CELULAS HEK293. LINEA CELULAR

La línea de células HEK se ha utilizado ampliamente como herramienta de expresión de las proteínas recombinantes, ya que se generó hace más de 25 años. Aunque de origen epitelial, su maquinaria bioquímica es capaz de llevar a cabo la mayor parte del plegado posterior a la traducción y el procesamiento requerido para generar proteína funcional, madura a partir de un amplio espectro de ambos ácidos nucleicos de mamíferos y no mamíferos. Aunque popular como un sistema de expresión transitorio, este tipo de células también se ha visto un amplio uso en formas transfectadas de manera estable (células transformadas) es decir, para estudiar una variedad de preguntas de biología celular en la neurobiología.Los principales atributos que han hecho de la célula HEK una opción popular entre los electrofisiólogos para estudiar los canales de los receptores aislados incluyen; su reproducción y mantenimiento rápido y fácil; IMPREGNABILIDAD transfección utilizando una amplia variedad de métodos; alta eficiencia de transfección y la producción de proteínas; fiel traducción y procesamiento de las proteínas; y tamaño de células pequeñas con procesos mínimos adecuados para la experimentación de fijación de voltaje. Estos, y otros atributos, también significan que las evaluaciones biológicas bioquímica / celulares complementarias de proteínas expresadas se pueden realizar en conjunto con análisis funcionales para establecer perfiles farmacológicos y biofísicos detallados para la acción de nuevos fármacos y sus dianas. El aumento de la cantidad de información de la secuencia disponible en el genoma humano ha puesto un mayor énfasis en los sistemas de expresión de células heterólogas como objetivos para la evaluación de alto rendimiento estructura-función de nuevas dianas de medicamentos y marcadores de la enfermedad. Aquí hemos puesto de manifiesto algunas de las características innatas de la célula HEK con el fin de que su idoneidad como un vehículo para la expresión de un producto génico se puede evaluar para las necesidades particulares. También hemos detallado algunos de los métodos estándar utilizados para la transfección y obtención de datos funcionales a partir de técnicas de registro electrofisiológico.

Orígenes de la línea celular HEK293:

HEK293 es una línea celular derivada de células de riñón embrionarias humanas cultivadas en cultivo de tejidos. También son conocidos, más informal, como las células HEK. Esta línea particular se inició por la transformación y el cultivo de las células HEK normales con adenovirus 5 ADN cizallado. La transformación dio lugar a la incorporación de aproximadamente 4,5 kilobases del genoma viral en el cromosoma humano 19 de las células HEK. La línea se cultivó el científico Alex Van der Eb, a principios de 1970, en su laboratorio en la Universidad de Leiden, Holanda.La transformación fue ejecutado por Frank Graham, otra científica Van der laboratorio de Eb, que inventó el método de fosfato de calcio para la transfección de células. La fuente de las células era un feto abortado

saludable. El nombre HEK293 se thusly nombrado porque era experimento 293a de Frank Graham.

El tipo de célula renal que la línea celular HEK293 es desconocido, y es difícil de caracterizar de manera concluyente la células después de la transformación, ya que el adenovirus 5 podría haber alterado significativamente la morfología y la expresión de células, y los riñones de embriones son una mezcla heterogénea de casi todos los tipos de células presentes en el cuerpo. De hecho, se ha especulado por investigadores independientes, incluyendo Van der Eb sí mismo, que las células pueden ser neuronal en origen. Esto es posible, aunque la mayoría de las células derivadas de un riñón embrionario serían endotelial, epitelial, o los fibroblastos. Origen neuronal se sospecha debido a la presencia de la presencia de ARNm y productos génicos se encuentran típicamente en las neuronas.

Expresión en células HEK293:

Factor de liberación de corticotropina tipo 1 receptor [10]

Receptores de esfingosina-1-fosfato EDG1, EDG3 y EDG5 [11]

Receptores de acetilcolina muscarínicos M3 [12]

Receptor de potencial transitorio TRPC1, TRPC3, TRPC4, TRPC6 [13]

HEK293 Citogenética:

El número cromosómico modal para las células HEK293 es 64, que se produce en el 60% de las células. Las células con ploidías mayores ocurren con menos frecuencia, a una tasa del 4,2%. Líneas celulares HEK293 muestran cierta inestabilidad citogenética.