La replicación del DNA y el ciclo celular. Otra pregunta con respuesta abierta: ¿Cómo se regula...
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La replicación del DNA y el ciclo celular
Otra pregunta con respuesta abierta:
¿Cómo se regula la actividad de los
orígenes de replicación de modo de
obtener una sóla replicación por ciclo
celular?
“Once, and only once”
Experimentos de fusión celular
•Entender la naturaleza del estado competente (G1)
•Cual es la naturaleza del activador de S
•Caracterizar el estado de incompetencia (G2)
•Caracterizar el desbloqueo y regreso a la competencia
Sperm DNA
Extractos Xenopus
(+) o (-) cicloheximida
Incubación 5 horas
Observación microscopio
+CH
-CH
Hoechts contraste
Sperm DNA + ATPP32 + BrdU + extracto Xenopus
(+) o (-) cicloheximida
Incubación 5 horas
Extracción DNA
Gradiente CsCl
Análisis 32P en fracciones
Sperm DNA + ATPP32 + BrdUTP + extracto Xenopus
(+) CH (-)CH
Núcleos replicaban Núcleos replicaban
Separación de núcleos a distintos tiempos post-extracto (1, 2, 3, 4, 5 h)
Núcleos + ATP-3H + BrdU + extracto Xenopus fresco
(+)CH (-)CH (+)CH (-)CH
Incubación durante 4 horas
Miden si hay segunda ronda de replicación por extracción del DNA, gradiente de CsCl y análisis de 3H
Teoría del licenciamiento de la replicación
Letters to NatureNature 430, 913-917 (19 August 2004) | doi: 10.1038/nature02813
Structural basis for inhibition of the replication licensing factor Cdt1 by geminin
Changwook Lee1, BumSoo Hong1,5, Jung Min Choi1,5, Yugene Kim1, Saori Watanabe2, Yukio Ishimi3, Takemi Enomoto2, Shusuke Tada2, Youngchang Kim4 and Yunje Cho1