Desarrollo de Terapia Génica Mediante Liposomas conjugados con MC1R
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Desarrollo de Terapia génica suicida a través de liposomas conjugados con el ligando del receptor MC1R en melanoma maligno
Antonio E. Serrano
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Melanoma
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Melanoma Uveal
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Antígenos Asociados A Tumor
Productos de genes silentes Proteínas oncogénicas Antígenos derivados de
proteínas virales
Antigenos oncofetales Antígenos tejido-específicos Productos de mutaciones
puntuales
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Antígenos Asociados a Melanoma Melan-A/Mart-1, MAGE 1,2 y 3 gp-100 Gp75 TRP-2 tirosinasa MC1R
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Receptor Melanocortina 1
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-MSH
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MC1R en melanoma
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Objetivo
Desarrollar una estrategia de entrega no viral de un gen suicida utilizando liposomas conjugados con -MSH, específicos para el receptor MC1R sobreexpresado en células de melanoma maligno humano.
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Objetivos específicos:
1) Clonar el gen de la HSV-TK en un plásmido comercial y transfectarlo a células de melanoma humano y evaluar lisis del gen suicida en presencia de ganciclovir mediante esnsayos de citotoxicidad por liberación de Cr 51
2) Evaluar reconocimiento del complejo -MSH-PEG–DSPE por parte de melanomas MC1R positivos a través de inmunodeteccion y radiomarcación.
3) Evaluar eficiencia de transfección y funcionlidad del complejo pCMV-HSV-TK-Neo -MSH-PEG–DSPE in vitro mediante rt-pcr y ensayo citotóxico respectivamente.
4) Evaluar citólisis in vivo de pCMV-HSV-TK-Neo -MSH-PEG–DSPE en células de melanoma murino B16 que espresan MC1R humano en superficie mediante análisis histológico y macroscópico en metástasis pulmonares.
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1) Clonar el gen de la HSV-TK
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Clonar el gen de la HSV-TK
Lipofectin
Cr51
· Chromium Release· PCR
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Evaluar reconocimiento del complejo -MSH-PEG–DSPE
PEG
distearoylphosphatidylethanolamine
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Evaluar reconocimiento del complejo -MSH-PEG–DSPE
Rhodamina
FACS
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Eficiencia de transfección y funcionlidad del complejo pCMV-HSV-TK-Neo -MSH-PEG–DSPE.
Cr51
· Chromium Release· PCR
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Evaluar citólisis in vivo
hMC1rLipofectin
Melanoma B16
GCV
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Resultados esperados
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Análisis histológico
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Perspectivas
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Perspectivas
Desarrollo de entrega adenoviral del gen HSV-Tk a melanoma utilizando MC1R como receptor.
Modificaciones del péptido -MSH para mejorar selectividad y afinidad.
Estudio Clínico de estrategia de liposomas vía nebulización en metástasis pulmonares de melanoma
Estudio Clínico de Ad-HSV-tk