antigeno anticuerpo
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REACCIONES ANTIGENO-ANTICUERPO
COMPONENTESANTIGENO
ANTICUERPO C. P
L.TCITOQUINAS
L-Memoria
SENSIBILIZACION
HIPERSENSIBILIDAD RETARDADA
REACCIONES ANTIGENO-ANTICUERPO
FASES DE LA REACCION1.- F. Oculta… - unión Ag-ac estable pero imperceptible
- forman complejos inmunes circulantes
- neutralización del antígeno
- opsonización .
2.- F. Visible…. - exteriorizacion de la reaccion
- demostración del anticuerpo producido
mediante pruebas serológicas Ag-ac
- reacciones de hipersensibilidad inmediata
o reacciones de hipersensibilidad tardía
REACCIONES ANTIGENO-ANTICUERPO
DETERMINACION DE LA REACCION
Ag-ac, EN LABORATORIO
Pruebas serológicas ( Inmunoserologia )
1.- Directas:
Demostración del ac, mediante un Ag conocido
Demostración del Ag, mediante un ac conocido
2.- Indirectas:
Demostración del choque Ag-ac, mediante un
anti-anticuerpo específico
Pruebas Serológicas Ag-ac
FACTORES MODULADORES
• FENOMENO DE ZONA (PROZONA): Una reacción Ag-ac , es perceptible si los dos componentes están en
proporción similar. - exceso de cualquiera de los dos componentes puede inhibir la
reaccion• CONCENTRACION SALINA Y ph : cantidad minima de electrolitos para exteriorizar la reaccion Ag-Ac
- soluc. Fisiológica(9ml de NaCl) optimo - ph ( 6 - 8.5 ). Optimo < o > concentracion inhibrn reacciones
inmunologicas• TEMPERATURA Y AGITACIÓN : - temperatura óptima ( 37- 40°C ) > mayor altera anticuerpos - permite una mayor expresión de determinantes antigénicos
TECNICAS INMUNOSEROLOGICAS
PROPIEDADES• Revelan generalmente determinados sistemas de reacción
Antígeno-anticuerpo.• El anticuerpo induce cambios en el Antígeno: • ( aglutinación , precipitación, etc.)• Técnicas simples detectan concentraciones altas de Ag o ac.• Técnicas complejas detectan concentraciones muy bajas de
Ag o ac.
Clasificación• Técnicas simples:
- de precipitación, Aglutinación,
- Fijación de Complemento, etc.• Técnicas con conjugados:
- Inmunofluorescencia ( I-F )
- Radioinmunoensayo ( R.I.A )
- Inmunoenzimoensayo (ELISA)
TECNICAS INMUNOSEROLOGICAS
Técnicas simplesVentajas
- Fácil implementación, técnicas sencillas
- No requieren mayor equipamiento.
- Bajo costo de operación- Resultados reproducibles- Fácilmente cuantificables- Reactivos de fácil consecución y de caducidad manejable.
Técnicas simples Desventajas:- Detectan concentraciones
altas de Ag o Ac.- Posibilidad de fenómeno
de Zona- Menos sensibles y menos
específicas.- Cada técnica detecta un
solo tipo de anticuerpo ( precipitinas, aglutininas)
REACCIONES DE PRECIPITACION
COMPONENTES
• Antígeno: Reactivo comercial soluble.
• Anticuerpo: Precipitinas (IgG) en el suero del pcte.
• Reacción (+): formación de precipitados ( m.líquidos)
formación de halos de difusión (m.sólidos)
REACCIONES DE PRECIPITACION
TIPOS1. En medio líquido:
2. En medios sólidos: en soporte de gel difunden los componentes ( halos de difusión )
Difusión simple Difusión doble
Precipitado
granular fino
Halos de turbidez
+
-Ej. Reacc. De Oudin, Eleck y Outcherloni (difteria)
Ej. Reacc . de V.D.R.L
REACCIONES DE AGLUTINACIONCOMPONENTES
• Antígeno: Reactivo comercial adsorvido en soportes
1. Para glucósidos…. Como soporte utilizan Eritrocitos. Ej. Antígeno de Klebsiellas,
Salmonellas, Tuberculina, etc.
2. Para Lípidos….. Como soporte…..cristales de colesterol y lecitina.
Ej. Antígeno cardiolipínico, Reacc. De V.D.R.L.
3. Para Proteínas… Como soporte…..partículas de látex o eritrocitos Ej. Reacciones de PCR, FR, Tests de embarazo, otros.
( En ciertos casos se puede adsorver el ANTICUERPO en lugar del ANTIGENO ).
Anticuerpo: Generalmente presente en el suero del pcte
REACCIONES DE AGLUTINACION
Tipos de reacción
1.- Aglutinación Directa: El antígeno (aglutinogeno) forma parte de una célula y es aglutinado por un anticuerpo comercial.(aglutinina)
ej. Aglutinación de antígenos de eritrocitos ( sist. ABO, Rh ).
A B A-B O
A B A B
RH +
RH -
A A B B
O
RH + RH -
Reacciones de Aglutinación
2.- Aglutinación indirecta:- Los Antígenos o los anticuerpos comerciales están fijados en
SOPORTES:
a) partículas de LATEX, Ej. Reacciones de FR, PCR, GRAVINDEX, etc
b) en ERITROCITOS ( R. de Hemaglutinación ).
Ej. Reacciones de DNA,Toxoplasma, etc.
- Los anticuerpos o antígenos que se buscan, están en el suero del
paciente.
LATEX
IgM Anti-PCR
Suero pcte….PCR
LATEX
IgG
Suero Pcte…Anti IgG ( F.R)
P.C.R F.R
Reacciones de aglutinación
Ventajas1. Mas sensible y específica que la anterior.
2. Sujeta con menos frecuencia a fenómeno de zona.
3. Reactivos más variados
4. Evaluación cualitativa y cuantitativa a simple vista
Desventajas1. Falsas negativas en exceso de anticuerpo
2. Problemas técnicos dependientes de los soportes
Otras Reacciones de Aglutinación
1. Reacciones de Hemaglutinación: - Utilizan Eritrocitos como soportes del antígeno o del anticuerpo
- La reacción positiva se expresa mediante aglutinación visible de los eritrocitos
2. Reacciones de Hemólisis: - Utilizan al Eritrocito como soporte del antígeno o anticuerpo.
- La reacción positiva induce + permeabilidad de la membrana del eritrocito
con liberación de hemoglobina al medio externo.
Otras Reacciones de Aglutinación
3. Reacciones de Inhibición de la Hemólisis:
Fundamento: Utilizan al eritrocito para demostrar en pctes, infección por bacterias productoras de
HEMOLISINAS ( estreptolisinas O ).
La reacción positiva ( HEMOLISIS ) detecta ausencia
de anti-estreptolisinas O …(ASTO NEGATIVO).
La reacción negativa ( NO HEMOLISIS ) detecta presencia de antiestreptolisinas…(ASTO POSITIVO).
Reacción de inhibición de la hemólisis“ A.S.T.O ”
Suero A.S.T.O (+) Suero A.S.T.O (-)
Eritrocitos O
Estreptolisina
Suero con
antiestreptolisina
Eritrocitos O
Estreptolisina O
Suero sin
Antiestreptolisina O
NO HEMOLISIS HEMOLISIS
Paciente enfermo Suero control
REACCION DE FIJACION DEL COMPLEMENTO
COMPONENTES1.- Anticuerpo (IgG o IgM). (FIJADOR DE COMPLEMENTO)
2.- Antígeno: comercial
3.- U. de Complemento: (Suero fresco de un animal)cobayo
4.- Sistema Hemolítico: ( eritrocitos de conejo,sensibilizados)
complejo ERITROCITO-anticuerpo
F de C +++ Lisis (----- ) F de C ------ Lisis (++++)
REACCION DE FIJACION DEL COMPLEMENTO
Propiedades1.-Alta sensibilidad y especificidad ( + de 80%)
2.-Detecta pequeñas concent. de anticuerpo ( 1 mcgr. ). IgG-IgM
3.- Utiliza Antígenos solubles o particulados.
4.- Utilizado para titular anticuerpos o control de calidad de
la técnicas anteriores.
5.- Técnica laboriosa., No utilizada de rutina
ej. Reacc. De Waserman…dx de sífilis
Técnica para dosificar Complemento total o sus unidades
TECNICAS CON CONJUGADOS
.- VENTAJAS:
- Altamente específicas y sensibles ( 90-96% ).- Detectan concentraciones muy bajas de Ag o ac.- Pueden establecer cualquier tipo de Igs. ( IgD-IgE ).- Reacciones tanto cualitativas como cuantitativas.
.- DESVENTAJAS:
- Requieren implementación costosa.- Reactivos de corta caducidad, costosos y en kits de multiples tests.- Algunas pruebas son de manejo cuidadoso ( recíduos en el RIA ).
TECNICAS COMPLEJAS CONANTICUERPOS o ANTIGENOS MARCADOS
(“Conjugados”)
TIPOS DE REACCIONES
• 1.- Inmunofluorescencia ( I.F).. marcador mas comun el Isotiocianato de
fluoresceina(permite la visualizacion con luz ultravioleta)
• 2.- Radioinmunoensayo ( R.I.A).. anticuerpo esta marcado con sust radioactivas como el Yodo
radiactivo ( Y125 - Y131 ).
• 3.- Enzimoinmunoensayo (E.L.I.S.A).. Cutiliza como marcador substractos enzimaticos como
fosfatasa alcalina o peroxidasas
METODOS PRINCIPALES
1.- Método Directo- En una sola etapa- Técnica más simple…. Mas costosa….menos utilizada ..poca disponibilidad de
conjugados
a.- Conjugado: Anticuerpo específico + Marcador de la reacción.
b.- Antígeno: Muestra clínica del paciente
cortes de tejido a estudiar obtenidos con crióstato y
fijados a una placa de vidrio
Positivo
a b b
METODOS PRINCIPALES
2.- Método Indirecto• 1.- Etapa: Fase oculta.- el antígeno comercial fijo en las paredes de un tubo se une al anticuerpo que está en la muestra del paciente.
• 2.- Etapa: Fase demostrativa.- el conjugado: un segundo anticuerpo dirigido contra el Anticuerpo específico del paciente, se une al idiotipo de este.• 3.- La muestra positiva se detecta mediante captación de la substancia utilizada como marcador del conjugado, mediante aparatos adecuados que valoran la concentracion del Ac.
METODOS PRINCIPALES
2.- Método Indirecto• 1.- Etapa: Fase oculta.-
• 2.- Etapa: Fase demostrativa.-
Fluorómetro
Contador gamma
Espectofotómetro