n

Facultad de Medicina Humana

ASIGNATURA : BIOLOGIA CELULAR

TEMA : MICROSCOPIA, TECNICAS DE COLORACIÓN,

PREPARCIÓN EN FRESCO Y EN SECO

DOCENTE : Dr. NESTOR RODRIGUEZ ALAYO

ALUMNOS : HINOSTROZA HUAMAN ADLER

CICLO : I

LAMBAYEQUE, 03 DE SEPTIEMBRE DEL 2011

CONTENIDO

I. INTRODUCCIÓN

II. FUNDAMENTO TEÓRICO

III. OBJETIVOS

IV. MATERIALES

V. PROCEDIMIENTO

VI. RESULTADOS

VII. DISCUSIÓN

VIII. CONCLUSIONES

IX. CUESTIONARIO

X. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

I. INTRODUCCIÓN

El hombre en su afán de llegar siempre más lejos en la investigación de la

naturaleza de lo que los límites de sus órganos sensoriales le imponen, el hombre

ha construido múltiples instrumentos que le han permitido acceder allí donde los

sentidos no podían penetrar.

El microscopio hizo posible conocer los mundos de dimensiones ínfimas, entre

ellos la célula, base de la vida y por lo tanto poder diferenciar una célula normal de

una patológica

El microscopio es un instrumento fundamental en cualquier laboratorio de análisis

biológico, como en los análisis bioquímicos y microbiológicos.

El término microscopio procede de micros: pequeño y scope: observar. Su

descubrimiento se debe a Jean Faber, miembro de la antigua academia de los

Lincel (1624), el holandés Antoni Van Leewenhoek (1632 – 1723); fue el

verdadero impulsador de la microscopía, construyó microscopios con lentes muy

convexos y realizó observaciones especiales, adquiriendo gran renombre como

anatomista y fisiólogo.

El microscopio ha sido una de las herramientas esenciales para el estudio de las

ciencias de la vida. Abrió el ojo humano hacia una nueva dimensión. Tanto es así

que actualmente, el microscopio nos permite observar el "corazón" mismo de la

materia: los átomos

MICROSCOPÍA

II. FUNDAMENTO TEÓRICO

MICROSCOPIO COMPUESTO

Un microscopio compuesto es un microscopio óptico que se compone de una serie

de lentes para conseguir imágenes aumentadas de objetos diminutos que por su

extrema pequeñez no son visibles al ojo humano. Los microscopios compuestos se

utilizan especialmente para examinar objetos transparentes, o cortados en láminas

tan finas que se transparentan. Se emplea para aumentar o ampliar las imágenes de

objetos y organismos no visibles a simple vista. El microscopio óptico común está

conformado por tres sistemas:

EL SISTEMA ÓPTICO. Está constituido por:

Objetivos: sistema de lentes convergentes que actua como una lente que se

encuentran montados en el revólver. Lo usual es que cada microscopio tenga

cuatro objetivos de diferentes aumentos (4x, 10x, 40x, 100x) los que se

clasifican en:

Objetivos en seco: en los que el aire se interpone entre la lente y la

preparación

Objetivos de inmersión: en el cual un líquido (aceite) se interpone entre

la lente y la preparación.

Ocular: El ocular es una lente convergente que recoge la imagen intermedia

producida por el objetivo y forma una nueva imagen virtual, derecha, y

amplificada un cierto número de veces (x veces, según se indica en el propio

ocular). Los aumentos más comunes son 10x y 16x.

EL SISTEMA DE ILUMINACIÓN comprende las partes del microscopio que

reflejan, transmiten y regulan la cantidad de luz necesaria para efectuar la

observación a través del microscopio.

Condensador: sistemas de lentes convergentes que concentra el haz

de luz sobre la preparación

Diafragma: Sirve para regular la cantidad de luz que llega a la

preparación.

Fuente de luz: Puede ser natural o artificial (ampolleta)

Portafiltro: Opcional, sirve para colocar filtro de distintos colores para

mejorar el contraste.

EL SISTEMA MECÁNICO está constituido por una serie de piezas en las que

van instaladas las lentes, que permiten el movimiento para el enfoque.

La parte mecánica del microscopio comprende el pie, el tubo, el revólver, el

asa, la platina, el carro, el tornillo macrométrico y el tornillo micrométrico. Estos

elementos sostienen la parte óptica y de iluminación; además, permiten los

desplazamientos necesarios para el enfoque del objeto.

El pie. Constituye la base sobre la que se apoya el microscopio y tiene

por lo general forma de Y o bien es rectangular.

Tubo óptico. Tiene forma cilíndrica y está ennegrecido internamente

para evitar las molestias que ocasionan los reflejos de la luz. En su

extremidad superior se colocan los oculares.

El revólver. Es una pieza giratoria provista de orificios en los que se

enroscan los objetivos. Al girar el revólver, los objetivos pasan por el eje

del tubo y se colocan en posición de trabajo, lo que se nota por el ruido

de un piñón que lo fija.

La columna, llamada también asa o brazo, es una pieza colocada en la

parte posterior del aparato. Sostiene el tubo en su porción superior y por

el extremo inferior se adapta al pie.

La platina. Es una pieza metálica plana en la que se coloca la

preparación u objeto que se va a observar. Presenta un orificio, en el eje

óptico del tubo, que permite el paso de los rayos luminosos a la

preparación. La platina puede ser fija, en cuyo caso permanece inmóvil;

en otros casos puede ser giratoria; es decir, mediante tornillos laterales

puede centrarse o producir movimientos circulares.

o

Carro. Es un dispositivo, colocado sobre la platina, que permite deslizar

la preparación con movimiento ortogonal de adelante hacia atrás y de

derecha a izquierda.

El tornillo macrométrico. Girando este tornillo, asciende o desciende

el tubo del microscopio, deslizándose en sentido vertical gracias a una

cremallera. Estos movimientos largos permiten el enfoque rápido de la

preparación.

El tornillo micrométrico. Mediante el movimiento casi imperceptible

que produce al deslizar el tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y

nítido de la preparación. Lleva acoplado un tambor graduado en

divisiones de 0,001 mm., que se utiliza para precisar sus movimientos y

puede medir el espesor de los objetos.

TIPOS DE MICROSCOPIOS

Existen diversas clases de microscopios, según la naturaleza de los sistemas de

luz, y otros accesorios utilizados para obtener las imágenes.

EL MICROSCOPIO COMPUESTO u óptico utiliza lentes para ampliar las

imágenes de los objetos observados. El aumento obtenido con estos

microscopios es reducido, debido a la longitud de onda de la luz visible que

impone limitaciones. El microscopio óptico puede ser monocular, y consta

de un solo tubo. La observación en estos casos se hace con un solo ojo. Es

binocular cuando posee dos tubos. La observación se hace con los dos

ojos. Esto presenta ventajas tales como mejor percepción de la imagen,

más cómoda la observación y se perciben con mayor nitidez los detalles.

MICROSCOPIO ESTEREOSCÓPICO: el microscopio estereoscópico hace

posible la visión tridimensional de los objetos. Consta de dos tubos oculares

y dos objetivos pares para cada aumento. Este microscopio ofrece ventajas

para observaciones que requieren pequeños aumentos. El óptimo de visión

estereoscópica se encuentra entre 2 y 40X o aumento total del microscopio.

MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA: La fluorescencia es la propiedad que

tienen algunas sustancias de emitir luz propia cuando inciden sobre ellas

radiaciones energéticas. El tratamiento del material biológico con

flurocromos facilita la observación al microscopio.

MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES: es útil para poner de manifiesto

diferentes recorridos ópticos debidos a zonas de distinto índice de

refracción o grosor, cuando estas diferencias son demasiados pequeñas

para ser vistas con el microscopio normal. La microscopia de contraste de

fases resulta muy útil para el examen de células y tejidos transparentes

vivos, cristales, plásticos, emulsiones, etc. El microscopio de fases tiene un

disco anular en el condensador para limitar la luz a un cono hueco sintético,

con el que queda enfocado en el objetivo como un anillo brillante de luz si

no hay ninguna preparación. Se utiliza cuando se necesitan ver objetos

incoloros. Si la amplitud de la luz que incide apenas cambia, se obtiene un

contraste muy malo. Se usa entonces una iluminación por varios sitios y se

miden diferencias de fase para poder "ver" el objeto.

MICROSCOPIO ELECTRÓNICO: es aquél que utiliza electrones en lugar de

fotones o luz visible para formar imágenes de objetos diminutos. Los

microscopios electrónicos permiten alcanzar una capacidad de aumento

muy superior a los microscopios convencionales (hasta 500.000 aumentos

comparados con los 1000 de los mejores microscopios ópticos) debido a

que la longitud de onda de los electrones es mucho menor que la de los

fotones.

Comparación del microscopio de luz, electrónico de transmisión y electrónico de barrido

III. OBJETIVOS

Reconocer las partes del microscopio óptico. Señalar las partes del mismo en el dibujo adjunto

MEDICIÓN A TRAVÉS DEL MICROSCOPIO

Para calcular el aumento que está proporcionando un microscopio, basta

multiplicar los aumentos respectivos debidos al objetivo y el ocular

empleados. Por ejemplo, si estamos utilizando un objetivo de 45X y un

ocular de 10X, la ampliación con que estamos viendo la muestra será: 45X

x 10X = 450X, lo cual quiere decir que la imagen del objeto está ampliada

450 veces, también expresado como 450 diámetros.

MANTENIMIENTO DEL MICROSCOPIO

El microscopio debe estar protegido del polvo, humedad y otros agentes

que pudieran dañarlo. Mientras no esté en uso debe guardarse en un

estuche o gabinete, o bien cubrirlo con una bolsa plástica o campana de

vidrio.

Las partes mecánicas deben limpiarse con un paño suave; en algunos

casos, éste se puede humedecer con xilol para disolver ciertas manchas de

grasa, aceite de cedro, parafina, etc. Que hayan caído sobre las citadas

partes.

La limpieza de las partes ópticas requiere precauciones especiales. Para

ello debe emplearse papel "limpiante" que expiden las casas distribuidoras

de material de laboratorio. Nunca deben tocarse las lentes del ocular,

objetivo y condensador con los dedos; las huellas digitales perjudican la

visibilidad, y cuando se secan resulta trabajoso eliminarlas.

Para una buena limpieza de las lentes puede humedecerse el papel "limpiante"

con éter y luego pasarlo por la superficie cuantas veces sea necesario. El aceite

de cedro que queda sobre la lente frontal del objetivo de inmersión debe quitarse

inmediatamente después de finalizada la observación. Para ello se puede pasar el

papel "limpialentes" impregnado con una gota de xilol. Para guardarlo se

acostumbra colocar el objetivo de menor aumento sobre la platina y bajado hasta

el tope; el condensador debe estar en su posición más baja, para evitar que

tropiece con alguno de los objetivos. Guárdese en lugares secos, para evitar que

la humedad favorezca la formación de hongos. Ciertos ácidos y otras sustancias

químicas que producen emanaciones fuertes, deben mantenerse alejados del

microscopio.

PROCEDIMIENTO DE LA PRÁCTICA Nº 1

OBJETIVOS:

Manejar adecuadamente los instrumentos y materiales de laboratorio

Conocer las diferentes funciones de cada uno de estos materiales

Dar el uso debido uso del microscopio conociendo cada uno de sus partes

Mediante observaciones en el microscopio observar los diferentes

aumentos de las muestras en fresco y en seco

MATERIALES:

Lamina portaobjetos

Laminilla cubreobjetos

Microscopio compuesto

Agua estancada

Sarro dental:

Hisopo

Safranina :

Pipetas pasteur

Eosina

Agua destilada

Mechero

Azul de metileno

Aceite de inmersión

PROCEDIMIENTO:

PREPARADOS EN FRESCO:

1. Colocar una gota de agua estancada en una lámina.

2. Colocar una laminilla cubreobjetos.

3. Observar.

4.- Resultado observado:

PREPARADOS EN SECO:

1. Extracción de muestra a utilizar de uno de nuestros compañeros

Paramecio

2.- Secamos la muestra en un mechero de alcohol

3.-Realizamos la coloración respectiva agregando azul de metileno.

4.-Observamos al microscopio

5.- Resultados observados

OBSERVACIÓN DE GLÓBULOS ROJOS:

1.- Extracción de sangre a uno de nuestros compañeros

2.-Colocacion de la muestra en la lamina portaobjetos

3.- Observamos al microscopio.

Bacilos

DISCUSIÓN:

El microscopio óptico se compone de una parte mecánica, que sirve de soporte,

y una parte óptica, constituida por tres sistemas de lentes: el condensador, el

objetivo y el ocular.

La finalidad del condensador es proyectar un cono de luz sobre las células que

están siendo examinadas en el microscopio. Después de atravesar a las células,

Glóbulos Rojos

ese haz luminoso, en la forma de cono, penetra en el objeto. El objetivo proyecta

una imagen aumentada en el plano focal del ocular, que nuevamente la amplia.

Por fin, la imagen provista por el ocular puede ser percibida por la retina como

una imagen situada a 25cm de la lente ocular o también, puede ser proyectada

sobre un telón o una película fotográfica. La ampliación total dada por un

microscopio es igual al aumento del objetivo multiplicado por el aumento del

ocular.

Se llama poder de resolución de un sistema óptico a su capacidad de separar

detalles. En la práctica, el poder de resolución es expresado por el límite de

resolución, que es la menor distancia que debe existir entre dos puntos para que

ellos aparezcan individualizados.

Por ejemplo: dos partículas separadas por 0,3 um aparecen individualizadas

cuando son examinadas en un sistema óptico con un límite resolutivo de 0,2 um,

pero aparecen como una partícula única cuando el límite resolutivo es de 0,5 um.

Lo que determina entonces, la riqueza de detalles de la imagen provista por

un sistema óptico es su límite de resolución, y no su poder de aumentar el tamaño

de los objetos. La propiedad de aumentar solamente tiene valor práctico si es

acompañada de un aumento paralelo del poder resoluto. El límite de resolución

depende esencialmente del objetivo. El ocular no puede detalles de una imagen;

su función es solo aumentar de tamaño a la imagen, que es proyectada en su

plano de foco por el objetivo.

El límite de resolución depende, sobre todo, de la abertura numérica (AN) del

objetivo y de la longitud de onda de la luz utilizada.

CONCLUSIONES:

El Microscopio es: cualquiera de los distintos tipos de instrumentos que se

utilizan para obtener una imagen aumentada de objetos minúsculos o

detalles muy pequeños de los mismos. El microscopio simple o lente de

aumento es el más sencillo de todos y consiste en realidad en una lupa que

agranda la imagen del objeto observado. Las evidentes limitaciones de este

sistema, conocido desde la antigüedad, y el desarrollo de la óptica y de la

construcción de lentes hizo que surgieran en el siglo XVII los microscopios

compuestos, diestramente utilizados por el holandés Antonie van

Leewenhock en el estudio de la microfauna de los estanques y charlas.

Estas observaciones, unidas a las de Robert Hooke, establecieron la

microscopia como poderosa herramienta científica.

Dos lentes convexas bastan para construir un microscopio. Cada lente hace

converger los rayos luminosos que la atraviesan. Una de ellas, llamada

objetivo, se sitúa cerca del objeto que se quiere estudiar. El objetivo forma

una imagen real aumentada e invertida. Se dice que la imagen es real

porque los rayos luminosos pasan realmente por el lugar de la imagen. La

imagen es observada por la segunda lente, llamada ocular, que actúa

sencillamente como una lupa. El ocular está situado de modo que no forma

una segunda imagen real, sino que hace divergir los rayos luminosos, que

al entrar en el ojo del observador parecen proceder de una gran imagen

invertida situada más allá del objetivo. Como los rayos luminosos no pasan

realmente por ese lugar, se dice que la imagen es virtual.

BIBLIOGRAFÍA:

Biología Celular y Molecular de De Robertis. 12ª edición. Buenos Aires.

Ateneo 2007

Biología Celular y Molecular. Junqueira, Carneiro 6ª edición

Enciclopedia Encarta 2009. Microsoft Corporation

Enciclopedia Hispánica Millennium. (2000). Volumen 10. Caracas.

Mazparrote, Serafín. (2000). Biología. 9no. Grado. Editorial Biosfera.

Caracas