Resultados Inducción y RestricciónEquipo 3

Bioquímica ExperimentalGrupo 1

Inducción

Recordando….

La proteína tiene un peso molecular aproximado de:• 32 kDa si tiene el péptido señal de la proteína ompA •29 kDa sin péptido señal.

Recordando….

Lo que esperabamos….1. Aumento gradual en la intensidad de la banda de la proteína expresada dado que cada mesa utilizó diferentes concentraciones de inductor.

2. La concentración de proteína expresada será mayor conforme aumenta el tiempo trascurrido después de la inducción con el IPTG.

Lo que esperabamos….

3. Las bandas pertenecientes a las proteínas de las células también se verán más intensas debido al crecimiento celular, sin embargo no serán tan intensas como la de la proteína inducida.

Lo que esperábamos….

Teñido con la solución de Coomasie0.12% azul de coomasie R25050% Metanol10% ácido acéticoDesteñido con:45% Metanol10% ácido acético

Tiempo de inducción 0 0.5 1.0 1.5 Std

Lo que obtuvimos….

Equipo 1 y 2

Equipo 3 y 4

Equipo 5 y 6

Equipo 7

Lo que obtuvimos….

A pesar de que se utilizaron 3 concentraciones distintas de inductor las bandas señaladas con la flecha aparentan tener la misma intensidad lo que indicaría que se obtuvieron cantidades iguales de proteína inducida.

Que observamos..

Se obtuvo, de acuerdo con el estándar, la proteína en un peso molecular cercano al esperado.

Restricción de plásmido Pet-TEM

Marcador de PM

Pásmido + inserto1

Pásmido + inserto2

Plásmido

Inserto 1 Inserto 2

Recordando…

66500 pb5310 pb

Estándar de peso molecular

Gel de muestra

1 Std

2 Sin restringir

3 BamHI

4 BamHI+NdeI

5 NdeI(30 min)+

BamHI (OVN)

6 NdeI (OVN)

OVN toda la noche

1 2 3 4 5 6

RNA y/o proteínas de bajo peso

Banda inserto

Vector recombinante

linearizado

Topoisomero alto peso molecular

Vector vacío

Resultados

1. Plasmido sin restringir

2. restringido con una enzima

3. restringido con las dos enzimas

4. estándar

1 2 3 4

RNA y/o proteínas de bajo peso

Plásmido sin

restringir

ADN restringido con una enzima

Bandas esperadas