Efecto antimicrobiano de extractos obtenidos de residuos ...
Estudios de sensibilidad antibi tica in vitro · Saber que la infección no es curable sin el...
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MÉTODOS PARA EL ESTUDIO IN VITRO DE LA ACTIVIDAD DE LOS ANTIMICROBIANOS
Dra. Montserrat Ruiz Garcí[email protected]. MicrobiologíaHGU de Elche18 de febrero de 2013
MÉTODOS PARA EL ESTUDIO IN VITRO DE LA ACTIVIDAD DE LOS ANTIMICROBIANOS
1.- RESISTENCIAIMPORTANCIA FACTORES IMPLICADOS
2.- EL ANTIBIOGRAMACONCEPTOSTIPOS
3.- MECANISMOS DE ACCIÓN DE LOS ANTIBIÓTICOSMECANISMOS DE RESISTENCIA DE LOS MICROORGANISMOS
4.- RESISTENCIA DE ALGUNAS ESPECIES IMPORTANTES EN CLÍNICA
RESISTENCIA FACTORES IMPLICADOS
FACTORES QUE MODULAN EL EFECTO FINAL DE LOS ABFactores del microorganismo: acceso al interior de la bacteriaFactores del pacienteFactores del antibiótico: metabolito activo, concentación suficiente
TIPOS DE RESISTENCIA1.- Intrínseca o natural
2.- Adquirida: Mutaciones Adquisición de plásmidos
RESISTENCIA: FACTORES DEL
MICROORGANISMO Pared celular: Diferente en GP y GN
Más impermeable la de GN
RESISTENCIA: FACTORES DEL ANTIBIÓTICO
Distribución anatómica de algunos antibióticos de uso frecuente
Sangre LCR Orina
Ampicilina + + +Ceftriaxona + + +
Vancomicina + +/- +
Ciprofloxacina + +/- +Gentamicina + - +
Clindamicina + - -
Norfloxacina - - +Nitrofurantoína - - +
RESISTENCIA: FACTORES DEL ANTIBIÓTICO Y DEL MICROORGANISMO
ANTIBIÓTICOS BACTERIOSTÁTICOS Y BACTERICIDAS*BACTERIOSTÁTICOS BACTERICIDASCloranfenicol Aminoglucósidos
Macrólidos Beta-lactámicosClindamicina Vancomicina
Sulfonamidas Quinolonas
Trimetoprim RifampicinaTetraciclinas Metronidazol
*La naturaleza bacteriostática o bactericida del antimicrobiano varía dependiendo de la concentración usada y de la especie bacteriana a la que se dirige
La infecciones graves no se pueden tratar con AB bacteriostáticos
Bacterias G+/Aztreonam.....................Falta de PBP’s
Bacterias G-/Vancomicina....................Falta de penetración membrana externa
Klebsiella/Ampicilina y ticarcilina...........Beta-lactamasas
RESISTENCIA: FACTORES DEL ANTIBIÓTICO Y DEL MICROORGANISMO
ANTIBIOGRAMA
Estudio de la sensibilidad de los microorganismos
OBJETIVO: Intentar predecir cuál será la respuesta al tratamiento si se emplea el antibiótico estudiado
CMI: minima concentración de antimicrobiano que inhibe la multiplicación de un microorganismo (µg/ml)
Si la CMI del antibiótico frente a un determinado microorganismo es inferior a la concentración máxima alcanzada por el antibiótico en el foco de la infección, el microorganismo será inhibido y la infección podrá ser curada
ANTIBIOGRAMA CATEGORÍAS
■ SENSIBLE: Existe una elevada probabilidad de que el paciente responda al tratamiento si se utiliza el antibiótico estudiado. Predice una buena respuesta clínica
■ RESISTENTE: El tratamiento probablemente fracasaría en caso de administrar el antibiótico ensayado. Falta de eficacia.
■ INTERMEDIO O MODERADAMENTE SENSIBLE: Dosis altas en antibióticos poco tóxicos Ab que se concentra en la zona a tratar
ANTIBIOGRAMA
TIPOS:Cualitativo (S, R, I)Cuantitativo (CMI)Disco-difusión en agar o placa
Microdilución en caldo
Epsilon-test (Etest)
A
B
C
D
A: K. pneumoniae KPC-3
B: control negativo
C: KPC control positivo
D: control negativo
Actividad carbapenemasa:
TEST DE HODGE MODIFICADO
TÉCNICAS GENÉTICAS
Basadas en las técnicas de amplificación de ácidos nucléicosDetectan los genes que codifican las resistencias
VENTAJASRápidasNo precisan de interpretación
LIMITACIONESLa resistencia en algunos casos es multifactorial
ANTIBIOGRAMA INTERPRETATIVO
Lectura interpretativa del antibiograma
Identificación correcta de la especieConocimiento de su patrón de resistencia habitualAntibióticos marcadores
VENTAJAS� Permite detectar mecanismos de resistencia emergentes� Puede inferirse la sensibilidad de antibióticos no incluidos� Mejora de la calidad
LIMITACIONES � Requiere la aplicación de numerosos conocimientos� Complejidad y simultaneidad de los mecanismos de resistencia� Interferencia de mecanismos intrínsecos� Diferente validez de las técnicas� Limitación en el descubrimiento de nuevos mecanismos
MECANISMO DE ACCIÓN DE LOS ANTIBIÓTICOS
VARIAS DIANAS POSIBLES
1.- PARED CELULAR
2.- MEMBRANA CITOPLÁSMICA
3.- SÍNTESIS PROTEICA
4.- SÍNTESIS DE ÁCIDOS NUCLÉICOS
5.- INHIBICIÓN DE VÍAS METABÓLICAS
6.- MECANISMOS INDIRECTOS
ANTIBACTERIANOS QUE ACTÚAN CONTRA LA PARED CELULAR
Pared rígida de peptidoglicano que está por fuera de la membranacitoplásmica
1.-BETA-LACTÁMICOS
2.-GLICOPÉPTIDOS: VANCOMICINA Y TEICOPLANINA
ANTIBACTERIANOS QUE ACTÚAN CONTRA LA MEMBRANA CITOPLÁSMICA
“AGUJEREAN” LA MEMBRANA
■ POLIMIXINA B Y COLISTINA: Detergentes de gramnegativos.
■ GRAMICIDINA A: grampositivos
■ POLIENOS: Hongos
ANTIBACTERIANOS QUE ACTÚAN INHIBIENDO LA SÍNTESIS PROTEICA
■ Alteran profundamente el metabolismo bacteriano
1.-AMINOGLUCÓSIDOS2.-MACRÓLIDOS-CETÓLIDOS3.-LINCOSAMINAS-ESTREPTOGRAMINA 4.-OXAZOLIDINONAS5.-TETRACICLINAS
ANTIBACTERIANOS QUE INHIBEN LA SÍNTESIS DE ÁCIDOS NUCLÉICOS
1.- FLUOROQUINOLONAS2.- METRONIDAZOL3.- NITROFURANTOÍNA4.- RIFAMPICINA
MECANISMOS DE RESISTENCIA DE LOS MICROORGANISMOS A LOS ANTIBIÓTICOS
MECANISMOS
■ Inactivación enzimática
■ Alteración de la diana (PBP’S, gyrasa, ribosoma)
■ Disminución de la concentación intracelular de antibiótico Alteración de permeabilidad (porinas) Bombas de expulsión
RESISTENCIA DE DETERMINADAS ESPECIES BACTERIANAS
Staphylococcus aureus
MECANISMOS
■ Beta-lactamasas■ Resistencia a meticilina (SARM)■ Fenómeno de tolerancia■ R a Vancomicina
RESISTENCIA DE Enterococcus spp
RESISTENCIA INTRÍNSECA■ Cefalosporinas■ Clindamicina■ De bajo nivel a aminoglucósidos. No interfiere con el sinergismo
con beta-lactámicos
RESISTENCIA ADQUIRIDA
A muchos otros antibióticos� Glicopéptidos: fenotipos van� Ampicilina
RESISTENCIA DE Streptococcus pneumoniae
BETA-LACTÁMICOS■ PENICILINAESPAÑA: neumococo resistente a Penicilina 20-30%Mecanismos: Alteraciones de las PBP’S
■ CEFALOSPORINASESPAÑA: Excepcional la resistencia a cefalosporinas 3ª g.
QUINOLONASLevofloxacino: empiezan a aparecer resistencias
RESISTENCIA DE Streptococcus pyogenes
■ No resistencia a penicilina
■ Aumentan las resistencias a macrólidos Bombas de expulsión (gen mef) Metilasas (gen erm)
RESISTENCIA DE Haemophillus influenzae
■ Resistencia a PENICILINA
■ Mecanismos Beta-lactamasas: El más frecuente (TEM-1) Alteraciones en PBP’S
INACTIVACIÓN ENZIMÁTICA
Beta-lactamasas (TEM, SHV, IRT, OXA, AMP C, BLEES)■ Tipos Constitutivas o Inducibles Cromosómicas o PlasmídicasInhibidores de beta-lactamasas: ácido clavulánico, sulbactam
■ Especiales: AMP C BLEES: degradan cefalosporinas de 3ª generación Metalobetalactamasas: degradan carbapenems
RESISTENCIA DE Pseudomonas aeruginosa
■ Intrínsecamente R a muchos AB
■ Sensibles: Peniclinas antiseudomónicas, Ceftazidima, Aminoglucósidos,Ciprofloxacino, Aztreonam, Imipenem, meropenem
■ NOSOCOMIALES: Más resistentes
Muchos mecanismos de resistencia combinados
RESISTENCIA DE Neisseria spp
Neisseria gonorrhoeaeResistencia a penicilina■ Beta-lactamasas: El más importante■ Alteraciones de PBP’SResistencia a quinolonas y cefalosporinas de 3ªg
Neisseria meningitidisResistencia a penicilina■ Alteraciones de PBP’S: El más importante■ Beta-lactamasas: Poco frecuente
BASES PARA EL TRATAMIENTO ANTIBIÓTICO EMPÍRICO
■ Diagnóstico clínico de la infección.■ Tener en cuenta microorganismos causantes más probables.■ Conocer los patrones de sensibilidad de los patógenos a los
antibióticos en nuestro medio.■ Saber que la infección no es curable sin el concurso de
antibióticos.■ Elección del antimicrobiano más idóneo.■ Instaurar siempre el tratamiento coadyuvante más idóneo, para
acelerar la curación■ Poner siempre en marcha estudios microbiológicos que llevan a
la identificación del agente causal, antes de la toma de antibióticos.