Columnas Acquity UPLC & Nuevos Rellenos LC€¦ · Amplia y creciente selección de rellenos de...
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©2010 Waters Corporation
Columnas Acquity UPLC & Nuevos Rellenos LC
Bàrbara Bagó
Facultad Química - Universidad de Sevilla
3 de Noviembre 2011
©2011 Waters Corporation 2
Agenda
Columnas Acquity UPLC
HILIC
Nuevos Rellenos en Fase Reversa — HSS CN
— HSS PFP
Nuevas columnas 2.5 um eXtended Performance [XP]
©2011 Waters Corporation 3
Columnas Waters
Styragel®
µBondapak™
DeltaPak®
1964 1979 1973
1992
Symmetry®
Spherisorb®
Atlantis ®
Symmetry® 300
XTerra®
XTerraPrep®
1998
Nova-Pak®
ProteinPakTM
Pico-TagTM
SymmetryShield®
1984
1986
2002
1999 1994 2003
Atlantis ® HILIC Silica Prep OBD™
Intelligent SpeedTM
BioSuite™ NanoEase™
2004
ACQUITY UPLC® BEH SunFire™ Columns
PrepPak®
1976
1958
Atlantis® T3
ACQUITY UPLC® HSS T3 AccQTagTM Ultra
2006
2005
XBridge™
2007
ACQUITY UPLC ® HSS C18 and HSS C18 SB
2008
XBridge™ HILIC
2009
ACQUITY UPLC® BEH Amide ACQUITY UPLC® BEH Glycan ACQUITY HSS HPLC Columns
2010
ACQUITY UPLC® BEH200 SEC XSelect CSH HPLC columns
ACQUITY CSH Columns Viridis SFC Columns
ProteinPak High Rs IEX
AccQTagTM
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La oferta más amplia en Columnas UPLC – Hasta los 15 – 18 K PSI
BEH C18
BEH C8
BEH Fenilo
BEH Shield RP18
BEH HILIC
BEH Amida
CSH C18
CSH Fluoro-Fenilo
HSS T3
HSS C18
HSS C18 SB
5 partículas base • 130Å, 200Å and 300Å BEH [Ethylene Bridged Hybrid], HSS [High
Strength Silica] and CSH [Charged Surface Hybrid]
• Todos disponibles en tamaños de partícula HPLC y UPLC
Amplia y creciente selección de rellenos de columna • 15 fases estacionarias
• BEH 130Å C18, C8, Shield RP18, Fenil, HILIC y Amida
• BEH 300Å C18 y C4
• BEH 200Å SEC
• HSS C18, T3, C18 SB, HSS CN & HSS PFP
• CSH C18, Fluoro-Fenilo y Fenilo-Hexilo
Contrastadas soluciones para aplicaciones específicas • AAA, OST, PST, PrST y Glicanos
Escalabilidad entre HPLC y UPLC Columnas XBridge HPLC y ACQUITY UPLC BEH
Columnas HSS HPLC y ACQUITY UPLC HSS
Columnas XSelect HPLC y ACQUITY CSH
Precolumnas VanGuard
Tecnología eCord
CSH Fenilo-Hexilo
Si
O
O
O
Si
F
F
F
F
F
O
O
O
Si
O
O
O
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Precolumnas VanGuard™ Diseñadas para aplicaciones UPLC®
Las primeras y únicas precolumnas desarrolladas para trabajar en rutina a presiones de hasta 15.000 – 18.000 psi (1.000 – 1.200 bar)
Diseño de muy baja dispersión
Protección de la columna de UPLC®, manteniendo su eficacia
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Dimensiones Columnas ACQUITY UPLC™
Diámetro interno (1.0 mm, 2.1 mm y 3.0 mm)
— Como recomendación genérica usar 2.1 mm
— Usar sólo 1 mm en situaciones específicas
o Volumen de muestra muy pequeño
— Nuevas columnas de 3.0 mm id
o Recomendadas en separaciones isocráticas
o Superior capacidad de carga
Longitud (30 mm, 75 mm, 50 mm, 100 mm y 150 mm)
— Si el objetivo prioritario es RAPIDEZ
o Empezar con 50 mm de longitud
— Si el objetivo prioritario es RESOLUCION
o Empezar con 100 mm de longitud
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Columnas UPLC - Nuevas dimensiones: 75 mm longitud
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Columnas Acquity CSH [Charged Surface Hybrid]: Tecnología CSH
Amplio rango de selectividades con un
elevado nivel de reproducibilidad
Superior forma de pico/capacidad de carga para compuestos básicos
Idealmente adecuadas para fases móviles con
baja fuerza iónica, sin tamponar o bien tamponadas
Rápido equilibrado de columna al cambiar entre diferentes pH’s
Excepcional reproducibilidad lote - a - lote
Escalabilidad entre plataformas tecnológicas HPLC y UPLC
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Columnas Acquity CSH [Charged Surface Hybrid]:
CSH C18
— Mid/high coverage trifunctional C18
— Particle size: 1.7 µm [UPLC]; 3.5 and 5 µm [XSelect HPLC Columns]
— pH range: 1 – 11; Temp. limit: 80°C
— Superior peak shape for bases in buffered and low ionic strength mobile phases
— Lower retentivity for bases (vs. BEH C18)
CSH Fluoro-Phenyl — Non end-capped trifunctional pentafluorophenyl (PFP)
— Particle size: 1.7 µm [UPLC]; 3.5 and 5 µm [XSelect HPLC Columns]
— pH range: 1 – 8; Temp. limit: 60°C
— Exceptional peak shape and lower retentivity for bases with exceptional selectivity differences
— Market-leading reproducibility
CSH Phenyl-Hexyl — Trifunctional phenyl-hexyl
— Particle size: 1.7 µm [UPLC]; 3.5 and 5 µm [XSelect HPLC Columns]
— pH range: 1 – 11; Temp. limit: 80°C
— Exceptional peak shape for bases
— Complementary selectivity for aromatic species
1.7 µm
UPLC
HPLC
3.5, 5 µm
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Tecnología CSH: Controlled Surface Charge Yields High Performance
Column: 2.1 x 50 mm MP A: water
MP B: acetonitrile MP C: 2% formic acid
Gradient: 25-35%B in 2 min, 35 – 95%B from 2 -
3 min; [2.5% C held constant]
Inj. Vol.: 5 µL Sample Conc.: 10
µg/mL Detection UV @ 254 nm Sampling rate: 20 Hz
Filter: 0.1 sec System: ACQUITY UPLC H-Class with ACQUITY UPLC PDA and SQD
Tricyclic
antidepressants: 1. Doxepin
2. Desipramine 3. Imipramine 4. Nortriptyline 5. Amitriptyline 6. Trimipramine
1
AU
0.00
0.05
0.10
ACQUITY CSH C18 1.7 µm 0.05 % formic acid
Peak capacity =71
2 3 4
5 6
Minutes
0.00 1.00 2.00 3.00 4.00
0.00
Minutes
0.00 1.00 2.00 3.00 4.00
AU
0.05
0.10
Fused Core C18 1.7 µm 0.05 % formic acid
Peak capacity = 26
1 2 3 4 5 6
Comparative separations may not be representative of all applications
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Columnas Acquity BEH [Ethylene Bridged Hybrid]: Tecnología BEH
Columnas de aplicación general
— Amplio rango de compuestos
— Fases móviles tamponadas
— Estabilidad a pH elevado es lo más importante
Excepcional comportamiento cromatográfico en cualquier plataforma tecnológica
Elevada eficiencia, forma de pico y estabilidad
Combinación exclusiva de rango de pH, límite de temperatura y presión
Escalabilidad entre plataformas tecnológicas HPLC y UPLC®
Amplio rango de fases estacionarias
Tecnología de partícula híbrida adecuada para el desarrollo de métodos
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Columnas Acquity BEH [Ethylene Bridged Hybrid]: Químicas Fase Reversa
BEH C18 — Enlace trifucnional - ligando C18
— Tamaño partícula: 1.7 µm [UPLC]; 2.5, 3.5 , 5 y 10 µm [Columnas HPLC XBridge]
— Rango pH: 1 – 12; Límite temp.: 80°C — Excepcional eficacia y forma de pico
BEH C8 — Enlace trifuncional- ligando C8
— Tamaño partícula: 1.7 µm [UPLC]; 2.5, 3.5 , 5 y 10 µm [Columnas HPLC XBridge]
— Rango pH: 1 – 12; Límite temp.: 60°C — Menor hidrofobicidad que C18
BEH Shield RP18 — Enlace monofuncional, grupo carbamato embebido [pH 2 – 11]
— Tamaño partícula: 1.7 µm [UPLC]; 2.5, 3.5 , 5 y 10 µm [Columnas HPLC XBridge]
— Rango pH: 2 – 11; Límite temp.: 50°C — Selectividad alternativa
BEH Fenilo — Enlace trifuncional – ligando C6-Fenilo
— Tamaño partícula: 1.7 µm [UPLC]; 2.5, 3.5 y 5 µm [Columnas HPLC XBridge]
— Rango pH: 1 – 12; Límite temp.: 80°C — Selectividad complementaria para compuestos aromáticos
1.7 µm
UPLC
HPLC
2.5, 3.5, 5 & 10 µm
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Columnas Acquity HSS [High Strength Silica]
HSS T3 — Baja densidad de ligando, enlace trifucnional - ligando C18 [pH 2 – 8]
— Tamaño de partñicula: 1.8 µm [UPLC]; 3.5 y 5 µm [Columnas HPLC HSS]
— Rango pH: 2 – 8; Límite temp.: 45°C
— C18 compatible con fases móviles acuosas con elevada vida de columna
— Recomendada para máxima retención de compuestos polares en fase reversa
HSS C18 — Elevada cobertura, enlace trifuncional – ligando C18 [pH 1 – 8]
— Tamaño de partícula: 1.8 µm [UPLC]; 3.5 y 5 µm [Columnas HPLC HSS ]
— Rango pH: 1 – 8; Límite temp.: 45°C
— Universal, elevado comportamiento C18
— Proprietary endcapping technique for superior peak shape and lifetime
HSS C18 SB [Selectivity para Bases] — Baja densidad de ligando, enlace trifuncional - ligando C18 [pH 2 – 8]
— Tamaño de partícula: 1.8 µm [UPLC]; 3.5 y 5 µm [Columnas HPLC HSS]
— Rango pH: 2 – 8; Límite temp.: 45°C
— C18 sin endcapping diseñada para in teracción silanólica y selectividad alternativa
1.8 µm
UPLC
HPLC
3.5 and 5 µm
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¿Qué opciones existen para mejorar la retención de compuestos polares?
Probar HILIC
Analitos Polares – Límitaciones en la Aproximación por Fase Reversa
Inferior sensibilidad en la detección por MS — Los analitos se retienen en un elevado contenido acuoso en la fase
móvil
— Más difícil desolvatar fases móviles acuosas en MS
Retención inadecuada si el analito está cargado — Los analitos con elevado pKa se retendrán menos en las fases
móviles habituales a pH ácido
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¿Qué es HILIC?
HILIC - Hydrophilic Interaction Chromatography
Retención de compuestos altamente polares no retenidos por fase reversa
— Menor interferencia de componentes de la matriz
Selectividad complementaria a la fase reversa — Los pesticidas polares se retienen más que las interferencias
Hidrofóbicas Sensibilidad superior en MS
— Fases móviles con elevado contenido orgánico (> 80% ACN) favorece la respuesta ESI-MS
— Inyección directa de extractosaltamente orgánicos sin dilución — Facilita el uso de pequeños volúmenes de muestra
Elevado procesamiento de muestras
— Inyección directa de extractos de elevado contenido orgáncio que provienen de PPT, LLE o SPE sin necesidad de diluir o bien
evaporar y reconstituir
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Columnas Acquity BEH [Ethylene Bridged Hybrid]: Químicas HILIC
1.7 µm
UPLC
HPLC
2.5, 3.5, 5 & 10 µm
BEH HILIC — Partícula híbrida puente etileno sin funcionalizar
— Tamaño de partícula: 1.7 µm [UPLC]; 2.5, 3.5 y 5 µm [Columnas HPLC
XBridge]
— Rango pH: 1 – 9; Límite temp.: 45°C
— Excepcional forma de pico y retención para analitos básicos polares
BEH Amida — Selectividad alternativa para separaciones HILIC
— Tamaño de partícula: 1.7 µm [UPLC]; 3.5 µm [Columnas HPLCXBridge]
— Rango pH: 2 – 11; Límite temp.: 90°C
— Diseñada para la retención de analitos polares ácidos, neutros y básicos
— Columna ideal para carbohidratos/azúcares y glicanos
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Comparación Selectividad BEH Amida vs. BEH HILIC
Compounds 1. Methacrylic Acid
2. Cytosine 3. Nortriptyline 4. Nicotinic Acid
AU
0.00
0.20
0.40
0.60
3
1 2
4
Minutes 0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00
AU
0.00
0.20
0.40
0.60 1
2
3
4
ACQUITY UPLC BEH HILIC 2.1 x 100 mm, 1.7 µm
Isocratic mobile phase of 90/5/5 ACN/EtOH/10 mM CH3COONH4 in H2O with 0.02% CH3COOH, flow rate 0.5 mL/min, column temp. 25 °C, 1.5 µL injection, 60 µg/mL each compound, sample diluent 75/25 ACN/MeOH, UV 210 nm
ACQUITY UPLC BEH Amide 2.1 x 100 mm, 1.7 µm
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Análisis azúcares en Columna 1.7µm BEH Amida
1) Fructose, 2) Glucose, 3) Sucrose, 4) Maltose, 5) Lactose
ACQUITY ELSD using 0.29mL/min at 35°C, Isocratic with 0.2%TEA in 75% ACN
Minutes 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0
Food Sugars (1mg/mL)
1
Blueberry Jam Extract
(5mg/mL)
2
3
4
5
1
2
4
P-T
olu
am
ide
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Agenda
Columnas Acquity UPLC
HILIC
Nuevos Rellenos en Fase Reversa — HSS CN
— HSS PFP
Nuevas columnas 2.5 um eXtended Performance [XP]
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2 Plataformas en Columnas LC completamente escalables
Familia diseñada y optimizada para
Estabilidad pH
Columnas LC más compatibles con detección MS en el mercado
Familia diseñada y optimizada para Selectividad
Múltiples sustratos de partícula
para resolver múltiples problemas cromatográficos
1.7 [UPLC], 2.5, 3.5, 5 y 10 µm 1.8 [UPLC], 2.5, 3.5 y 5 µm HSS
1.7 [UPLC], 2.5, 3.5 y 5 µm CSH
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Ever-Growing Selectivity Range XBridge/BEH: 2005
ACQUITY BEH Phenyl XBridge Phenyl
ACQUITY BEH C18 XBridge C18
ACQUITY BEH Shield RP18 XBridge Shield RP18
ACQUITY BEH C8 XBridge C8
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Ever-Growing Selectivity Range XBridge/BEH, HSS: 2008
ACQUITY BEH Phenyl XBridge Phenyl
ACQUITY BEH C18 XBridge C18
ACQUITY BEH Shield RP18 XBridge Shield RP18
ACQUITY BEH C8 XBridge C8
ACQUITY HSS C18 SB XSelect HSS C18 SB
ACQUITY HSS C18 XSelect HSS C18
ACQUITY HSS T3 XSelect HSS T3
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Ever-Growing Selectivity Range XBridge/BEH, XSelect CSH & HSS: 2010
ACQUITY BEH Phenyl XBridge Phenyl
ACQUITY BEH C18 XBridge C18
ACQUITY BEH Shield RP18 XBridge Shield RP18
ACQUITY BEH C8 XBridge C8
ACQUITY HSS C18 SB XSelect HSS C18 SB
ACQUITY HSS C18 XSelect HSS C18
ACQUITY HSS T3 XSelect HSS T3
ACQUITY CSH C18 XSelect CSH C18
ACQUITY CSH Phenyl-Hexyl XSelect CSH Phenyl-Hexyl
ACQUITY CSH Fluoro-Phenyl XSelect CSH Fluoro-Phenyl
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Ever-Growing Selectivity Range XBridge/BEH, XSelect CSH & HSS: 2011
ACQUITY BEH Phenyl XBridge Phenyl
ACQUITY BEH C18 XBridge C18
ACQUITY BEH Shield RP18 XBridge Shield RP18
ACQUITY BEH C8 XBridge C8
ACQUITY HSS C18 SB XSelect HSS C18 SB
ACQUITY HSS C18 XSelect HSS C18
ACQUITY HSS T3 XSelect HSS T3
ACQUITY CSH C18 XSelect CSH C18
ACQUITY CSH Phenyl-Hexyl XSelect CSH Phenyl-Hexyl
ACQUITY CSH Fluoro-Phenyl Xselect CSH Fluoro-Phenyl
ACQUITY HSS CN XSelect HSS CN
ACQUITY HSS PFP XSelect HSS PFP
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Nuevos Rellenos XSelect/ACQUITY UPLC
HSS PFP —Selectividad excepcional para
isómeros posicionales, compuestos halogenados y compuestos polares
HSS Ciano —Estable, compatible con RP & NP,
química CN reproducible
—Baja hidrofobicidad y selectividad única comparada con ligando C18
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Descripción Producto XSelect HSS/ACQUITY UPLC HSS CN
Ofrece al cromatografista una fase para: — Baja hiydrofobicidad para una rápida elución de los analitos
hidrofóbicos
— Selectividad única
— Compatible con Fase Normal
Beneficios Diferenciales: — Significativa menor retención que C18 (típicamente requiere
menor % orgánico en fase móvil)
— Compatible con fases móviles altamente acuosas
— Estable, bajo sangrado en separaciones LC-MS
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Mezcla Compuestos Básicos en columna CN
ACQUITY UPLC HSS CN
0.000
0.010
0.020
0.030
0.000
0.010
0.020
0.030
0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50
1
2
3 4
5
6
7
Zorbax SB-CN 1
2
3 4
5
6
7
Compuestos: 1. Aminopyrazine
2. Pindolol 3. Quinine
4. Labetalol 5. Verapamil 6. Diltiazem
7. Amitriptyline
Gradiente: 30% al 60% MeOH con Formiato Amónico 10 mM
Ambas Columnas: 2.1 x 50 mm, 1.7 μm ó 1.8 μm
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Descripción Producto: XSelect HSS/ACQUITY UPLC HSS PFP
Ofrece al cromatografista mecanismos de selectividad múltiples que incluyen: — puentes de hidrógeno — dipolo-dipolo — aromáticos (pi-pi) — hidrofóbico (fase reversa)
Análisis:
Isómeros posicionales, compuestos halogenados y compuestos polares
Simple positioning vs. CSH Fluoro-Phenyl
— HSS PFP: SUPERIOR retención de compuestos básicos — CSH Fluoro-Fenil: MENOR retención de compuestos básicos
©2011 Waters Corporation 29 Minutes 0.0 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00
Condiciones : Columns: 2.1 x 50 mm Mobile Phase A: 0.1% CF3COOH in H2O Mobile Phase B: 0.08% CF3COOH in ACN Flow Rate: 0.5 mL/min Gradient: Time Profile Curve (min) %A %B 0.0 92 8 6 0.1 92 8 6 4.45 50 50 7 4.86 10 90 6 5.0 92 8 6 6.0 92 8 6 Injection Volume: 1.0 µL Sample Diluent: 50:50 H2O: MeOH with 0.05% CF3COOH Sample Conc.: 100 µg/mL Temperature: 40 oC Detection: UV @ 330 nm Sampling rate: 40 pts/sec Time Constant: 0.1 Instrument: Waters ACQUITY UPLC®, with ACQUITY UPLC® TUV
Compuestos Ácidos 1. Caftaric acid 2. Chlorogenic acid 3. Cynarin 4. Echinacoside 5. Cichoric acid
UPLC® Gama Selectividad Derivados Ácido Caféico
HSS PFP
1
2
3
4
5
4
1
2
3
CSH Fluoro-Fenil 5
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Comaparación: Antidepresivos Tricíclicos
Compounds 1. Trimethoprim 2. Nordoxepin 3. Doxepin 4. Nortriptyline 5. Imipramine 6. Amitriptyline 7. Trimipramine
ACQUITY UPLC HSS PFP, 1.8 µm, 2.1 X 50mm
Kinetex PFP, 1.7 µm, 2.1X50 mm
0.000
0.002
0.004
0.006
0.008
0.010
0.012
0.014
0.016
0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00
1
2
3 4 5 6 7
1
2 3
4 6 7
0.000
0.005
0.010
0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00
5
RPHAve = 3.04
RPHAve = 17.77
System: ACQUITY UPLC® H-Class with ACQUITY UPLC ® PDA Detector
Mobile Phase A: 10mM NH4COOH, pH3.0
Mobile Phase B: ACN
Isocratic Mobile Phase: 60:40; A:B
Flow Rate: 0.5 mL/min
Injection Volume: 1 µL
Column Temperature: 30 °C
UV Detection: 254 nm
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Agenda
Columnas Acquity UPLC
HILIC
Nuevos Rellenos en Fase Reversa — HSS CN
— HSS PFP
Nuevas columnas 2.5 um eXtended Performance [XP]
©2011 Waters Corporation 32
Nuevas Columnas 2.5 um XP eXtended Performance [XP]
Empaquetadas en hardware de baja dispersión – hardware UPLC
Diseñadas para trabajar hasta presiones de 18000psi
Compatibles con tecnología HPLC, UHPLC & UPLC
Configuraciones disponibles:
— Diámetros: 2.1 mm / 3.0 mm (4.6 mm Enero 2012)
— Longitudes: 30 mm / 50 mm / 75 mm / 100 mm
— 14 Fases Estacionarias
Empaquetadas con partículas XBridge [BEH], XSelect [CSH&HSS] de 2.5 um con los siguientes ligandos: — BEH C18, Shield RP18, C8, HILIC & Amide
— CSH C18, CSH Fenil-Hexil, CSH Fluoro-Fenil
— HSS C18, T3, C18 SB, Ciano & PFP
©2011 Waters Corporation 33
Columnas 2.5 µm eXtended Performance [XP]
Rápida Optimización de Métodos guiados por Farmacopea (USP, EP)
• Las columnas 2.5 µm XP ofrecen la flexibilidad para transferir métodos HOY (de acuerdo con las guías de reducción del 50% del tamaño de partícula; 5 µm-a-2.5 µm)
Baja Contrapresión, Elevado Throughput, Incremento de la Productividad
• 40% menor contrapresión que las columnas de UPLC < 2 µm
• Aumento del caudal para aumentar throughput en cromatografía HPLC - NOTA: La sensibilidad y la resolución se reducirán
• Presión equivalente y comportamiento superior a las columnas core-shell • Aumento de la productividad HPLC en 2-4X comparado con columnas HPLC 3.5 – 5 µm
Inigualable Disponibilidad de Selectividad
• 14 químicas que incluyen C18, Fenil-Hexil, C8, Grupo Polar Embebido, HILIC, Amide así como las nuevas columnas Ciano & PFP
• 3 partículas diferentes que incluyen sílice, híbrida y híbrida con carga en la superficie • Directamente escalable a columnas UPLC 1.7/1.8 µm y columnas HPLC como 3.5/5 µm
• +160 configuraciones resultan en 380 referencias
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AU
0.00
0.10
0.20
0.30
Minutes 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00
XSelect CSH C18 XP 4.6 x 75 mm, 2.5 µm
HPLC System
2X más rápido que 3.5 µm HPLC
2.5 µm XP
Aumento de la Productividad
ACQUITY UPLC CSH C18 2.1 x 50 mm, 1.7 µm
UPLC System
9X más rápido que 3.5 µm HPLC
AU
0.00
0.10
0.20
0.30
0.00 0.50 1.00 1.50 2.50 3.00 3.50 Minutes 2.10
1.7 µm
AU
0.00
0.10
0.20
0.30
Minutes 0.00 4.00 8.00 12.00 16.00 20.00 24.00 28.00
XSelect CSH C18 4.6 x 100 mm, 3.5 µm
Sistema HPLC 3.5 µm
5X más rápido que 2.5 µm HPLC
Tolm
etin
Nap
roxe
n
Feno
prof
en
Indo
met
haci
n
Dic
lofe
nac
©2011 Waters Corporation 35
Curvas van Deemter
0
5
10
15
20
25
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0
1 . 7 µm ACQUITY UPLC® BEH C18
2 . 5 µm XBridge™ BEH C18 XP
2 . 6 µm Core-Shell C18
Linear Velocity, u (cm/sec)
Plat
e H
eigh
t (H
, 4 s
igm
a)
Acenaphthene, 2.1 x 50 mm columns
70/30 MeCN/H2O, 30 °C, 254 nm
Observaciones: Comportamiento similar de partículas core-shell 2.6 µm y partículas completamente porrosas 2.5 µm 1.7 µm ofrece una eficacia superior comparado con tamaños de partícula mayores
pdHETPh =
m
p
Ddu
v×
=
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Eficacia vs. Caudal
0
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5
Flow Rate (mL/min)
Plat
e Co
unt (
4 si
gma)
1.7 µm ACQUITY UPLC® BEH C18
2.5 µm XBridge™ BEH C18 XP
2.6 µm Core-Shell C18
Acenaphthene, 2.1 x 50 mm columns
70/30 MeCN/H2O, 30 °C, 254 nm
Observaciones: Cuando se realiza un gráfico eficacia vs. caudal, se observa que un tamaño de partícula menor siempre ofrecerá mejor eficacia que uno superior Partículas completamente porosas 2.5 µm y partículas 2.6 µm core-shell ofrecen la misma eficacia
¿Qué sucede con la presión?
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Comparación Contrapresión: Completamente Porosa vs. Core-Shell
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5
Flow Rate (mL/min)
Pres
sure
(psi
)
2 . 5 µm XBridge™ BEH C18 XP
2 . 6 µm Core-Shell C18
2.1 x 50 mm columns
70/30 MeCN/H2O, 30 °C, 254 nm
Observaciones: Partículas completamente porosas 2.5 µm y partículas 2.6 µm porosas en la superficie produce n la misma contrapresión
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Impacto de la Dispersión del Instrumento en el Rendimiento de la Columna
Instrumento UPLC de Ultra-baja dispersión
mejora el rendimiento de la columna, incluso con diámetros de 4.6 mm
A: agua con 0.1% ácido fórmico B: acetonitrilo con 0.1% ácido
fórmico Caudal: 1.4 mL/min
Mezcla NSAID (50-100 ug/mL) Detección UV a 270 nm
Gradiente (2.5µm): 35%B mantenido durante 2.37 min, rampa al 65%B en 9.05 min, mantenido durante 0.41
min, re-acondicionamiento al 35%B.
AU
0.00
0.10
0.20
0.30
0.40
0.50
Minutes 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00
Alliance 2695 HPLC XSelect CSH C18 XP
4.6 x 75 mm, 2.5 µm
AU
0.00
0.10
0.20
0.30
0.40
0.50
Minutes 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00
ACQUITY UPLC H-Class XSelect CSH C18 XP
4.6 x 75 mm, 2.5 µm
Tolm
etin
Nap
roxe
n
Feno
prof
en
Indo
met
haci
n
Dic
lofe
nac
15% disminución anchura pico
30% aumento altura pico
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Resolución, Throughput y Sensibilidad: Comparación entre Columnas 2.5 µm XP y 1.7 µm UPLC
Columna 1.7 µm ACQUITY UPLC ofrece
2X mayor velocidad y 20% mayor sensibilidad
comparado con columnas 2.5 µm XP mientras se
mantiene la selectividad
AU
0.00
0.05
0.10
0.15
0.20
0.25
0.30
0.35
Minutes 0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00
XSelect CSH C18 XP 2.1 x 75 mm, 2.5 µm
Caudal: 0.54 mL/min
A: agua con 0.1% ácido fórmico B: acetonitrilo con 0.1% ácido
fórmico Mezcla NSAID (50-100 ug/mL)
Detección UV a 270 nm
Gradient e(2.5µm): 35%B al 65%B en 4.85 min, mantenido durante 0.66
min, re-acondicionamiento al 35%B.
Gradiente (1.7µm): 35%B al 65%B en 2.20 min, mantenido durante 0.3
min, re-acondicionamiento al 35%B.
Las 2 columnas se usaron en un sistema ACQUITY UPLC H-Class
ACQUITY UPLC CSH C18 2.1 x 50 mm, 1.7 µm
Caudal: 0.8 mL/min
AU
0.00
0.05
0.10
0.15
0.20
0.25
0.30
0.35
Minutes 0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50
AU
0.00
0.05
0.10
0.15
0.20
0.25
0.30
0.35
Minutes 0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00
Tolm
etin
Nap
roxe
n
Feno
prof
en
Indo
met
haci
n Dic
lofe
nac
©2011 Waters Corporation 40
Transferencia a UPLC
©2010 Waters Corporation