INOCULOS

PREPARACIÓN DE INOCULOS PARA DISTINTOS PROCESO FERMENTATIVOS:

o FERMENTACIÓN LACTICA:

Preparación del inoculo:PARA Lactobacillus delbrueckii ssp. Y Streptococcus thermophilus

- Muestra: Leche fresca

- Pre tratamiento de la muestra:Para aislamiento de S. thermophilus calentar la leche a 60 °C, durante 30 minutos.

- Enriquecimiento:Homogenizar la muestra de lecheSembrar 1 mL de cada una de las muestras en tubos con 9 mL de caldo MRSIncubar los tubos a 30 °C en una atmosfera de 5 a 8 % de CO2durante 24 horas.

- Aislamiento: Tomar una asada de la muestra de leche enriquecida y sembrar mediante

la técnica de agotamiento y estría sobre agar Rogosa(placas de Petri) Incubar en jarra de Brewer a 30 °C por 24 horas Seleccionar las colonias brillantes, convexas, de 1 a 2 mm de diámetro

(Lactobacilos) y las colonias puntiformes (Streptococcus) Subcultivar en viales conteniendo agar Rogosa inclinado, para obtener

cultivos puros y proceder a su identificación

o FERMENTACIÓN ALCOHOLICA :

Preparación del inoculo:PARA Saccharomyces cerevisiae

- Obtención de mosto fermentado: Adquirir 0.5 kg de uva dulce tinta (pulpa y hollejo purpura) o tintórea

(hollejo purpura) Proceder al desgranado: Manualmente separar los granos del raspón en

cada racimo y colocarlos en un depósito limpio. En simultáneo eliminar los frutos deteriorados.

Realizar el estrujado: Triturar los granos de uva, lo suficiente para lograr la separación total de hollejo y la pulpa pero no para deteriorar las pepas

Depositar el material resultante o mosto en un matraz de fermentación previamente esterilizado. Tapar con algodón e incubar a 30°C durante 24 horas. Cambiar el algodón por una tapa hermética de goma que presenta un agujero en el centro para permitir la salida del CO2 a través de una cánula que desemboca en un frasco conteniendo una solución de NaCl al 20%. Incubar a 30 °C durante 72 horas.

- Aislamiento de levaduras Tomar una alícuota del mosto fermentado y sembrar mediante la técnica

de agotamiento y estría sobre agar Sabouraud glucosado con antibiótico (placas de Petri)

Incubar a 30 °C durante 24 a 48 horas. Seleccionar las colonias redondas, blancas o cremosas, convexas, con

bordes enteros, de consistencia mantecosa, con un diámetro aproximado de hasta 5 mm.

Subcultivar las colonias levaduriformes en viales conteniendo agar Sabouraud glucosado inclinado e incubar a 30 °C durante 24 horas.

o FERMENTACIÓN ACETICA:

Preparación del inoculo:PARA Acetobacter y Gluconobacter

- Muestra:Frutas acidas: limón, naranja, lima, uva

- Enriquecimiento de la muestra: Depositar a 20 mL de cerveza en frascos de boca ancha. Sumergir por 15 minutos y en frascos separados de uva, manzana, limón y

naranja. Retirar los frutos Cubrir los frascos con gasa o malla para evitar la entrada de insectos Mantener la temperatura ambiente por 4 días Observar el crecimiento bacteriano en forma de un velo o película

blanquecina sobre la superficie

- Aislamiento: Tomar una pequeña porción de la película bacteriana desarrollada en las

muestras enriquecidas y sembrarla mediante la técnica de agotamiento y estría sobre agar Lee.

Incubar en aerobiosis a 30 °C durante 24 horas Realizar la tinción Gram Replicar a viales conteniendo Agar Manitol o un frasco con 25 mL de

cerveza