Caracteriación química de azafrán por técnicas de HPLC · Fase móvil B: H2O/Ac. Fórmico 0,05%...
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Caracteriación química de azafrán por técnicas de HPLC
Caracteriación química de azafrán por
técnicas de HPLC
Dr. Fernando Lafont. Univesidad Córdoba
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Introducción
Preparación muestra
Instrumentación analítica
Resultados
HPLC-UV/DAD
UHPLC-QTOF
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Preparación de muestra
20000 rpm
Dispersar
0,25 g muestra homogeneizada
Transferir muestra a un tubo de 50 mL
Añadir 25 mL 50% H2O/50% MeOH
CentrifugarInyectar HPLC-UV/DAD
Inyectar UHPLC-TOF
Filtrar Transferir 1 mL a vial
0.2 µm
100 µL PI (2-nitroanilina)
+
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Instrumentación HPLC-UV/DAD
HPLC
Fase móvil A: H2O
Fase móvil B:ACN
Columna: C18, 10 cm × 4,6 mm 2,7 µm
Flujo de la columna: 1 mL min-1
Temperatura: 35ºC
Inyección de muestra: 5 µl
Detector UV/DAD
ʎ1: 440 nm
ʎ2: 250 nm
ʎ3: 310 nm
Tiempo(min)
A(%)
B(%)
6 20 80
29 50 50
30 100 0
34 100 0
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Instrumentación UHPLC-TOF
HPLC
Fase móvil A: Metanol
Fase móvil B: H2O/Ac. Fórmico 0,05%
Columna: C18, 10 cm × 2,1 mm 1,8 µm
Flujo de la columna: 0,40 mL min-1
Temperatura columna: 40ºC
Inyección de muestra: 5 µl
Fuente
Ionización: Electrospray positivo, 5500 V
Temperatura: 225 ºC
Detector MS: Bruker
Maxis Impact II,
Resolución: 40000
Adquisición de datos:
bbCID (m/z 60-1000)
Tiempo(min)
A(%)
B(%)
0 95 5
0.35 95 5
10 50 100
14 0 100
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Resultados HPLC-UV/DAD
ʎ3: 310 nm
ʎ1: 440 nm
ʎ2: 250 nm
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Resultados HPLC-UV/DAD
ʎ1: 440 nm
ʎ2: 250 nm
ʎ3: 310 nm
Longitud de onda(nm)
Compuestoscuantificados
440 Crocín
250 Picocrocín y kaempherol
310 Safranal
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Resultados HPLC-UV/DAD
Crocín (suma)
Criterios de linealidad
r2 > 0,995
RSD < 10%
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Resultados HPLC-UV/DAD
Muestras totales: 139
Compuesto Valor medio(mg/g)
RSD(%)
Safranal 1.87 43.5
Crocín 174 26.7
Kaempherol 0.55 25.5
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Resultados HPLC/UV-DAD
Toledo
Ciudad Real
Albacete
Cuenca
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Resultados HPLC/QTof
Detección de 368 compuestos diferentes
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