Qu relevancia tiene la extraccin de ADN?La extraccin del ADN es el primer paso en la tecnologa del ADN.Determinacin

del perfil del

ADN Clonacin Diagnstico de enfermedades Determinacin de secuencias del ADN Transferencia gnica; Organismos modificados genticamente, agricultura, farmacutica. Pruebas ambientales, bioterrorismo.

La extraccin de ADN requiere una serie de etapas bsicas: En primer lugar tiene que romperse la pared celular y la membrana plasmtica para poder acceder al ncleo de la clula. A continuacin debe romperse tambin la membrana nuclear para dejar libre el ADN.

Colocar 5mL de sangre y llenar a 35mL con solucin de lisis de eritrocitos

Agitar vigorosamente 1min y colocar en el refrigerador 15min

Balancear los tubos

Centrifugar 20 min a 4000 RPM

Decantar el sobrenadante y obtendremos un botn de leucocitos que trasladaremos a un tubo eppendrof de 1.5 mL

Se resuspende el botn en 1mL buffer de lisis y se pasa al tubo eppendroff

Se centrifuga 5min a 10000RPM, y se decanta.

Agregar 600L de DTAB, agitar por inmersin y colocar en bao Mara a 68.

Agregar 900L de cloroformo y agitar vigorosamente (vortex). Centrifugar 15 min 10,000rpm se formarn 3 capas donde la capa superior acuosa contiene al ADN

Recuperar la fase acuosa y agregar 100L de CTAB y 900L de agua, agitar suavemente por inversin durante 2min. Centrifugar 10 min a 10,000rpm , decantar y resuspender con 350L de NaCl 1.2M

O

Na+ Na+

O

P O CH2

O

Base

OAzcar

Na+O

O

P OO CH2

Na+

Base

OAzcar

OH

Evaporar el etanol colocando los tubos abiertos en un bao Mara a 55-60 Resuspender la pastilla en 300L de agua inyectable.

Agregar 750L de etanol al 100% y agitar moderadamente* Centrifugar 15min a 10,000rpm, decantar y resuspender en etanol al 70%, agitar y centrifugar a 10,000 durante 5 min. Repetir el lavado 3 veces

Existen en el mercado kits de extraccin para ADN, utilizan los mismos fundamentos, solo cambiando los reactivos con los que se obtienen altos rendimientos.