Instructivo 001 preparacion de ziehl neelsen
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Laboratorio ORION Investigación, Diagnóstico y Análisis Clínico Area de Microbiología y Bacteriología
Laboratorios “ORIOS” Investigación, Diagnóstico y Análisis Clínicos Jr. Lima Nº 208 II piso Of. 09 Tel. 351561 – Fax. 353865 www.laboratorioorionpuno.blogspot.com
Código: LO–B–001 Revisión: 00 Fecha de Emisión: 02.02.2016
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INSTRUCTIVO DE TRABAJO Nº 01
PREPARACION DE REACTIVOS ZIEHL - NEELSEN
Elaborado por: Blgo. Herbert L. Flores R. Revisado por: Aprobado por: Fecha: 02.02.2016
Firma: …………………………………….
Revisado por: Unidad de Calidad y Seguridad en Salud Fecha: 02.02.2016
Firma: …………………………………….
Aprobado por: Director de la Unidad Fecha: 02.02.2016
Firma: …………………………………….
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Laboratorios “ORIOS” Investigación, Diagnóstico y Análisis Clínicos Jr. Lima Nº 208 II piso Of. 09 Tel. 351561 – Fax. 353865 www.laboratorioorionpuno.blogspot.com
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INSTRUCTIVO DE TRABAJO Nº 01
PREPARACION DE REACTIVOS ZIEHL - NEELSEN
TABLA DE CONTENIDOS
I. OBJETIVOS
II. ALCANCE
III. REFERENCIAS NORMATIVAS
IV. DEFINICIONES
V. RESPONSABILIDADES
VI. PROCEDIMIENTO
VII. VERIFICACION
VIII. DOCUMENTACION RELACIONADA
IX. TABLA DE REVISIONES
X. ANEXOS
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Laboratorios “ORIOS” Investigación, Diagnóstico y Análisis Clínicos Jr. Lima Nº 208 II piso Of. 09 Tel. 351561 – Fax. 353865 www.laboratorioorionpuno.blogspot.com
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INSTRUCTIVO Nº 01
I. OBJETIVO
Normalizar el correcto uso y preparación de los reactivos para la
Tinción de Ziehl – Neelsen en el diagnóstico de baciloscopías.
II. ALCANCE
Se aplica al servicio de tuberculosis del Laboratorio “ORION” como
parte de los procesos que conducen a una correcta aplicación de la
Tinción de Ziehl- Neelsen.
III. REFERENCIAS NORMATIVAS
3.1. Instituto Nacional de Salud (INS). Centro Nacional de Control de
Calidad (CNCC). ISC-CNCC-001. Tratamiento de no
conformidades y toma de acciones correctivas y preventivas.
Primera Edición. Lima: INS/CNCC; 2002.
3.2. Instituto Nacional de Salud (INS). Manual de Bioseguridad para
los Laboratorios: MPR-CNSP-013. Segunda Edición. Lima: INS,
2002.
3.3. Instituto Nacional de Salud (INS). El Laboratorio de Salud
Pública Frente a la Emergencia de la Tuberculosis Resistente:
DT Nº 013. Primera Edición. Lima: INS/CNCC; 2001.
3.4. Instituto Nacional de Salud (INS). Manual de Procedimientos de
Laboratorio de Análisis Clínicos: MPR-CNSP-001. Primera
Edición. Lima: INS/MINSA; 1999.
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IV. DEFINICIONES
4.1. Acción correctiva
Acción tomada para eliminar la causa de una no conformidad
detectada u otra situación no deseable.
4.2. Acción preventiva
Acción tomada para eliminar la causa de una no conformidad
potencial u otra situación potencial no deseable.
4.3. Acta de Verificación
Las actas de verificación son testimonios de hechos ocurridos y
suelen escribirse en libros con hojas renglonadas para ello.
Además, se las numera correlativamente
4.4. Baciloscopía
Una baciloscopia es una técnica en la que se obtiene una
muestra mediante un pequeño corte en la piel y que se colorea
para poder identificar bacilos de Micobacterium tuberculosis.
4.5. Tinción de Zielh neelsen
La tinción de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una técnica de tinción
diferencial rápida y económica, para la identificación de
microorganismos patógenos, por ejemplo M. tuberculosis.
V. RESPONSABILIDADES
5.1. Biólogo del servicio de tuberculosis.
5.2. Técnico en laboratorio del servicio de tuberculosis.
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VI. PROCEDIMIENTO
a. Descripción del procedimiento
i. Fucsina fenicada
Fucsina básica 10 gr
Alcohol de 95º 100 ml
Fenol acuoso 55 ml
Agua destilada 1000 ml
Preparación:
Preparar fenol acuoso calentando a baño maría 1 Kg de fenol
cristalizado hasta completar su disolución y agregando 100 ml
de agua destilada.
Disolver los 10 grs de fucsina con los 100 ml de alcohol,
agregando lentamente, en pequeñas cantidades y agitando
constantemente.
A 500 ml de agua destilada caliente (70º C) agregar 55 ml de
fenol acuoso (agua fenicada)
La fucsina disuelta en alcohol vaciar a una probeta y agregar
el agua fenicada en pequeñas cantidades y completar hasta
1000 ml con agua destilada.
Dejar reposar durante 24 horas protegida de la luz.
Filtrar y guardar en frasco color ambar. El tiempo máximo de
duración de la fucsina preparada es de un mes.
ii. Azul de metileno
Azul de metileno 1 gr
Alcohol de 90º 100 ml
Agua destilada 1000 ml
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Preparación
En un matraz Erlenmeyer disolver mediante agitación el azul
de metileno agregándole pequeñas cantidades de alcohol.
Una vez disuelto agregar el agua destilada y filtrar.
iii. Solución decolorante
Acido clorhídrico concentrado 30 ml
Alcohol de 95º 970 ml
Preparación
Dejar escurrir el ácido clorhídrico por las paredes del matraz
que contiene el alcohol con una pipeta y agitar suavemente.
iv. Solución decolorante
Cada vez que las soluciones sean trasvasadas a frascos o
dispensadores que se empleen para la tinción deben filtrarse
Esto es especialmente necesario para la fucsina fenicada,
porque con el tiempo el colorante se precipita.
Los dispensadores deben ser lavados con cuidado y deben
tener sus paredes secas cada vez que se remueva su
contenido.
Los reactivos deben conservarse en frascos color ambar y
protegidos lejos de la luz.
Se recomienda preparar los colorantes en cantidades para
consumo no mayor de un mes.
b. Monitoreo
i. Responsable
Biólogo del Servicio del Laboratorio de Tuberculosis.
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ii. Frecuencia
Cada vez que se prepare el reactivo
iii. Parámetros
Tiempo de coloración
iv. Metodología
A una lámina fijada con muestra de esputo cubrir con fucsina
fenicada 5 minutos y calentar hasta la emisión de 3 vapores.
Lavar con agua
Añadir con decolorante durante 3 minutos
Lavar con agua
Cubrir con azul de metileno durante 1 minuto
Lavar con agua
Secar al aire
v. Registros
Cuaderno de Registro de Evaluación
c. Acciones correctivas y preventivas posteriores
i. Responsable
Biólogo del Servicio del Laboratorio de Tuberculosis.
ii. Tiempo de Resolución
Una semana
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iii. Registro
Cuaderno de Supervisión
VII. VERIFICACION
d. Responsable
Biólogo del Servicio del Laboratorio de Tuberculosis.
e. Frecuencia
Cada tres meses
f. Registros
Cuaderno y acta de verificación
VIII. DOCUMENTACION RELACIONADA
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IX. TABLA DE REVISIONES
X. ANEXOS
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