Estudios experimentales para terapia celular en mmc
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Estudios experimentales para la espina bífida:
¿es posible la terapia celular? Dr. Fernando de Miguel PedreroLaboratorio de Terapia Celular
Instituto de Investigación Hospital La Paz
VII JORNADAS DE AMEB
Colaboración Cirugía Pediátrica- Lab. Terapia Celular
Origen EB: Defecto de cierre del tubo neural en la 3ª semana de gestación
¿Qué hacer?
Cirugía, rehabilitación…
Modelos experimentales de MMC
• Teratogénicos (ácido retinoico en ratas)• Quirúrgicos (lesión lumbar en ovejas,
conejos)
Ácido retinoico en rata
• Ratas preñadas a día g10• 60-100 mg/kg ácido retinoico en aceite de oliva p.o.• Cesárea a día g15-g21
ControlControl +AR +AR +AR
Ácido retinoico en rataAnomalías esqueléticas
Control+AR
Ácido retinoico en rataAnomalías medulares y vertebrales
Control, H/E, 10x +AR, H/E, 20x
Ácido retinoico en rataAnomalías celulares
Iba-1 (microglía), 20x y 63x
Ácido retinoico en rataAnomalías por MRI
Ácido retinoico en rataFuncionalidad vesical
Modelo quirúrgico en oveja
Meuli M. et al. Nature Medicine 1:342-347, 1995Meuli M. et al. J Pediatr Surg 30:1028-1033, 1995
• Lesión a día g75• Cesárea a día g135
Modelo quirúrgico en oveja
Meuli M. et al. Nature Medicine 1:342-347, 1995Meuli M. et al. J Pediatr Surg 30:1028-1033, 1995
Modelo quirúrgico en oveja
Modelo quirúrgico en ovejaAnomalías cerebrales
Encinas JL. et al. Pediatr Surg Int (2008) 24:1335-1340 Encinas JL. et al. J Pediatr Surg (2011) 46:713-722
Modelo quirúrgico en ovejaAnomalías vesicales
Bladder thickness
0
50
100
150
200
Control Non-selfclosure
Non-selfclosure
Correctivesurgery
mic *
Encinas JL. et al. Cir Pediatr (2010) 23:122-125
Qué es Terapia Celular
• Administración de productos biológicos que contengan células para el tratamiento de enfermedades o servir de apoyo a otras terapias
Qué es Terapia Celular
• Directiva Europea 2001/83/CE sobre medicamentos de uso humano, modificada por Directiva 2009/120/CE sobre medicamentos de Terapia Avanzada
• Reglamento 1394/2007 del Parlamento sobre medicamentos de Terapias Avanzadas
• Transposición a la legislación española (Orden SAS/1144/2010 de 3 de mayo que modifica el Anexo I del RD 1345/2007 de 11 de octubre)
Material para Terapia Celular
• Qué células se pueden usar
– diferenciadas (Paracelso, s XVI: “igual cura igual”)
– indiferenciadas/pluripotentes= madre/troncales• Embrionarias• Adultas• Pluripotentes inducidas (iPS)
Células madre embrionarias
Dr. J.A. Thomson1998
Células iPS
Dr. S. Yamanaka Dr. J.A. Thomson
2007
2012
Células madre adultas
1970s
1990s
Células madre de médula ósea
Células madre mesenquimales
• Médula ósea, tejido adiposo, líquido amniótico, cordón umbilical– Crecimiento en colonias fibroblastoides– Mismos marcadores citometría– Diferenciación osteogénica, adipogénica, condrogénica
osteoRojo alizarina
adipoOil Red O
condroAzul alcian
Ensayos clínicos de Terapia Celular
• Más de 100.000 ensayos clínicos reconocidos que se desarrollan en más de 150 países distintos
• En diferentes etapas de desarrollo (fase I/II/III), constan unos 3.000 EECC de terapia experimental con células progenitoras: la mayoría emplean células adultas de diversos orígenes, 5 se basan en células embrionarias diferenciadas (uno a oligodendrocitos)
• 1 en Japón con células iPS diferenciadas (epitelio retina)
• Uso autólogo (mayoritario), y uso alogénico
Terapia Celular para reparación del SN
• Diferenciación (neuronas, glía, oligodendrocitos)• Apoyo trófico• Detener procesos degenerativos y/o inflamatorios• Facilitar crecimiento axonal• Facilitar función glial• Secreción neurotransmisores
Terapia Celular para reparación del SN
Motoneuronas: rhodamina (rojo)HSC: GFP (verde)
Terapia Celular para reparación del SN
Terapia Celular para reparación del SN
ASC para MMC: factores neurotróficos
hASC tratadas con medio de diferenciación neural
Terapia celular en MMC
GDNF BDNFX-gal BrdU/nestin
Terapia Celular para MMCDiseño experimental en oveja
Ovejas preñadas (n=70)
Datación ecográfica
Cirugía defecto lumbar (MMC) (n=60)Inyección FluoroGold
d75g
Control sano (n=10)Inyección FluoroGold
Reparación ITissucol (n=20)
Reparación IITissucol+ASC (n=20)
Controlno reparado (n=20)
d100g
Parto
d150g
• Evaluación física• Manometría ano-rectal• Contractilidad vejiga• Histología cerebro, médula, ano-recto, vejiga
Terapia Celular para MMC en oveja
Terapia Celular para MMC en oveja
ASC en tissucol (H/E, 40x)
Piel a término (d140)
Médula lumbar a término (d140) (H/E, 20x)
MMC en feto de ovejaCirugía con Membranas PLLA
Colaboración con Dra. D. Farmer, UCSF
Terapia Celular para MMC en rata
100 µm
100 µm
rASC-GFP
Filtro policaprolactona(3.5 mm x 1.5 mm)
Terapia Celular para MMC en rata
Terapia Celular para MMC en rata
Terapia Celular para MMC en rata
Terapia Celular para MMC en rata
Terapia Celular para MMC en rata
Terapia Celular para MMC en oveja
Colaborar para competir
Grupo 41. Terapia Celular y Genometástasis
Grupo 38. Cirugía de Malformaciones Congénitas
Fundación para Investigación en Urología-AEU