielonefritis

La sangre y sus resultados en el EGOLa sangre es un tejido líquido que recorre el organismo transportando

células, y todos los elementos necesarios para realizar sus funciones vitales y todo un conjunto de funciones muy complejas y muy importantes para la vida.

La cantidad de sangre de una persona está en relación con su edad, peso, sexo y altura, una persona adulta se puede considerar que tiene entre 4,5 y 6 litros de sangre.

Todos los órganos del cuerpo humano funcionan gracias a la sangre que circula por arterias, venas y capilares.

Existen muchas causas potenciales para la presencia de sangre en la orina. Con frecuencia, la orina sanguinolenta deriva de un problema en los riñones o alguna otra parte de las vías urinarias.

Entre las causas de los riñones y las vías urinarias están:- Cáncer de la vejiga o de los riñones- Fractura de la pelvis- Cálculos renales o cálculos en la vejiga - Enfermedad renal inmediatamente después de una faringitis

estreptocócica ( glomerulenefritis posestreptocócica), una causa clásica de sangre en la orina de los niños

- Insuficiencia renal- Infección en la vejiga, los riñones o la uretra - Inflamación de la vejiga, la uretra o el riñón ( glomerulonefritis)- Lesión al riñón- Poliquistosis renal - Procedimiento reciente en las vías urinarias, como cateterismo,

circuncisión, cirugía o biopsia del riñón

El pH y sus resultados en el EGOEl pH es una medida de la acidez o de la alcalinidad de una sustancia.Los ácidos y las bases tienen una característica que nos deja poder

medirlos, es la concentración de los iones de hidrógeno. Los ácidos fuertes tienen altas concentraciones de iones de hidrógeno y los ácidos débiles tienen concentraciones bajas.

Un pH alto en la orina puede deberse a:- Succión gástrica - Insuficiencia renal - Acidosis tubular renal - Infección urinaria - Vómito

Un pH bajo en la orina puede deberse a:- Enfermedad pulmonar obstructiva crónica (por ejemplo,

enfisema)- Cetoacidosis diabética - Diarrea - Inanición

Las proteínas y sus resultados en el EGO

Las proteínas son los materiales que desempeñan un mayor número de funciones en las células de todos los seres vivos. Por un lado, forman parte de la estructura básica de los tejidos (músculos, tendones, piel, uñas, etc.) y, por otro, desempeñan funciones metabólicas y reguladoras (asimilación de nutrientes, transporte de oxígeno y de grasas en la sangre, inactivación de materiales tóxicos o peligrosos, etc.). También son los elementos que definen la identidad de cada ser vivo, ya que son la base de la estructura del código genético (ADN) y de los sistemas de reconocimiento de organismos extraños en el sistema inmunitario.

Los resultados anormales pueden deberse a:- Amiloidosis- Pielonefritis bacteriana- Tumor en la vejiga- Insuficiencia cardíaca congestiva- Nefropatía diabética - Glomerulonefritis - Síndrome de Goodpasture - Intoxicación por metales pesados- Lupus eritematoso- Hipertensión maligna- Mieloma múltiple - Síndrome nefrótico- Terapia con fármacos nefrotóxicos- Poliquistosis renal - Preeclampsia

El urobilinógeno y sus resultados en el EGOEl urobilinógeno es un producto de la conjugación de la bilirrubina por

las bacterias intestinales en el tubo digestivo, que se absorbe hacia la circulación portal y es re-excretado por el hígado.

Los nitritos y sus resultados en el EGOLas bacterias son los agentes más frecuentes en las infecciones de las

vías urinarias. La Echerichia coli, causante de la mayoría de estas infecciones, y otros gérmenes patógenos de la orina, reducen los nitratos de la orina a nitritos durante su crecimiento. La prueba de los nitritos se basa en la capacidad de algunos microorganismos para reducir los nitratos a nitritos.

- La presencia de nitritos en orina puede indicar la presencia de hongos.

Los leucocitos y sus resultados en el EGOLos leucocitos o glóbulos blancos son células que están

principalmente en la sangre y circulan por ella con la función de combatir las infecciones o cuerpos extraños; pero en ocasiones pueden atacar los tejidos normales del propio cuerpo. Es una parte de las defensas inmunitarias del cuerpo humano.

- La presencia de leucocitos en la orina representa alguna infección urinaria.