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Centro de Investigación en Alimentación
y Desarrollo, A.C.
ESTUDIOS CINÉTICOS Y CONFORMACIONALES
DE LA BETAÍNA ALDEHÍDO DESHIDROGENASA
DE RIÑÓN DE CERDO
Por:
HECTOR GUMERCINDO AYALA CASTRO
TESIS APHOl3ADA POI LA
COOl DINACIÓN DE CIENCIA DE LOS ALIMENTOS
COMO l EQUISITO PAHCIAL PAHA OBTENER EL Gl ADO DE
DOCTORADO EN CIENCIAS
Heni1osillo, Sonora, México Agosto del 2007
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RESUMEN
Como parte del mecanismo concentrador de orina, las células de la médula
renaI están expuestas a un ambiente hiperosmótico, conteniendo altas
concentraciones de iones inorgánicos y urea. La síntesis glicina betaína (GB)
es crucial para el ajuste osmótico de las células renales. Para que esta síntesis
se lleve a cabo, la betaína aldeíhldo deshidrogenasa (BADH) debe de
mantener su actividad y estabilidad bajo dichas condiciones ambientales. Se
encontró que la BADH se inactiva completamente a 45°C, formando agregados
de muy alto peso molecular. La fuerza iónica dada por cationes monovalentes
(K+), incrementa la termoestabilidad de la enzima. La desnaturalización
térmica de la enzima analizada mediante fluorescencia indica que ésta se lleva
a cabo en dos etapas. El K+ estabiliza significativamente a la enzima durante
la primera etapa de transición, no así en la segunda, donde la temperatura es
extrema para la BADH. Altas concentraciones de urea inducen la agregación
de la BADH, siendo ésta revertida a fuerza iónica fisiológica y alta, lo que
significa que bajo condiciones fisiológicas renales, la BADH puede mantener
su estabilidad y por tanto, su actividad bajo condiciones de alta concentración
de urea. Concentraciones fisiológicas de urea inhiben de manera competitiva a
la BADH con respecto a NAD+, y no-competitiva con respecto a BA, bajo
condiciones saturantes de los sustratos. Las constantes de afinidad aparentes
para NAD+ se ven poco afectadas por urea; sin embargo para BA, se
incrementan un orden de magnitud bajo estas condiciones. A condiciones
subsaturantes, la inhibición por urea es mixta con respecto a NAD+, y no-
competitiva con respecto a BA. El efecto de la urea sobre la KmBA se
incrementa 3 veces, es menos drástico bajo estas condiciones.
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condiciones subsaturantes de sustratos, la inhibición por urea es mixta con
rnspecto a NAD', y no•competltiva con respecto a BA El efecto de la urea
sobre la KmllA se Incrementa 3 vecc:\s, es menos drástico bajo estas
condicloni s.
El dlsulflram es un fármaco que Inhibe a las aldel1ldo
deshldrogenasas y es usado en el tratamiento del alcoholismo. A pH 7.0 y
bajo condiciones de pseudo prlrner orden, concentraciones por debajo de 30
1,1M de DSF inhiben a la 13ADH de rif'ión de cerdo. Concentraciones
fisiológicas de betrilna alde1·1ldo y glicina betalna protegen parcialmente a la
enzima contra la lnactivación, mientras que las de NAD' y NADH la pl'()teglm
compkitmnente. Este r,fecto protector de NAD' es dependiente de la
concentración y los datos obtenidos sugieren que la coenz.irna induce
cambios conforn1acionales que protegen tl la BADH de la inactivación por
disulfirarn.
La regulación d( la actividad de la l.3ADH renal está directamente
influenciada por el medio ambiente en el cual se encuentra. l...a fuerza iónica
y las concentraciones de NAD' dese111pef1an papelt s irnportanl.es en dicha
rc;gulación.
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