APLICACIONES EN EL LABORATORIO DE LAS ENZIMAS DE RESTRICIONES

En la actualidad la utilización de las enzimas de restricción ha permitido el desarrollo de tecnología del ADN recombinante y la biotecnología, el ADN recombinante se basa en la introducción de secuencia de ADN por año en un hospedero ósea de un ADN de otro ser en el hospedero este a su vez se incorpora este ADN extraño como si fuera uno propio, tiene muchas aplicaciones a nivel de la genética medicina y biotecnología por ejemplo tenemos a nivel de la como se genera insulina humana a partir de un plásmido que se ha añadido a una sepa de la E. coli que es una bacteria de la micro flora de los seres humanos, al añadir un gen aislado de la producción de la insulina humana al genoma de la E. coli se ha logrado la producción de la insulina sintética pero q a su vez tiene mucha relación y es idéntica a los de los humanos:

FABRICACION DE INSULINA:

Primeramente se clonan los genes con la β-galactosidasa en el plasmido pBR322. La recombinación de los plásmidos son amplificados en E. coli. Se lleva a cabo una transformación de la bacteria, en dos nucleótidos diferentes, luego la reacción entre la proteína β-gal y el gen de la insulina con la metionina hace que el complejo proteico cambie, expulsando de esta manera la molécula de la metionina y produciendo al final la insulina con menos aminoácidos que al inicio del proceso por el método de la recombinación.

El mecanismo de la separación de la insulina es a través del sistema RP-HPLC, a cual es utilizada para separar la insulina de otras especies, basada en una gran variedad de diferentes aminoácidos y gracias a la hidrofobicidad de la insulina relacionada con otros componentes. La tendencia de las proteínas debe ser generalmente con las proteínas más grandes que se encuentren en una fase estacionaria, en la cual tienen una gran limitación del soporte de alcalinidad.

POLIMORFISMOS DE LONGITUD DE FRAGMENTO POR ENZIMA DE RESTRICCION (RFLP)

Las enzimas de restricción reconocen secuencias muy específicas de nucleótidos en el ADN

El ADN de distintos individuos rara vez tiene la misma disposición de sitios de restricción y de distintas entre estos sitios.

Por lo tanto, se dice que la población es polimorfa (tiene muchas formas) con respecto a estos patrones de fragmento de restricción. Estas diferencias se conocen con la denominación: polimorfismos de longitud de fragmento por enzima de restricción (RFLP). Estas diferencias pueden aparecer a partir de mutaciones.

Al cortar una muestra de ADN con una enzima de restricción concreta, se obtiene fragmentos de ADN de distinta longitud. Estos fragmentos se separan mediante electroforesis en gel

Esto proporciona un patrón de bandas que es exclusivo para el ADN que se analiza en particular. Estas “huellas dactilares del ADN” se utilizan en medicina forense para las investigaciones criminales.

Los RFLP también son útiles como marcadores para identificar determinados grupos de personas, susceptibles de padecer ciertas enfermedades genéticas.