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UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA

LABORATORIO DE PATOLOGIA CLINICA Av. Circunvalación – Cda. 29 San Borja Telf. 435-3348 – Anexo 237

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Evaluación de la Residualidad en Leche de una Infusión Antibiótica Intrauterina sobre la base de Cefalexina, Neomicina, Cloxacilina y

Vitamina A (Metricef 3®) en vacas lecheras del distrito de Pachacamac, departamento de Lima.

Alvarado A.,¹ Tang J., Ruiz, F., Rodriguez, L.²

¹ Laboratorio de Patología Clínica – Facultad de Medicina Veterinaria - UNMSM ² Área de Investigación en Salud Animal – Laboratorio Agrovet Market Animal Health

INTRODUCCION

El uso de antibióticos es sin lugar a dudas una de las principales herramientas en el control y erradicación de numerosas enfermedades infecciosas de origen bacteriano en animales de producción y compañía. Una vez producido el diagnostico de una afección y establecido el tratamiento, además de seguir el curso clínico de los animales afectados se debe prestar especial atención a los periodos de descarte de leche para poder enviar al mercado la leche con niveles de inhibidores por debajo de los máximos residuales permitidos.

El término residuos, se refiere a pequeñas concentraciones de estos fármacos que quedan en leche o carne después de finalizado un tratamiento, independiente de la vía de administración del producto (parenteral, intrauterina o intramamaria).

Los riesgos de estos fármacos en la población humana se centran fundamentalmente en los siguientes aspectos: reacciones de hipersensibilidad, efectos tóxicos específicos, aparición de cepas resistentes y susceptibles de ser transmitidas al hombre y alteraciones de la flora intestinal. Actualmente, con el gran incremento. En el caso particular de la leche, al riesgo toxicológico se suma el riesgo tecnológico, es decir el efecto que las concentraciones de antibióticos pueden tener sobre los procesos fermentativos dirigidos a la obtención de productos de alto valor agregado. Es importante destacar, que estos residuos causan graves daños en la industria lechera, ya que la elaboración de derivados lácteos como queso y yogurt necesitan el desarrollo de la flora ácido láctico. Esta flora, es inhibida por la presencia de concentraciones pequeñas de antibióticos, razón por la cual las industrias realizan rutinariamente un control interno, para separar la leche ausente de estos residuos y destinarla a la elaboración de estos productos. Por ello en la actualidad se debe conocer las concentraciones máximas permitidas, y como herramienta para su detección existen diversos métodos para estimar las concentraciones máximas permitidas en la leche. Ahora se encuentran técnicas como la de tipo ensayo de receptor de Beta s.t.a.r. (UCB-Bioproducts, Bélgica), la técnica de ensayo de unión a receptor ligado a enzima de Snap (IDEXX Laboratories INC.,EEUU), técnicas microbiológicas como la de CH ATK Single Test P&S (Copan Italia) , Charm Farm Test Vial (Charm Sciences Inc., EEUU) y el Test cuali o Delvotest® SP – NT. El método Test cuali o Delvotest® SP - NT es una prueba de difusión estándar para la detección de los residuos de sustancias antibacterianas (tales como antibióticos y sulfonamidas). La prueba consiste de




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ampolletas que contienen al medio sólido agar sembrado de un número estandarizado de las esporas de Bacillus stearothermophilus var. Calidolactis, junto con nutrientes requeridos para el crecimiento y un antifolate trimethoprim. El medio es coloreado en púrpura por el indicador de pH púrpura de bromocresol.

La sensibilidad de Delvotest ® SP-NT dada en la hoja de especificación de este producto, aparte de las sensibilidades especificadas para la Penicilina G y Sulfadiazina, muestra los rangos de sensibilidad para otros antibióticos y sustancias inhibitorias que pueden ser detectados, tales como aquellos definidos por el Nivel Máximo de Residuo (MRL). La tabla 1, da una visión de los niveles de detección de Delvotest SP-NT para residuos de diferentes antibióticos y sulfonamidas. El Nivel de detección se refiere a la concentración más baja en la cual una droga es todavía detectada por la prueba, al tiempo control o al tiempo de lectura fijo de 3 horas. Tabla 1: Datos indicativos sobre el nivel de detección con Delvotest® SP - NT en ppb (partes por billón o ng/ml) en la leche bovina cruda mezclada. Las drogas enlistadas son una selección de la muestra del espectro de detección.

Droga Nivel de detección a tiempo de control

(ppb)

Nivel de detección Lectura a 3 horas

(ppb) β-lactams penicilina ampicilina amoxicilina ceftiofur cefapirina cloxacilina dicloxacilina oxacilina Sulfonamidas sulfadiazina sulfametazina Tetraciclinas tetraciclina oxytetraciclina Macrolidas Tilosina Spiramicina Eritromicina Otras Trimetoprim Dapsona Aminoglicosidos Gentamicina Neomicina

1 – 2

4 2 – 3

25 – 50 4 – 6 20 10 10

25 – 50

25 – 100

250 – 500 250 – 500

30

400 -600 40 – 80

50 -100 0.5 – 1

50

100 – 200

2 – 3 6 – 7 3 – 5

50 – 100 6 – 8

20 – 30 10 – 20

10

100 – 150 100 – 250

800 800

50

800 – 1000 200

200 – 300

1 – 2.5

200 300 - 600

Las muestras de leche que están libres de sustancias antibacterianas o las que contienen por debajo de niveles especificados, cuando se les hace la prueba añadiendo 0,1 mL de leche e incubadas a 64ºC




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permite la germinación y el crecimiento de la bacteria. Esto conducirá a un cambio en color del indicador de púrpura a amarillo. Cuando la muestra de leche contiene sustancias antibacterianas por encima de la sensibilidad de la prueba, el crecimiento es inhibido y como resultado el color del agar permanece púrpura.

Esta técnica detecta al antimicrobiano por debajo del límite de tolerancia fijada por FDA, USDA. Los niveles de detección para Cloxacilina, Neomicina y Cefalosporinas son 20, 100 – 200 y 25 - 50 partes por billon (ppb) respectivamente.

Metri-Cef 3® está indicado para el tratamiento y la prevención de las metritis (clínica y subclínica) y piometra de bovinos, causadas por gérmenes sensibles a alguno de los antibióticos de la fórmula. La asociación de sus tres antibióticos le otorga una efectividad completa contra las bacterias causantes de problemas infecciosos en el útero:

Cefalexina: su efectividad es inmediata, ejerciendo su acción durante las primeras 24 horas de aplicado el producto. Elimina la primera barrera bacteriana. Es activo contra la mayoría de las bacterias Gram positivas (entre ellas los estafilococos) y algunas Gram negativas, incluyendo E.coli, Proteus; Klebsiella, salmonella, Shigella y Enterobacter, además de los estafilococos penicilinasa positivos, sin embargo no posee actividad contra Enterobacter spp., P.aeruginosa y Serratia spp, entre otros. La resistencia adquirida se presenta en bacterias gramnegativas y es de particular importancia en las Enterobacterias.

Neomicina Sulfato: Asociada al excipiente de larga duración presente en la fórmula, extiende su acción hasta por 3 semanas. La neomicina es el antibiótico más utilizado en combinaciones de drogas debido a su amplio espectro antibacteriano. Su actividad bactericida abarca un gran número de bacterias Gramnegativas, incluyendo E.coli, Klebsiella pneumoniae, Haemophilus sp., Enterobacter sp., Pasteurella, Serratia sp., Neisseria sp., Proteus sp. Salmonella spp, Shigella spp, y Pseudomona aeruginosa y su espectro abarca también un número reducido de bacterias Gram positivas como el Staphylococcus aureus. La resistencia mediada por plásmidos ocurre mediante una variedad de enzimas. Tal resistencia, la cual a menudo es múltiple, es relativamente común en los comensales y patógenos entéricos pero menos frecuente entre otros patógenos oportunistas. La resistencia por mutación cromosomal carece de importancia. Cloxacilina Benzatínica: Su estructura química la hace estable, impidiendo el acceso de enzimas de núcleo B-Lactámico. Su acción es contra bacterias Gram positivas (tales como Estreptococos, Estafilococos, algunas Corynebacterias, Enrysipelothrix rhusiopathiae, Clostridium spp, Bacillus anthracis), pero también contra algunos cocos Gramnegativos, Leptospira canicola, Campylobacter foetus y Actinomyces.

Además, Metri-Cef 3® contiene Vitamina A, que funciona como regenerador epitelial. La adición de Vitamina A, reduce las consecuencias del proceso infeccioso y participa manteniendo la integridad del tejido. Metri-Cef 3®, se administra mediante infusión intrauterina. La dosis utilizada es una jeringa de 30 mL por animal, la cual debe ser introducida en el útero utilizando la pipeta anexa. En casos severos el tratamiento puede ser repetido después de 48 horas. Para vacas repetidoras administre una jeringa 24 horas después de la inseminación artificial.




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Antes de la administración intrauterina de Metri-Cef 3® las personas que efectúen el tratamiento deben lavarse y secarse las manos previamente. Dada la naturaleza del empaque y la no-reabsorción del principio activo, Metri-Cef 3® presenta un amplio margen de seguridad, imposibilitando una sobredosis.

En la presente evaluación se tuvo como objetivo demostrar la inexistencia de residuos o trazas de antibióticos en la leche después del uso de Metri-Cef 3® en dosis terapéuticas. OBJETIVO Determinar el tiempo de residualidad en leche de una Infusión Antibiótica Intrauterina sobre la base de Cefalexina, Neomicina, Cloxacilina y Vitamina A (Metri-Cef 3®) en vacas lecheras en lactación. MATERIALES Y METODOS Lugar de Ejecución: Establo Casablanca en el distrito de Pachacamac, departamento de Lima. Materiales: Veinte (20) Vacas lecheras con metritis. Jeringa de Infusión antibiótica intrauterina sobre la base de Cefalexina, Neomicina,

Cloxacilina y Vitamina A (Metri-Cef 3®). Guantes de plástico para inseminación. Aretes Boviflex para identificación. Botas descartables o de goma. Frascos esteriles para colección y análisis de Leche. Kit Delvotest® SP – NT para detección de antibióticos en leche. Metodología: Se seleccionaron dos grupos de trabajo: Grupo A (Tratamiento): 10 vacas lecheras con

metritis. Grupo B (Control): 10 vacas lecheras sin tratamiento, todas en un promedio de peso de 600 Kg.

En el grupo A y grupo B se tomaron muestras de leche que contengan una mezcla de los cuatro cuartos de cada vaca, previos a la aplicación del producto para descartar la adición de otros antibióticos o tratamientos previos, lo cual se consideró como la muestra de hora cero (00 h).

En el Grupo A se aplicará mediante una pipeta de inseminación un tubo intrauterino de 30 ml de Metri-Cef 3® por vaca.




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Una vez aplicado el producto se tomaron muestras de leche de ambos grupos a las 12, 24, 36, 48, 60 y 72 horas que contengan una mezcla de los cuatro cuartos de cada vaca.

Se trabajó con el Kit Devotest SP – NT de acuerdo con la metodología descrita por el fabricante.

RESULTADOS CUADRO 1: Resultados de muestras de leche con kit Delvotest SP- NT del grupo tratado con Metri-Cef 3®

GRUPO A (TRATADO)

VACA 00 h 03/02 (T)

12 h 04/02 (M)

24 h 04/02 (T)

36 h 05/02 (M)

48 h 05/02 (T)

60 h 06/02 (M)

72 h 06/02 (T)

LINDA - - - - - - -

NITA - - - - - - -

LULU - + - - - - -

GLADIS - - - - - - -

LIDIA - - - - - - -

11 - - - - - - -

12 - - - - - - -

13 - + - - - - -

14 - - - - - - -

15 - - - - - - -

CUADRO 2: Resultados de muestras de leche con kit Delvotest SP- NT del grupo no tratado. GRUPO B (CONTROL)

VACA 00 h 03/02 (T)

12 h 04/02 (M)

24 h 04/02 (T)

36 h 05/02 (M)

48 h 05/02 (T)

60 h 06/02 (M)

72 h 06/02 (T)

1 - - - - - - -

2 - - - - - - -

3 - - - - - + -

4 - - - - - - -

5 - - - - - - -

6 - - - - - - -

7 - - - - - - -

8 - - - - - - -

9 - - - - - - -

10 - - - - - - -




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Leyenda: - : Negativo a presencia de antibiótico. +: Positivo a presencia de antibiótico. h : Horas M: Mañana T : Tarde DISCUSION Los resultados mostrados en el Cuadro 1 del Grupo A (Tratado) muestra que todas las vacas, se encuentran negativos a presencia de antibióticos en leche desde el primer muestreo (12 h) post-tratamiento y permanecen negativas hasta el muestreo final que fue hasta las 72 horas. Las excepciones a estos resultados fueron las vacas Lulú y Nº 3, que tuvieron resultados positivos al primer muestreo (12 h), los cuales se pueden considerar que se tratarían de reacciones cruzadas o probables contaminaciones con desinfectantes a la hora de la toma de muestras, ya que estas vacas en el muestreo pre-tratamiento (00 h) estuvieron negativas y considerando la alta sensibilidad de la prueba es muy fácil la detección elementos extraños a los buscados en la prueba. La interpretación de un resultado negativo a residuos de antibióticos es que, las muestras tienen niveles de concentración que están por debajo de los niveles de detección, siendo el caso para Cefalexina la cual se encuentra por debajo de las 50 a 100 ppb, para Cloxacilina 20 a 30 ppb, y, para Neomicina 300 a 600 ppb respectivamente (Tabla 1). En el Cuadro 2 de los resultados del Grupo B (Control) sin tratamiento, se observa que todas las vacas se mostraron negativas a residuos de antibióticos en leche, tanto en el muestreo de hora cero (00 h) como en los siguientes muestreos, hasta el muestreo final de 72 horas; lo cual demuestra que todas las vacas utilizadas en el experimento en ambos grupos, se mantuvieron durante el periodo de prueba, sin tener contacto con ninguna fuente de antimicrobianos o desinfectante que hubieran podido influenciar en los resultados obtenidos. CONCLUSION Se concluye que la residualidad en leche de una Infusión Antibiótica Intrauterina sobre la base de Cefalexina, Neomicina, Cloxacilina y Vitamina A (Metri-Cef 3®) en vacas lecheras en lactación es nula; dado a que, los resultados como negativos por el método utilizado en el presente trabajo se interpretan como valores de antibióticos por debajo de los niveles de detección y estos a su vez son valores considerados menores al LMR. BIBLIOGRAFIA CITADA

1. Manual Merck de Veterinaria. Quinta Edición. Océano Grupo Editorial. España. 2000.




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2. Prescott, John F.; Baggot Desmond. Antimicrobial Therapy in Veterinary Medicine. Second edition.1993. 557-558

3. Sumano, Ocampo. Farmacología Veterinaria. Segunda Edición.1998

4. http://www.capraispana.com/enfermedades/mastitis/secado.htm. El tratamiento y

prevención de mastitis durante el período de secado.

5. http://www.infolactea.com/descargas/biblioteca/290.pdf. Calidad de leche y manejo sanitario de la vaca seca. Pamela Ruegg. University of Wisconsin.

6. http://www.westfalia.com/mx/es/what_is_new/news/2007/dryoffnoticia.aspx. Control de mastitis en vacas en seca. GEA Farm Technologies.

Lima, 15 de Marzo del 2010. M.V. ARNALDO ALVARADO S. Área de Pruebas Especieles Lab de Patologia Clinica Facultad de Medicina Veterinaria




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FOTOGRAFIAS DE LA APLICACIÓN DEL PRODUCTO, TOMA Y PROCESAMIENTO DE LAS MUESTRAS.

Introducción de pajilla de Metricef 3

Pajilla con jeringa de Metricef 3




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Introducción de la suspensión

Metricef 3




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Toma de muestra de leche

Muestra de leche




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Retiro de leche con pipeta calibrada

Incubación de muestras de leche con el kit Delvotest SP-NT




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Toma de resultados luego de la incubación

Verificación de resultados luego de la incubación

Delvotest® SP 5 PACK - NT Instrucciones de uso

Introducción El Delvotest® SP – NT es un sistema de análisis de presencia de sustancias antibacterianas en leche tales como antibióticos y sulfonamidas. En función de asegurar una optima aplicación del producto, debe seguirse un simple procedimiento. Ver dentro de la caja del producto las instrucciones correspondientes. Contenido del kit El kit de Delvotest® SP 5 PACK – NT contiene: 480 determinaciones en 5 placas con 96 celdas cada una, con un medio de agar sólido contenindo una cantidad estandarizada de esporas de Bacillus stearothermophilus var. calidolactis, junto con nutrientes y bromocresol púrpura para testear el crecimiento del organismo. Las placas están cubiertas con un film de aluminio y consiste en seis bloques con 16 celdas rectangulares cada una. El kit también incluye cubiertas adhesivas en cantidad suficiente para sellar las placas durante la incubación; descrito en las instrucciones de uso dentro de la caja. Precaución Como este test es extremadamente sensible a algunas sustancias antibacterianas (antibióticos, compuestos sulfa y otros componentes tales como desinfectantes, detergentes, etc.), hay que prevenir contaminaciones con estos componentes. Es recomendable lavarse y secarse las manos antes de comenzar el ensayo. Use una mesada limpia. No manipular las placas del test porque puede perder el medio sólido de agar de las celdas. Esto puede afectar la calidad de los colores del test durante la lectura de los resultados del ensayo. Orientaciones Con una placa entera se pueden analizar un máximo de 96 muestras. De acuerdo a la cantidad de muestras a analizar, se pueden usar uno o mas de los 16 bloques. Si el numero de muestras es menor a 16 algunas celdas pueden quedar sin usar durante la incubación. Cuidado al sacar la cubierta de aluminio Si uno o mas bloques van a ser usados cortar con un cuchillo el papel de aluminio sobresaliente y separar con un cuchillo o tijera. Tener cuidado de no dañar la cubierta de la parte de la placa que no se usa porque se pueden humedecer las celdas.

Adicionar la muestra de leche Se debe pipitear en la primer celda 0.1ml de una muestra de leche libre de antibióticos como control negativo (el control negativo esta disponible con su distribuidor de DSM Food Specialties). En las siguientes celdas pipetear 0.1 ml de cada una de las muestras a analizar. Usar para cada nueva muestra, una punta de pipeta nueva y limpia (evitar la contaminación de las puntas). Las letras y números alrededor de las placas están para facilitar la identificación de las muestras. Incubación del test a 64°C Las placas o bloques se sellan cuidadosamente con las cintas adhesivas provistas en la caja y se ponen suavemente a flotar en un baño precalentado o en un incubador seco a una temperatura de 64.0°C ± 0.5°C. Incubar las placas por 2 horas y 15 minutos. Variaciones en la temperatura del baño pueden prolongar la duración del test y afectar la sensibilidad del mismo. Pida mayor información sobre el uso de incubadores secos a su distribuidor de DSM. Lectura Comenzar leyendo el resultado de color de la muestra de leche control negativo (primera celda) después de un tiempo de incubación de 2 horas y 15 minutos. Si el color no ha cambiado a amarillo claro, las placas deben ser retornadas al baño hasta que se alcance a leer el color amarillo claro en la muestra control negativo. (Es recomen-dable repetir las lecturas a intervalos de 5 minutos.) Los resultados deben ser leídos desde la base de la celda. Cuando la muestra control negativo se ha tornado amarillo claro todas las otras celdas (muestras) pueden ser leídas. Lectura de las muestras; Color amarillo indica ausencia de sustancias antibacterianas en una concentración por encima del limite del test. Color amarillo / púrpura indica la presencia de sustancias antibacterianas cerca del limite de detección del test. El nivel de detección con Delvotest® SP 5 PACK – NT para la Penicillina G es entre 1 y 2 ng/ml y para sulfadizina es entre 25 y 100 ng/ml. Información adicional de todo el espectro de sensibilidad esta disponible vía su distribuidor de DSM. Información adicional sobre la lectura Lectura opcional con el software Delvo®Scan, consulte a su distribuidor de DSM. Cuando el tiempo de incubación es determinado bajo condiciones locales se puede usar el tiempo obtenido como

Boletín Técnico

tiempo base para los próximos test del bach bajo las mismas condiciones. Durante el almacenamiento el tiempo de incubación requerido aumenta gradualmente. Test cercanos a su fecha de expiración pueden requerir algún tiempo mas de incubación que uno recién producido. Testear diferentes tipos de productos lácteos puede requerir otros tiempos de incubación. Solicite mas información a su distribuidor de DSM. Almacenamiento El test debe conservarse derecho en el envase original, en un lugar oscuro y a una temperatura constante debajo de 15°C, impedir el congelamiento (preferentemente entre 4°C y 15°C). Temperaturas menores o fluctuaciones de temperatura, conducen a un ablandamiento y soltura del agar con la formación de burbujas de aire. Almacenamiento a altas temperaturas acortaran la vida útil. La “fecha de vencimiento” esta indicada junto con el numero de lote en el envase. Muestreo La muestra debe ser representativa del lote de leche que se investigara. Cuando se analizan vacas individuales evitar analizar calostro. Tener cuidado de mezclar la leche cuidadosamente, evitando la formación de burbujas de aire o espuma. El análisis esta diseñado para una muestra de 0.1 ml (+/- 10%). Bajo ninguna circunstancia se debe usar una pipeta descartable para mas de una muestra. Como la cantidad de muestra es pequeña, si queda una gota y contiene antibiótico, la muestra puede llevar a un resultado incorrecto. Muestras de leche control Para verificar las condiciones del análisis o para determinar el optimo tiempo de incubación, se debe analizar una muestra control junto con las muestras de leche. Estas muestras consisten en leche libre de sustancias inhibidoras. Controles negativos están disponibles con su proveedor de Delvotest®. No usar agua como control negativo. Siempre usar el mismo tipo de matriz de muestra para el control de las muestras a analizar. Almacenamiento de las muestras de leche Si no es posible analizar las muestras de leche en unas pocas horas, deberán ser guardadas bajo refrigeración a 6°C o si no se analizan el mismo día, en un freezer (-18°C o menos). Equipamiento necesario Para incubar a la temperatura requerida de 64°C ± 0.5°C es necesario un baño de agua con agitación con tapa o un incubador seco. Para equilibrar la temperatura

dejar el equipo de incubación un tiempo suficiente a 64°C. La temperatura del baño de agua debe ser de 64.0°C ± 0.5°C y debe ser chequeado a varias posiciones, con un termómetro verificado, pero aun mas importante es el nivel y localización de las placas del test. No colocar el baño de agua o el incubador seco cerca de la ventana o en un lugar con corriente de aire y tener cuidado que el nivel de agua no sea demasiado baja, como para producir variaciones en la temperatura. Variaciones de temperatura o temperaturas muy altas o muy bajas durante la incubación conducirán a tiempos de incubación mas largos y se puede afectar la sensibilidad del ensayo. Utilización de baño de agua Las placas deben ser incubadas en un baño de agua sellado de acuerdo a las instrucciones, debiendo las placas flotar en la superficie del agua. Asegurar que las tiras adhesivas perforadas sean cuidadosamente aplicadas evitando que el agua del baño de agua entre en las celdas. Siempre mantener la tapa del baño de agua cerca durante la incubación. Prevenir que cualquier condensación de agua de la tapa del baño de agua gotee en el test. Si es requerida agitación esta debe ser suave. Cuidar que el nivel de agua no sea muy bajo a fin de evitar variaciones de temperatura. Utilización de un incubador seco El uso de un incubador seco y/o un incubador de laboratorio con ventilador es aconsejable solo si la distribución de calor del equipo y la transferencia de calor al medio es lo suficientemente constante como para obtener resultados confiables. Evitar que los incubadores sean abiertos frecuentemente ya que pueden causar variaciones de temperatura. NOTA: La incubación en incubadores secos es mejor ejecutada con cintas adhesivas no perforadas. El paquete de cintas esta perforada, por lo tanto es mas adecuada para la utilización de baño de agua. Por cintas no perforadas contacte a su distribuidor de DSM. Por mas información, por favor contactarse: DSM Food Specialties Dairy Ingredients P.O. Box 1 2600 MA Delft The Netherlands Tel: +31-15-2792355 Fax: +31-15-2793200 E-mail: [email protected] www.dsm.com/dsm/dairy o con nuestro representante local:

“Con el mejor de nuestro conocimiento, la información contenida adjunto es exacta y completa. Sin embargo, no se interpretara que el contenido adjunto implique una garantía o caución”.

Ttb dtest SP 5 pack - NT ifu 0409s1

Delvotest® SP - NT Test Sensitivity or Detection levels

Introduction Delvotest® SP-NT, SP MINI – NT and SP 5 PACK – NT are broad spectrum antibiotic residue test systems offering the possibility to verify the presence of a multitude of different antimicrobial substances in milk. An indication of the sensitivity of Delvotest® SP-NT has been given in the specification sheet of this product. However, apart from the specified sensitivities for Penicillin G and Sulphadiazine, a substantial number of other antibiotics and inhibitory substances can be detected at or close to the levels such as those defined by the Maximum Residue Level (MRL). Table 1 gives an overview of the indicative detection levels of Delvotest® SP -NT for different antibiotic residues and sulphonamides. Table 1 Indicative data on detection levels with Delvotest® SP - NT in ppb (parts per billion or ng/ml) in commingled raw bovine milk. Drugs listed are a sample selection only of the total detection spectrum of Delvotest® SP -NT.

Drugs Detection level

At control time

Detection level

Reading time 3 hours

ß-lactams penicillin ampicillin amoxicillin ceftiofur cephapirin cloxacillin dicloxacillin oxacillin Sulphonamides sulphadiazine sulphamethazine Tetracyclines tetracycline oxytetracycline Macrolides Tylosin Spiramycin Erythromycin Others Trimethoprim Dapsone Aminoglycosides Gentamycin Neomycin

1 - 2

4 2 - 3

25 - 50 4 - 6 20 10 10

25 - 50 25 - 100

250 - 500 250 - 500

30 400 - 600 40 - 80

50 - 100 0.5 - 1

50 100 - 200

2 - 3 6 - 7 3 - 5

50 - 100 6 - 8

20 - 30 10 - 20

10

100 -150 100 - 250

800 800

50 800 - 1000

200

200 - 300 1 – 2.5

200 300 - 600

Technical Bulletin

The data indicated in the table are based upon readings judged as being yellow/purple to purple and are to be regarded as an indication. It is recommended that positive test results are always confirmed. Variations in incubation times and temperatures, operators and storage conditions may have an influence on the reading result found. Definitions Drug : Active ingredient of cattle medication such as antibiotics and sulphonamides. Spectrum : Total number of different active ingredients that can be detected by Delvotest® SP - NT at or below the required detection level. Detection level : The lowest concentration at which a drug is still detected by the test, at control time or at a fixed reading time of 3 hours. Control time : Time at which the test agar containing the negative control sample has just changed to yellow.

For more information please contact: or our local representative : DSM Food Specialties Dairy Ingredients P.O. Box 1 2600 MA Delft The Netherlands Tel.: +31-15-2792355 Fax: +31-15-2793200 E-mail: [email protected] www.dsm.com/dfs/dairy "To the best of our knowledge, the information contained herein is accurate and complete. However, nothing contained herein shall be construed to imply any warranty or guarantee".

Ttb dtest SP – NT detectlev 0409e1

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