Citometría de flujo con fluorescencia en urianálisis
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Citometría de flujo
con fluorescencia
en urianálisis
10.03.16• XV Reunión Científica LABCAM • Anna Corominas, Sysmex España • Puertollano
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Agenda
01
02
03
04
05
Tecnología
Beneficios automatización
Aplicaciones
Estudios
Innovación – UN-series
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Tecnología
XV Reunión Científica LABCAM • Anna Corominas, Sysmex España • Puertollano • 310.03.2016
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CFF en URI (I)
La orina marcada es transportada através del canal mediante un fluidoenvolvente.
Las partículas presentes en la orina sedisponen una detrás de la otra,gracias a la fuerza hidrodinámicaque ejerce el fluido transportador através del canal.
La disposición en fila de a uno de laspartículas, permite un recuento yclasificación precisos.
La velocidad del flujo está en el rangode metros por segundo, consiguiendouna elevada velocidad de recuento(miles de partículas por segundo).
XV Reunión Científica LABCAM • Anna Corominas, Sysmex España • Puertollano • 410.03.2016
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CFF en URI (II)
Uso de Marcadores de Polimetina en la CFF:
Gracias a la amplia capacidad de absorción y a la potente fluorescencia
de los marcadores, se pueden detectar incluso a niveles de “ultratrazas“,
permitiendo un elevado ratio de detección de las partículas de orina
marcadas selectivamente.
Marcaje óptimo y selectivo de las distintas partículas de la orina, gracias
a los distintos grupos moleculares reactivos presentes en los distintos
marcadores.
El sistema de reactivos empleado permite una tinción óptima,
gracias a:
XV Reunión Científica LABCAM • Anna Corominas, Sysmex España • Puertollano • 510.03.2016
Valor de pH óptimo
Pretratamiento de las
membranas celulares
Previene tinciones
inespecíficas
Acelera la tinción selectiva
Disuelve las sales presentes
Temperatura óptima para la
tinción
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Al atravesar el haz láser, las partículas
marcadas emiten un pulso momentáneo de
fluorescencia.
Este pulso de fluorescencia se mide
mediante fotomultiplicadores.
Dispersión frontal (FSC) tamaño de la
partícula.
Dispersión lateral (SSC) superficie y la
complejidad interna de la partícula.
Intensidad de fluorescencia (FI) capacidad de
tinción de cada partícula.
CFF en URI (III)
XV Reunión Científica LABCAM • Anna Corominas, Sysmex España • Puertollano • 610.03.2016
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La características ópticas son diferentes entre cada partícula – patrón
único que permite su clasificación y recuento.
CFF en URI (IV)
XV Reunión Científica LABCAM • Anna Corominas, Sysmex España • Puertollano • 710.03.2016
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CFF en URI (V)
XV Reunión Científica LABCAM • Anna Corominas, Sysmex España • Puertollano • 810.03.2016
Caso clínico
Pielonefritis
Hombre, 91 años
Molestias: fiebre
<Hallazgos Clínicos>
El paciente presentaba una fiebre de 38ºC y no había tenido apetito
desde hacía 2 días. Al momento de la revisión, su recuento de
leucocitos fue de 16500 WBC/µL y proteína C reactiva de 11,45
mg/dL. El examen de orina mostró piuria evidente y fue hospitalizado
para su tratamiento. El cultivo de orina fue positivo para Escherichia
Colii (106 /mL). La condición del paciente mejoró con los antibióticos.
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Beneficios automatización del urianálisis
XV Reunión Científica LABCAM • Anna Corominas, Sysmex España • Puertollano • 910.03.2016
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Beneficios
La automatización cambia el urianálisis
aportando:
Mayor rapidez en la obtención de resultados:
Ofrece un mejor servicio a los facultativos
Diagnóstico prematuro tratamiento o no desde el
inicio
Menor carga de trabajo manual
Disminución errores de manipulación
Ahorro de costes
Mejora en la calidad y la estandarización
Mayor facilidad de conseguir los requisitos de
acreditación
Resultados de alta calidad
XV Reunión Científica LABCAM • Anna Corominas, Sysmex España • Puertollano • 1010.03.2016
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Aplicaciones
XV Reunión Científica LABCAM • Anna Corominas, Sysmex España • Puertollano • 1110.03.2016
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Aplicaciones de la CFF (I)
XV Reunión Científica LABCAM • Anna Corominas, Sysmex España • Puertollano • 1210.03.2016
Sistemático y Sedimento urinario
● Discriminar muestras negativas
● Ahorro de tiempo de FEA en muestras negativas
● Augmento de disponibilidad de tiempo para muestras positivas
● Mejor indicación de las muestras patológicas
o Infecciones de tracto urinario
o Hematuria
URINOGRAMA (sedimento)
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Aplicaciones de la CFF (II)
• Posibilidad de análisis de los siguientes líquidos:
• Líquido cefaloraquídeo
• Líquido pleural
• Líquido ascítico
• CAPD (diálisis peritoneal)
• Líquido sinovial
• No requiere ningún pretratamiento – se evitan errores de preparación
• Capacidad de detección en rangos bajos – relevancia clínica
• Rápido procesamiento y fácil recuento celular. Preparación de citospin
directamente después del análisis.
• No requiere recuento manual.
XV Reunión Científica LABCAM • Anna Corominas, Sysmex España • Puertollano • 1310.03.2016
LÍQUIDOS BIOLÓGICOS
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Aplicaciones de la CFF (III)
• Tecnología reconocida por la guías clínicas de la SEIMC
• Punto de corte para bacteriuria y leucocituria
• Otros parámetros de interés: EC, SRC, Levaduras
• Ventajas:
Informar el paciente negativo en minutos
Ayudar a la lucha contra la resistencia a antibioticos
Disminución de siembra
Posible asociación a MALDI-TOF - Ahorro tiempo
XV Reunión Científica LABCAM • Anna Corominas, Sysmex España • Puertollano • 1410.03.2016
CRIBADO UROCULTIVOS
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Estudios
XV Reunión Científica LABCAM • Anna Corominas, Sysmex España • Puertollano • 1510.03.2016
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Evaluación del UF-500i (I)
•XV Reunión Científica LABCAM • Anna Corominas, Sysmex España • Puertollano • 1610.03.2016
Hospital Santa Bárbara (Puertollano)
Objetivos:
Se pretende validar las características del contador de partículas en
orina, UF-500i, en comparación con el método de referencia
recomendado.
• Repetitividad (precisión) para hematíes y leucocitos
• Linealidad: diluciones en serie de muestras de orina con una alta
concentración de hematíes y leucocitos.
• Comparación del recuento de partículas en la orina con el método
de rutina usado en el laboratorio, así como con el método de
referencia según ISLH (cámara Fuchs Rosenthal). Se estudia la
correlación entre el UF-500i y el método de referencia de contaje
de partículas en el microscopio.
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Evaluación del UF-500i (II)
•XV Reunión Científica LABCAM • Anna Corominas, Sysmex España • Puertollano • 1710.03.2016
Objetivos (II):
¿Puede el UF-500i ser usado como un sistema de cribado previo al
urocultivo, descartando aquellas muestras que no tengan indicaciones
de infección de tracto urinario como indican las guidelines
internacionales?
• Comparación con el método de rutina usado en microbiología.
Correlación entre el UF-500i y el urocultivo.
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Evaluación del UF-500i (III)
Punto de corte UF-500i: LEUCOS > 15/µl y BACT > 100/µl
Total analizados = 97 Cultivos negativos = 60 Cultivos positivos = 37
Cultivos positivos UF: 45
FP= 8 TP=37
Cultivos negativos UF: 52
FN= 0 TN=52
Sensibilidad = 100% Valor predictivo negativo = 100%
Especificidad = 86,67 % Valor predictivo positivo = 82,22%
Reducción de siembra (cultivos) = 53,60%
•XV Reunión Científica LABCAM • Anna Corominas, Sysmex España • Puertollano • 1810.03.2016
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Evaluación del UF-500i (IV)
•XV Reunión Científica LABCAM • Anna Corominas, Sysmex España • Puertollano • 1910.03.2016
La reducción de siembra de orinas es de 53,60%
La correlación del contaje de Hematíes y Leucocitos
en el UF-500i y en la cámara de Fuchs Rosenthal
es muy buena. (RBC r= 0,999 y WBC r=0,950)
La linealidad del contaje de Hematíes y Leucocitos
es muy buena (RBC R2=0,997 y WBC R2= 0,999)
La precisión del contaje de Hematíes y Leucocitos
es muy buena (cv% RBC=1,55 y cv% WBC = 0,99)
Conclusiones
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Estudio URISCAM (I)
Estudio multicéntrico en 6 hospitales del SESCAM
Servicios de Microbiología participantes:
Hospital La Mancha Centro
Hospital Santa Bárbara
Hospital General de Guadalajara
Hospital Universitario de Ciudad Real
Hospital Nuestra Señora del Prado
Hospital Universitario Virgen de la Salud
Objetivo
Determinar la validez y precisión de la citometría en la detección de las
infecciones del tracto urinario y/o bacteriurias asintomáticas para ser usado como
método de cribado previo al urocultivo.
XV Reunión Científica LABCAM • Anna Corominas, Sysmex España • Puertollano •2010.03.2016
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Variables predictivas significativas ITU/BA:
Bacterias, Morfoflogia, Leucocitos y
Edad
Incidencia ITU/BA 15,6%, 156‰
XV Reunión Científica LABCAM • Anna Corominas, Sysmex España • Puertollano • 2110.03.2016
Estudio URISCAM (II)
Tamaño muestral pequeño para bolsas colectoras
y orinas de sondaje
Mala concordancia morfología UF vs cultivo
Sin influencia del conservante
Conclusiones (I)
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El 69% de los FN eran orinas contaminadas
Errores diagnósticos: 1,17% (0,36%)
XV Reunión Científica LABCAM • Anna Corominas, Sysmex España • Puertollano • 2210.03.2016
Estudio URISCAM (III)
Punto de corte 21 bacterias
BUEN MÉTODO DIAGNÓSTICO
El método seleccionado permite un ahorro
de siembras del 38% de las muestras
Algoritmo predictivo (reglas de decisión):
S=94,9%, E= 47,4%, VPP=35%, VPN=97%,
Kappa=0,289 VÁLIDO PARA CRIBADO
Conclusiones (II)
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Innovación – UN-series
XV Reunión Científica LABCAM • Anna Corominas, Sysmex España • Puertollano • 2310.03.2016
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UN-series
UF-5000 UC-3500UD-10
XV Reunión Científica LABCAM • Anna Corominas, Sysmex España • Puertollano • 2410.03.2016
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UN-series
UCUC
UFUF
UFUFUD
XV Reunión Científica LABCAM • Anna Corominas, Sysmex España • Puertollano • 2510.03.2016
UCUC UF
UFUF
UF
UD
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UN-series
UCUC
UFUF
UFUFUD
XV Reunión Científica LABCAM • Anna Corominas, Sysmex España • Puertollano • 2610.03.2016
SISTEMA MODULAR DE
AUTOMATIZACIÓN COMPLETA DEL URINÁLISIS
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La innovación constante es la única forma de mantenerse competitivo, porqué ninguna ventaja es sostenible en el largo plazo. – Jorge González Moore
Gracias por su atención
·Anna Corominas·
Sysmex España, S. L.