149

Fundamentos de Inmunología Básica y Clínica

Iván Palomo G., Arturo Ferreira V., Cecilia Sepúlveda C.,Mario Rosemblatt S., Ulises Vergara C.

Editorial Universidad de Talca, 2002

Capítulo 7

RECEPTOR DE LINFOCITOS T Y SEÑALESACCESORIAS DE COESTIMULACIÓN

Ulises Vergara C. e Iván Palomo G.

1. Introducción2. Estructura del receptor T2.1. TCR 2.2. TCR 3. Estructura y función del complejoCD34. Receptor T y reconocimientoantigénico.4.1. Linfocitos TCD4, linfocitosTCD8 y restricción MHC

4.2. Células TNK (LinfocitosT NK1.1 o NKT).

5. Genética molecular del receptor T5.1. Genes de cadenas TCR , TCR ,TCR y TCR5.1.1. Genes de cadenas TCR5.1.2. Genes de cadenas TCR5.1.3. Genes de cadenas TCR5.1.4. Genes de cadenas TCR5.2. Reordenamiento génico6. Linfocitos T y señales accesorias decoestimulación7. Homeostasis linfocitaria y desarro-llo post-tímico de linfocitos T

Sin título-2 5/26/06, 10:25 AM149

150

Sin título-2 5/26/06, 10:25 AM150

151

RESUMEN

Así como los linfocitos B reconocen el antígeno a través de receptores BCR, los linfocitosT lo hacen a través de receptores TCR. Éstos son heterodímeros o que reconocen péptidosantigénicos unidos a moléculas MHC (de clase I o II) o antígenos glicolipídicos unidos a molécu-las CD1. Los receptores T se expresan asociados al complejo CD3, que entre otras funciones,participa en la transducción de señales de activación de la célula, una vez que el TCR ha recono-cido el antígeno.El capítulo se refiere además al fenómeno de restricción MHC. Por otra parte, se describe la

subpoblación de linfocitos T , denominada células TNK, las cuales pueden ser CD4+, CD8+, oCD4- y CD8-, y presentan marcadores de células NK.En humanos los segmentos génicos que codifican para las cadenas TCR y TCR se en-

cuentran en el cromosoma 14 y los de las cadenas TCR y TCR en el cromosoma 7. El capítulorevisa en detalle los mecanismos de variabilidad genética del TCR, los que son similares a losdescritos para BCR. La diversidad del repertorio linfocitario T se ha estimado más elevada (1018)que la del repertorio linfocitario B (1014). Los segmentos génicos que codifican para las cadenasTCR se reordenan primero que los segmentos génicos para cadenas TCR ; en las células B sereordenan primero los segmentos génicos de cadenas pesadas y luego aquellos de las cadenaslivianas. Al igual que en el reordenamiento génico de las inmunoglobulinas, en el reordenamientode segmentos génicos de cadenas del TCR también existen los fenómenos de exclusión alélicay exclusión isotípica (T versus T ).Las células T, además del TCR y de las moléculas CD4 o CD8, expresan otros receptores de

membrana que resultan importantes en la transducción de señales accesorias de coestimulación,,en la estabilidad de la interacción linfocito T-célula presentadora de antígeno, o en el recluta-miento, recirculación y “homing” linfocitario. Entre estos receptores se encuentran: CD28, CD40L,CD2, LFA-1 y CD45.

1. INTRODUCCIÓN

El desarrollo de una respuesta inmune hu-moral mediada por anticuerpos, se asocia prima-riamente a los linfocitos B y requiere el reconoci-miento antigénico por el receptor (BCR) delinfocitos B específicos. El desarrollo de una res-puesta inmune celular en cambio, se asocia alinfocitos T y requiere el reconocimientoantigénico por el receptor (TCR ,"T cell recep-tor") de linfocitos T específicos.Los mecanismos efectores humoral y celular

de respuesta inmune resultan entonces de la se-lección, activación y expansión clonal de dos po-blaciones linfocitarias distintas, que utilizan me-canismos y receptores distintos de reconocimien-to antigénico. Así, mientras el repertoriolinfocitario B puede reconocer directamenteantígenos solubles o de membrana de muy diver-sa naturaleza química (proteínas, carbohidratos,

lípidos, ácidos nucleicos, haptenos), el repertoriode receptores linfocitarios T reconoce fundamen-talmente proteínas antigénicas en forma de frag-mentos peptídicos unidos a moléculas de presen-tación MHC ("Major HistocompatibilityComplex") o antígenos glicolipídicos unidos a mo-léculas de presentación CD1, expresadas en lamembrana de células presentadoras de antígeno(ver capítulo 9).En el repertorio linfocitario B (estimado en

1014 linfocitos B distintos) se distinguen al menosdos subpoblaciones celulares, denominadas B1 yB2, que presentan características estructurales yfuncionales distintas y se generan a diferentes eda-des durante la ontogenia linfocitaria. Lasubpoblación B1 se desarrolla durante la vida fe-tal/neonatal, presenta receptores polirreactivos debaja afinidad, se asocia a la producción deanticuerpos naturales T-independientes y se en-cuentra mayoritariamente en las cavidades

Sin título-2 5/26/06, 10:25 AM151

152

peritoneal y pleural. La subpoblación linfocitariaB2 que se genera a partir de células progenitorasde la médula ósea adulta, constituye la mayor par-te del repertorio linfocitario B, su activación eslinfocito T-dependiente y se encuentra, fundamen-talmente, en los órganos linfoides secundarios yen el torrente sanguíneo.En el repertorio linfocitario T (estimado en

1018 linfocitos T distintos) se distinguen tambiéndos subpoblaciones celulares, denominadaslinfocitos T y linfocitos T , que presentan TCRcon características estructural y funcionalmentedistintas. Entre los linfocitos T se distinguenademás 3 subpoblaciones celulares distintas de-nominadas linfocitos T CD4+, linfocitos T CD8+y linfocitos TNK. Los linfocitos TNK (denomi-nados también células NKT: "natural killer Tcells"), corresponden a una subpoblaciónlinfocitaria T , que presenta marcadores o re-ceptores propios de células NK (“natural killer”).

2. ESTRUCTURA DEL RECEPTOR T

En el receptor de un linfocito B se distinguendos subunidades, estructural y funcionalmente dis-tintas: el receptor clonotípico representado por unainmunoglobulina de membrana (responsable delreconocimiento antigénico) y el complejo acce-sorio Ig /Ig , responsable del transporte y expre-sión del BCR en la membrana y de la transducciónde señales de activación cuando el receptorclonotípico une específicamente un antígeno.De manera similar, en el receptor de un lin-

focito T se describen también dos subunidades es-tructural y funcionalmente distintas: el receptorclonotípico T o T (responsable del reconoci-miento específico del antígeno) y el complejo ac-cesorio CD3, responsable del transporte y expre-sión del TCR en la membrana y de la transducciónde señales de activación cuando el receptorclonotípico T une específicamente su antígeno.El receptor clonotípico TCR es un

heterodímero o formado por dos cadenasglicoproteicas de 40 a 60 kDa, covalentemente uni-das entre sí por puentes disulfuro. Como ocurre enlos linfocitos B, este receptor tiene una distribu-ción clonal, indicando que clones linfocitarios condistinta especificidad antigénica expresarán distin-tos TCR. De la misma manera, la región variablede los componentes clonotípicos del receptor TCRpresenta, como en las inmunoglobulinas, tres re-giones CDR que en el caso de los linfocitos T ,

reconocerán un complejo formado por un fragmentopeptídico alojado en el bolsillo de presentación deuna molécula MHC, o un antígeno glicolipídicounido a una molécula CD1. La mayoría de loslinfocitos T no reconocen el antígeno en la for-ma de un complejo MHC-péptido, aunque molé-culas MHC-Ib no clásicas (como CD1, H-2M3 yQ de ratón) pueden presentar ciertos antígenos aesta subpoblación de LT. Además algunos linfocitosT pueden reconocer directamente al antígeno, dela misma manera como hacen los linfocitos B.Linfocitos T y T recombinan su DNA y

expresan su receptor clonotípico, en momentos dis-tintos durante la ontogenia linfocitaria tímica. Así,linfocitos T emergen tempranamente desde el timoy expresan un receptor denominado TCR1 que segenera antes que el receptor TCR2, cuya expresiónestá limitada a los linfocitos T , que maduran mástardíamente en el órgano linfoide primario. Aunqueel timo es el principal sitio anatómico de desarrollolinfocitario T, se ha descrito en el intestino la exis-tencia de una línea celular T distinta, generadaextratímicamente a partir de precursores celularespresentes en la lámina propia intestinal.

2.1. TCR

El 90 a 95% de los clones presentes en elrepertorio linfocitario expresan copias múltiplesde un receptor T , constituido por las glico-proteínas y covalentemente unidas entre sí porenlaces disulfuro (figura 7-1) y no covalentementeunidas al complejo accesorio CD3 (figura 7-2) (verpunto 3).La cadena es una glicoproteína acídica de

40-50 kDa y la cadena es una glicoproteína bási-ca o neutra de 40-45 kDa. Ambas cadenas tienensimilitud estructural con las cadenas pesadas y li-vianas de las inmunoglobulinas, presentando unaregión o dominio variable aminoterminal de 102-119 aminoácidos (V y V ) y un dominio constan-te carboxiterminal de 138 a 170 aminoácidos (Cy C , respectivamente). Tal como ocurre con loslinfocitos B, la diversidad y especificidad del TCRestán dadas fundamentalmente por las regioneshipervariables o determinantes de complemen-tariedad CDR1, CDR2 y CDR3 de los dominiosV y V , que se asocian y configuran de maneratal que se forma un único paratopo T, que presen-ta por el antígeno una afinidad entre 10-5 y 10-7 M,en los distintos clones linfocitarios T .En la región constante carboxiterminal de las

cadenas T y T (o T y T ), se distinguen 4 domi-

Sin título-2 5/26/06, 10:25 AM152

153

Figura 7-1. Estructura esquemática del receptor linfocitario T. El receptor TCR está formado por dos cadenas polipeptídicascovalentemente unidas entre sí por puentes disulfuro. Los receptores TCR2 presentan cadenas y, los TCR1 cadenas y . Encada una de las cadenas y (o / ), existe un dominio variable aminoterminal y un dominio constante carboxiterminal, demanera similar a lo que ocurre en las cadenas pesadas y livianas del receptor linfocitario B (BCR).

nios estructural y funcionalmente distintos: a) undominio constante extracelular hacia el extremoaminoterminal y que forma un “loop” semejante alos dominios constantes de inmunoglobulinas; b)

una región bisagra inmediatamente por fuera de lamembrana plasmática linfocitaria y que contieneel enlace disulfuro que une el heterodímero delreceptor clonotípico T ; c) un dominiohidrofóbico transmembrana de 20 a 25 aminoácidosy que incluye residuos polares conservados comoarginina y lisina, que permiten la unión no covalentecon residuos de ácido glutámico y ácido aspárticonegativamente cargados del complejo accesorioCD3; d) un dominio citoplasmático carboxitermi-nal, de 5 a 12 aminoácidos.

2.2. TCR

Entre los linfocitos T pueden distinguirse di-ferentes subpoblaciones celulares que se desarrollanen momentos distintos de la ontogenia linfocitaria;expresan distintos dominios variables y tienendistinta distribución tisular periférica. En ratones porejemplo, los linfocitos T que se encuentran en lapiel, se desarrollan neonatalmente y expresan regio-nes variables distintas de los linfocitos T que seencuentran en vagina, útero y lengua, que se dife-rencian más tardíamente en el timo.

Figura 7.2. Complejo CD3. El complejo CD3 está constitui-do por cinco proteínas transmembrana denominadas , , , y (o ). El complejo CD3 está funcionalmente asociadocon la expresión del TCR en la membrana y con la transducción

de señales de activación, luego del reconocimiento antigénico.

Sin título-2 5/26/06, 10:25 AM153

154

Los linfocitos T constituyen entre 5 a 10%del repertorio linfocitario T en sangre periférica,bazo y ganglios linfáticos de humanos, ratones yaves; pero pueden representar hasta el 50% de loslinfocitos intraepiteliales en piel y mucosas intes-tinal y génitourinaria murina. En ovejas, loslinfocitos T pueden representar hasta el 30%de los linfocitos T periféricos.Las cadenas (45-55 kDa) y (40-50 kDa) de

receptor clonotípico T , son glicoproteínas de mem-brana con estructura similar a las cadenas y delreceptor T . Ambas presentan un dominio variableaminoterminal y un dominio constante carboxiterminalque incluye una región bisagra, un dominiotransmembrana, y una corta cola citoplasmática. Lasdistintas regiones y presentan características simi-lares a las descritas para las cadenas polipéptídicasdel receptor T (figura 7-1).

3. ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DEL COM-PLEJO CD3

Los receptores clonotípicos T y T se ex-presan asociados de manera no covalente, al com-plejo accesorio CD3, que representa la subunidadresponsable del transporte y expresión del TCRen la membrana y de la transducción de señalesde activación, luego del reconocimiento antigénicopor el receptor clonotípico T.El complejo CD3 está constituido por cinco

proteínas denominadas , , , y de 25, 20, 20,16 y 22 kDa, respectivamente (figuras 7-3 y 7-4).Las proteínas del complejo CD3 se asocian entresí de manera tal que se forman tres dímeros dis-

tintos, dos de los cuales corresponden a losheterodímeros y . En aproximadamente el90% de los linfocitos T, el tercer dímero corres-ponde al homodímero y sólo el 10 % de loslinfocitos T periféricos expresan el heterodímero. Los dominios transmembrana de cada una delas proteínas del complejo CD3 contienen residuosaminoacídicos negativamente cargados, que seasocian no covalentemente con residuostransmembra positivamente cargados de los recep-tores clonotípicos T o T .

4. RECEPTOR T Y RECONOCIMIENTOANTIGÉNICO

Los linfocitos T MHC-restringidos, expre-san receptores clonotípicos que sólo reconocenfragmentos peptídicos presentados por moléculasMHC de clase I o de clase II, en la superficie delas células presentadoras profesionales y otras cé-lulas (figura 7-4). Los linfocitos T CD1-restrin-gidos, expresan en cambio receptores clonotípicosque sólo reconocen antígenos glicolipídicos, aso-ciados a moléculas de presentación CD1, expre-sadas en la membrana de células presentadorasprofesionales (células dendríticas, macrófagos ylinfocitos B).Linfocitos T citótoxicos T reconocen

antígenos MHC clase I-restringidos y son prima-riamente responsables de la eliminación de célu-las infectadas con virus o bacterias intracelulares.Para la mayoría de las células, los antígenos MHCclase I-restringidos, derivan de proteínas sinteti-zadas en el citoplasma de la misma célula, exis-

Figura 7-3. Relación estructural TCR-CD3. La asociación entre TCR y del CD3 es no covalente. Se produce una interacciónelectrostática entre aminoácidos transmembrana con carga positiva del TCR, con aminoácidos negativamente cargados del com-plejo CD3. Existen enlaces disulfuro entre las cadenas (o ) del receptor T, y entre los homo o heterodímeros formados por lascadenas y .

Sin título-2 5/26/06, 10:25 AM154

155

Figura 7-4. TCR y reconocimiento antigénico MHC-cla-se II-restringido. El receptor linfocitario T , reconoce elcomplejo molecular MHC-fragmento peptídico. La moléculaCD4 actúa como co-receptor reconociendo una región con-servada, en cadena de la molécula MHC de clase II.

Figura 7-5. Migración de células dendríticas y linfocitos T. Células dendríticas inmaduras capturan antígenos en los tejidosperiféricos y migran a los tejidos linfoides convirtiéndose en células maduras que expresan altos niveles de moléculas MHC yligandos coestimuladores para los linfocitos T. Los linfocitos se movilizan desde el torrente sanguíneo a los órganos linfoidessecundarios y luego de su activación y expansión clonal se diferencian en linfocitos T efectores y linfocitos T de memoria central( TMC) y linfocitos de memoria efectores (T

EM).

tiendo un acceso limitado de antígenos exógenosa esta vía endógena de procesamiento y presenta-ción antigénica. Sin embargo, existe unasubpoblación de células presentadoras (particular-mente células dendríticas) que pueden capturarantígenos exógenos tejido específicos en la peri-feria y presentarlos, asociados a moléculas MHCde clase I, a linfocitos T citotóxicos en los ganglioslinfáticos, mediante un mecanismo de presenta-ción cruzada (“cross-priming”). Además, en in-fecciones con Mycobacterium tuberculosis, seactivan también linfocitos citotóxicos T CD1-restringidos que reconocen glicolípidosbacterianos y linfocitos citotóxicos T que reco-nocen ligandos fosforilados.Las células dendríticas son células de origen

medular que están normalmente presentes en unestado inmaduro en epitelios y tejidos periféricos.Estas células dendríticas son capaces de una efec-tiva fagocitosis de células apoptóticas y deendocitosis y macropinocitosis de antígenos solu-bles, pero no expresan moléculas MHC y ligandoscoestimuladores, en los niveles requeridos para laactivación de linfocitos T. Esta forma de incorpo-ración antigénica por células inmaduras, resultaen un mayor y mejor “cross-priming” de antígenosexógenos en el contexto de moléculas MHC declase I por células dendríticas maduras, lo que re-

Sin título-2 5/26/06, 10:25 AM155

156

sulta fundamental, tanto para el desarrollo de unarespuesta inmune dependiente de linfocitos Tcitotóxicos, como para la inducción de toleranciaa lo propio.En respuesta a un estímulo inflamatorio (ge-

neralmente proporcionado por citoquinasproinflamatorias o productos bacterianos), lascélulas dendríticas inmaduras capturan materialantigénico en la periferia (microorganismos, cé-lulas apoptóticas y detritus celulares) e inician sudiferenciación en células maduras que pierden susreceptores para quimioquinas inflamatorias y au-mentan la expresión de receptores paraquimioquinas de tejidos linfoides. Las célulasdendríticas en maduración se movilizan hacia losórganos linfoides secundarios donde culminan sudiferenciación expresando altos niveles de molé-culas MHC y ligandos coestimuladores que lasconvierten en células maduras extraordinariamenteeficientes en la presentación de antígenos alinfocitos T vírgenes (figura 7-5). Mediante la se-creción de distintos patrones de citoquinas, lascélulas dendríticas maduras inducen y regulan larespuesta inmune promoviendo la activación ydiferenciación de linfocitos T, la expansión clonalde linfocitos B, la producción de anticuerpos y laestimulación de la actividad citotóxica de célulasNK y la producción de IFN- .Los linfocitos T vírgenes se movilizan des-

de el torrente circulatorio a las regiones T de losórganos linfoides secundarios, en busca deantígenos presentados por células dendríticas.Como consecuencia de su estimulación, loslinfocitos T proliferan por expansión clonal y sediferencian en células efectoras que expresan re-ceptores que les permiten luego migrar a las áreasde linfocitos B del órgano linfoide secundario ohacia los sitios de inflamación en los tejidosperiféricos. Aún cuando la mayoría de loslinfocitos T efectores son de corta vida media,unos pocos sobreviven durante varios años comolinfocitos T de memoria que pueden separarse endos subpoblaciones de acuerdo a sus habilidadesmigratorias: (i) las llamadas células efectoras dememoria (T

EM), migran a los tejidos periféricos y

(ii) las denominadas células T de memoria central(TCM), permanecen en circulación. Esta última

subpoblación expresa receptores de “homing” si-milares a los de linfocitos T vírgenes que les per-mite migrar preferentemente a los órganoslinfoides secundarios donde, luego de una re-estimulación con el antígeno, inducirán el desa-rrollo de una respuesta inmune secundaria y la

generación de nuevos linfocitos T de memoria.Se ha sugerido que la expresión de CCR7,

un receptor para las quimioquinas MIP("Macrophage Inflammatory Protein") y SLC("Secondary Lymphoid Chemokine") controla el"homing" a órganos linfoides secundarios y per-mite separar los linfocitos de memoria T efectores(CCR7-) que tienen función efectora inmediata yrepresentan la primera línea de defensa inmuneespecífica, de los linfocitos de memoria centralesCCR7+ que carecen de función efectora inme-diata pero patrullan los órganos periféricos y cons-tituyen la línea defensiva de reserva. Los linfocitosT efectores CCR7- producen citoquinas efectorascomo IFN- , IL-4, IL-5 o expresan perforina(linfocitos T citotóxicos).

4.1. Linfocitos T CD4, Linfocitos T CD8 y res-tricción MHC

Linfocitos T parecen reconocer sólo frag-mentos peptídicos presentados en asociación conmoléculas MHC o fragmentos glicolipídicos pre-sentados en asociación con moléculas CD1, en lasuperficie de células presentadoras profesionales.Este fenómeno se explica como resultado del pro-ceso de “educación tímica” que permite que du-rante la diferenciación en este órgano linfoide pri-mario, precursores linfocitarios T sean positiva-mente seleccionados en función de su capacidadpara reconocer antígenos asociados a moléculasde presentación antigénica en la membrana decélulas del epitelio tímico.La mayoría de los linfocitos periféricos T ,

son linfocitos MHC restringidos que expresan elcorreceptor CD4 o el correceptor CD8, y han sidopositivamente seleccionados en función de su ca-pacidad para reconocer sólo fragmentos peptídicosasociados a moléculas MHC de clase I (linfocitosT CD8+) o fragmentos peptídicos asociados amoléculas MHC de clase II (linfocitos T CD4+)(figura 7-6).El correceptor CD4 es una glicoproteína

transmembrana de 55 kDa que se expresa en aproxi-madamente el 65% de los linfocitos periféricos T ;reconoce una región conservada ( 2) de la molé-cula MHC de clase II y transduce señales acceso-rias de coestimulación linfocitaria T.El correceptor CD8 es un heterodímero o

un heterodímero , de 78 kDa, que se expresaen aproximadamente el 35% de los linfocitos Tde sangre y tejido linfoide periférico, reconoce unaregión conservada ( 3) de la molécula MHC de

Sin título-2 5/26/06, 10:25 AM156

157

clase I y transduce señales accesorias decoestimulación linfocitaria T, luego de suinteracción con la molécula MHC de clase I.Los linfocitos T CD4+ expresan funciones

de colaboración o “helper” por medio decitoquinas que activan macrófagos y/o linfocitosB, mientras los linfocitos T CD8+ actúan prima-riamente como células citotóxicas que destruyenlas células infectadas.Los linfocitos T CD4+ MHC de clase II-res-

tringidos desempeñan un rol muy importante enla inmunidad protectora contra bacterias yprotozoos, mientras los linfocitos T CD8+ MHCde clase I-restringidos resultan fundamentales enla respuesta inmune contra infecciones virales.Sin embargo, la respuesta inmune contra bacte-rias intracelulares involucra la participación nosólo de linfocitos T CD4+ MHC-II restringidos,sino también de diversas subpoblacioneslinfocitarias entre las que se encuentran células TCD8+ MHC-I restringidos, linfocitos T quereconocen fosfoligandos en ausencia de célulaspresentadoras de antígeno y finalmente, linfocitos

T restringidos por moléculas MHC de clase Iby linfocitos T y T restringidos por moléculasCD1 que reconocen ligandos bacterianos altamen-te conservados.Durante mucho tiempo se pensó que los

linfocitos T sólo reconocían fragmentos peptídicospresentados por moléculas MHC de clase I o declase II. Sin embargo, el descubrimiento de lasmoléculas CD1 que presentan ligandosglicolipídicos, ha permitido la identificación desubpoblaciones linfocitarias T CD1-restringi-das: TCD4+, TCD8+, TCD4-, CD8- (TDN o do-ble negativos) y de linfocitos T NK1.1 (célulasTNK o NKT), que constituyen poblaciones celu-lares heterogéneas presentes en diferentes tejidos.Las moléculas CD1 se expresan predominan-

temente en células presentadoras profesionales eincluyen 4 moléculas distintas en humanos (CD1a,CD1b, CD1c y CD1d) y sólo una en ratones(CD1d). Las moléculas son similares a las molé-culas MHC de clase I, están no covalentementeunidas a la 2-microglobulina, pero su bolsillo depresentación antigénica es más estrecho y másprofundo que el de las moléculas MHC y une suligando glicolipídico mediante interaccioneshidrofóbicas.Las moléculas CD1a, b y c (grupo I) se ex-

presan en timocitos corticales y célulasdendríticas, mientras las moléculas CD1d (gru-po II) se encuentran principalmente en célulasepiteliales, timocitos corticales, hepatocitos ycélulas presentadoras de antígeno profesiona-les (células dendríticas, macrófagos y linfocitosB). Glicolípidos como fosfatidil inositolmanósido (PIM), lipoarabino manan (LAM),ácido micólico y hexosil-1-fosfo-isoprenoide,son presentados a linfocitos T , por molécu-las CD1 del grupo I (tabla 7-1). Tanto en huma-nos como en ratón, se ha descrito que las molé-culas CD1d presentan -galactosil ceramidaexistente en esponjas marinas.

4.2. Células TNK

Las células TNK (linfocitos T NK1.1 oNKT) corresponden a una subpoblaciónheterogénea de linfocitos T , que presentan mar-cadores propios de las células NK o “natural killer”e incluye células TNK CD4+, células TNK/CD8+y células TNK DN (CD4- CD8-) que presentandistinta distribución tisular (timo, hígado, bazo,ganglios linfáticos y médula ósea). El marcadorNK1.1 corresponde a NKRP1C o CD161.

Figura 7-6. Estructura del receptor de la célula T, comple-jo CD3 e interacción con el complejo MHC-péptido.

Sin título-2 5/26/06, 10:25 AM157

158

La diversidad de su receptor T es bastan-te restringida y limitada a la expresión de unaspocas cadenas TCR (V 8-2, V 7, V 2 yV 14J 281 en el ratón y de sus equivalentesV 11 y V 24J Q en humanos), que resultanCD1d restringidas. La proporción de células TNKvaría en diferentes tejidos y representansubpoblaciones funcionalmente distintas en elhígado (30-50%), médula ósea (20-30%) y timo(10-20%), y son menos frecuentes en órganoscomo bazo (3%), ganglios linfáticos (0,3%), san-gre periférica (4%) y pulmón (7%).Las células TNK CD4+ y TNK DN parecen

ser de origen tímico, puesto que no se desarrollanen ratones atímicos o en ratones neonatalmentetimectomizados. Las células TNK CD8+ en cam-bio, parecen tener un origen extratímico, puestoque se encuentran normalmente en la periferia enratones timectomizados neonatalmente.Las células TNK constituyen una

subpoblación linfocitaria heterogénea en la quees posible encontrar células CD1-restringidas ycélulas MHC-restringidas (estas últimas expresanTCR de mayor diversidad), que tienen la capaci-dad de secretar diferentes citoquinas (IL-4, IFN-, TNF), dependiendo del microambiente tisular.La producción de altos niveles de IL-4 e IFN- ,sugieren un rol regulador en el desarrollo de lasrespuestas Th1 y Th2 dependientes. El desarrollode una respuesta Th2 sería estimulada a través de

la secreción de IL-4. El desarrollo de una respuestaTh1 sería inhibida mediante la secreción de IL-4,IL-10 y TGF- . Las células TNK también produ-cen altos niveles de quimioquinas, tales comoMIP- y MIP- , lo que concuerda con su capaci-dad para reclutar monocitos, células dendríticasmieloides y linfocitos T convencionales, e ini-ciar una respuesta inmune adquirida. Finalmentela actividad efectora citotóxica de las células TNK,es mediada por perforina y granzimas.Se desconoce la influencia de moléculas co-

estimuladoras y otros receptores asociados a lascélulas T NK y aunque es claro que el receptorTCR de células TNK responde a moléculas CD1d,el ligando natural de CD1d es todavía desconoci-do. La mayoría de las células TNK reconoce mo-léculas CD1d asociadas a un ligando hidrofóbico,probablemente glicolipídico y de naturaleza des-conocida. Sin embargo, se ha sugerido que podríaser glicofosfatidil inositol (GPI) y/o fosfatidilinosito manósido (PIM). La molécula -galactosilceramida derivada de esponjas marinas se une amoléculas CD1d, estimula linfocitos TNK CD4+y TNK DN y parece imitar al ligando natural deCD1d en humanos y ratones.Las células TNK tienen también la habilidad

de responder no sólo a ligandos específicos deri-vados de agentes patógenos sino también aligandos lipídicos autólogos derivados de célulastumorales y parecen desempeñar un rol impor-

Tabla 7-1. Antígenos lipídicos presentados por moléculas CD1 humanas

Antígeno Linfocitos T Molécula CD1

Glicolípidos bacterianosLípidos no definidos T CD1aLipoarabinomanan (LAM) T CD1bGlucosa monomicolato T CD1bFosfatidil inositol (PI) T CD1bHesoxil 1- fosfoisoprenoide T CD1c

Glicolípidos autólogosLípidos no definidos T CD1aGangliósidos cerebrales T CD1b Lípidos no definidos T y T CD1c Lípidos no definidos TNK CD1d

Otras moléculasA-Galactosil Ceramida TNK CD1d

Sin título-2 5/26/06, 10:25 AM158

159

tante en la regulación de la respuesta inmune acélulas tumorales y agentes patógenos y en la man-tención de la tolerancia a lo propio.

5. GENÉTICA MOLECULAR DEL RECEP-TOR T

El TCR es generado a partir de larecombinación somática de segmentos génicos,durante un proceso de diferenciación que permi-te que cada linfocito T o T esté provisto decopias múltiples de un receptor clonotípico únicoque no está codificado en el DNA germinal de lacélula precursora.La organización genómica de los TCR es si-

milar a la organización de las inmunoglobulinas ycontiene tanto segmentos génicos V(D)J que co-difican la región variable, como segmentos génicosC, que codifican la región constante de cada ca-dena del receptor clonotípico. De esta manera elrepertorio de linfocitos T (estimado en 1018

linfocitos T distintos), es generado también al azarpor reordenamiento génico V(D)J y, la variabili-dad TCR, generada por la recombinación de dis-tintos segmentos génicos, será también enorme-mente diversificada por: (i) corte impreciso delos segmentos génicos que se recombinan, (ii)agregado de nucleótidos al azar en los sitios decorte y unión de los distintos segmentos génicos,(iii) combinación al azar de cadenas TCR yTCR (o TCR y TCR ), y (iv) edición del re-ceptor T o T .

5.1. Genes de cadenas TCR , TCR , TCR yTCR

En el DNA germinal de un vertebrado, noexisten genes que codifiquen la síntesis de los com-ponentes polipeptídicos del receptor clonotípicoTCR. Al contrario, estos genes deben ser genera-dos o ensamblados, por una recombinasa sitio-es-pecífica que reordena segmentos génicos V(D)J,distintos de aquéllos utilizados para ensamblar losgenes que codifican las cadenas pesadas y livia-nas del receptor de linfocitos B (ver capítulo 6).Los segmentos génicos que codifican las dis-

tintas regiones o dominios de las cadenas TCR ,TCR , TCR o TCR , se encuentran agrupadosen cuatro grupos o familias génicas distintas:

• Familia TCR : incluye segmentos génicosV y J (codifican la región variable de la

cadena TCR ) y, un segmento génico C(codifica la región constante TCR ).

• Familia TCR : incluye segmentos génicosV , D , J y C .

• Familia TCR : incluye segmentos génicos V ,J y C .

• Familia génica TCR : incluye segmentos V ,D , J y C .

En humanos, los segmentos génicos que co-difican las cadenas TCR y TCR , se encuentranen el cromosoma 14 (en región alejada del locuspara cadenas pesadas de Inmunoglobulinas (Ig),mientras los segmentos génicos de cadenas TCRy TCR , se encuentran en el cromosoma 7. En ra-tones, los segmentos génicos que codifican las ca-denas TCR y TCR , se encuentran en elcromosoma 14, mientras los segmentos génicosque codifica las cadenas TCR y TCR , se en-cuentran en los cromosomas murinos 6 y 13, res-pectivamente.

5.1.1. Genes de cadenas TCR

El repertorio genómico de cadenas TCRocupa 1000 kilobases en el brazo largo delcromosoma 14 humano e incluye 54 segmentosgénicos variables V en posición centromérica,61 segmentos génicos de unión J y, un único seg-mento constante C , en posición más telomérica.Como ocurre en el repertorio genómico de lasinmunoglobulinas, cada segmento TCR variable,está precedido de una secuencia líder o señal (L),en posición 5’(figura 7-7).Los segmentos génicos V J , situados en po-

sición 5’, se encuentran separados de C , por unaregión genómica que contiene los segmentosgénicos de la cadena TCR .El potencial de este repertorio genómico con-

siste de 41 a 47 segmentos funcionales V (quepertenecen a 35-37 subgrupos o subfamilias) y 50segmentos funcionales J . Entre los segmentos va-riables se encuentran además 5 segmentos desig-nados TCRV /V que pueden reordenarse con Jo con D y pueden, por lo tanto, utilizarse en lageneración de genes TCR o TCR .

5.1.2. Genes de cadenas TCR

En humanos, el repertorio genómico de ca-denas TCR ocupa 620 kb en el brazo largo del

Sin título-2 5/26/06, 10:25 AM159

160

cromosoma 7 y consiste de 62-65 segmentosgénicos variables V y de segmentos D , J y Cque se encuentran separados en dos grupos(“clusters”) distintos. El primer grupo, situado enposición 5’, contiene un segmento D1 , seis seg-mentos J1 (J1 1 a J1 6) y un segmento C1 . Elsegundo grupo, situado en posición 3’ con respec-to al primero, incluye un segmento D2 , ocho seg-mentos J2 y un único segmento C2 .Los segmentos V se encuentran en posición

más telomérica, pero existe un segmento génicoV 30, en orientación invertida con respecto a latranscripción, localizado en posición 3’, máscentromérico que el segundo "cluster"D2 J2 C2 . El repertorio genómico potencialconsiste de 39-46 segmentos V funcionales, quepertenecen a 23 subgrupos o subfamilias. Cadasegmento J codifica 3-5 aminoácidos, mientraslos segmentos, segmentos D , codifican de 15 a17 residuos aminoacídicos. Cada segmento varia-

Figura 7-7. Distribución de los segmentos génicos TCR y TCR . En el cromosoma 14 humano y 14 murino, se encuentran ellocus que contiene los segmento génicos V y C asociado a segmentos J y D . Los segmentos V y J , localizados enposición 5’, están separados de C por el locus TCR .

ble precedido de un exón líder (L) o señal (figura7-8).Se han descrito además, 6 segmentos V

huérfanos, localizados en el brazo corto delcromosoma 9 humano.

5.1.3. Genes de cadenas TCR

El locus TCR humano ocupa 165 kb en el brazocorto del cromosoma 7 y consiste de 12-15 seg-mentos génicos variables V , en posición máscentromérica y dos "clusters" de segmentos C J .El primer grupo contiene tres segmentos J1 y unúnico segmento C1 . El segundo grupo, situadoen posición más telomérica, contiene dos segmen-tos J2 y un segmento a C2 . El repertorio poten-cial incluye 4-6 segmentos V que se agrupan endos subfamilias y los dos "clusters" D J C (figu-ra 7-9).

Sin título-2 5/26/06, 10:25 AM160

161

5.1.4. Genes de cadenas TCR

En humanos el locus TCR ocupa una regiónde 60 kb localizada dentro del locus TCR y con-tiene un cluster formado por un segmento génicoV (V 3), tres segmentos D , cuatro segmentosJ D y un único gen C (figura 7-7).El locus TCR contiene además un segmen-

to génico V (V 3), localizado hacia abajo en po-sición 3’ del gen C y, un segmento génico varia-ble V 1, localizado 360 kb hacia arriba en direc-ción 5’, entre los segmentos V . Todos los seg-mentos génicos TCR/D son funcionales y a ellos

Figura 7-8. Distribución de segmentos génicos TCR . En los cromosomas 7 humano y 6 murino, se encuentran distribuidos lossegmentos V y los dos conjuntos C con sus respectivos segmentos génicos J y D .

se agregan, finalmente, los 5 segmentos TCRV /V (mencionados en 5.1.1.), que pueden compor-tarse como funcionales o como seudogenes.

5.2. Reordenamiento génico

Al igual como ocurre en las células Binmaduras, respecto a las inmunoglobulinas, enlas células T precursoras los segmentos génicosV(D)J y C que codifican las cadenas TCR, se en-cuentran en una configuración germinal no fun-cional y deben reordenarse por recombinación si-tio-específica, para generar la enorme diversidad

Figura 7.9. Familia de segmentos génicos TCR murino y humano.

Sin título-2 5/26/06, 10:25 AM161

162

del repertorio linfocitario T, durante un procesoregulado de maduración y educación tímica.La recombinación de segmentos génicos

V(D)J, es fundamental en el desarrollo del siste-ma inmune de los vertebrados e implica la partici-pación de una recombinasa que reconoce y cortasecuencias específicas de recombinación (12-RSSy 23-RSS) (figura 7-10) y de una compleja ma-quinaria de reparación del DNA que incluye unaproteína quinasa DNA-dependiente (DNA-PK),las proteínas Ku/Ku80 y Artemisa, la DNA ligasaIV (ver capítulo 6), y diversas otras proteínascomo Xrcc, histona H2AX y el complejo Mre11/rad50/Nbs1. Deben además existir diversos fac-tores de remodelación de la cromatina, que limi-tan el acceso a las secuencias de recombinaciónRSS de modo tal que las regiones genómicas quecontienen los segmentos V(D)J y C, de Ig o TCR,sólo estén disponibles en ciertos tipos celulares yen ciertos estados de desarrollo, según elmicroambiente tisular.El orden en el reordenamiento, es similar a

como ocurre con las inmunoglobulinas y tambiénimplica el cumplimiento de la regla 12/23 y laeliminación o delección de todos los segmentosque separan a aquéllos que deben recombinarse(ver capítulo 6). Así, en las cadenas TCR yTCR , primero se reordena un segmento génicode diversidad D, con un segmento de unión J, eli-minando toda la secuencia nucleotídica que lossepara. Luego uno de los segmentos variables V,se recombina con el complejo DJ ya reordenado,

eliminando los segmentos génicos que los separa.Sin embargo, dada la existencia de "clusters" DJC,la selección de un determinado segmento D obli-ga a la recombinación con los segmentos J y C,incluidos en el mismo "cluster".El DNA ya reordenado, será luego utilizado

como molde para la síntesis de un transcrito pri-mario, el que una vez procesado dará origen alcorrespondiente mRNA que codifica la cadenaTCR (figura 7-11).La maquinaria de recombinación de segmen-

tos génicos es siempre la misma, tanto en linfocitosB como linfocitos T. Sin embargo, sólo las Ig sereordenan en linfocitos B, y sólo cadenas TCR sereordenan en los linfocitos T. Además en cada unade estas líneas celulares existe un orden precisode reordenamiento de modo tal que las cadenaspesadas se reordenan siempre antes que las cade-nas livianas del BCR y las cadenas TCR sereordenan siempre antes que las cadenas TCRen los linfocitos T.La diversidad potencial de los TCR se estima

mayor que en las inmunoglobulinas y ello obede-ce, fundamentalmente a una mayor diversificaciónde las regiones N (generada por agregado denucleótidos al azar) y P (generada por transferen-cia de nucleótidos desde la hebra no codificante delDNA. Además, a diferencia de lo que ocurre conlas inmunoglobulinas, los genes de TCR yareordenados no sufren hipermutaciones en susCDRs, que conduzcan a cambios en la función oafinidad del receptor, durante la respuesta inmune.

Figura 7-10. Secuencia señal de recombinación (RSS) y segmentos génicos V(D)J. (A) Heptámero, espaciador y nonámero delas secuencias RSS. (B) Los diversos reordenamientos de los segmentos génicos V(D)J que generan los genes que codifican lascadenas TCR , TCR , TCR y TCR . Las secuencias 12-RSS se muestran con triángulos abiertos y las secuencias 23-RSS contriángulos cerrados.

Sin título-2 5/26/06, 10:25 AM162

163

Finalmente, sólo uno de los dos loci de cadauna de las cadenas TCR , TCR , TCR oTCR D que existen en el DNA germinal, seráfuncionalmente reordenado y expresado en unlinfocito T maduro. De esta manera, al igualque en los genes de inmunoglobulinas, el fenó-meno de exclusión alélica impide que sereordenen ambos alelos de un mismo gen. Asípor ejemplo, sólo cuando del reordenamientode segmentos génicos en uno de loscromosomas homólogos, se obtiene un genTCR no funcional (que no puede ser transcritoo el transcrito no puede ser traducido) se iniciael reordenamiento de segmentos en el otrocromosoma homólogo. Si de ambos alelos seobtienen genes no funcionales, se induceapoptosis de la célula T en diferenciación. Elfenómeno de exclusión isotípica que ocurre en-tre las cadenas livianas y de las

Figura 7-11. Reordenamiento génico y transcripción de la cadena TCR . El proceso se inicia con el reordenamiento de unsegmento génico D y un segmento J . Luego, el complejo D -J ya reordenado, se recombina con un segmento V . Posterior-mente, el transcrito primario será procesado para generar el mRNA que codifica la cadena TCR .

inmunoglobulinas, es también válido para losgenes TCR, puesto que un reordenamientoTCR excluye todo reordenamiento TCR yviceversa.

6. LINFOCITOS T Y SEÑALES ACCESO-RIAS DE COESTIMULACIÓN

Los linfocitos T, aparte del receptor TCR y delos correceptores CD4 y/o CD8, expresan otrosreceptores de membrana que, aunque no reco-nocen antígenos, resultan fundamentales en latransducción de señales accesorias de activa-ción celular (moléculas accesorias), en la es-tabilización de la interacción linfocitoT-célulapresentadora de antígeno (CPA), o en el reclu-tamiento, recirculación y “homing” linfo-citario (moléculas de adhesión) (figura 7-12).

Sin título-2 5/26/06, 10:25 AM163

164

En ausencia de señales accesorias decoestimulación, el reconocimiento antigénico y latransducción de señales a través del complejoTCR-CD3, no conduce a activación celular. Alcontrario, señales aisladas transducidas por TCR-CD3, conducen a anergia celular y/o apoptosis.Las señales adicionales requeridas para la activa-ción de linfocitos T, son fundamentalmente pro-porcionadas por moléculas coestimuladoras expre-sadas en la membrana de células vecinas o de cé-lulas presentadoras de antígeno y por mediadoressolubles como citoquinas.Entre las moléculas accesorias expresadas en

la superficie de linfocitos T y que unen molécu-las coestimuladoras, se encuentran:

• CD8 y CD4, que se unen a moléculas MHCde clase I y II, respectivamente,

• CD28 que une sus ligandos B7.1 (CD80) yB7.2 (CD86), expresados en células presen-tadoras de antígeno (CPA) activadas.

• CD40L (CD154), que se expresa en linfocitosT activados y une su ligando CD40 (cons-titutivo en la CPA).

• CD2 (LFA-2), que une su ligando LFA-3(CD58 en humanos) CD48 en ratón.

• LFA-1 ("Leukocyte Function AssociatedAntigen-1") que une su ligando ICAM("Intercellular Adhesión Molecule-1" oCD54).

• CD45, una tirosín fosfatasa que une su ligan-do CD22. La isoforma CD45RA se expresaen linfocitos T en reposo y CD45RO enlinfocitos T activados.

Además, moléculas como ICOS ("Induciblecostimulator", similar a CD28 pero no une CD80o CD86), citoquinas (IL-1, IL-2 , IL-4, IL-6, IL-12, TNF) y diversas moléculas de adhesión(integrinas 1 y 2, selectinas), también propor-cionan señales secundarias o terciarias que facili-tan o promueven la activación y/o diferenciación

Figura 7-12. Activación de linfocitos T y señales accesorias de coestimulación. Además del receptor TCR, del complejo CD3y de los correceptores CD4 o CD8, los linfocitos T expresan otros receptores de membrana (CD2, CD28, LFA-1, CD40L, etc.),que resultan fundamentales en la transducción de señales accesorias de coestimulación, en la estabilización de la interacciónlinfocito T-célula presentadora o en el reclutamiento, recirculación y “homing” linfocitario.

Sin título-2 5/26/06, 10:25 AM164

165

de distintas subpoblaciones de linfocitos T.Sin embargo, no todas las señales proporcio-

nadas por citoquinas o moléculas de superficie,proporcionan estímulos coactivadores. Así porejemplo, IL-10 y TGF- ("transforming growthfactor- "), a menudo inhiben diversas poblacio-nes linfocitarias T, B y NK. De manera similar,la unión a CTLA-4 (CD152, una moléculahomóloga a CD28 y que se expresa en la superfi-cie de linfocitos T activados), a sus ligandos CD80o CD86, también proporciona señales de inhibi-ción linfocitaria.El efecto de las señales accesorias de

coestimulacíon va a depender de diversos facto-res; entre éstos se encuentran: el número de com-plejos MHC-péptido que inician las señales detransducción, la afinidad, avidez y duración de esainteracción y el nivel de moléculascoestimuladoras que amplifican las señales inicia-les de activación.Células dendríticas y linfocitos B, expresan

constitutivamente moléculas MHC, CD40,ICAM-1, LFA-3 y son bastante eficientes en lacaptura y procesamiento de antígeno. Sin embar-go, sólo una vez activadas (y como consecuenciade la expresión de altos niveles de las moléculascoestimuladoras CD80 y CD86 y de moléculas depresentación MHC), se convertirán en potentescélulas estimuladoras de linfocitos T. La madura-ción de la célula presentadora de antígeno, aumen-ta notablemente los niveles de CD80 y CD86,que se coexpresan en microdominios de membra-na junto a moléculas MHC, lo que favorece laefectividad de las señales transducidas por TCR/CD3 y CD28. La unión de CD28 a CD80 o CD86gatilla la activación de linfocitos T, la expresiónde CD40L que potencia la activación y la síntesisde IL-2 y sus receptores (IL-2R), todo lo cual con-duce a la proliferación y diferenciación linfocitaria(figura 7-12). En una fase posterior, las moléculasCD80 y CD86 las puede modular la diferencia-ción Th1/Th2 e inhibir la respuesta celular T, yasea directamente mediante la unión a su ligandoCLA-4 (expresado en la fase final de activaciónde los linfocitos) o indirectamente promoviendola generación de células T reguladoras.

7. HOMEOSTASIS Y DESARROLLO POST-TÍMICO DE LINFOCITOS T

Una de las características del sistema inmu-ne es que el número total y la distribución de los

distintos clones linfocitarios están bajo controlhomeostático. Por lo tanto, nuevos linfocitos queson continuamente generados en los órganoslinfoides primarios y secundarios (linfocitos vír-genes y linfocitos activados/linfocitos memoria,respectivamente) deben competir con los linfocitosresidentes en los distintos órganos y tejidos y man-tener la diversidad del repertorio linfocitario.Luego del encuentro con el antígeno, los

linfocitos T vírgenes se convertirán en células Tefectoras o en células T de memoria, que se dis-tinguirán de los linfocitos vírgenes en función delpatrón de moléculas de adhesión y de receptorespara citoquinas que expresan en su membrana.Como la homeostasis de linfocitos vírgenes y dememoria se regula independientemente, nuevoslinfocitos T de memoria reemplazarán sólo a otroslinfocitos T de memoria; de esta manera el núme-ro de linfocitos vírgenes y de memoria permane-cerá relativamente constante y equivalente en laperiferia.En los últimos años se ha establecido que aún

en ausencia de antígeno, la sobrevida post-tímicade los clones linfocitarios T, es un proceso activoy requiere la interacción continua de linfocitos vír-genes periféricos con moléculas MHC para lascuales los linfocitos fueron positivamente selec-cionados en el timo. En ratones por ejemplo,linfocitos T CD8 MHC de clase I (H-2Db)-restrin-gidos sobrevivirán sin proliferar si se transfierenpasivamente a ratones de haplotipo H-2Db, perono sobrevivirán si se transfieren a ratones dehaplotipo H-2Dk que expresan moléculas MHC declase I distintas. Si la transferencia es hacia rato-nes que expresan bajos niveles de moléculas H-2Db de clase I, sobrevivirá sólo una pequeña frac-ción de los linfocitos T CD8 adoptivamente trans-feridos y esta fracción será proporcional al nivelde expresión de estas moléculas MHC de clase Ien el individuo receptor.Aunque el antígeno no parece ser un

prerrequisito para la sobrevida de los linfocitosde memoria, el tamaño de un clon linfocitarioantígeno-específico puede disminuir en ausenciadel antígeno, simplemente por mecanismoshomeostáticos. Se ha sugerido, por lo tanto, quela vida media de los linfocitos memoria está de-terminada por la frecuencia con que los linfocitosse encuentran con el antígeno y del espacio dispo-nible para su sobrevida en el repertorio linfocitarioT. Así, la memoria inmunológica contra unantígeno que se encuentra una única vez, será re-lativamente corta, mientras que el encuentro fre-

Sin título-2 5/26/06, 10:25 AM165

166

cuente con un antígeno será suficiente para man-tener o aumentar el tamaño clonal de los linfocitosT antígeno-específicos, generando una memoriainmunológica casi indefinida, debido a la genera-ción continua de nuevas células de memoria.El compartimiento linfocitario T puede ser

mantenido o reemplazado por nuevas células queemergen desde el órgano linfoide primario o bienpor repoblamiento a partir de la expansiónperiférica de clones linfocitario T maduros, sobretodo cuando la actividad tímica disminuye comoconsecuencia de la edad.

LECTURAS SUGERIDAS

Burdin, N. and Kronenberg M., “CD-1 mediatedimmune response to glycolipids”, Curr. Opin.Immunol. 11: 326-331, 1999.

Fagarasan S. and T. Honjo. “T-Independent Im-mune Response: New Aspects of Cell Biology”,Science 290: 89-92, 2000.

Freitas A.A. and Rocha B., “Population Biologyof Lymphocytes: The flight for survival”, Annu.Rev. Immunol 18: 83-111, 2000.

Fugmann S.D. et al., “The RAG Proteins andV(D)J Recombination: Complexes, Ends andTrasposition”, Annu. Rev. Immunol. 18: 495-527,2000.

Gellert, M., “V(D)J Recombination: RAG Pro-teins, Repair Factors, and Regulation”, Annu. Rev.Biochem, 71: 101-132, 2002.

Godfrey, D.I., et al., “NKT cells: facts, functionsand fallacies”, Immunol. Today 21: 573-583, 2000.

Grauwunder U. and Harfst E., “How to make endsmeet in V(D)J recombination”, Curr. Opin.Immunol. 13: 186-194, 2001.

Hayday A.C., “ Cells: A Right Time and a RightPlace for a Conserved Third Way of Protection”,Annu. Rev. Immunol. 18: 975-1026, 2000.

Kronenberg M., Naidenko O., Koning F., “Righton target: Novel approaches for the direct visual-ization of CD1-specific Tcell responses”, Proc.Nat. Acad. Sci. USA 98: 2950-2952, 2001.

Lanzavecchia A. and Sallusto F., “Dynamics of Tlymphocyte Responses: Intermediates, Effectorsand Memory Cells”, Science 290: 92-97, 2000.

Lefranc, M.P., “Locus maps and genomic reper-toire of the human T-cell receptor genes”, Immu-nologist 8: 72-80, 2000.

MacDonald H.R., Radke F., Wilson A., “T cell fatespecification and / lineage commitment”,Curr. Opin. Immunol. 13: 219-224, 2001.

Martin F. and Kearney J.F., “B1 cells: similaritiesand differences with other B cell subsets”. Curr.Opin. Immunol. 13: 195-201, 2001.

Matsuuchi L. and Gold M.R., “New views of BCRstructure and organization”, Curr. Opin. Immunol.13: 270-277, 2001.

Nemazee, D., “Receptor selection in B and T Lym-phocytes”, Annu. Rev. Immunol. 18: 19-51, 2000.

Ravecht J.V. and Lanier L.L., “Immune InhibitoryReceptors”, Science 290: 84-89, 2000.

Saito, H. et al., “Role of gut cryopatches in earlyextrathymic maturation of intestinal intraepithelialT cells”, J. Immunol. 164: 3616- 3626, 2000.

Sallusto, F. et al., “Two subsets of memory T lym-phocytes with distinct homing potential and ef-fector functions”, Nature 401: 708-712, 1999.

Schaible, U.E., Kaufmann, S.H.E. “CD1 and CD1-restricted T cells in infection with intracellularbacteria”, Trends Microbiol. 8: 419-425, 2000.

Von Adrian, U.H, Mackay, C.R. “T-cell functionand migration”, NEJM. 343: 1020-1034, 2000.

Wilson, S.B., Byrne, M.C. “Gene expression inNKT cells: defining a functionally distinct CD1d-restricted T cell subset. Curr. Opin. Immunol. 13.555-561.

Sin título-2 5/26/06, 10:25 AM166