Evaluación morfológica Evaluación morfológica y funcional de y funcional de fibroblastos fibroblastos

periodontales sometidos periodontales sometidos

fuerzas ortodóncicasfuerzas ortodóncicas

DirectoraDirectora: María Victoria Aguirre: María Victoria Aguirre

Personal de InvestigaciónPersonal de Investigación:: María Alejandra Gili; María Alejandra Gili;

Karina Latyn; María Silvia AlmirónKarina Latyn; María Silvia Almirón

Personal de ApoyoPersonal de Apoyo: Marcela Solís; Elisa Picek: Marcela Solís; Elisa Picek

IntroducciónIntroducciónEste trabajo pretende evaluar las modificaciones tanto morfológicas Este trabajo pretende evaluar las modificaciones tanto morfológicas

como funcionales que experimentan los fibroblastos del como funcionales que experimentan los fibroblastos del ligamento periodontal de piezas dentarias sometidas a fuerzas ligamento periodontal de piezas dentarias sometidas a fuerzas ortodóncicas, aportando la información necesaria respecto a ortodóncicas, aportando la información necesaria respecto a como responde este linaje celular a la aplicación de fuerzas como responde este linaje celular a la aplicación de fuerzas permitiendo decidir por el tratamiento mas adecuado. permitiendo decidir por el tratamiento mas adecuado.

Los estudios de los tejidos periodontales sanos y enfermos por Los estudios de los tejidos periodontales sanos y enfermos por medio de microscopia electrónica y otras técnicas ultra medio de microscopia electrónica y otras técnicas ultra estructurales han contribuido a un entendimiento más completo estructurales han contribuido a un entendimiento más completo de las reacciones hísticas involucradas y a la caracterización de de las reacciones hísticas involucradas y a la caracterización de los componentes tisulares. los componentes tisulares.

Los análisis permiten una evaluación del estado funcional del tejido Los análisis permiten una evaluación del estado funcional del tejido periodontal y un cálculo de la fracción de volumen que ocupan las periodontal y un cálculo de la fracción de volumen que ocupan las células y los componentes intercelulares durante la aplicación de células y los componentes intercelulares durante la aplicación de fuerzas.fuerzas.

Los cultivos celulares permiten avanzar en el conocimiento de la Los cultivos celulares permiten avanzar en el conocimiento de la fisiología celular, y estudiar los procesos de reparación tisular. fisiología celular, y estudiar los procesos de reparación tisular.

Es importante conocer y analizar los posibles mecanismos o Es importante conocer y analizar los posibles mecanismos o alteraciones que se presentan a nivel tanto de la célula como de alteraciones que se presentan a nivel tanto de la célula como de los componentes de la matriz extracelular por medio de cultivos los componentes de la matriz extracelular por medio de cultivos celulares celulares in vitroin vitro, los cuales permiten observar el comportamiento , los cuales permiten observar el comportamiento de las células del ligamento periodontal humano y para ello es de las células del ligamento periodontal humano y para ello es necesario lograr su crecimiento, con técnicas y medios necesario lograr su crecimiento, con técnicas y medios adecuados para su proliferación y de esta manera llegar a adecuados para su proliferación y de esta manera llegar a conclusiones que puedan dar aportes a la Ortodoncia y terapia conclusiones que puedan dar aportes a la Ortodoncia y terapia periodontal.periodontal.

ObjetivosObjetivosGeneralGeneral: :

Analizar a través de distintos métodos las variaciones morfológicas Analizar a través de distintos métodos las variaciones morfológicas y funcionales de fibroblastos periodontales sometidos a fuerzas y funcionales de fibroblastos periodontales sometidos a fuerzas ortodóncicas.ortodóncicas.

EspecíficosEspecíficos::Describir las características del tejido conectivo periodontal y de los Describir las características del tejido conectivo periodontal y de los fibroblastos periodontales sometidos a fuerzas ortodóncicas fibroblastos periodontales sometidos a fuerzas ortodóncicas mediante Microscopía Óptica con técnicas de coloración mediante Microscopía Óptica con técnicas de coloración histológica convencionales (Hematoxilina-Eosina) y especiales histológica convencionales (Hematoxilina-Eosina) y especiales (Tricrómica de Masson).(Tricrómica de Masson).Describir las características del tejido conectivo periodontal y de Describir las características del tejido conectivo periodontal y de los fibroblastos periodontales sometidos a fuerzas ortodóncicas los fibroblastos periodontales sometidos a fuerzas ortodóncicas mediante la Microscopía Electrónica de Barridomediante la Microscopía Electrónica de BarridoEstandarizar la metodología de aislamiento de fibroblastos Estandarizar la metodología de aislamiento de fibroblastos periodontales humanos.periodontales humanos.Establecer los índices de celularidad y viabilidad de fibroblastos Establecer los índices de celularidad y viabilidad de fibroblastos periodontales sometidos a fuerzas ortodóncicas.periodontales sometidos a fuerzas ortodóncicas.Optimizar las distintas fases de la técnica de cultivo de fibroblastos Optimizar las distintas fases de la técnica de cultivo de fibroblastos del ligamento periodontal humano del ligamento periodontal humano in vitroin vitro para evaluar la para evaluar la diferenciación y proliferación de estas células en grupo control y diferenciación y proliferación de estas células en grupo control y grupo sometido a fuerzas ortodóncicas.grupo sometido a fuerzas ortodóncicas.

Materiales y MétodoMateriales y MétodoEstudio descriptivoEstudio descriptivoMuestras de tejido periodontal de pacientes sistémica y Muestras de tejido periodontal de pacientes sistémica y periodontalmente sanos en los cuales se requiere de exodoncia de periodontalmente sanos en los cuales se requiere de exodoncia de las piezas dentarias que fueron previamente sometidas a fuerzas las piezas dentarias que fueron previamente sometidas a fuerzas ortodóncicas. Servicio de Ortodoncia FOUNNE.ortodóncicas. Servicio de Ortodoncia FOUNNE.Las muestras de tejido serán utilizadas para realizar:Las muestras de tejido serán utilizadas para realizar:

1) Observación al Microscopio ÓpticoObservación al Microscopio Óptico con Coloraciones con Coloraciones convencionales con Hematoxilina-Eosina ( H/E) y convencionales con Hematoxilina-Eosina ( H/E) y Coloraciones especiales como Tricrómica de Masson. Coloraciones especiales como Tricrómica de Masson. Servicio de Anatomía Patológica .Servicio de Anatomía Patológica . Cátedra de Cátedra de Histología FOUNNEHistología FOUNNE

- Registro fotográfico y descripción las estructuras- Registro fotográfico y descripción las estructuras

2) 2) Observación con Microscopía ElectrónicaObservación con Microscopía Electrónica Servicio Servicio Microscopía Electrónica de Barrido de la Fac. de Cs. Microscopía Electrónica de Barrido de la Fac. de Cs. Agrarias de Agrarias de la la UNNE.UNNE.

- - Descripción las estructurasDescripción las estructuras

--

3) 3) Aislamiento y cultivo de fibroblastos periodontales Cátedra de Química Biológica II de FaCENA

- medio de transporte con solución de PBS (buffer fosfato salino) y antibióticos

- se realizará el lavado y desinfección en cabina de flujo laminar- el material obtenido se deposita en cajas de cultivo celular.- disgregación enzimática del tejido - se añadirá medio DMEM suplementado- se centrifugará la suspensión celular - eliminación del sobrenadante y el pellet obtenido se suspenden 1 ml

de medio DMEMs

Determinación de la Viabilidad celular: método de coloración de Trypan Blue (0.4 %) . Relación entre el número de células vivas/numero de células totales

Determinación de la Celularidad: con solución de Turk en una dilución 1:200. Permite contar las células refringentes nucleadas en un hemocitómetro (cámara de Neubauer). Los resultados serán expresados como 1x 106 fibroblastos/ml de suspensión

Tareas realizadasTareas realizadas

► ► Etapa Inicial del Proyecto:Etapa Inicial del Proyecto:

Investigación bibliográfica del estado del conocimiento en la Investigación bibliográfica del estado del conocimiento en la temática abordada.temática abordada.

Entrenamiento en técnicas de obtención adecuada de muestrasEntrenamiento en técnicas de obtención adecuada de muestras Preparación de medios de transporte.Preparación de medios de transporte. Manejo de test de conteo celular.Manejo de test de conteo celular. Selección de casosSelección de casos

Bibliografía ConsultadaBibliografía Consultada

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