MATRICULA: 83323133.

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MATRICULA : 83323133. CLAVE: 23.2 309.86. uK;AR SE LEVO k W: LABXATXIG S - 159 Dm. DE BICTECNOIJXIA. U.A.M. - I. DE INICIO: 2f! DE E X E C ) DE 1989. F'EXP. DE TEIiMINACION: ma2 DEL nm:

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MATRICULA 83323133

CLAVE 2 3 2 30986

uKAR SE L E V O k W LABXATXIG S - 159 D m DE BICTECNOIJXIA UAM - I

DE INICIO 2f DE E X E C ) DE 1989

FEXP DE TEIiMINACION

ma2 DEL n m

Wniversidad Autonoma Metropolitana

Inf opme Final de Servicio Social

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I

Con todo mi a mis padres Lucila y Vicente por todo lo que significan para mi

gradezco profundnmente a 1 D r Svastianos Raussos asesor de este t r a h jo par su gran ayuda y consejos y por su invaluable amistad

A mis amigos que han sido un apoyo en mi camino

A mis familiares que de alguna manera realizamr esfuerzos y sacrificios para l o g r a r de mi un verdadero profesionista

A Argeles Willy y Laura par sus opartunos consejos y valiasos caaaentarios

A la Universidad Autiquest- Metropolitana

A todos gracias

c

INDICE

Pagina

1 I r n C C I r n GIJEFK 1

11 ANAZISIS BI8LIWIZ 3

21 Fisiologia de crecimiento 3 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento 4

22 Fisiologia de espomlacion 5 23 Prduccion de espor as 6 24 Usos de l a s espor as 6

111 9mIVB 8

VI MrnIAL Y m 9

41 Microoqmi smos

42 M e d i o s de cultivo 9 421 Medios de conservation 9 422 Medios de esprulacion 9

a) Falacion de los medi os 9

43 Condiciones de cultivo 9 431 Inoculacion 9 432 Q-ecimiento y espomlacion 10

44 Yetodos FE lo procluc~cion ae esparos 10 44 i KE-waces Erlen k y e r de 25C mi 10 442 Fe-mentaaor de disc os 1C

a) Descripcion del fermentad or lG b) fixiorzmiento y uso 1C

45 Cceecha y cuenta de espr as 11

v mm Y DImldW 16 w w

51 Descripcioacuten morfoldgica del sistema de reproduccioacuten 16 511 Ani ger 16 512 At errstls 17 513 B h t s s i a m 10 514 Fenicillium sp 19 515 T h a n i anum 20 516 Conclusiones 21

52 Seleccioacuten de la fuente de carbono 22 521 A n i p 22 522 Aterrrstts 23 523 3htssiana 24 524 Penici1lium sp 24 525 Thami anum 24 526 Conclusiones 25

53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN 26 531 Ani gw 26 532 At erreus 26 533 B h s s i m 26 534 Pencillium sp 27 533 T h a m i anum 27 536 Conclusiones 27

54 Cineacuteticas de p-oduccioacuten de canidiosporas en esporulador de discos 33 541 Ani gar 33 542 Atam~= 33 543 Bh=ssiana B 544 Penici1lirmr sp 34 545 Thnnianum 34 546 Conclusiones 37

55 Prducciiquestn comparada de conidimporas en fermentador matraz 38

56 Recopilrsquoacioacuten de conciiciones Oacutep~lsquoimas de esporulacioacuten

VI mzus10m GElmWs 45

111 mwm4 46

-I 11 ~ BiFllrnIA 47

1 - 1mccCIm m Recientemente se ha dado un gran intereacutes en el desarrollo de

fermentaciones en medio soacutelido para la produccidn de alimentos enriquecidos con proteiacutena microbiana a partir de sustratos amilaceos (Raimbault 19801 detoxificacioacuten de p u i p a de cafe (Aquiahuati y col 19871 produccioacuten de enzimas celulasas (Raussosl985) asi cogpo de diversos metabolitos secwdarios tales carno aflataxinas antibioacuteticos (Eiawios 1987) Btos procesos implican el crecimiento de hongos f i l a m e n t o s o s sobre susCaatos soacutelidos le inoculacioacuten de estos sustratos requiere de una gran cantidad de esparas

las esporas de hongas filament- son la fonna ae resistencia y reprcduccioacuten de estos mirroarganismos y constituyen el punto de inicio de l o s procesas de fermentacioacuten en medio soacuteliao dado que se requiere de unu inoculacioacuten masiva y homogenea en el medio de cultivo y bajo ciertas condiciones puedan llevarse a cabo l a s transformaciones de bioconversioacuten deseables Por io tanto se necesita disponer de cantidades importantes de esporas (Raussos 19B51

El nuacutemero de esparas producidas por UT hongo filanentoso es principalmente funcioacuten de la composicioacuten del medio de cultivo tal como se reporta pura Aspryil Ius n i d u l m que cuando se cambia la naturaleza o la cantidad de la fuente ae carbono o de nieeno del medio de cultivo optimizado se observa ma disminucidnde la produccioacuten de esporas de este hongo filamentoso [Martimlli 1976

tos hongos filamentosos Aniger Atemetls Ebss iam Fenicillim sp y Thamianum se clasifican aentro ae l o s hongos imwrfectos o aeuteroanicetos ya que no se les conoce reproduccih s e d 1 (Alexopoulos 1962)

El intereacutes de estudiar estos cuatro homos filumentosos radica en lo siguiente

A n i m posamp la capacidad de -air amilasas dependiencio de l a s condiciones de cuitivo debido a esta caracteristica la utilizacidr de Ari-aar para mmx-Jtar e conteniac proteico de la yuca (Raimbauit 1980 tlene relevante imponancia aaemb prcduce pectinasas

A t m m tiene la capacidad de desnncoliawse s o b e 1~ celulosa microcristalina lo que ie permite apmvecna- el bagam de la cantildea de m c a r (Brizuela et al 1987) ademamp elabma sui=stancies antiiacterianas ae toxicidaci variabie (flavipinas terreina citrina emim etc)(bttm etal 1985)

$ lt- 46

I u v

- -

B m i a m El geacutenero comprende S c 4 especies snpdf itas o paraacutesitcs de insectos entre los que se enmen-wa B h z s s i m la c u a l parasita art6pteros como Melanoplus smvinipes (Mercardier y Khachataurians 1987) contra coieoacutepteros tales como b p t i m t a r s a ecernilineata (Hajek etmal 1987) Anartis sahlifara Apim rchari Nisotra arbiculata Desmidopkms hebes Chilo onellus (Padit y Sam 1988)

Amicillium sp la imprtancia de este hongo es sobre todo en la industria lactea de antibioacuteticos y recientemente para la detoxificacioacuten de la p u l p a de cafe (Aquiahuatl y col 1988)

T harzianum Las especies de3 genero Zl-i~~nna sor frecuentemente empleadas en los p-ocesos de hidrdlisis de le celulosa Estos horgcs pmducen cantidades importantes de exoenzimas capaces de hidmlisar completamente la celuiosa en glucosa (Raussos 1981) Ademaacutes la cepa de T hruzianum fue utilizada con eacutexito para el enriquecimiento en pteinas de la harina de yuca por fermentacioacuten en medio liacutequido (Muindi y Hanssen 1981)

Otra caracteriacutestica impartante es que T harziunum es un antagonista micrdbiano poderoso Olivjer y Germain (1983) demostraron claramente que T viride y T hnrzimurc producen UM

tales como Botrytis c i m lampizoctonin solunipetc - inhibicioacuten en ciertns fases aei desarrollo de hongos fitopatoacutegenos

3

21 F ISIWIA DE CRD2IMW

Lx horgos filamentaeos m microoapnnismos eucaribticos quimiarganotrdficog estrictamente aarbbios y se repmducen de manara natural por medio de conidicepmas

La clasificacih de los horgoe esth basaamp principalmente en las caracterlsticaa de las agpcrras e e x u a l e e y de l o e cuarpos fructZfaroe presentes durante l o s estadlos s e x u a l e s de w1 ciclo biolbgico Loe hangoe con un estado e e x u a l conocido em denaninan h v perfectos Sin embaryo rmuchcs h o w eo10 producen eapcrras s e x u a l e s y cue- fructlf imx bajo ciertas corwiiciones exprimentales m y precisas si ea que las pmducen

Asi pues todavila no 8e conocen l o s ciclos biolQicos cunpleto8 con l o s estadroe sexuales ccmpletoe de muchos hongog Para estos hongos ein estadbs sexuales conocidos les conoce como how imperfectas (Talbot 1978)

La vida de un hongo imperfecto 8e divide en CUEltro etapas fisiolbgiacutecas impctantes que son la latencia la germinacibn la marltiplicacitm vegetativa y la conidiogbnesis (Rcrussosl985) - P

La conidioapora de un hongo f i lamentoso e8 una parte altamente espetcializada de mproduccibn Bupewivencia y dierparsibn ncamalmente delimitadas de iexclas muchas partes de l o s hongos y caracterizada por un metabolismo minim bajo conteniao de agua y carece da movimiento IcitoplasmCttim Aparte de m obvio p a p e l ecolbgico en la naturaleza l a s conidiosporas son usah en el laboratorio colpa irdculo en la pmduccibn de biomass para egtcperimentos o pmcm industriales y mhs recientemente para real izar directamente transformaciones qulmicas especff icas (Vezina y Sing 1975)

La conidiospwa esta en latencia cuando no gemina ampampa latencia pede ser de dos tipos constitucional o exQena

Con respecto Q la latencia constitucional la conidiospara puede IX) genninar aunque se encuentre bajo condiciones ambientales ade- pem primero requiere un proceso de activacibn para vencer una propiedad inata en el estado latente el cual pede ser una bancera pura la penetracibn de nutrientes una dDstruccih metab3lica o una auto-irhibiciamp~

Por otra parte en la latencia exwena la conidiospra es inactiva porque hay cordiciones ambientalee aesfavaruhles qulmicas yo flsicas y Pplede rapidamente reanudar m d e m l lo en un medio ambiente favorable E T 1 este tipc de

4

latencia la ganninacitm es contmlmamp p o r la necesidad esencial fact de- ampg2--r io - 2

Charamp todas la6 barreras de latencia han sido removidas la amidiospara normalmente requiere de niveles de temperatura de humedad favorable8 y ademhe de ciertas subetancias en el medio ambiente para canenzar el proceeo de germinacibn DespUes del inicio de esta nueva fase de genninacidn aparece la reepiracibn aardbica que 88 un requerimiento m 1 para todas las espocras Alguna8 canidiasparaa pueden exigir ademhs de estos factores un requerimiento de CDZ la mayor3a de las esporas requiere de una fuente externa de carbohidratos para germins aigunas otras pceeen adecuadamente res~nms oryhicas pero tienen la necesidad solamente del agua (Smith 1978)

BJ 1- siguientes gheros de hongos filamentosos que ee estuiian en este trabajo c u m Aspargillus Beauveria Axicillim sp y Zl-ichoderrpa (hongos imperfectos) las conidiosporas repmeentan la fama de reproduccibn a s e x u a l La definicibn que Sussman (1965) ha dado de l a s conidiceporas es la siguiente Todo perPodo de vida lento o intarrupcih reversible de desarrollo del cuyaniemo la caracterhtica fundamental de la oonidiospaota es que hay un irdividuo en potencialidad esta potencialidad esta reportada en el tiempo de latencia

211 Las etapas fieiologicas de crecimiento

a) La geminacih de mnidiospmas

La genninacidn es la suma de l o s procesce y de los cambios que intervienen en la recuperacibn del desarrollo de la fanm en la latencia y en la transformacibn de una estructura diferente (Allen1965) EB decir tambian el -pocimer estad30 imvemible que es abservado cano una diferencia del organismo en latencia el juicio pede ser formado soh l o s criterios morfoltrgicos citol6gicos fisiolbgicce o bioqulmicos (Sussman 1975)

b) La multiplicacibn vegetativa

Esta etapa romprende en realidad varias partes ia mamps importante corresponde a la fase de multiplicacibn de tipo exponencia1 del micelio cuando estamp desarrollado en nume- ramificaciones y extremos a UM pmduccibn de biomasa IRoyssos 1985) c) La conidiwhesis

La conidicghesis consiste en UM sucesiEcl de eventos internos en la dlula micelial (proliferacib del retlculo endoplasmdtico de vacuolas y nkleos) que temira en la iontacibn de conidiosporas la produccibn y

I

x - 2 L - - A ~

d

liberncibn de estas (Imrpent 1972 Fewe eco111975 De hecho la conidiogbesis de hongos filmentosos es un proceso muy ample jo

22 FIS1OLLXIA E EsFcrRuLACION

La conidioghesis es una etapa fisioltgiccr muy importante para l o s horgos imperfectos eta etapa comesponde a la fonnacibn

y liberacih de conidiosporas

El coanplejo proceso de esparulacibn en la conidioghesis pede ser visto cano la integracibn de algunos eventos biolbgicos La habilidad para cambiar de una fonnn de desarrollo filamentoso vegetativo a UM fonne ae espora reproductiva y generalmente esfGrica es el resultado final de un metdbolismo que responde a cambios fisicoqufmicos especlficos del medio ambiente (pH CO O Z temperatura humedad o la aparicibn de al- metabolito secundario) l o s cuales ejercen cambios en los estTmulos internos que regulan la actividad celular

Es hitido que el desencadenamiento de la esporulacibn es inducido por un factor limitate que desaparece en el medio de cultivo durante el crecimiento del hoqo La naturaieza de este factor es muy variable Se supone que el agotamiento de la fuente de carbono-o de nitrbgeno es generalmente el factor limitante Sin embaqo no deben olvidarse ios demas factores fisicoqulmicos untes mencionados

Un desancollo n o r m a 1 de micelio y una tuena conidiog6nesis son l a s condiciones previas G m produccibn imporLante ae midiosporas (Rcysscs 1985 El nilmero ae conidiosporas producidas por un hongo filamentoso es principalmente funcibn de la cantidad de la fuente de carbono y de nitriquestgeno presente en el medio de cultivo

El efecto de induccibn-inhibicibn de la conidicgbesis de Aniger fua puesto en evidencia por Gnlbraith y S m i t h (1969) De la misma manera la irduccidn del riiLmo endbgeno de esporulacibn de Aniger es influenciaamp por la relacibr glucosapotusio y por l o s oligoelementos presentes en el nedicl de cultivo (Jerebzoff eta11976)

En los medios de cultivc las sales Icineraies a urle concentacibn elevada podrlan tener los efectos opuestas sobre el crecimiento y la conidioghesis de homos f i l m e n t o s o s (Girdruth 1977 Slayan y Tatm 1954 Lilly L9euro51 De a misna manera la aereacibn y la humedad poseer una influencia en la pduccibn cuantitativa de coniaiwpras ae P m p e f w t i (Maheva et col 1984)

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___ ~ ~~ - ~- ~ ~ ~ -~

deben ser definidas para a especie h e 5 un medio amp4cultivo optimizado para la produccibn de conidiwporns de una especie puede no ser adecuado para alguna otra (Vezim y co11965)

23 PRclDuccION DE E S O R A S

Diferentes tecnicas sa conocidas para la produccibn masiva de esparas La mds antigua consiste en cultivar el mirrocqganismo sobre una superficie en UT ampio de cultivo con agar ya sea en cajas de Petri a nivel labratorio o en btellns Rolux para fines prticticcs Osta tecnica presenta graves problemas de recoleccibn y la manipuiacibn de u n h e m importante de frasccs ademas se debe llevar a cabo bajc asepsia canpleta

Se ha mostrado la posibilidad de producir esporas en cultivo llquido utilizardo fermentadores esterilizables y extrapolables a nivel industrial (Bmderic eta11982)

Se h a n hecho estudios para producir esporas utilizando sustratos nmilaceos en ferntadores de lecho fijo (Maheva y col 19841 y mediante el uso de charolas en l a s cuales se coloca el sustrato en capas y se pone en una estufa de incubacibn (Vezina 1975) y ~ s o b r e pan de cebamp para producir esporas de Penicillium laucun en la elaboracibn de quesos (Nougaret 19821 ~

p Ultimamente se ha desarrdllado un proceso de cultivo en

superficie sobe un medio amplido utilizando un fermentador de discos rotatorios el c u a l ha dado henos resultados pero no puede ser escalado a un nive mayor (RaimLault y Raussos 1985)

Se ha desarrollado tam5i8n otrc amptodo de pmduccibn de espus solre soporte amplido esto es con la utilizacibn de bagazo de camp (Roussos y coldboradores 1988 certificado de invencibn)

2 4 irsos DE LAS EspoRAs

Eb la produccibn industrial de productos derivados de las fementaciones con hongos filmentosos la inoculacibn de los sustratos requiere de una gran cantidad de conidiosporcs ya que constituyen el punto de inicio de estos procesos de fernentacidn

La importancia de l o s cinco hongos fitmentosos estudiados radica en lo siguiente

~ p ~ ~ ~ l ~ nigerhiunenta el contenido pmteicc de le yucs (hinhult 1980) ademris de poseer actividad pectinolltica

ASprgiIlus te-mm p e e actividad p - a e aprovechamiento de la cantildea de azucar (Brizuela 1987) ademamp elaboran dos substancias antihcteriens de toxicidad variabie (flakripinas citrirn] (Bottm etai965)

7 _

- - ~ ~ ~ - ~~ -- - - i -

B s a u w i a bassima es parbita de insectos por lo qua ayuda en lucha biol6gica adema de producir enzimas como quitiMeas y 1 ipaears

micjllirm sp egta 0CPa posee una alticapacidad ampa e la cafeina de la pllpa de cafe esto rice penuite eliminar uno de lo s principales toxicos en la pulpa y de esta manera disminuir la contaminacion que produce y emplearla para alimentacion animal

2)-ickdema hurzidoum es un pl0dUctor de celulasas y ayuda en lucha biol6gica ya que m la propiedad de em- un antagonista poderaeo con respecto a un cierto rimero de hongos fitoputiquestgeme

( R o w e o s 19851

- _I__I k -

--

l- probar el efecto del tipo de la fuente de carbono en la

empleados en l o s procesos de fermentacioacuten dlida I produccioacuten masiva de midiosporas de l o s p-incipales horqcs

2- Probar el efecto combinado del tipo de la fuente de carbm y la relacioacuten CN en la produccioacuten masiva ae amidiosporas

3- Llevar a cabo la produccioacuten rnasiv de conidiospwas en un fermentador de discos rotatorios de 2 i

9

IDS micmotyanismas estudiados en este t r a j o fueron P s P w g i I I u s n i p ORSIUH NlO A s p e r g i l I u s t m u s cepa del ICIDCA (Instituto cubano para la Investigacioacuten de l o s Derivados de la Cantildea de Azucur) B e a u w i d hssiann cepa d e l ICIDCA Fanicillium sp cepa de la uA y Zkichoderma harzianum CCM F470 (Czechoslovak Collection of Microorganisms) ampliamente descrita por Rcwsg~os (1985)

4 2 MEDIOS DE CULTIVO

4 2 l Medios de comervaciOacuten

las cepas de Aniger A tanclrsus Fenicillium sp y Tharzianum son resembradas en un medio de PDA (papa- dextrasa-agar) y la cepa de B a i u n u es resenbada en PDA con 05 de extracto de levadura cada 6 meses e incubadas durante 7 dias a 29C para despueacutes ser conservadas en refrigeracioacuten durante 6

- meses apracimadamente ~ ~

4 2 2 Medios de esparulacidn

Se probaran l a s siguientes fuentes de cwbmHarina de Yuca Harina de P i g o M e l a z a y Sacarosa con relacioacuten CN de 10 14 24 Y 4 0

a) FmlaciOacuten de los medios

i

t

Lxw medios de cultivo utilizados para la produccioacuten de conidiospwas de Aniger A terreus Bampiana Amicillium p y Thamianum se muestran en l a s tablas I 11 I11 y IV

43 CONDICIONB DE CULTIVO

4 3 1 Inoculacioacuten

El medio de cultivo se inocula en masa este modo de inoculacioacuten consiste en mantener a 40C el medio de cultivo para posteriannente agregar uryt suspensidn de conidiospm-as de concentracioacuten conocida (2 x lo7 esporaWgr de sustrato) El ampio inoculado se agita para obtener una disiribucioacuten hamogenea en el cam ae maeaces Nand0 se utiiiza el fermentaamp de discos se pone en funcionamiento el sistema rotatwio para que SS distribuya el medio de cultivo inocuiaao en l o s discos de forma hmcqenea

F

432 Crecimiento--yespwulacion - - - -

Los cultivos se incuban a temperatura de laboratorio de 18 a 23C durante 7 y 14 dias Al fermentada- de discos se le suministra un flujo de aire estdril con un gasto de 4 lhr durante el periacuteodo de incubncioacuten

44 MEXDO PARA LA F9OJXJEION DE CONIDICSRXA5

Se conocen divemos amptodos para la pmducci6n de conidiosporas nosotras utilizaremos mntraces Erlen Meyer de 250 m1 y Fermentazdares de Discos

441 Matraces Erlen Heyer de 250 ml

El medio de cultivo se reparte en matraces Erlen Meyer de 250 m1 a rampn de 20 m1 par matraz y se obtura con un tapamp de algodoacuten se esteriliza en autoclave a 121C durante 20 min

442 Fermentada- de discos

El esquema del fermentada- de discos rotutorios utilizado se muestra en fmma detallada en la figura 1 El fermentador conteniendo300 m1 de medio de cultivo se esteriliza en autoclave a 121C por 45 min

-

e

a) Descripcioacuten del fermentada-

El fermentador de discos que se presenta en la fig 1 esta fannado por una cuba de vidrio la c u a l tiene una entrada y una salida en la parte superiorde la cuke se coloca una platina que tiene dos entradas una para realizar la inoculacioacuten del medio de cultivo y otra para airear esta platina sostiene un eje en el centro satre el eje se colocan 11 pares de discos formados por 2 m a l l a s de acero inoxidable de 2 mm de espesor y tamantildeo de malla de 4 mm c m un diaacutemetro de 10 c m y separados cuda par por 10 mm con unas rondanas especiales de acero inoxidable en el extremo inferior del eje se coloca una abrazadera la c u a l ejece presioacuten s e e l o s discos y con esto se mantienen fijos el total de 22 discos nos proporciona una superficie uacutetii de 172787 cm2 en la parte superior del eje se localiza un T la omi nos pemitlra colocar un motor y con esto hacer girar los disc-

b) Fimcionamiento y uso

El funcionamiento del fementaaor ae discos es de la siguiente manera LKB vez que se ha agregado e medic de cultivo y se ha esterilizado se coloca a un rotor de marera harizontal lo que nos permitiraacute mantener a l o s discos inmerso= en el medio ae cultivo y de esta forma una vezque se va enfrianio se adhiera a ellos el medic de cultivo se i m l a cunni0 se sncuentra en un promedio de

11

I ~

tempertura de 30 y 35CYTbl medio aun se encuentra licfuido) y asi poder tener una distriMciOacuten hanogenea de l a s esparas en el medio de cultivo (inoculacioacuten en masa) Una vez que el medio de cultivo se ha impregnado a l o s diecog el farmentador puede ser colocado de manera vertical en un l u g = adecuado

__ - - - - -

45 COSECHA Y CxlENrA DE EspoRAs

a) Para l o s cultivos en matraces se agmgu a cada uno 100 m1 de agua destilada estkil adicionada de Tbreen 80 (01) y se hunogeniza mediante agitacih magrktica

b) Para l o s cultivos en fementadares de discos 58 introduce al fermentadar 300 m1 de agua desti lada estampil adicionada de Tween 80 (01) y se mantienen los discos en rotaci6n durante 10 min

El conteo de l a s mas 88 realiza mediante el uso de kas de Malassez con suspensiones convenientemente diluidas y aplicando la siguiente f b l a

A + B + CJ = X 10 = N

A + B + C J = cuenta total de esporas en 10 cuhdros de la celda - x N - mimero de espmas pranedio

1D = factor de dilucioacuten 3

t

1 -Cuva

2 - P l a r i n a

3-Eje

4 -Disc05

5 - E n t rad2 zuper i or de l a cuva

6 - Sal ida i n f e r i o r d e l a cuva

- - Tapon d e entrada y s a l ida

r - 12

-

Medio I I I 3 I 4 I

I I 1 I I I I I Harim de I I I I

Yuca 4 0 4 0 4 0 I 4

I I I

Cgl) 1 1 I 2

I

I I I I I I

I I I I I I

(NH4)2904 402 287 167 100 I I I I

I 1 I I I

Urea 091 065 038 022

cac12 1 1 1 1 1 I 1 I

I I I I I I

I I I I

1 I 1 I I I

I ~~~ ~ ~ ~

I I I I

K H 2 p o 9 2 I 2 I 2 I 2 I I I I t I

I I I - I I I

Ag8r 15 15 I 15 I 15 I I I I 1 I I

I I I I I Agua (ml) loo0 1000 1000 1000

I I I I I

1 I I I I

I CN 10 I 14 I 24 I 40 I

I I I I I

I I I 1 I I

1 pH 56 56 156 56

I I I I I 1

Medio I I I I

Harim de I I I I

Trigo 5714 5714 5714 5714

(gl) I 1 1 2 I 3 I 4 I I I I I

I I I I I I

I I I I I 1

I I I I I I

(NH4)ZSX 402 287 167 100 I I I I I I

I I I I I I

u r e a 091 065 038 (322 I I I I I 1

1 I I I I I ~~ ~~ ~~~

I cac12 1 I 1 I 1 I 1 I

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~ I - s 2 I 2 I 2 I 2 I

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J q a r 15 15 I 15 I 15 I

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Agua (m11 loo0 1000 1000 1000 I I 1 I I I

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I pH 56 56 56 56 I I I I I I

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14

c

C_ de l o s medios S a m a camo

r

de cultivo para fuente de carbono

Hedio I I I I

(gl) 1 2 3 I 4 I

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I I I I I

SaculmBa 3040 3 0 4 0 3040 3040 I I

I I

~ N l i 4 ) 2 S X 402 287 167 100 I I I

I I

1 I 1 I 1 I

I

I 2 I 2 I 2 I I I I

95

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urea 091 065 038 022 I I I

I I I I I I

cac12 1 m 2

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I I

Agar I 15 15 I 15 I I

I I I I I

Agua (m11 1000 1000 1000 1000 I I I I I I

56 56 56

L -

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I I I I I

I pH 56

cN 10 14 24 4 0

I I I I I I

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I

r

Hedio

I I I

I I I I

(gl) 1

I I

I 2 I 3 4 I

I I

I I

I I I I I

M e l a z a 5470 5470 5470 5470 I I I I I I I (W)2S34 402 287 167 1-00 I I I I I I

I I I

I Urea 091 065 038 022 I I I

cac12 I 1 1 1 1 1 1

I

I I I

I

I

I I I

I I I I I

I I 1 I I I

m 2 I I I I

Agar 15 15

I 2 I 2 I 2 I

I

I I

e

I I I I

I 15 I 15 I

I -

I I

I I 1 I I I

Agw (m11 loo0 1000 1000 1000 1 I t I I

I I I p H 56 56 56 56 I I I I

CN 10 1 I 14 I 24 4 0 I I I I I I

I I I I I I

511- AsparYillus n i p -

de 3 dias aparecen farmas especializadas de reploduccian asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este se desarrolla UM vesicula y sobre la vesicula se

conidicsporas Estas conidospwas presentan un color cafe obscuro y n e g r o son gldbulares ornamentadas con un diumetro aproximado de 35 a 5 m La colonia cambia al c o l o r negro del centro B los ext remos

El micelio de este horgo es septa30 y de color blanco despues

desarrollan lae f ialides de las cuales se farmaran l a s

LA estructura de la fama de repruduccion se p-esenta en la figura 2

ru LA 7 V E S I CULA

ESTI P E

ELULA P O D A L

Figura 2 - Conidioforas y conidias de Aniger

El micelio de este h q o e8 septado de color blanco depea de 3 dias aparecen fonoas especializades de repmduccion asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este crecen fialides y de l a s fialides se forman las conidiosparas y presenta exudados ambarinoe Eetas conidiceparas presentan un color amarillo l a s conidiceporas son lisas glokulares con un diametro aproximado de 15 - 25 m

Figura 3 la estructura de la f a r m a de reproduction presenta en la

FIA

Figura 3- Conidioforos y coniaias de X t e

Este hongo presenta un micelio atercipelado y coposo inicialmente blanco presenta un raacutenquis genicula denticulado o en zigzag posteriarmente se tans amarillento Posee conidias hialinas y gldlxllams can un diaacutemetro aproximado de 15 a 3ym La estructura se presenta en la Figura 4

RANQU I S

c

Figura 4 - ConidiOacutefaros y conidias de E h s s i e n o

m cepa se ha identificado corno Penicillium W f a r t i i presenta un micelio septado con produccioacuten de micelio vegetativo aerial d e y e e de un tiempo aparecen estructurns especializadas de repocoduccion a s e x u a l Se presenta un estipe m e n t a d o unas brancpeas meacutetulas f M i d e s y conidias Elstas conidiosporas presentan un colap- verduzco son globdares y lisas con un dibtro apmximado de 4 a 6p Lae conidias son producidas en cadenas cortas La estructura se presenta en la Figura 5

C O N l D l A S

1 O r r m

Figura 5- Conidioacuteforos y coniaias de Fenicilliun

Al inicio este h q o presenta un micelio blanco pterionnente aprecen farmas especializadas de reproduccion asexual fialidee y conidicepuras I m conidiofaros se presentan en farmas piramidalee y en estos sistemas las fialidee Be localizan en g r u ~ w de dos a cuatro Las conidia3 Bon de color verde olivo son de superficie lisas subglobulares con un diametm apmximado de 2 a 3 m

La egtructura de la fcwma de reproduccion se presenta en la figura 6

Las colonias de Thnnianum en FDA se caracterizan pol tener un color verde con circulos concentricos Hay que mencionar que las colanias pmducen un olor a coco (coconut) muy caracteristico

CONlDl

Figura 6 - Conidioforos y conidias de Thanianum

516- Conclusiones v 4

_ _

el curse) de este capitulo se describieron los sietemas de reproduccioacuten de las cinco cepas de hongos filamentosos estudiados Todos estos hongos se repaoducen de manera a s e x u a l Se que l a s 5 cepas presentan estructuras muy diferentes a s i co~po diversos colores en l o s estadios de crecimiento vegetativo y ccmidiogdnesie ademds presentan conidimporas glohlares de muy diversos tamafios

c

093039 t

2 2

- La composicioacuten de l o s diferentes meampicsde cultvoutQizados pera llevar a cabo este estudio fueron medio N 2 de l a s tablas I 11111 y IV y se establecioacute prabay las diferentes fuentes de carbno (Harina de Yuca Harina de Pigo M e l a z a y Sacarosa) en matraces a una relaci6n CN de 14 para de esta manera poder observar el efecto que cada una de ell- ejerce solre la conidicgbesis de l o s hongos filamentosos estudiadas L m resultados se reman en l a s tablas V VI VII VI11 y XI y se exp-esan en base al Indice de Bporulacidn (Ie - N de esporas g de sustrato carbonado) para 7 dias de incubacion a temperatura ambiente (15-22C)

~ - -4

La Harim de Yuca es un producto amilaceo que ha demostrado ser un sustrato de gran eficiencia para la produccion de conidiosparas de hongos filamentosos ademds de ser un producto tropical de facil acceso su principal componente es el almidoacuten que corresponde al 80 en materia seca se encuentran en esta Harina pteiacutenas grasas y vitaminas del tipo B y C adamp de fibras y cenizas (Grace 1977)

la Harina de Pigo es otro sustrato amilaceo que se considerd importante utilizar debido a su alta disponibilidad en su canposicioacuten estan presentes pteiacutenas grw calcio f oacute s f m h i m tiamina riboflavina y niacina esto lo hace un sustrato interesante

La M e l a z a es el subproducto final de la fakicacioacuten de azucar es un liquido o b s c u r o denso y viscoso que se separa de la masa cocida de baja-calidad y del cual no se pede cristalizar ampamcar por amptodos mencionales y econoacutemicos en su composicioacuten estdn presentes 1 0 s amcares y otras sustancias entre l a s cuales se pueden citar l o s corapuestos nitrogenados aacutecidos aminoacidos albiminas vitaminas ceras esteroles lipid- sales minerales y cenizas etc (ICIDCA1986) Como se puede ver es un producto muy complejo por lo que puede ser un sustrato muy atractivo para su utilizaci6n como fuente de carbono en ipedios de cultivo pura la espomlaci6n de hongos filamentosos (Brinela 1987)

la s a c m a es un producto de facil adquisicioacuten y de pmduccioacuten idustrial importante por lo que se considem un sustrato atractivo para la produccioacuten de amidiosporas de hongos filamentosos La sacarosa se encuentra fonnada por una molecula de fructosa y una de glucosa l o s medios de cultivo que contienen sacarosa pcdriamos decir que son medios simples en comparacioacuten con la complejidad de la melaza y l a s harinas

521- A n i g ~

Fh la tabla V se muestran l o s Ie obtenidos para Anigerutilizardo l a s 4 fuentes de carbono antes mencionadas El mayor Ie se alcanzoacute en el medio de cultivo con k i n a de Yuca seguido de la M e l a z a la k i n a de Pigo y por Gltimo la Sacarosa se ha demostrado que durante el proceso de esterilizacioacuten la Harina de Yuca sufre un tratamiento teacutermico que hace que las moleacuteculas de almidh pasen cie una forma cristalina a un estado amdrfo (gelatinizacion) y que Ani_mr es un productm de amilasas (Raimbault 19801 lo que sugiere que la gelatinizacioacuten podriacutea facilitar el ataque enzimdtico y con esto i iberar cantidades importantes de glucosa que favoreced el crecilriiento del hongo lo que normalmente estaacute reiacionado con una produccioacuten importante de conidias

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I

I

I c- 7 DIAS

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 509xl0^9 I I I I

I I 1 I

Harina de Trigo 14 367X1^9 I I I

I I I I

Melaza 14 424x10-9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 16Ox10^8 I I I I

522- d t ~ 1 7 9 ~ ~

Eh la tabla VI se muestran l o s Ie obtenidos para A termus -utiliZando__las 4 fuentes de carbono antes mencionadas El Ie mas alto se encmtroacute en el medio de cultivo con M e l a z a seguido de la Yprina de Yuca y Trigo y por uacuteltimo la Sacarosa d t m u s es utilizado en lo s procesos de aprovechamiento de eubproductos de la industria cantildeera en cuba (meollo y bagazo) (Blanco bpez Villarl968) Esta cepa estaacute adaptada a l o s procesos de la industria cuntildeera de c u b a por lo que se esperariacutea que espurulara mejor en Melaza tal como ocurrioacute

TXBLA VI- Indices de espwulacibn para dtwreus utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa como fuente de carbono para tiempos de incubacidn de 7 dias y relacioacuten CN de 14

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I I I I I I 7 DIAS I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 60x10n9 I I I

Harina de pigo 14 403xlO-9

I I I

1 I I I

I I I I

M e l a z a 14 612xlOA9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 S40~107 1 I I

211

523- Bbassi= 1

Las resulta- 5e rem en la t ~ ~ h ~ f - - - ~ ~ - - ~ ~ e se -obtwo en el medio con Harina de Trigo m i d o de la H a r i n a de Yuca Melnza y Sacarosa Se puede obeervar que 1 0 s Ie amp altos se logran con los sustratos amiluceos que tal vez puedan ser mamp facilmente utilizados por el microoqanimno debido a l - v e s o de gelatinizacioacuten que Wren

524- Penicillium sp

Los resultados se muestran en la tabla VIII Los mayores le se alcanzaron con las Harims de Yuca y Trigo con respecto a los atros dos sustratos Se observoacute una mayor produccioacuten de micelio en los sustratos amilaceos lo que podria justificar la produccibn maacutes alta de conidias

525- Thnmianum

LBS resultados se reportan en la tabla XI Estudios hechos par Raussos (1985) demostraron la capacidad de Thanianum en la produccidn de ami la s a s utilizando almidoacuten cam0 fuente de carbono pesto que la harim de yuca y la harina de trigo son sustratos amilacecs se esperariacutea una produccioacuten impcortante de esporras tal COQLO sucedioacute para la harina de yuca y no asi para la harina de trigo Con respecto a la s a c m a el Ie tan bajo que se obtuvo con relacidn a la melaza pede ser debido a todos los compuestos que se encuentran en las m e l a z a s

c TABLA VI1- Inlices de esparcllacibn para Bhssiana utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo M e i u z a y Sacarosa axno fuente de carbono para tiempos de incubacioacuten de 7 dias y relacion CN de 14

I I I

I I I Ie I

Summ CN I I

1 I I I

I I

1 I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 1 8 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

7 DIAS

Harina de Pigo 14 702~10~9 I I I I

I I I

Melaza 14 217~10~9 I I I I

I I I I

Sacarosa i 14 8 5 8 ~ 1 0 ~ 6 I I I I

r

I I

I Ie 1

I Summ CN I

I 1 i I

I I 7 DIAS

I I I I

I 1 I I

Harina de Yuca 14 142x10^10 I I I I

I I I I

Harina de Pigo 14 832xlO-9 1 1 I I

I I I I

M e l a z a 14 293~10~9

I I I

Sacarosa 14 103x10n9

I I I I

I I I I

m IX-Indices de espauulacian para Thamianum utilizando Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa corno fuente de carbono para tiapos de incubacich de 7 dim y relacioacuten CN de 14

I I I I

I -

1 I Ie I

I Summ CN I

I I 7 D I A S t I I I

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 11ox1On1O I I I I

I I I I

Harina de Trigo 14 12Ox10-9 I I I I

I I I I

M e l a z a 14 875~10~9 I I I I

I

Sacarosa I

I i I

14 11Ox10^8 I I I

526- Conclusiones

Varios autores han demostrado la importancia de la fuente de carbono sobre la conidiogenesis de hongos f ilamentosos (Vezina y co11965 Martinelli1976) en este estudio se pudo observar que cada cepa tiene caracteristicas fisiolcjgicas de esporulacidn propias con respecto al tipo de fuente de carbono que se le proporcione Para este caso en especial la cepa de Aniper esporuld mejor en Harina de Yuca A termus en M e l a z a B m i a m en Harinri de Trigo y T harzinnum en Harina de Yuca

------Esttuiaa - - h - - i s o s (lE5) han demostrado que la concentracidn de Nieeno prwente en el mampio de cup170 ejerce una influencia directa en el nuacutemero de conidiosporas producidas por Thurzjmm par 10 que era necesario seleccionar la relacioacuten CN oacuteptima para cada cepa y para cada sustrato

la composicioacuten de l o s medios de cultivo utilizados para llevar a cabo este estudio estb presentados en las tablas I 11 I11 y IV Se utilizaron 4 diferentes relaciones CN estas fueron de 101424 y 40 empleanda UM mezcla de 23 panes de Sulfato de Amonio y 13 parte de h a toanando- 128 g de carbono como base de caacutelculo y tiempos de incubacioacuten de 7 y 14 dias l o s experimentos se realizaron en matraces de 250 ml

Ln relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despueacutes de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Anigw son mostrados en la tabla X

h datos obtenidos para Aniger nos indican que cuardo se emplea Harina de Yuca en concentracich de 40 gl y la reiaci6n CN estaacute entre 10 y 40 no es un factor determinante en la conidiogeacutenesis ya que esporula de rnanera similar entre estos r a n g o s para l o s medio a base de Harina de Trigo la CN entre 40 y 24 es donde mejm esporulacidn se obtiene

r 5 3 2 - A s m i l ~ s t

h relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de espomlaci6n obtenidos aespuk de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Rtemxs son mostradrx en la tabla XI

Lns medios de cultivo con 14 dias de incubacidn presentan el mayor ntUnero de conidiospwas a una relaci6n CN de 14 con excepcih de l o s medios con Sacarosa que mostramn en todos l o s cc~sos un compm-tamiento muy pobre con respecto al n h de conidias producidas Los mejores Ie se log-amn con Harina de Yuca y M e l a z a con una relacidn CN de-14 para 14 dias de incubacidn

Lo relaci6n que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despuds de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para B b s s i a n a son mostrados en la tabla XII

b Ie logrados para B b n s s i m e son muy similares entre si es decir no cambian significativamente l o s Ie para l o s cultivos con 14 dias de inmbacidn son bastante altos siendo el medio de cultivo con una relaci6n CN de 14 y Melaza como fuente de carbono ei queposee el mejor Ie con un tiempo de incuhcidn de 14 dias BI esta cepa se ve su capacidad de adaptacioacuten con respecto a l a s anteriores para crecer en Sackrosa

~ r

27 534- Psnicilliue sp

kiaeiampi que exiate entre 1- necG~-edt-~vcv - y h rendimientos de esparulaciOacutentilde-6btenidos despds de 7 -_Fl4 dias de cultivo en matraces para FbnciIlium sp son mostrados en la tabla XILI

_

La relacidn CN entre 10 y40 no tiene una influencia directa en la conidioghnesis de esta cepa sin embargo se dbeewa una tendencia a la disminucioacuten del N de conidiospcwas producidas en los cultivos con 14 dias de incubacih Los mayores Ie se lcgrarcm con los medios de cultivo a bnse de Harina de Yuca y Harina de Trigo

La relaci6n que existe entre la composiciiquestn quiacutemica del medio de cultivo y l a s rendimientos de esporulaci6n obtenidos desples de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Thurzzanum son mostrados en la tabla XIV

Las resultados obtenidos 1x1s mestran unatendencia hacia la obtencioacuten del m y m Ie en rangos de CN de 10 a 14 y estudios hechos par Raussos (1985) sohre el efecto de la concentraci6n de Nitriquestgeno en la oanidiogdnesis de Thaniunum pnmporcionaron una CN optima de 14 utilizando Harina de Yuca corno fuente de curbno

Sin embxqo pura una CN de 3253 obtiene un Ie para 7 dias --de incubacidn de Q16x1On9 cmparando este resultado con el resultado obtenido en mi estudio encuentro que a una CN de 40 para 7 diQs de incubacibn tengo un Ie de 132xlO-9 esto es 13 veces mamp por lo que es dificil comparar estos datos en l o s resultados obtenidos se obsewa una tendencia para los cultivos con 14 dias de incubacidn de disminuir el Ie confarme aumenta la relacidn CN y para l a s cultivos con 7 dias se observn lo contrario Los Ie mus altos se logran con l o s medios de cultivo a base de Harinu de Yuca y Melaza

536- Conclusiones

Las cepas estudiadas eSp0IWlUn dependiendo del tipo de fuente de carbono la fuente de carbono y su naturaleza tiene m infiuencia directa en la conidiogeacutenesis de l o s hongos f ilamentosos que la concentracioacuten de nitrdgeno sin embargo es recamendable la adlcidn ae nitdgeno entre l o s rargos de CN de 10 a 4 0

Para disminuir l o s costos de pmduccioacuten de conidiosporas hay que optimizar los medics de cultivo nacer la seleccioacuten de una h e m fuente de carbono para cada cepa y trhjar en rangos de CN de 14 a 4 0

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
                                          • -- A
                                          • --
                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
                                          • M
Page 2: MATRICULA: 83323133.

Wniversidad Autonoma Metropolitana

Inf opme Final de Servicio Social

r

I

Con todo mi a mis padres Lucila y Vicente por todo lo que significan para mi

gradezco profundnmente a 1 D r Svastianos Raussos asesor de este t r a h jo par su gran ayuda y consejos y por su invaluable amistad

A mis amigos que han sido un apoyo en mi camino

A mis familiares que de alguna manera realizamr esfuerzos y sacrificios para l o g r a r de mi un verdadero profesionista

A Argeles Willy y Laura par sus opartunos consejos y valiasos caaaentarios

A la Universidad Autiquest- Metropolitana

A todos gracias

c

INDICE

Pagina

1 I r n C C I r n GIJEFK 1

11 ANAZISIS BI8LIWIZ 3

21 Fisiologia de crecimiento 3 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento 4

22 Fisiologia de espomlacion 5 23 Prduccion de espor as 6 24 Usos de l a s espor as 6

111 9mIVB 8

VI MrnIAL Y m 9

41 Microoqmi smos

42 M e d i o s de cultivo 9 421 Medios de conservation 9 422 Medios de esprulacion 9

a) Falacion de los medi os 9

43 Condiciones de cultivo 9 431 Inoculacion 9 432 Q-ecimiento y espomlacion 10

44 Yetodos FE lo procluc~cion ae esparos 10 44 i KE-waces Erlen k y e r de 25C mi 10 442 Fe-mentaaor de disc os 1C

a) Descripcion del fermentad or lG b) fixiorzmiento y uso 1C

45 Cceecha y cuenta de espr as 11

v mm Y DImldW 16 w w

51 Descripcioacuten morfoldgica del sistema de reproduccioacuten 16 511 Ani ger 16 512 At errstls 17 513 B h t s s i a m 10 514 Fenicillium sp 19 515 T h a n i anum 20 516 Conclusiones 21

52 Seleccioacuten de la fuente de carbono 22 521 A n i p 22 522 Aterrrstts 23 523 3htssiana 24 524 Penici1lium sp 24 525 Thami anum 24 526 Conclusiones 25

53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN 26 531 Ani gw 26 532 At erreus 26 533 B h s s i m 26 534 Pencillium sp 27 533 T h a m i anum 27 536 Conclusiones 27

54 Cineacuteticas de p-oduccioacuten de canidiosporas en esporulador de discos 33 541 Ani gar 33 542 Atam~= 33 543 Bh=ssiana B 544 Penici1lirmr sp 34 545 Thnnianum 34 546 Conclusiones 37

55 Prducciiquestn comparada de conidimporas en fermentador matraz 38

56 Recopilrsquoacioacuten de conciiciones Oacutep~lsquoimas de esporulacioacuten

VI mzus10m GElmWs 45

111 mwm4 46

-I 11 ~ BiFllrnIA 47

1 - 1mccCIm m Recientemente se ha dado un gran intereacutes en el desarrollo de

fermentaciones en medio soacutelido para la produccidn de alimentos enriquecidos con proteiacutena microbiana a partir de sustratos amilaceos (Raimbault 19801 detoxificacioacuten de p u i p a de cafe (Aquiahuati y col 19871 produccioacuten de enzimas celulasas (Raussosl985) asi cogpo de diversos metabolitos secwdarios tales carno aflataxinas antibioacuteticos (Eiawios 1987) Btos procesos implican el crecimiento de hongos f i l a m e n t o s o s sobre susCaatos soacutelidos le inoculacioacuten de estos sustratos requiere de una gran cantidad de esparas

las esporas de hongas filament- son la fonna ae resistencia y reprcduccioacuten de estos mirroarganismos y constituyen el punto de inicio de l o s procesas de fermentacioacuten en medio soacuteliao dado que se requiere de unu inoculacioacuten masiva y homogenea en el medio de cultivo y bajo ciertas condiciones puedan llevarse a cabo l a s transformaciones de bioconversioacuten deseables Por io tanto se necesita disponer de cantidades importantes de esporas (Raussos 19B51

El nuacutemero de esparas producidas por UT hongo filanentoso es principalmente funcioacuten de la composicioacuten del medio de cultivo tal como se reporta pura Aspryil Ius n i d u l m que cuando se cambia la naturaleza o la cantidad de la fuente ae carbono o de nieeno del medio de cultivo optimizado se observa ma disminucidnde la produccioacuten de esporas de este hongo filamentoso [Martimlli 1976

tos hongos filamentosos Aniger Atemetls Ebss iam Fenicillim sp y Thamianum se clasifican aentro ae l o s hongos imwrfectos o aeuteroanicetos ya que no se les conoce reproduccih s e d 1 (Alexopoulos 1962)

El intereacutes de estudiar estos cuatro homos filumentosos radica en lo siguiente

A n i m posamp la capacidad de -air amilasas dependiencio de l a s condiciones de cuitivo debido a esta caracteristica la utilizacidr de Ari-aar para mmx-Jtar e conteniac proteico de la yuca (Raimbauit 1980 tlene relevante imponancia aaemb prcduce pectinasas

A t m m tiene la capacidad de desnncoliawse s o b e 1~ celulosa microcristalina lo que ie permite apmvecna- el bagam de la cantildea de m c a r (Brizuela et al 1987) ademamp elabma sui=stancies antiiacterianas ae toxicidaci variabie (flavipinas terreina citrina emim etc)(bttm etal 1985)

$ lt- 46

I u v

- -

B m i a m El geacutenero comprende S c 4 especies snpdf itas o paraacutesitcs de insectos entre los que se enmen-wa B h z s s i m la c u a l parasita art6pteros como Melanoplus smvinipes (Mercardier y Khachataurians 1987) contra coieoacutepteros tales como b p t i m t a r s a ecernilineata (Hajek etmal 1987) Anartis sahlifara Apim rchari Nisotra arbiculata Desmidopkms hebes Chilo onellus (Padit y Sam 1988)

Amicillium sp la imprtancia de este hongo es sobre todo en la industria lactea de antibioacuteticos y recientemente para la detoxificacioacuten de la p u l p a de cafe (Aquiahuatl y col 1988)

T harzianum Las especies de3 genero Zl-i~~nna sor frecuentemente empleadas en los p-ocesos de hidrdlisis de le celulosa Estos horgcs pmducen cantidades importantes de exoenzimas capaces de hidmlisar completamente la celuiosa en glucosa (Raussos 1981) Ademaacutes la cepa de T hruzianum fue utilizada con eacutexito para el enriquecimiento en pteinas de la harina de yuca por fermentacioacuten en medio liacutequido (Muindi y Hanssen 1981)

Otra caracteriacutestica impartante es que T harziunum es un antagonista micrdbiano poderoso Olivjer y Germain (1983) demostraron claramente que T viride y T hnrzimurc producen UM

tales como Botrytis c i m lampizoctonin solunipetc - inhibicioacuten en ciertns fases aei desarrollo de hongos fitopatoacutegenos

3

21 F ISIWIA DE CRD2IMW

Lx horgos filamentaeos m microoapnnismos eucaribticos quimiarganotrdficog estrictamente aarbbios y se repmducen de manara natural por medio de conidicepmas

La clasificacih de los horgoe esth basaamp principalmente en las caracterlsticaa de las agpcrras e e x u a l e e y de l o e cuarpos fructZfaroe presentes durante l o s estadlos s e x u a l e s de w1 ciclo biolbgico Loe hangoe con un estado e e x u a l conocido em denaninan h v perfectos Sin embaryo rmuchcs h o w eo10 producen eapcrras s e x u a l e s y cue- fructlf imx bajo ciertas corwiiciones exprimentales m y precisas si ea que las pmducen

Asi pues todavila no 8e conocen l o s ciclos biolQicos cunpleto8 con l o s estadroe sexuales ccmpletoe de muchos hongog Para estos hongos ein estadbs sexuales conocidos les conoce como how imperfectas (Talbot 1978)

La vida de un hongo imperfecto 8e divide en CUEltro etapas fisiolbgiacutecas impctantes que son la latencia la germinacibn la marltiplicacitm vegetativa y la conidiogbnesis (Rcrussosl985) - P

La conidioapora de un hongo f i lamentoso e8 una parte altamente espetcializada de mproduccibn Bupewivencia y dierparsibn ncamalmente delimitadas de iexclas muchas partes de l o s hongos y caracterizada por un metabolismo minim bajo conteniao de agua y carece da movimiento IcitoplasmCttim Aparte de m obvio p a p e l ecolbgico en la naturaleza l a s conidiosporas son usah en el laboratorio colpa irdculo en la pmduccibn de biomass para egtcperimentos o pmcm industriales y mhs recientemente para real izar directamente transformaciones qulmicas especff icas (Vezina y Sing 1975)

La conidiospwa esta en latencia cuando no gemina ampampa latencia pede ser de dos tipos constitucional o exQena

Con respecto Q la latencia constitucional la conidiospara puede IX) genninar aunque se encuentre bajo condiciones ambientales ade- pem primero requiere un proceso de activacibn para vencer una propiedad inata en el estado latente el cual pede ser una bancera pura la penetracibn de nutrientes una dDstruccih metab3lica o una auto-irhibiciamp~

Por otra parte en la latencia exwena la conidiospra es inactiva porque hay cordiciones ambientalee aesfavaruhles qulmicas yo flsicas y Pplede rapidamente reanudar m d e m l lo en un medio ambiente favorable E T 1 este tipc de

4

latencia la ganninacitm es contmlmamp p o r la necesidad esencial fact de- ampg2--r io - 2

Charamp todas la6 barreras de latencia han sido removidas la amidiospara normalmente requiere de niveles de temperatura de humedad favorable8 y ademhe de ciertas subetancias en el medio ambiente para canenzar el proceeo de germinacibn DespUes del inicio de esta nueva fase de genninacidn aparece la reepiracibn aardbica que 88 un requerimiento m 1 para todas las espocras Alguna8 canidiasparaa pueden exigir ademhs de estos factores un requerimiento de CDZ la mayor3a de las esporas requiere de una fuente externa de carbohidratos para germins aigunas otras pceeen adecuadamente res~nms oryhicas pero tienen la necesidad solamente del agua (Smith 1978)

BJ 1- siguientes gheros de hongos filamentosos que ee estuiian en este trabajo c u m Aspargillus Beauveria Axicillim sp y Zl-ichoderrpa (hongos imperfectos) las conidiosporas repmeentan la fama de reproduccibn a s e x u a l La definicibn que Sussman (1965) ha dado de l a s conidiceporas es la siguiente Todo perPodo de vida lento o intarrupcih reversible de desarrollo del cuyaniemo la caracterhtica fundamental de la oonidiospaota es que hay un irdividuo en potencialidad esta potencialidad esta reportada en el tiempo de latencia

211 Las etapas fieiologicas de crecimiento

a) La geminacih de mnidiospmas

La genninacidn es la suma de l o s procesce y de los cambios que intervienen en la recuperacibn del desarrollo de la fanm en la latencia y en la transformacibn de una estructura diferente (Allen1965) EB decir tambian el -pocimer estad30 imvemible que es abservado cano una diferencia del organismo en latencia el juicio pede ser formado soh l o s criterios morfoltrgicos citol6gicos fisiolbgicce o bioqulmicos (Sussman 1975)

b) La multiplicacibn vegetativa

Esta etapa romprende en realidad varias partes ia mamps importante corresponde a la fase de multiplicacibn de tipo exponencia1 del micelio cuando estamp desarrollado en nume- ramificaciones y extremos a UM pmduccibn de biomasa IRoyssos 1985) c) La conidiwhesis

La conidicghesis consiste en UM sucesiEcl de eventos internos en la dlula micelial (proliferacib del retlculo endoplasmdtico de vacuolas y nkleos) que temira en la iontacibn de conidiosporas la produccibn y

I

x - 2 L - - A ~

d

liberncibn de estas (Imrpent 1972 Fewe eco111975 De hecho la conidiogbesis de hongos filmentosos es un proceso muy ample jo

22 FIS1OLLXIA E EsFcrRuLACION

La conidioghesis es una etapa fisioltgiccr muy importante para l o s horgos imperfectos eta etapa comesponde a la fonnacibn

y liberacih de conidiosporas

El coanplejo proceso de esparulacibn en la conidioghesis pede ser visto cano la integracibn de algunos eventos biolbgicos La habilidad para cambiar de una fonnn de desarrollo filamentoso vegetativo a UM fonne ae espora reproductiva y generalmente esfGrica es el resultado final de un metdbolismo que responde a cambios fisicoqufmicos especlficos del medio ambiente (pH CO O Z temperatura humedad o la aparicibn de al- metabolito secundario) l o s cuales ejercen cambios en los estTmulos internos que regulan la actividad celular

Es hitido que el desencadenamiento de la esporulacibn es inducido por un factor limitate que desaparece en el medio de cultivo durante el crecimiento del hoqo La naturaieza de este factor es muy variable Se supone que el agotamiento de la fuente de carbono-o de nitrbgeno es generalmente el factor limitante Sin embaqo no deben olvidarse ios demas factores fisicoqulmicos untes mencionados

Un desancollo n o r m a 1 de micelio y una tuena conidiog6nesis son l a s condiciones previas G m produccibn imporLante ae midiosporas (Rcysscs 1985 El nilmero ae conidiosporas producidas por un hongo filamentoso es principalmente funcibn de la cantidad de la fuente de carbono y de nitriquestgeno presente en el medio de cultivo

El efecto de induccibn-inhibicibn de la conidicgbesis de Aniger fua puesto en evidencia por Gnlbraith y S m i t h (1969) De la misma manera la irduccidn del riiLmo endbgeno de esporulacibn de Aniger es influenciaamp por la relacibr glucosapotusio y por l o s oligoelementos presentes en el nedicl de cultivo (Jerebzoff eta11976)

En los medios de cultivc las sales Icineraies a urle concentacibn elevada podrlan tener los efectos opuestas sobre el crecimiento y la conidioghesis de homos f i l m e n t o s o s (Girdruth 1977 Slayan y Tatm 1954 Lilly L9euro51 De a misna manera la aereacibn y la humedad poseer una influencia en la pduccibn cuantitativa de coniaiwpras ae P m p e f w t i (Maheva et col 1984)

T

___ ~ ~~ - ~- ~ ~ ~ -~

deben ser definidas para a especie h e 5 un medio amp4cultivo optimizado para la produccibn de conidiwporns de una especie puede no ser adecuado para alguna otra (Vezim y co11965)

23 PRclDuccION DE E S O R A S

Diferentes tecnicas sa conocidas para la produccibn masiva de esparas La mds antigua consiste en cultivar el mirrocqganismo sobre una superficie en UT ampio de cultivo con agar ya sea en cajas de Petri a nivel labratorio o en btellns Rolux para fines prticticcs Osta tecnica presenta graves problemas de recoleccibn y la manipuiacibn de u n h e m importante de frasccs ademas se debe llevar a cabo bajc asepsia canpleta

Se ha mostrado la posibilidad de producir esporas en cultivo llquido utilizardo fermentadores esterilizables y extrapolables a nivel industrial (Bmderic eta11982)

Se h a n hecho estudios para producir esporas utilizando sustratos nmilaceos en ferntadores de lecho fijo (Maheva y col 19841 y mediante el uso de charolas en l a s cuales se coloca el sustrato en capas y se pone en una estufa de incubacibn (Vezina 1975) y ~ s o b r e pan de cebamp para producir esporas de Penicillium laucun en la elaboracibn de quesos (Nougaret 19821 ~

p Ultimamente se ha desarrdllado un proceso de cultivo en

superficie sobe un medio amplido utilizando un fermentador de discos rotatorios el c u a l ha dado henos resultados pero no puede ser escalado a un nive mayor (RaimLault y Raussos 1985)

Se ha desarrollado tam5i8n otrc amptodo de pmduccibn de espus solre soporte amplido esto es con la utilizacibn de bagazo de camp (Roussos y coldboradores 1988 certificado de invencibn)

2 4 irsos DE LAS EspoRAs

Eb la produccibn industrial de productos derivados de las fementaciones con hongos filmentosos la inoculacibn de los sustratos requiere de una gran cantidad de conidiosporcs ya que constituyen el punto de inicio de estos procesos de fernentacidn

La importancia de l o s cinco hongos fitmentosos estudiados radica en lo siguiente

~ p ~ ~ ~ l ~ nigerhiunenta el contenido pmteicc de le yucs (hinhult 1980) ademris de poseer actividad pectinolltica

ASprgiIlus te-mm p e e actividad p - a e aprovechamiento de la cantildea de azucar (Brizuela 1987) ademamp elaboran dos substancias antihcteriens de toxicidad variabie (flakripinas citrirn] (Bottm etai965)

7 _

- - ~ ~ ~ - ~~ -- - - i -

B s a u w i a bassima es parbita de insectos por lo qua ayuda en lucha biol6gica adema de producir enzimas como quitiMeas y 1 ipaears

micjllirm sp egta 0CPa posee una alticapacidad ampa e la cafeina de la pllpa de cafe esto rice penuite eliminar uno de lo s principales toxicos en la pulpa y de esta manera disminuir la contaminacion que produce y emplearla para alimentacion animal

2)-ickdema hurzidoum es un pl0dUctor de celulasas y ayuda en lucha biol6gica ya que m la propiedad de em- un antagonista poderaeo con respecto a un cierto rimero de hongos fitoputiquestgeme

( R o w e o s 19851

- _I__I k -

--

l- probar el efecto del tipo de la fuente de carbono en la

empleados en l o s procesos de fermentacioacuten dlida I produccioacuten masiva de midiosporas de l o s p-incipales horqcs

2- Probar el efecto combinado del tipo de la fuente de carbm y la relacioacuten CN en la produccioacuten masiva ae amidiosporas

3- Llevar a cabo la produccioacuten rnasiv de conidiospwas en un fermentador de discos rotatorios de 2 i

9

IDS micmotyanismas estudiados en este t r a j o fueron P s P w g i I I u s n i p ORSIUH NlO A s p e r g i l I u s t m u s cepa del ICIDCA (Instituto cubano para la Investigacioacuten de l o s Derivados de la Cantildea de Azucur) B e a u w i d hssiann cepa d e l ICIDCA Fanicillium sp cepa de la uA y Zkichoderma harzianum CCM F470 (Czechoslovak Collection of Microorganisms) ampliamente descrita por Rcwsg~os (1985)

4 2 MEDIOS DE CULTIVO

4 2 l Medios de comervaciOacuten

las cepas de Aniger A tanclrsus Fenicillium sp y Tharzianum son resembradas en un medio de PDA (papa- dextrasa-agar) y la cepa de B a i u n u es resenbada en PDA con 05 de extracto de levadura cada 6 meses e incubadas durante 7 dias a 29C para despueacutes ser conservadas en refrigeracioacuten durante 6

- meses apracimadamente ~ ~

4 2 2 Medios de esparulacidn

Se probaran l a s siguientes fuentes de cwbmHarina de Yuca Harina de P i g o M e l a z a y Sacarosa con relacioacuten CN de 10 14 24 Y 4 0

a) FmlaciOacuten de los medios

i

t

Lxw medios de cultivo utilizados para la produccioacuten de conidiospwas de Aniger A terreus Bampiana Amicillium p y Thamianum se muestran en l a s tablas I 11 I11 y IV

43 CONDICIONB DE CULTIVO

4 3 1 Inoculacioacuten

El medio de cultivo se inocula en masa este modo de inoculacioacuten consiste en mantener a 40C el medio de cultivo para posteriannente agregar uryt suspensidn de conidiospm-as de concentracioacuten conocida (2 x lo7 esporaWgr de sustrato) El ampio inoculado se agita para obtener una disiribucioacuten hamogenea en el cam ae maeaces Nand0 se utiiiza el fermentaamp de discos se pone en funcionamiento el sistema rotatwio para que SS distribuya el medio de cultivo inocuiaao en l o s discos de forma hmcqenea

F

432 Crecimiento--yespwulacion - - - -

Los cultivos se incuban a temperatura de laboratorio de 18 a 23C durante 7 y 14 dias Al fermentada- de discos se le suministra un flujo de aire estdril con un gasto de 4 lhr durante el periacuteodo de incubncioacuten

44 MEXDO PARA LA F9OJXJEION DE CONIDICSRXA5

Se conocen divemos amptodos para la pmducci6n de conidiosporas nosotras utilizaremos mntraces Erlen Meyer de 250 m1 y Fermentazdares de Discos

441 Matraces Erlen Heyer de 250 ml

El medio de cultivo se reparte en matraces Erlen Meyer de 250 m1 a rampn de 20 m1 par matraz y se obtura con un tapamp de algodoacuten se esteriliza en autoclave a 121C durante 20 min

442 Fermentada- de discos

El esquema del fermentada- de discos rotutorios utilizado se muestra en fmma detallada en la figura 1 El fermentador conteniendo300 m1 de medio de cultivo se esteriliza en autoclave a 121C por 45 min

-

e

a) Descripcioacuten del fermentada-

El fermentador de discos que se presenta en la fig 1 esta fannado por una cuba de vidrio la c u a l tiene una entrada y una salida en la parte superiorde la cuke se coloca una platina que tiene dos entradas una para realizar la inoculacioacuten del medio de cultivo y otra para airear esta platina sostiene un eje en el centro satre el eje se colocan 11 pares de discos formados por 2 m a l l a s de acero inoxidable de 2 mm de espesor y tamantildeo de malla de 4 mm c m un diaacutemetro de 10 c m y separados cuda par por 10 mm con unas rondanas especiales de acero inoxidable en el extremo inferior del eje se coloca una abrazadera la c u a l ejece presioacuten s e e l o s discos y con esto se mantienen fijos el total de 22 discos nos proporciona una superficie uacutetii de 172787 cm2 en la parte superior del eje se localiza un T la omi nos pemitlra colocar un motor y con esto hacer girar los disc-

b) Fimcionamiento y uso

El funcionamiento del fementaaor ae discos es de la siguiente manera LKB vez que se ha agregado e medic de cultivo y se ha esterilizado se coloca a un rotor de marera harizontal lo que nos permitiraacute mantener a l o s discos inmerso= en el medio ae cultivo y de esta forma una vezque se va enfrianio se adhiera a ellos el medic de cultivo se i m l a cunni0 se sncuentra en un promedio de

11

I ~

tempertura de 30 y 35CYTbl medio aun se encuentra licfuido) y asi poder tener una distriMciOacuten hanogenea de l a s esparas en el medio de cultivo (inoculacioacuten en masa) Una vez que el medio de cultivo se ha impregnado a l o s diecog el farmentador puede ser colocado de manera vertical en un l u g = adecuado

__ - - - - -

45 COSECHA Y CxlENrA DE EspoRAs

a) Para l o s cultivos en matraces se agmgu a cada uno 100 m1 de agua destilada estkil adicionada de Tbreen 80 (01) y se hunogeniza mediante agitacih magrktica

b) Para l o s cultivos en fementadares de discos 58 introduce al fermentadar 300 m1 de agua desti lada estampil adicionada de Tween 80 (01) y se mantienen los discos en rotaci6n durante 10 min

El conteo de l a s mas 88 realiza mediante el uso de kas de Malassez con suspensiones convenientemente diluidas y aplicando la siguiente f b l a

A + B + CJ = X 10 = N

A + B + C J = cuenta total de esporas en 10 cuhdros de la celda - x N - mimero de espmas pranedio

1D = factor de dilucioacuten 3

t

1 -Cuva

2 - P l a r i n a

3-Eje

4 -Disc05

5 - E n t rad2 zuper i or de l a cuva

6 - Sal ida i n f e r i o r d e l a cuva

- - Tapon d e entrada y s a l ida

r - 12

-

Medio I I I 3 I 4 I

I I 1 I I I I I Harim de I I I I

Yuca 4 0 4 0 4 0 I 4

I I I

Cgl) 1 1 I 2

I

I I I I I I

I I I I I I

(NH4)2904 402 287 167 100 I I I I

I 1 I I I

Urea 091 065 038 022

cac12 1 1 1 1 1 I 1 I

I I I I I I

I I I I

1 I 1 I I I

I ~~~ ~ ~ ~

I I I I

K H 2 p o 9 2 I 2 I 2 I 2 I I I I t I

I I I - I I I

Ag8r 15 15 I 15 I 15 I I I I 1 I I

I I I I I Agua (ml) loo0 1000 1000 1000

I I I I I

1 I I I I

I CN 10 I 14 I 24 I 40 I

I I I I I

I I I 1 I I

1 pH 56 56 156 56

I I I I I 1

Medio I I I I

Harim de I I I I

Trigo 5714 5714 5714 5714

(gl) I 1 1 2 I 3 I 4 I I I I I

I I I I I I

I I I I I 1

I I I I I I

(NH4)ZSX 402 287 167 100 I I I I I I

I I I I I I

u r e a 091 065 038 (322 I I I I I 1

1 I I I I I ~~ ~~ ~~~

I cac12 1 I 1 I 1 I 1 I

I I

~ I - s 2 I 2 I 2 I 2 I

e I I I I I

J q a r 15 15 I 15 I 15 I

I I

I I I I I I

I 1 I I I I

I I I I I

I I I I I I

Agua (m11 loo0 1000 1000 1000 I I 1 I I I

I I I I I I

I pH 56 56 56 56 I I I I I I

1 I I I I I

I cm 10 I 14 I 24 I 40 I I I I I I I

r

t

14

c

C_ de l o s medios S a m a camo

r

de cultivo para fuente de carbono

Hedio I I I I

(gl) 1 2 3 I 4 I

I I I I I I I I

I I

I I I I I

SaculmBa 3040 3 0 4 0 3040 3040 I I

I I

~ N l i 4 ) 2 S X 402 287 167 100 I I I

I I

1 I 1 I 1 I

I

I 2 I 2 I 2 I I I I

95

I I

I I

I I

I I

I I I I

urea 091 065 038 022 I I I

I I I I I I

cac12 1 m 2

I I I

I I I I

I I I

I I

Agar I 15 15 I 15 I I

I I I I I

Agua (m11 1000 1000 1000 1000 I I I I I I

56 56 56

L -

I I I

I I I I I

I pH 56

cN 10 14 24 4 0

I I I I I I

I I

I I

I I

I I

I I

I

r

Hedio

I I I

I I I I

(gl) 1

I I

I 2 I 3 4 I

I I

I I

I I I I I

M e l a z a 5470 5470 5470 5470 I I I I I I I (W)2S34 402 287 167 1-00 I I I I I I

I I I

I Urea 091 065 038 022 I I I

cac12 I 1 1 1 1 1 1

I

I I I

I

I

I I I

I I I I I

I I 1 I I I

m 2 I I I I

Agar 15 15

I 2 I 2 I 2 I

I

I I

e

I I I I

I 15 I 15 I

I -

I I

I I 1 I I I

Agw (m11 loo0 1000 1000 1000 1 I t I I

I I I p H 56 56 56 56 I I I I

CN 10 1 I 14 I 24 4 0 I I I I I I

I I I I I I

511- AsparYillus n i p -

de 3 dias aparecen farmas especializadas de reploduccian asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este se desarrolla UM vesicula y sobre la vesicula se

conidicsporas Estas conidospwas presentan un color cafe obscuro y n e g r o son gldbulares ornamentadas con un diumetro aproximado de 35 a 5 m La colonia cambia al c o l o r negro del centro B los ext remos

El micelio de este horgo es septa30 y de color blanco despues

desarrollan lae f ialides de las cuales se farmaran l a s

LA estructura de la fama de repruduccion se p-esenta en la figura 2

ru LA 7 V E S I CULA

ESTI P E

ELULA P O D A L

Figura 2 - Conidioforas y conidias de Aniger

El micelio de este h q o e8 septado de color blanco depea de 3 dias aparecen fonoas especializades de repmduccion asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este crecen fialides y de l a s fialides se forman las conidiosparas y presenta exudados ambarinoe Eetas conidiceparas presentan un color amarillo l a s conidiceporas son lisas glokulares con un diametro aproximado de 15 - 25 m

Figura 3 la estructura de la f a r m a de reproduction presenta en la

FIA

Figura 3- Conidioforos y coniaias de X t e

Este hongo presenta un micelio atercipelado y coposo inicialmente blanco presenta un raacutenquis genicula denticulado o en zigzag posteriarmente se tans amarillento Posee conidias hialinas y gldlxllams can un diaacutemetro aproximado de 15 a 3ym La estructura se presenta en la Figura 4

RANQU I S

c

Figura 4 - ConidiOacutefaros y conidias de E h s s i e n o

m cepa se ha identificado corno Penicillium W f a r t i i presenta un micelio septado con produccioacuten de micelio vegetativo aerial d e y e e de un tiempo aparecen estructurns especializadas de repocoduccion a s e x u a l Se presenta un estipe m e n t a d o unas brancpeas meacutetulas f M i d e s y conidias Elstas conidiosporas presentan un colap- verduzco son globdares y lisas con un dibtro apmximado de 4 a 6p Lae conidias son producidas en cadenas cortas La estructura se presenta en la Figura 5

C O N l D l A S

1 O r r m

Figura 5- Conidioacuteforos y coniaias de Fenicilliun

Al inicio este h q o presenta un micelio blanco pterionnente aprecen farmas especializadas de reproduccion asexual fialidee y conidicepuras I m conidiofaros se presentan en farmas piramidalee y en estos sistemas las fialidee Be localizan en g r u ~ w de dos a cuatro Las conidia3 Bon de color verde olivo son de superficie lisas subglobulares con un diametm apmximado de 2 a 3 m

La egtructura de la fcwma de reproduccion se presenta en la figura 6

Las colonias de Thnnianum en FDA se caracterizan pol tener un color verde con circulos concentricos Hay que mencionar que las colanias pmducen un olor a coco (coconut) muy caracteristico

CONlDl

Figura 6 - Conidioforos y conidias de Thanianum

516- Conclusiones v 4

_ _

el curse) de este capitulo se describieron los sietemas de reproduccioacuten de las cinco cepas de hongos filamentosos estudiados Todos estos hongos se repaoducen de manera a s e x u a l Se que l a s 5 cepas presentan estructuras muy diferentes a s i co~po diversos colores en l o s estadios de crecimiento vegetativo y ccmidiogdnesie ademds presentan conidimporas glohlares de muy diversos tamafios

c

093039 t

2 2

- La composicioacuten de l o s diferentes meampicsde cultvoutQizados pera llevar a cabo este estudio fueron medio N 2 de l a s tablas I 11111 y IV y se establecioacute prabay las diferentes fuentes de carbno (Harina de Yuca Harina de Pigo M e l a z a y Sacarosa) en matraces a una relaci6n CN de 14 para de esta manera poder observar el efecto que cada una de ell- ejerce solre la conidicgbesis de l o s hongos filamentosos estudiadas L m resultados se reman en l a s tablas V VI VII VI11 y XI y se exp-esan en base al Indice de Bporulacidn (Ie - N de esporas g de sustrato carbonado) para 7 dias de incubacion a temperatura ambiente (15-22C)

~ - -4

La Harim de Yuca es un producto amilaceo que ha demostrado ser un sustrato de gran eficiencia para la produccion de conidiosparas de hongos filamentosos ademds de ser un producto tropical de facil acceso su principal componente es el almidoacuten que corresponde al 80 en materia seca se encuentran en esta Harina pteiacutenas grasas y vitaminas del tipo B y C adamp de fibras y cenizas (Grace 1977)

la Harina de Pigo es otro sustrato amilaceo que se considerd importante utilizar debido a su alta disponibilidad en su canposicioacuten estan presentes pteiacutenas grw calcio f oacute s f m h i m tiamina riboflavina y niacina esto lo hace un sustrato interesante

La M e l a z a es el subproducto final de la fakicacioacuten de azucar es un liquido o b s c u r o denso y viscoso que se separa de la masa cocida de baja-calidad y del cual no se pede cristalizar ampamcar por amptodos mencionales y econoacutemicos en su composicioacuten estdn presentes 1 0 s amcares y otras sustancias entre l a s cuales se pueden citar l o s corapuestos nitrogenados aacutecidos aminoacidos albiminas vitaminas ceras esteroles lipid- sales minerales y cenizas etc (ICIDCA1986) Como se puede ver es un producto muy complejo por lo que puede ser un sustrato muy atractivo para su utilizaci6n como fuente de carbono en ipedios de cultivo pura la espomlaci6n de hongos filamentosos (Brinela 1987)

la s a c m a es un producto de facil adquisicioacuten y de pmduccioacuten idustrial importante por lo que se considem un sustrato atractivo para la produccioacuten de amidiosporas de hongos filamentosos La sacarosa se encuentra fonnada por una molecula de fructosa y una de glucosa l o s medios de cultivo que contienen sacarosa pcdriamos decir que son medios simples en comparacioacuten con la complejidad de la melaza y l a s harinas

521- A n i g ~

Fh la tabla V se muestran l o s Ie obtenidos para Anigerutilizardo l a s 4 fuentes de carbono antes mencionadas El mayor Ie se alcanzoacute en el medio de cultivo con k i n a de Yuca seguido de la M e l a z a la k i n a de Pigo y por Gltimo la Sacarosa se ha demostrado que durante el proceso de esterilizacioacuten la Harina de Yuca sufre un tratamiento teacutermico que hace que las moleacuteculas de almidh pasen cie una forma cristalina a un estado amdrfo (gelatinizacion) y que Ani_mr es un productm de amilasas (Raimbault 19801 lo que sugiere que la gelatinizacioacuten podriacutea facilitar el ataque enzimdtico y con esto i iberar cantidades importantes de glucosa que favoreced el crecilriiento del hongo lo que normalmente estaacute reiacionado con una produccioacuten importante de conidias

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I

I

I c- 7 DIAS

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 509xl0^9 I I I I

I I 1 I

Harina de Trigo 14 367X1^9 I I I

I I I I

Melaza 14 424x10-9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 16Ox10^8 I I I I

522- d t ~ 1 7 9 ~ ~

Eh la tabla VI se muestran l o s Ie obtenidos para A termus -utiliZando__las 4 fuentes de carbono antes mencionadas El Ie mas alto se encmtroacute en el medio de cultivo con M e l a z a seguido de la Yprina de Yuca y Trigo y por uacuteltimo la Sacarosa d t m u s es utilizado en lo s procesos de aprovechamiento de eubproductos de la industria cantildeera en cuba (meollo y bagazo) (Blanco bpez Villarl968) Esta cepa estaacute adaptada a l o s procesos de la industria cuntildeera de c u b a por lo que se esperariacutea que espurulara mejor en Melaza tal como ocurrioacute

TXBLA VI- Indices de espwulacibn para dtwreus utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa como fuente de carbono para tiempos de incubacidn de 7 dias y relacioacuten CN de 14

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I I I I I I 7 DIAS I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 60x10n9 I I I

Harina de pigo 14 403xlO-9

I I I

1 I I I

I I I I

M e l a z a 14 612xlOA9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 S40~107 1 I I

211

523- Bbassi= 1

Las resulta- 5e rem en la t ~ ~ h ~ f - - - ~ ~ - - ~ ~ e se -obtwo en el medio con Harina de Trigo m i d o de la H a r i n a de Yuca Melnza y Sacarosa Se puede obeervar que 1 0 s Ie amp altos se logran con los sustratos amiluceos que tal vez puedan ser mamp facilmente utilizados por el microoqanimno debido a l - v e s o de gelatinizacioacuten que Wren

524- Penicillium sp

Los resultados se muestran en la tabla VIII Los mayores le se alcanzaron con las Harims de Yuca y Trigo con respecto a los atros dos sustratos Se observoacute una mayor produccioacuten de micelio en los sustratos amilaceos lo que podria justificar la produccibn maacutes alta de conidias

525- Thnmianum

LBS resultados se reportan en la tabla XI Estudios hechos par Raussos (1985) demostraron la capacidad de Thanianum en la produccidn de ami la s a s utilizando almidoacuten cam0 fuente de carbono pesto que la harim de yuca y la harina de trigo son sustratos amilacecs se esperariacutea una produccioacuten impcortante de esporras tal COQLO sucedioacute para la harina de yuca y no asi para la harina de trigo Con respecto a la s a c m a el Ie tan bajo que se obtuvo con relacidn a la melaza pede ser debido a todos los compuestos que se encuentran en las m e l a z a s

c TABLA VI1- Inlices de esparcllacibn para Bhssiana utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo M e i u z a y Sacarosa axno fuente de carbono para tiempos de incubacioacuten de 7 dias y relacion CN de 14

I I I

I I I Ie I

Summ CN I I

1 I I I

I I

1 I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 1 8 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

7 DIAS

Harina de Pigo 14 702~10~9 I I I I

I I I

Melaza 14 217~10~9 I I I I

I I I I

Sacarosa i 14 8 5 8 ~ 1 0 ~ 6 I I I I

r

I I

I Ie 1

I Summ CN I

I 1 i I

I I 7 DIAS

I I I I

I 1 I I

Harina de Yuca 14 142x10^10 I I I I

I I I I

Harina de Pigo 14 832xlO-9 1 1 I I

I I I I

M e l a z a 14 293~10~9

I I I

Sacarosa 14 103x10n9

I I I I

I I I I

m IX-Indices de espauulacian para Thamianum utilizando Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa corno fuente de carbono para tiapos de incubacich de 7 dim y relacioacuten CN de 14

I I I I

I -

1 I Ie I

I Summ CN I

I I 7 D I A S t I I I

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 11ox1On1O I I I I

I I I I

Harina de Trigo 14 12Ox10-9 I I I I

I I I I

M e l a z a 14 875~10~9 I I I I

I

Sacarosa I

I i I

14 11Ox10^8 I I I

526- Conclusiones

Varios autores han demostrado la importancia de la fuente de carbono sobre la conidiogenesis de hongos f ilamentosos (Vezina y co11965 Martinelli1976) en este estudio se pudo observar que cada cepa tiene caracteristicas fisiolcjgicas de esporulacidn propias con respecto al tipo de fuente de carbono que se le proporcione Para este caso en especial la cepa de Aniper esporuld mejor en Harina de Yuca A termus en M e l a z a B m i a m en Harinri de Trigo y T harzinnum en Harina de Yuca

------Esttuiaa - - h - - i s o s (lE5) han demostrado que la concentracidn de Nieeno prwente en el mampio de cup170 ejerce una influencia directa en el nuacutemero de conidiosporas producidas por Thurzjmm par 10 que era necesario seleccionar la relacioacuten CN oacuteptima para cada cepa y para cada sustrato

la composicioacuten de l o s medios de cultivo utilizados para llevar a cabo este estudio estb presentados en las tablas I 11 I11 y IV Se utilizaron 4 diferentes relaciones CN estas fueron de 101424 y 40 empleanda UM mezcla de 23 panes de Sulfato de Amonio y 13 parte de h a toanando- 128 g de carbono como base de caacutelculo y tiempos de incubacioacuten de 7 y 14 dias l o s experimentos se realizaron en matraces de 250 ml

Ln relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despueacutes de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Anigw son mostrados en la tabla X

h datos obtenidos para Aniger nos indican que cuardo se emplea Harina de Yuca en concentracich de 40 gl y la reiaci6n CN estaacute entre 10 y 40 no es un factor determinante en la conidiogeacutenesis ya que esporula de rnanera similar entre estos r a n g o s para l o s medio a base de Harina de Trigo la CN entre 40 y 24 es donde mejm esporulacidn se obtiene

r 5 3 2 - A s m i l ~ s t

h relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de espomlaci6n obtenidos aespuk de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Rtemxs son mostradrx en la tabla XI

Lns medios de cultivo con 14 dias de incubacidn presentan el mayor ntUnero de conidiospwas a una relaci6n CN de 14 con excepcih de l o s medios con Sacarosa que mostramn en todos l o s cc~sos un compm-tamiento muy pobre con respecto al n h de conidias producidas Los mejores Ie se log-amn con Harina de Yuca y M e l a z a con una relacidn CN de-14 para 14 dias de incubacidn

Lo relaci6n que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despuds de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para B b s s i a n a son mostrados en la tabla XII

b Ie logrados para B b n s s i m e son muy similares entre si es decir no cambian significativamente l o s Ie para l o s cultivos con 14 dias de inmbacidn son bastante altos siendo el medio de cultivo con una relaci6n CN de 14 y Melaza como fuente de carbono ei queposee el mejor Ie con un tiempo de incuhcidn de 14 dias BI esta cepa se ve su capacidad de adaptacioacuten con respecto a l a s anteriores para crecer en Sackrosa

~ r

27 534- Psnicilliue sp

kiaeiampi que exiate entre 1- necG~-edt-~vcv - y h rendimientos de esparulaciOacutentilde-6btenidos despds de 7 -_Fl4 dias de cultivo en matraces para FbnciIlium sp son mostrados en la tabla XILI

_

La relacidn CN entre 10 y40 no tiene una influencia directa en la conidioghnesis de esta cepa sin embargo se dbeewa una tendencia a la disminucioacuten del N de conidiospcwas producidas en los cultivos con 14 dias de incubacih Los mayores Ie se lcgrarcm con los medios de cultivo a bnse de Harina de Yuca y Harina de Trigo

La relaci6n que existe entre la composiciiquestn quiacutemica del medio de cultivo y l a s rendimientos de esporulaci6n obtenidos desples de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Thurzzanum son mostrados en la tabla XIV

Las resultados obtenidos 1x1s mestran unatendencia hacia la obtencioacuten del m y m Ie en rangos de CN de 10 a 14 y estudios hechos par Raussos (1985) sohre el efecto de la concentraci6n de Nitriquestgeno en la oanidiogdnesis de Thaniunum pnmporcionaron una CN optima de 14 utilizando Harina de Yuca corno fuente de curbno

Sin embxqo pura una CN de 3253 obtiene un Ie para 7 dias --de incubacidn de Q16x1On9 cmparando este resultado con el resultado obtenido en mi estudio encuentro que a una CN de 40 para 7 diQs de incubacibn tengo un Ie de 132xlO-9 esto es 13 veces mamp por lo que es dificil comparar estos datos en l o s resultados obtenidos se obsewa una tendencia para los cultivos con 14 dias de incubacidn de disminuir el Ie confarme aumenta la relacidn CN y para l a s cultivos con 7 dias se observn lo contrario Los Ie mus altos se logran con l o s medios de cultivo a base de Harinu de Yuca y Melaza

536- Conclusiones

Las cepas estudiadas eSp0IWlUn dependiendo del tipo de fuente de carbono la fuente de carbono y su naturaleza tiene m infiuencia directa en la conidiogeacutenesis de l o s hongos f ilamentosos que la concentracioacuten de nitrdgeno sin embargo es recamendable la adlcidn ae nitdgeno entre l o s rargos de CN de 10 a 4 0

Para disminuir l o s costos de pmduccioacuten de conidiosporas hay que optimizar los medics de cultivo nacer la seleccioacuten de una h e m fuente de carbono para cada cepa y trhjar en rangos de CN de 14 a 4 0

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
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                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
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I

Con todo mi a mis padres Lucila y Vicente por todo lo que significan para mi

gradezco profundnmente a 1 D r Svastianos Raussos asesor de este t r a h jo par su gran ayuda y consejos y por su invaluable amistad

A mis amigos que han sido un apoyo en mi camino

A mis familiares que de alguna manera realizamr esfuerzos y sacrificios para l o g r a r de mi un verdadero profesionista

A Argeles Willy y Laura par sus opartunos consejos y valiasos caaaentarios

A la Universidad Autiquest- Metropolitana

A todos gracias

c

INDICE

Pagina

1 I r n C C I r n GIJEFK 1

11 ANAZISIS BI8LIWIZ 3

21 Fisiologia de crecimiento 3 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento 4

22 Fisiologia de espomlacion 5 23 Prduccion de espor as 6 24 Usos de l a s espor as 6

111 9mIVB 8

VI MrnIAL Y m 9

41 Microoqmi smos

42 M e d i o s de cultivo 9 421 Medios de conservation 9 422 Medios de esprulacion 9

a) Falacion de los medi os 9

43 Condiciones de cultivo 9 431 Inoculacion 9 432 Q-ecimiento y espomlacion 10

44 Yetodos FE lo procluc~cion ae esparos 10 44 i KE-waces Erlen k y e r de 25C mi 10 442 Fe-mentaaor de disc os 1C

a) Descripcion del fermentad or lG b) fixiorzmiento y uso 1C

45 Cceecha y cuenta de espr as 11

v mm Y DImldW 16 w w

51 Descripcioacuten morfoldgica del sistema de reproduccioacuten 16 511 Ani ger 16 512 At errstls 17 513 B h t s s i a m 10 514 Fenicillium sp 19 515 T h a n i anum 20 516 Conclusiones 21

52 Seleccioacuten de la fuente de carbono 22 521 A n i p 22 522 Aterrrstts 23 523 3htssiana 24 524 Penici1lium sp 24 525 Thami anum 24 526 Conclusiones 25

53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN 26 531 Ani gw 26 532 At erreus 26 533 B h s s i m 26 534 Pencillium sp 27 533 T h a m i anum 27 536 Conclusiones 27

54 Cineacuteticas de p-oduccioacuten de canidiosporas en esporulador de discos 33 541 Ani gar 33 542 Atam~= 33 543 Bh=ssiana B 544 Penici1lirmr sp 34 545 Thnnianum 34 546 Conclusiones 37

55 Prducciiquestn comparada de conidimporas en fermentador matraz 38

56 Recopilrsquoacioacuten de conciiciones Oacutep~lsquoimas de esporulacioacuten

VI mzus10m GElmWs 45

111 mwm4 46

-I 11 ~ BiFllrnIA 47

1 - 1mccCIm m Recientemente se ha dado un gran intereacutes en el desarrollo de

fermentaciones en medio soacutelido para la produccidn de alimentos enriquecidos con proteiacutena microbiana a partir de sustratos amilaceos (Raimbault 19801 detoxificacioacuten de p u i p a de cafe (Aquiahuati y col 19871 produccioacuten de enzimas celulasas (Raussosl985) asi cogpo de diversos metabolitos secwdarios tales carno aflataxinas antibioacuteticos (Eiawios 1987) Btos procesos implican el crecimiento de hongos f i l a m e n t o s o s sobre susCaatos soacutelidos le inoculacioacuten de estos sustratos requiere de una gran cantidad de esparas

las esporas de hongas filament- son la fonna ae resistencia y reprcduccioacuten de estos mirroarganismos y constituyen el punto de inicio de l o s procesas de fermentacioacuten en medio soacuteliao dado que se requiere de unu inoculacioacuten masiva y homogenea en el medio de cultivo y bajo ciertas condiciones puedan llevarse a cabo l a s transformaciones de bioconversioacuten deseables Por io tanto se necesita disponer de cantidades importantes de esporas (Raussos 19B51

El nuacutemero de esparas producidas por UT hongo filanentoso es principalmente funcioacuten de la composicioacuten del medio de cultivo tal como se reporta pura Aspryil Ius n i d u l m que cuando se cambia la naturaleza o la cantidad de la fuente ae carbono o de nieeno del medio de cultivo optimizado se observa ma disminucidnde la produccioacuten de esporas de este hongo filamentoso [Martimlli 1976

tos hongos filamentosos Aniger Atemetls Ebss iam Fenicillim sp y Thamianum se clasifican aentro ae l o s hongos imwrfectos o aeuteroanicetos ya que no se les conoce reproduccih s e d 1 (Alexopoulos 1962)

El intereacutes de estudiar estos cuatro homos filumentosos radica en lo siguiente

A n i m posamp la capacidad de -air amilasas dependiencio de l a s condiciones de cuitivo debido a esta caracteristica la utilizacidr de Ari-aar para mmx-Jtar e conteniac proteico de la yuca (Raimbauit 1980 tlene relevante imponancia aaemb prcduce pectinasas

A t m m tiene la capacidad de desnncoliawse s o b e 1~ celulosa microcristalina lo que ie permite apmvecna- el bagam de la cantildea de m c a r (Brizuela et al 1987) ademamp elabma sui=stancies antiiacterianas ae toxicidaci variabie (flavipinas terreina citrina emim etc)(bttm etal 1985)

$ lt- 46

I u v

- -

B m i a m El geacutenero comprende S c 4 especies snpdf itas o paraacutesitcs de insectos entre los que se enmen-wa B h z s s i m la c u a l parasita art6pteros como Melanoplus smvinipes (Mercardier y Khachataurians 1987) contra coieoacutepteros tales como b p t i m t a r s a ecernilineata (Hajek etmal 1987) Anartis sahlifara Apim rchari Nisotra arbiculata Desmidopkms hebes Chilo onellus (Padit y Sam 1988)

Amicillium sp la imprtancia de este hongo es sobre todo en la industria lactea de antibioacuteticos y recientemente para la detoxificacioacuten de la p u l p a de cafe (Aquiahuatl y col 1988)

T harzianum Las especies de3 genero Zl-i~~nna sor frecuentemente empleadas en los p-ocesos de hidrdlisis de le celulosa Estos horgcs pmducen cantidades importantes de exoenzimas capaces de hidmlisar completamente la celuiosa en glucosa (Raussos 1981) Ademaacutes la cepa de T hruzianum fue utilizada con eacutexito para el enriquecimiento en pteinas de la harina de yuca por fermentacioacuten en medio liacutequido (Muindi y Hanssen 1981)

Otra caracteriacutestica impartante es que T harziunum es un antagonista micrdbiano poderoso Olivjer y Germain (1983) demostraron claramente que T viride y T hnrzimurc producen UM

tales como Botrytis c i m lampizoctonin solunipetc - inhibicioacuten en ciertns fases aei desarrollo de hongos fitopatoacutegenos

3

21 F ISIWIA DE CRD2IMW

Lx horgos filamentaeos m microoapnnismos eucaribticos quimiarganotrdficog estrictamente aarbbios y se repmducen de manara natural por medio de conidicepmas

La clasificacih de los horgoe esth basaamp principalmente en las caracterlsticaa de las agpcrras e e x u a l e e y de l o e cuarpos fructZfaroe presentes durante l o s estadlos s e x u a l e s de w1 ciclo biolbgico Loe hangoe con un estado e e x u a l conocido em denaninan h v perfectos Sin embaryo rmuchcs h o w eo10 producen eapcrras s e x u a l e s y cue- fructlf imx bajo ciertas corwiiciones exprimentales m y precisas si ea que las pmducen

Asi pues todavila no 8e conocen l o s ciclos biolQicos cunpleto8 con l o s estadroe sexuales ccmpletoe de muchos hongog Para estos hongos ein estadbs sexuales conocidos les conoce como how imperfectas (Talbot 1978)

La vida de un hongo imperfecto 8e divide en CUEltro etapas fisiolbgiacutecas impctantes que son la latencia la germinacibn la marltiplicacitm vegetativa y la conidiogbnesis (Rcrussosl985) - P

La conidioapora de un hongo f i lamentoso e8 una parte altamente espetcializada de mproduccibn Bupewivencia y dierparsibn ncamalmente delimitadas de iexclas muchas partes de l o s hongos y caracterizada por un metabolismo minim bajo conteniao de agua y carece da movimiento IcitoplasmCttim Aparte de m obvio p a p e l ecolbgico en la naturaleza l a s conidiosporas son usah en el laboratorio colpa irdculo en la pmduccibn de biomass para egtcperimentos o pmcm industriales y mhs recientemente para real izar directamente transformaciones qulmicas especff icas (Vezina y Sing 1975)

La conidiospwa esta en latencia cuando no gemina ampampa latencia pede ser de dos tipos constitucional o exQena

Con respecto Q la latencia constitucional la conidiospara puede IX) genninar aunque se encuentre bajo condiciones ambientales ade- pem primero requiere un proceso de activacibn para vencer una propiedad inata en el estado latente el cual pede ser una bancera pura la penetracibn de nutrientes una dDstruccih metab3lica o una auto-irhibiciamp~

Por otra parte en la latencia exwena la conidiospra es inactiva porque hay cordiciones ambientalee aesfavaruhles qulmicas yo flsicas y Pplede rapidamente reanudar m d e m l lo en un medio ambiente favorable E T 1 este tipc de

4

latencia la ganninacitm es contmlmamp p o r la necesidad esencial fact de- ampg2--r io - 2

Charamp todas la6 barreras de latencia han sido removidas la amidiospara normalmente requiere de niveles de temperatura de humedad favorable8 y ademhe de ciertas subetancias en el medio ambiente para canenzar el proceeo de germinacibn DespUes del inicio de esta nueva fase de genninacidn aparece la reepiracibn aardbica que 88 un requerimiento m 1 para todas las espocras Alguna8 canidiasparaa pueden exigir ademhs de estos factores un requerimiento de CDZ la mayor3a de las esporas requiere de una fuente externa de carbohidratos para germins aigunas otras pceeen adecuadamente res~nms oryhicas pero tienen la necesidad solamente del agua (Smith 1978)

BJ 1- siguientes gheros de hongos filamentosos que ee estuiian en este trabajo c u m Aspargillus Beauveria Axicillim sp y Zl-ichoderrpa (hongos imperfectos) las conidiosporas repmeentan la fama de reproduccibn a s e x u a l La definicibn que Sussman (1965) ha dado de l a s conidiceporas es la siguiente Todo perPodo de vida lento o intarrupcih reversible de desarrollo del cuyaniemo la caracterhtica fundamental de la oonidiospaota es que hay un irdividuo en potencialidad esta potencialidad esta reportada en el tiempo de latencia

211 Las etapas fieiologicas de crecimiento

a) La geminacih de mnidiospmas

La genninacidn es la suma de l o s procesce y de los cambios que intervienen en la recuperacibn del desarrollo de la fanm en la latencia y en la transformacibn de una estructura diferente (Allen1965) EB decir tambian el -pocimer estad30 imvemible que es abservado cano una diferencia del organismo en latencia el juicio pede ser formado soh l o s criterios morfoltrgicos citol6gicos fisiolbgicce o bioqulmicos (Sussman 1975)

b) La multiplicacibn vegetativa

Esta etapa romprende en realidad varias partes ia mamps importante corresponde a la fase de multiplicacibn de tipo exponencia1 del micelio cuando estamp desarrollado en nume- ramificaciones y extremos a UM pmduccibn de biomasa IRoyssos 1985) c) La conidiwhesis

La conidicghesis consiste en UM sucesiEcl de eventos internos en la dlula micelial (proliferacib del retlculo endoplasmdtico de vacuolas y nkleos) que temira en la iontacibn de conidiosporas la produccibn y

I

x - 2 L - - A ~

d

liberncibn de estas (Imrpent 1972 Fewe eco111975 De hecho la conidiogbesis de hongos filmentosos es un proceso muy ample jo

22 FIS1OLLXIA E EsFcrRuLACION

La conidioghesis es una etapa fisioltgiccr muy importante para l o s horgos imperfectos eta etapa comesponde a la fonnacibn

y liberacih de conidiosporas

El coanplejo proceso de esparulacibn en la conidioghesis pede ser visto cano la integracibn de algunos eventos biolbgicos La habilidad para cambiar de una fonnn de desarrollo filamentoso vegetativo a UM fonne ae espora reproductiva y generalmente esfGrica es el resultado final de un metdbolismo que responde a cambios fisicoqufmicos especlficos del medio ambiente (pH CO O Z temperatura humedad o la aparicibn de al- metabolito secundario) l o s cuales ejercen cambios en los estTmulos internos que regulan la actividad celular

Es hitido que el desencadenamiento de la esporulacibn es inducido por un factor limitate que desaparece en el medio de cultivo durante el crecimiento del hoqo La naturaieza de este factor es muy variable Se supone que el agotamiento de la fuente de carbono-o de nitrbgeno es generalmente el factor limitante Sin embaqo no deben olvidarse ios demas factores fisicoqulmicos untes mencionados

Un desancollo n o r m a 1 de micelio y una tuena conidiog6nesis son l a s condiciones previas G m produccibn imporLante ae midiosporas (Rcysscs 1985 El nilmero ae conidiosporas producidas por un hongo filamentoso es principalmente funcibn de la cantidad de la fuente de carbono y de nitriquestgeno presente en el medio de cultivo

El efecto de induccibn-inhibicibn de la conidicgbesis de Aniger fua puesto en evidencia por Gnlbraith y S m i t h (1969) De la misma manera la irduccidn del riiLmo endbgeno de esporulacibn de Aniger es influenciaamp por la relacibr glucosapotusio y por l o s oligoelementos presentes en el nedicl de cultivo (Jerebzoff eta11976)

En los medios de cultivc las sales Icineraies a urle concentacibn elevada podrlan tener los efectos opuestas sobre el crecimiento y la conidioghesis de homos f i l m e n t o s o s (Girdruth 1977 Slayan y Tatm 1954 Lilly L9euro51 De a misna manera la aereacibn y la humedad poseer una influencia en la pduccibn cuantitativa de coniaiwpras ae P m p e f w t i (Maheva et col 1984)

T

___ ~ ~~ - ~- ~ ~ ~ -~

deben ser definidas para a especie h e 5 un medio amp4cultivo optimizado para la produccibn de conidiwporns de una especie puede no ser adecuado para alguna otra (Vezim y co11965)

23 PRclDuccION DE E S O R A S

Diferentes tecnicas sa conocidas para la produccibn masiva de esparas La mds antigua consiste en cultivar el mirrocqganismo sobre una superficie en UT ampio de cultivo con agar ya sea en cajas de Petri a nivel labratorio o en btellns Rolux para fines prticticcs Osta tecnica presenta graves problemas de recoleccibn y la manipuiacibn de u n h e m importante de frasccs ademas se debe llevar a cabo bajc asepsia canpleta

Se ha mostrado la posibilidad de producir esporas en cultivo llquido utilizardo fermentadores esterilizables y extrapolables a nivel industrial (Bmderic eta11982)

Se h a n hecho estudios para producir esporas utilizando sustratos nmilaceos en ferntadores de lecho fijo (Maheva y col 19841 y mediante el uso de charolas en l a s cuales se coloca el sustrato en capas y se pone en una estufa de incubacibn (Vezina 1975) y ~ s o b r e pan de cebamp para producir esporas de Penicillium laucun en la elaboracibn de quesos (Nougaret 19821 ~

p Ultimamente se ha desarrdllado un proceso de cultivo en

superficie sobe un medio amplido utilizando un fermentador de discos rotatorios el c u a l ha dado henos resultados pero no puede ser escalado a un nive mayor (RaimLault y Raussos 1985)

Se ha desarrollado tam5i8n otrc amptodo de pmduccibn de espus solre soporte amplido esto es con la utilizacibn de bagazo de camp (Roussos y coldboradores 1988 certificado de invencibn)

2 4 irsos DE LAS EspoRAs

Eb la produccibn industrial de productos derivados de las fementaciones con hongos filmentosos la inoculacibn de los sustratos requiere de una gran cantidad de conidiosporcs ya que constituyen el punto de inicio de estos procesos de fernentacidn

La importancia de l o s cinco hongos fitmentosos estudiados radica en lo siguiente

~ p ~ ~ ~ l ~ nigerhiunenta el contenido pmteicc de le yucs (hinhult 1980) ademris de poseer actividad pectinolltica

ASprgiIlus te-mm p e e actividad p - a e aprovechamiento de la cantildea de azucar (Brizuela 1987) ademamp elaboran dos substancias antihcteriens de toxicidad variabie (flakripinas citrirn] (Bottm etai965)

7 _

- - ~ ~ ~ - ~~ -- - - i -

B s a u w i a bassima es parbita de insectos por lo qua ayuda en lucha biol6gica adema de producir enzimas como quitiMeas y 1 ipaears

micjllirm sp egta 0CPa posee una alticapacidad ampa e la cafeina de la pllpa de cafe esto rice penuite eliminar uno de lo s principales toxicos en la pulpa y de esta manera disminuir la contaminacion que produce y emplearla para alimentacion animal

2)-ickdema hurzidoum es un pl0dUctor de celulasas y ayuda en lucha biol6gica ya que m la propiedad de em- un antagonista poderaeo con respecto a un cierto rimero de hongos fitoputiquestgeme

( R o w e o s 19851

- _I__I k -

--

l- probar el efecto del tipo de la fuente de carbono en la

empleados en l o s procesos de fermentacioacuten dlida I produccioacuten masiva de midiosporas de l o s p-incipales horqcs

2- Probar el efecto combinado del tipo de la fuente de carbm y la relacioacuten CN en la produccioacuten masiva ae amidiosporas

3- Llevar a cabo la produccioacuten rnasiv de conidiospwas en un fermentador de discos rotatorios de 2 i

9

IDS micmotyanismas estudiados en este t r a j o fueron P s P w g i I I u s n i p ORSIUH NlO A s p e r g i l I u s t m u s cepa del ICIDCA (Instituto cubano para la Investigacioacuten de l o s Derivados de la Cantildea de Azucur) B e a u w i d hssiann cepa d e l ICIDCA Fanicillium sp cepa de la uA y Zkichoderma harzianum CCM F470 (Czechoslovak Collection of Microorganisms) ampliamente descrita por Rcwsg~os (1985)

4 2 MEDIOS DE CULTIVO

4 2 l Medios de comervaciOacuten

las cepas de Aniger A tanclrsus Fenicillium sp y Tharzianum son resembradas en un medio de PDA (papa- dextrasa-agar) y la cepa de B a i u n u es resenbada en PDA con 05 de extracto de levadura cada 6 meses e incubadas durante 7 dias a 29C para despueacutes ser conservadas en refrigeracioacuten durante 6

- meses apracimadamente ~ ~

4 2 2 Medios de esparulacidn

Se probaran l a s siguientes fuentes de cwbmHarina de Yuca Harina de P i g o M e l a z a y Sacarosa con relacioacuten CN de 10 14 24 Y 4 0

a) FmlaciOacuten de los medios

i

t

Lxw medios de cultivo utilizados para la produccioacuten de conidiospwas de Aniger A terreus Bampiana Amicillium p y Thamianum se muestran en l a s tablas I 11 I11 y IV

43 CONDICIONB DE CULTIVO

4 3 1 Inoculacioacuten

El medio de cultivo se inocula en masa este modo de inoculacioacuten consiste en mantener a 40C el medio de cultivo para posteriannente agregar uryt suspensidn de conidiospm-as de concentracioacuten conocida (2 x lo7 esporaWgr de sustrato) El ampio inoculado se agita para obtener una disiribucioacuten hamogenea en el cam ae maeaces Nand0 se utiiiza el fermentaamp de discos se pone en funcionamiento el sistema rotatwio para que SS distribuya el medio de cultivo inocuiaao en l o s discos de forma hmcqenea

F

432 Crecimiento--yespwulacion - - - -

Los cultivos se incuban a temperatura de laboratorio de 18 a 23C durante 7 y 14 dias Al fermentada- de discos se le suministra un flujo de aire estdril con un gasto de 4 lhr durante el periacuteodo de incubncioacuten

44 MEXDO PARA LA F9OJXJEION DE CONIDICSRXA5

Se conocen divemos amptodos para la pmducci6n de conidiosporas nosotras utilizaremos mntraces Erlen Meyer de 250 m1 y Fermentazdares de Discos

441 Matraces Erlen Heyer de 250 ml

El medio de cultivo se reparte en matraces Erlen Meyer de 250 m1 a rampn de 20 m1 par matraz y se obtura con un tapamp de algodoacuten se esteriliza en autoclave a 121C durante 20 min

442 Fermentada- de discos

El esquema del fermentada- de discos rotutorios utilizado se muestra en fmma detallada en la figura 1 El fermentador conteniendo300 m1 de medio de cultivo se esteriliza en autoclave a 121C por 45 min

-

e

a) Descripcioacuten del fermentada-

El fermentador de discos que se presenta en la fig 1 esta fannado por una cuba de vidrio la c u a l tiene una entrada y una salida en la parte superiorde la cuke se coloca una platina que tiene dos entradas una para realizar la inoculacioacuten del medio de cultivo y otra para airear esta platina sostiene un eje en el centro satre el eje se colocan 11 pares de discos formados por 2 m a l l a s de acero inoxidable de 2 mm de espesor y tamantildeo de malla de 4 mm c m un diaacutemetro de 10 c m y separados cuda par por 10 mm con unas rondanas especiales de acero inoxidable en el extremo inferior del eje se coloca una abrazadera la c u a l ejece presioacuten s e e l o s discos y con esto se mantienen fijos el total de 22 discos nos proporciona una superficie uacutetii de 172787 cm2 en la parte superior del eje se localiza un T la omi nos pemitlra colocar un motor y con esto hacer girar los disc-

b) Fimcionamiento y uso

El funcionamiento del fementaaor ae discos es de la siguiente manera LKB vez que se ha agregado e medic de cultivo y se ha esterilizado se coloca a un rotor de marera harizontal lo que nos permitiraacute mantener a l o s discos inmerso= en el medio ae cultivo y de esta forma una vezque se va enfrianio se adhiera a ellos el medic de cultivo se i m l a cunni0 se sncuentra en un promedio de

11

I ~

tempertura de 30 y 35CYTbl medio aun se encuentra licfuido) y asi poder tener una distriMciOacuten hanogenea de l a s esparas en el medio de cultivo (inoculacioacuten en masa) Una vez que el medio de cultivo se ha impregnado a l o s diecog el farmentador puede ser colocado de manera vertical en un l u g = adecuado

__ - - - - -

45 COSECHA Y CxlENrA DE EspoRAs

a) Para l o s cultivos en matraces se agmgu a cada uno 100 m1 de agua destilada estkil adicionada de Tbreen 80 (01) y se hunogeniza mediante agitacih magrktica

b) Para l o s cultivos en fementadares de discos 58 introduce al fermentadar 300 m1 de agua desti lada estampil adicionada de Tween 80 (01) y se mantienen los discos en rotaci6n durante 10 min

El conteo de l a s mas 88 realiza mediante el uso de kas de Malassez con suspensiones convenientemente diluidas y aplicando la siguiente f b l a

A + B + CJ = X 10 = N

A + B + C J = cuenta total de esporas en 10 cuhdros de la celda - x N - mimero de espmas pranedio

1D = factor de dilucioacuten 3

t

1 -Cuva

2 - P l a r i n a

3-Eje

4 -Disc05

5 - E n t rad2 zuper i or de l a cuva

6 - Sal ida i n f e r i o r d e l a cuva

- - Tapon d e entrada y s a l ida

r - 12

-

Medio I I I 3 I 4 I

I I 1 I I I I I Harim de I I I I

Yuca 4 0 4 0 4 0 I 4

I I I

Cgl) 1 1 I 2

I

I I I I I I

I I I I I I

(NH4)2904 402 287 167 100 I I I I

I 1 I I I

Urea 091 065 038 022

cac12 1 1 1 1 1 I 1 I

I I I I I I

I I I I

1 I 1 I I I

I ~~~ ~ ~ ~

I I I I

K H 2 p o 9 2 I 2 I 2 I 2 I I I I t I

I I I - I I I

Ag8r 15 15 I 15 I 15 I I I I 1 I I

I I I I I Agua (ml) loo0 1000 1000 1000

I I I I I

1 I I I I

I CN 10 I 14 I 24 I 40 I

I I I I I

I I I 1 I I

1 pH 56 56 156 56

I I I I I 1

Medio I I I I

Harim de I I I I

Trigo 5714 5714 5714 5714

(gl) I 1 1 2 I 3 I 4 I I I I I

I I I I I I

I I I I I 1

I I I I I I

(NH4)ZSX 402 287 167 100 I I I I I I

I I I I I I

u r e a 091 065 038 (322 I I I I I 1

1 I I I I I ~~ ~~ ~~~

I cac12 1 I 1 I 1 I 1 I

I I

~ I - s 2 I 2 I 2 I 2 I

e I I I I I

J q a r 15 15 I 15 I 15 I

I I

I I I I I I

I 1 I I I I

I I I I I

I I I I I I

Agua (m11 loo0 1000 1000 1000 I I 1 I I I

I I I I I I

I pH 56 56 56 56 I I I I I I

1 I I I I I

I cm 10 I 14 I 24 I 40 I I I I I I I

r

t

14

c

C_ de l o s medios S a m a camo

r

de cultivo para fuente de carbono

Hedio I I I I

(gl) 1 2 3 I 4 I

I I I I I I I I

I I

I I I I I

SaculmBa 3040 3 0 4 0 3040 3040 I I

I I

~ N l i 4 ) 2 S X 402 287 167 100 I I I

I I

1 I 1 I 1 I

I

I 2 I 2 I 2 I I I I

95

I I

I I

I I

I I

I I I I

urea 091 065 038 022 I I I

I I I I I I

cac12 1 m 2

I I I

I I I I

I I I

I I

Agar I 15 15 I 15 I I

I I I I I

Agua (m11 1000 1000 1000 1000 I I I I I I

56 56 56

L -

I I I

I I I I I

I pH 56

cN 10 14 24 4 0

I I I I I I

I I

I I

I I

I I

I I

I

r

Hedio

I I I

I I I I

(gl) 1

I I

I 2 I 3 4 I

I I

I I

I I I I I

M e l a z a 5470 5470 5470 5470 I I I I I I I (W)2S34 402 287 167 1-00 I I I I I I

I I I

I Urea 091 065 038 022 I I I

cac12 I 1 1 1 1 1 1

I

I I I

I

I

I I I

I I I I I

I I 1 I I I

m 2 I I I I

Agar 15 15

I 2 I 2 I 2 I

I

I I

e

I I I I

I 15 I 15 I

I -

I I

I I 1 I I I

Agw (m11 loo0 1000 1000 1000 1 I t I I

I I I p H 56 56 56 56 I I I I

CN 10 1 I 14 I 24 4 0 I I I I I I

I I I I I I

511- AsparYillus n i p -

de 3 dias aparecen farmas especializadas de reploduccian asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este se desarrolla UM vesicula y sobre la vesicula se

conidicsporas Estas conidospwas presentan un color cafe obscuro y n e g r o son gldbulares ornamentadas con un diumetro aproximado de 35 a 5 m La colonia cambia al c o l o r negro del centro B los ext remos

El micelio de este horgo es septa30 y de color blanco despues

desarrollan lae f ialides de las cuales se farmaran l a s

LA estructura de la fama de repruduccion se p-esenta en la figura 2

ru LA 7 V E S I CULA

ESTI P E

ELULA P O D A L

Figura 2 - Conidioforas y conidias de Aniger

El micelio de este h q o e8 septado de color blanco depea de 3 dias aparecen fonoas especializades de repmduccion asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este crecen fialides y de l a s fialides se forman las conidiosparas y presenta exudados ambarinoe Eetas conidiceparas presentan un color amarillo l a s conidiceporas son lisas glokulares con un diametro aproximado de 15 - 25 m

Figura 3 la estructura de la f a r m a de reproduction presenta en la

FIA

Figura 3- Conidioforos y coniaias de X t e

Este hongo presenta un micelio atercipelado y coposo inicialmente blanco presenta un raacutenquis genicula denticulado o en zigzag posteriarmente se tans amarillento Posee conidias hialinas y gldlxllams can un diaacutemetro aproximado de 15 a 3ym La estructura se presenta en la Figura 4

RANQU I S

c

Figura 4 - ConidiOacutefaros y conidias de E h s s i e n o

m cepa se ha identificado corno Penicillium W f a r t i i presenta un micelio septado con produccioacuten de micelio vegetativo aerial d e y e e de un tiempo aparecen estructurns especializadas de repocoduccion a s e x u a l Se presenta un estipe m e n t a d o unas brancpeas meacutetulas f M i d e s y conidias Elstas conidiosporas presentan un colap- verduzco son globdares y lisas con un dibtro apmximado de 4 a 6p Lae conidias son producidas en cadenas cortas La estructura se presenta en la Figura 5

C O N l D l A S

1 O r r m

Figura 5- Conidioacuteforos y coniaias de Fenicilliun

Al inicio este h q o presenta un micelio blanco pterionnente aprecen farmas especializadas de reproduccion asexual fialidee y conidicepuras I m conidiofaros se presentan en farmas piramidalee y en estos sistemas las fialidee Be localizan en g r u ~ w de dos a cuatro Las conidia3 Bon de color verde olivo son de superficie lisas subglobulares con un diametm apmximado de 2 a 3 m

La egtructura de la fcwma de reproduccion se presenta en la figura 6

Las colonias de Thnnianum en FDA se caracterizan pol tener un color verde con circulos concentricos Hay que mencionar que las colanias pmducen un olor a coco (coconut) muy caracteristico

CONlDl

Figura 6 - Conidioforos y conidias de Thanianum

516- Conclusiones v 4

_ _

el curse) de este capitulo se describieron los sietemas de reproduccioacuten de las cinco cepas de hongos filamentosos estudiados Todos estos hongos se repaoducen de manera a s e x u a l Se que l a s 5 cepas presentan estructuras muy diferentes a s i co~po diversos colores en l o s estadios de crecimiento vegetativo y ccmidiogdnesie ademds presentan conidimporas glohlares de muy diversos tamafios

c

093039 t

2 2

- La composicioacuten de l o s diferentes meampicsde cultvoutQizados pera llevar a cabo este estudio fueron medio N 2 de l a s tablas I 11111 y IV y se establecioacute prabay las diferentes fuentes de carbno (Harina de Yuca Harina de Pigo M e l a z a y Sacarosa) en matraces a una relaci6n CN de 14 para de esta manera poder observar el efecto que cada una de ell- ejerce solre la conidicgbesis de l o s hongos filamentosos estudiadas L m resultados se reman en l a s tablas V VI VII VI11 y XI y se exp-esan en base al Indice de Bporulacidn (Ie - N de esporas g de sustrato carbonado) para 7 dias de incubacion a temperatura ambiente (15-22C)

~ - -4

La Harim de Yuca es un producto amilaceo que ha demostrado ser un sustrato de gran eficiencia para la produccion de conidiosparas de hongos filamentosos ademds de ser un producto tropical de facil acceso su principal componente es el almidoacuten que corresponde al 80 en materia seca se encuentran en esta Harina pteiacutenas grasas y vitaminas del tipo B y C adamp de fibras y cenizas (Grace 1977)

la Harina de Pigo es otro sustrato amilaceo que se considerd importante utilizar debido a su alta disponibilidad en su canposicioacuten estan presentes pteiacutenas grw calcio f oacute s f m h i m tiamina riboflavina y niacina esto lo hace un sustrato interesante

La M e l a z a es el subproducto final de la fakicacioacuten de azucar es un liquido o b s c u r o denso y viscoso que se separa de la masa cocida de baja-calidad y del cual no se pede cristalizar ampamcar por amptodos mencionales y econoacutemicos en su composicioacuten estdn presentes 1 0 s amcares y otras sustancias entre l a s cuales se pueden citar l o s corapuestos nitrogenados aacutecidos aminoacidos albiminas vitaminas ceras esteroles lipid- sales minerales y cenizas etc (ICIDCA1986) Como se puede ver es un producto muy complejo por lo que puede ser un sustrato muy atractivo para su utilizaci6n como fuente de carbono en ipedios de cultivo pura la espomlaci6n de hongos filamentosos (Brinela 1987)

la s a c m a es un producto de facil adquisicioacuten y de pmduccioacuten idustrial importante por lo que se considem un sustrato atractivo para la produccioacuten de amidiosporas de hongos filamentosos La sacarosa se encuentra fonnada por una molecula de fructosa y una de glucosa l o s medios de cultivo que contienen sacarosa pcdriamos decir que son medios simples en comparacioacuten con la complejidad de la melaza y l a s harinas

521- A n i g ~

Fh la tabla V se muestran l o s Ie obtenidos para Anigerutilizardo l a s 4 fuentes de carbono antes mencionadas El mayor Ie se alcanzoacute en el medio de cultivo con k i n a de Yuca seguido de la M e l a z a la k i n a de Pigo y por Gltimo la Sacarosa se ha demostrado que durante el proceso de esterilizacioacuten la Harina de Yuca sufre un tratamiento teacutermico que hace que las moleacuteculas de almidh pasen cie una forma cristalina a un estado amdrfo (gelatinizacion) y que Ani_mr es un productm de amilasas (Raimbault 19801 lo que sugiere que la gelatinizacioacuten podriacutea facilitar el ataque enzimdtico y con esto i iberar cantidades importantes de glucosa que favoreced el crecilriiento del hongo lo que normalmente estaacute reiacionado con una produccioacuten importante de conidias

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I

I

I c- 7 DIAS

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 509xl0^9 I I I I

I I 1 I

Harina de Trigo 14 367X1^9 I I I

I I I I

Melaza 14 424x10-9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 16Ox10^8 I I I I

522- d t ~ 1 7 9 ~ ~

Eh la tabla VI se muestran l o s Ie obtenidos para A termus -utiliZando__las 4 fuentes de carbono antes mencionadas El Ie mas alto se encmtroacute en el medio de cultivo con M e l a z a seguido de la Yprina de Yuca y Trigo y por uacuteltimo la Sacarosa d t m u s es utilizado en lo s procesos de aprovechamiento de eubproductos de la industria cantildeera en cuba (meollo y bagazo) (Blanco bpez Villarl968) Esta cepa estaacute adaptada a l o s procesos de la industria cuntildeera de c u b a por lo que se esperariacutea que espurulara mejor en Melaza tal como ocurrioacute

TXBLA VI- Indices de espwulacibn para dtwreus utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa como fuente de carbono para tiempos de incubacidn de 7 dias y relacioacuten CN de 14

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I I I I I I 7 DIAS I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 60x10n9 I I I

Harina de pigo 14 403xlO-9

I I I

1 I I I

I I I I

M e l a z a 14 612xlOA9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 S40~107 1 I I

211

523- Bbassi= 1

Las resulta- 5e rem en la t ~ ~ h ~ f - - - ~ ~ - - ~ ~ e se -obtwo en el medio con Harina de Trigo m i d o de la H a r i n a de Yuca Melnza y Sacarosa Se puede obeervar que 1 0 s Ie amp altos se logran con los sustratos amiluceos que tal vez puedan ser mamp facilmente utilizados por el microoqanimno debido a l - v e s o de gelatinizacioacuten que Wren

524- Penicillium sp

Los resultados se muestran en la tabla VIII Los mayores le se alcanzaron con las Harims de Yuca y Trigo con respecto a los atros dos sustratos Se observoacute una mayor produccioacuten de micelio en los sustratos amilaceos lo que podria justificar la produccibn maacutes alta de conidias

525- Thnmianum

LBS resultados se reportan en la tabla XI Estudios hechos par Raussos (1985) demostraron la capacidad de Thanianum en la produccidn de ami la s a s utilizando almidoacuten cam0 fuente de carbono pesto que la harim de yuca y la harina de trigo son sustratos amilacecs se esperariacutea una produccioacuten impcortante de esporras tal COQLO sucedioacute para la harina de yuca y no asi para la harina de trigo Con respecto a la s a c m a el Ie tan bajo que se obtuvo con relacidn a la melaza pede ser debido a todos los compuestos que se encuentran en las m e l a z a s

c TABLA VI1- Inlices de esparcllacibn para Bhssiana utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo M e i u z a y Sacarosa axno fuente de carbono para tiempos de incubacioacuten de 7 dias y relacion CN de 14

I I I

I I I Ie I

Summ CN I I

1 I I I

I I

1 I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 1 8 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

7 DIAS

Harina de Pigo 14 702~10~9 I I I I

I I I

Melaza 14 217~10~9 I I I I

I I I I

Sacarosa i 14 8 5 8 ~ 1 0 ~ 6 I I I I

r

I I

I Ie 1

I Summ CN I

I 1 i I

I I 7 DIAS

I I I I

I 1 I I

Harina de Yuca 14 142x10^10 I I I I

I I I I

Harina de Pigo 14 832xlO-9 1 1 I I

I I I I

M e l a z a 14 293~10~9

I I I

Sacarosa 14 103x10n9

I I I I

I I I I

m IX-Indices de espauulacian para Thamianum utilizando Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa corno fuente de carbono para tiapos de incubacich de 7 dim y relacioacuten CN de 14

I I I I

I -

1 I Ie I

I Summ CN I

I I 7 D I A S t I I I

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 11ox1On1O I I I I

I I I I

Harina de Trigo 14 12Ox10-9 I I I I

I I I I

M e l a z a 14 875~10~9 I I I I

I

Sacarosa I

I i I

14 11Ox10^8 I I I

526- Conclusiones

Varios autores han demostrado la importancia de la fuente de carbono sobre la conidiogenesis de hongos f ilamentosos (Vezina y co11965 Martinelli1976) en este estudio se pudo observar que cada cepa tiene caracteristicas fisiolcjgicas de esporulacidn propias con respecto al tipo de fuente de carbono que se le proporcione Para este caso en especial la cepa de Aniper esporuld mejor en Harina de Yuca A termus en M e l a z a B m i a m en Harinri de Trigo y T harzinnum en Harina de Yuca

------Esttuiaa - - h - - i s o s (lE5) han demostrado que la concentracidn de Nieeno prwente en el mampio de cup170 ejerce una influencia directa en el nuacutemero de conidiosporas producidas por Thurzjmm par 10 que era necesario seleccionar la relacioacuten CN oacuteptima para cada cepa y para cada sustrato

la composicioacuten de l o s medios de cultivo utilizados para llevar a cabo este estudio estb presentados en las tablas I 11 I11 y IV Se utilizaron 4 diferentes relaciones CN estas fueron de 101424 y 40 empleanda UM mezcla de 23 panes de Sulfato de Amonio y 13 parte de h a toanando- 128 g de carbono como base de caacutelculo y tiempos de incubacioacuten de 7 y 14 dias l o s experimentos se realizaron en matraces de 250 ml

Ln relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despueacutes de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Anigw son mostrados en la tabla X

h datos obtenidos para Aniger nos indican que cuardo se emplea Harina de Yuca en concentracich de 40 gl y la reiaci6n CN estaacute entre 10 y 40 no es un factor determinante en la conidiogeacutenesis ya que esporula de rnanera similar entre estos r a n g o s para l o s medio a base de Harina de Trigo la CN entre 40 y 24 es donde mejm esporulacidn se obtiene

r 5 3 2 - A s m i l ~ s t

h relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de espomlaci6n obtenidos aespuk de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Rtemxs son mostradrx en la tabla XI

Lns medios de cultivo con 14 dias de incubacidn presentan el mayor ntUnero de conidiospwas a una relaci6n CN de 14 con excepcih de l o s medios con Sacarosa que mostramn en todos l o s cc~sos un compm-tamiento muy pobre con respecto al n h de conidias producidas Los mejores Ie se log-amn con Harina de Yuca y M e l a z a con una relacidn CN de-14 para 14 dias de incubacidn

Lo relaci6n que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despuds de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para B b s s i a n a son mostrados en la tabla XII

b Ie logrados para B b n s s i m e son muy similares entre si es decir no cambian significativamente l o s Ie para l o s cultivos con 14 dias de inmbacidn son bastante altos siendo el medio de cultivo con una relaci6n CN de 14 y Melaza como fuente de carbono ei queposee el mejor Ie con un tiempo de incuhcidn de 14 dias BI esta cepa se ve su capacidad de adaptacioacuten con respecto a l a s anteriores para crecer en Sackrosa

~ r

27 534- Psnicilliue sp

kiaeiampi que exiate entre 1- necG~-edt-~vcv - y h rendimientos de esparulaciOacutentilde-6btenidos despds de 7 -_Fl4 dias de cultivo en matraces para FbnciIlium sp son mostrados en la tabla XILI

_

La relacidn CN entre 10 y40 no tiene una influencia directa en la conidioghnesis de esta cepa sin embargo se dbeewa una tendencia a la disminucioacuten del N de conidiospcwas producidas en los cultivos con 14 dias de incubacih Los mayores Ie se lcgrarcm con los medios de cultivo a bnse de Harina de Yuca y Harina de Trigo

La relaci6n que existe entre la composiciiquestn quiacutemica del medio de cultivo y l a s rendimientos de esporulaci6n obtenidos desples de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Thurzzanum son mostrados en la tabla XIV

Las resultados obtenidos 1x1s mestran unatendencia hacia la obtencioacuten del m y m Ie en rangos de CN de 10 a 14 y estudios hechos par Raussos (1985) sohre el efecto de la concentraci6n de Nitriquestgeno en la oanidiogdnesis de Thaniunum pnmporcionaron una CN optima de 14 utilizando Harina de Yuca corno fuente de curbno

Sin embxqo pura una CN de 3253 obtiene un Ie para 7 dias --de incubacidn de Q16x1On9 cmparando este resultado con el resultado obtenido en mi estudio encuentro que a una CN de 40 para 7 diQs de incubacibn tengo un Ie de 132xlO-9 esto es 13 veces mamp por lo que es dificil comparar estos datos en l o s resultados obtenidos se obsewa una tendencia para los cultivos con 14 dias de incubacidn de disminuir el Ie confarme aumenta la relacidn CN y para l a s cultivos con 7 dias se observn lo contrario Los Ie mus altos se logran con l o s medios de cultivo a base de Harinu de Yuca y Melaza

536- Conclusiones

Las cepas estudiadas eSp0IWlUn dependiendo del tipo de fuente de carbono la fuente de carbono y su naturaleza tiene m infiuencia directa en la conidiogeacutenesis de l o s hongos f ilamentosos que la concentracioacuten de nitrdgeno sin embargo es recamendable la adlcidn ae nitdgeno entre l o s rargos de CN de 10 a 4 0

Para disminuir l o s costos de pmduccioacuten de conidiosporas hay que optimizar los medics de cultivo nacer la seleccioacuten de una h e m fuente de carbono para cada cepa y trhjar en rangos de CN de 14 a 4 0

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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I t I

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
                                          • -- A
                                          • --
                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
                                          • M
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gradezco profundnmente a 1 D r Svastianos Raussos asesor de este t r a h jo par su gran ayuda y consejos y por su invaluable amistad

A mis amigos que han sido un apoyo en mi camino

A mis familiares que de alguna manera realizamr esfuerzos y sacrificios para l o g r a r de mi un verdadero profesionista

A Argeles Willy y Laura par sus opartunos consejos y valiasos caaaentarios

A la Universidad Autiquest- Metropolitana

A todos gracias

c

INDICE

Pagina

1 I r n C C I r n GIJEFK 1

11 ANAZISIS BI8LIWIZ 3

21 Fisiologia de crecimiento 3 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento 4

22 Fisiologia de espomlacion 5 23 Prduccion de espor as 6 24 Usos de l a s espor as 6

111 9mIVB 8

VI MrnIAL Y m 9

41 Microoqmi smos

42 M e d i o s de cultivo 9 421 Medios de conservation 9 422 Medios de esprulacion 9

a) Falacion de los medi os 9

43 Condiciones de cultivo 9 431 Inoculacion 9 432 Q-ecimiento y espomlacion 10

44 Yetodos FE lo procluc~cion ae esparos 10 44 i KE-waces Erlen k y e r de 25C mi 10 442 Fe-mentaaor de disc os 1C

a) Descripcion del fermentad or lG b) fixiorzmiento y uso 1C

45 Cceecha y cuenta de espr as 11

v mm Y DImldW 16 w w

51 Descripcioacuten morfoldgica del sistema de reproduccioacuten 16 511 Ani ger 16 512 At errstls 17 513 B h t s s i a m 10 514 Fenicillium sp 19 515 T h a n i anum 20 516 Conclusiones 21

52 Seleccioacuten de la fuente de carbono 22 521 A n i p 22 522 Aterrrstts 23 523 3htssiana 24 524 Penici1lium sp 24 525 Thami anum 24 526 Conclusiones 25

53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN 26 531 Ani gw 26 532 At erreus 26 533 B h s s i m 26 534 Pencillium sp 27 533 T h a m i anum 27 536 Conclusiones 27

54 Cineacuteticas de p-oduccioacuten de canidiosporas en esporulador de discos 33 541 Ani gar 33 542 Atam~= 33 543 Bh=ssiana B 544 Penici1lirmr sp 34 545 Thnnianum 34 546 Conclusiones 37

55 Prducciiquestn comparada de conidimporas en fermentador matraz 38

56 Recopilrsquoacioacuten de conciiciones Oacutep~lsquoimas de esporulacioacuten

VI mzus10m GElmWs 45

111 mwm4 46

-I 11 ~ BiFllrnIA 47

1 - 1mccCIm m Recientemente se ha dado un gran intereacutes en el desarrollo de

fermentaciones en medio soacutelido para la produccidn de alimentos enriquecidos con proteiacutena microbiana a partir de sustratos amilaceos (Raimbault 19801 detoxificacioacuten de p u i p a de cafe (Aquiahuati y col 19871 produccioacuten de enzimas celulasas (Raussosl985) asi cogpo de diversos metabolitos secwdarios tales carno aflataxinas antibioacuteticos (Eiawios 1987) Btos procesos implican el crecimiento de hongos f i l a m e n t o s o s sobre susCaatos soacutelidos le inoculacioacuten de estos sustratos requiere de una gran cantidad de esparas

las esporas de hongas filament- son la fonna ae resistencia y reprcduccioacuten de estos mirroarganismos y constituyen el punto de inicio de l o s procesas de fermentacioacuten en medio soacuteliao dado que se requiere de unu inoculacioacuten masiva y homogenea en el medio de cultivo y bajo ciertas condiciones puedan llevarse a cabo l a s transformaciones de bioconversioacuten deseables Por io tanto se necesita disponer de cantidades importantes de esporas (Raussos 19B51

El nuacutemero de esparas producidas por UT hongo filanentoso es principalmente funcioacuten de la composicioacuten del medio de cultivo tal como se reporta pura Aspryil Ius n i d u l m que cuando se cambia la naturaleza o la cantidad de la fuente ae carbono o de nieeno del medio de cultivo optimizado se observa ma disminucidnde la produccioacuten de esporas de este hongo filamentoso [Martimlli 1976

tos hongos filamentosos Aniger Atemetls Ebss iam Fenicillim sp y Thamianum se clasifican aentro ae l o s hongos imwrfectos o aeuteroanicetos ya que no se les conoce reproduccih s e d 1 (Alexopoulos 1962)

El intereacutes de estudiar estos cuatro homos filumentosos radica en lo siguiente

A n i m posamp la capacidad de -air amilasas dependiencio de l a s condiciones de cuitivo debido a esta caracteristica la utilizacidr de Ari-aar para mmx-Jtar e conteniac proteico de la yuca (Raimbauit 1980 tlene relevante imponancia aaemb prcduce pectinasas

A t m m tiene la capacidad de desnncoliawse s o b e 1~ celulosa microcristalina lo que ie permite apmvecna- el bagam de la cantildea de m c a r (Brizuela et al 1987) ademamp elabma sui=stancies antiiacterianas ae toxicidaci variabie (flavipinas terreina citrina emim etc)(bttm etal 1985)

$ lt- 46

I u v

- -

B m i a m El geacutenero comprende S c 4 especies snpdf itas o paraacutesitcs de insectos entre los que se enmen-wa B h z s s i m la c u a l parasita art6pteros como Melanoplus smvinipes (Mercardier y Khachataurians 1987) contra coieoacutepteros tales como b p t i m t a r s a ecernilineata (Hajek etmal 1987) Anartis sahlifara Apim rchari Nisotra arbiculata Desmidopkms hebes Chilo onellus (Padit y Sam 1988)

Amicillium sp la imprtancia de este hongo es sobre todo en la industria lactea de antibioacuteticos y recientemente para la detoxificacioacuten de la p u l p a de cafe (Aquiahuatl y col 1988)

T harzianum Las especies de3 genero Zl-i~~nna sor frecuentemente empleadas en los p-ocesos de hidrdlisis de le celulosa Estos horgcs pmducen cantidades importantes de exoenzimas capaces de hidmlisar completamente la celuiosa en glucosa (Raussos 1981) Ademaacutes la cepa de T hruzianum fue utilizada con eacutexito para el enriquecimiento en pteinas de la harina de yuca por fermentacioacuten en medio liacutequido (Muindi y Hanssen 1981)

Otra caracteriacutestica impartante es que T harziunum es un antagonista micrdbiano poderoso Olivjer y Germain (1983) demostraron claramente que T viride y T hnrzimurc producen UM

tales como Botrytis c i m lampizoctonin solunipetc - inhibicioacuten en ciertns fases aei desarrollo de hongos fitopatoacutegenos

3

21 F ISIWIA DE CRD2IMW

Lx horgos filamentaeos m microoapnnismos eucaribticos quimiarganotrdficog estrictamente aarbbios y se repmducen de manara natural por medio de conidicepmas

La clasificacih de los horgoe esth basaamp principalmente en las caracterlsticaa de las agpcrras e e x u a l e e y de l o e cuarpos fructZfaroe presentes durante l o s estadlos s e x u a l e s de w1 ciclo biolbgico Loe hangoe con un estado e e x u a l conocido em denaninan h v perfectos Sin embaryo rmuchcs h o w eo10 producen eapcrras s e x u a l e s y cue- fructlf imx bajo ciertas corwiiciones exprimentales m y precisas si ea que las pmducen

Asi pues todavila no 8e conocen l o s ciclos biolQicos cunpleto8 con l o s estadroe sexuales ccmpletoe de muchos hongog Para estos hongos ein estadbs sexuales conocidos les conoce como how imperfectas (Talbot 1978)

La vida de un hongo imperfecto 8e divide en CUEltro etapas fisiolbgiacutecas impctantes que son la latencia la germinacibn la marltiplicacitm vegetativa y la conidiogbnesis (Rcrussosl985) - P

La conidioapora de un hongo f i lamentoso e8 una parte altamente espetcializada de mproduccibn Bupewivencia y dierparsibn ncamalmente delimitadas de iexclas muchas partes de l o s hongos y caracterizada por un metabolismo minim bajo conteniao de agua y carece da movimiento IcitoplasmCttim Aparte de m obvio p a p e l ecolbgico en la naturaleza l a s conidiosporas son usah en el laboratorio colpa irdculo en la pmduccibn de biomass para egtcperimentos o pmcm industriales y mhs recientemente para real izar directamente transformaciones qulmicas especff icas (Vezina y Sing 1975)

La conidiospwa esta en latencia cuando no gemina ampampa latencia pede ser de dos tipos constitucional o exQena

Con respecto Q la latencia constitucional la conidiospara puede IX) genninar aunque se encuentre bajo condiciones ambientales ade- pem primero requiere un proceso de activacibn para vencer una propiedad inata en el estado latente el cual pede ser una bancera pura la penetracibn de nutrientes una dDstruccih metab3lica o una auto-irhibiciamp~

Por otra parte en la latencia exwena la conidiospra es inactiva porque hay cordiciones ambientalee aesfavaruhles qulmicas yo flsicas y Pplede rapidamente reanudar m d e m l lo en un medio ambiente favorable E T 1 este tipc de

4

latencia la ganninacitm es contmlmamp p o r la necesidad esencial fact de- ampg2--r io - 2

Charamp todas la6 barreras de latencia han sido removidas la amidiospara normalmente requiere de niveles de temperatura de humedad favorable8 y ademhe de ciertas subetancias en el medio ambiente para canenzar el proceeo de germinacibn DespUes del inicio de esta nueva fase de genninacidn aparece la reepiracibn aardbica que 88 un requerimiento m 1 para todas las espocras Alguna8 canidiasparaa pueden exigir ademhs de estos factores un requerimiento de CDZ la mayor3a de las esporas requiere de una fuente externa de carbohidratos para germins aigunas otras pceeen adecuadamente res~nms oryhicas pero tienen la necesidad solamente del agua (Smith 1978)

BJ 1- siguientes gheros de hongos filamentosos que ee estuiian en este trabajo c u m Aspargillus Beauveria Axicillim sp y Zl-ichoderrpa (hongos imperfectos) las conidiosporas repmeentan la fama de reproduccibn a s e x u a l La definicibn que Sussman (1965) ha dado de l a s conidiceporas es la siguiente Todo perPodo de vida lento o intarrupcih reversible de desarrollo del cuyaniemo la caracterhtica fundamental de la oonidiospaota es que hay un irdividuo en potencialidad esta potencialidad esta reportada en el tiempo de latencia

211 Las etapas fieiologicas de crecimiento

a) La geminacih de mnidiospmas

La genninacidn es la suma de l o s procesce y de los cambios que intervienen en la recuperacibn del desarrollo de la fanm en la latencia y en la transformacibn de una estructura diferente (Allen1965) EB decir tambian el -pocimer estad30 imvemible que es abservado cano una diferencia del organismo en latencia el juicio pede ser formado soh l o s criterios morfoltrgicos citol6gicos fisiolbgicce o bioqulmicos (Sussman 1975)

b) La multiplicacibn vegetativa

Esta etapa romprende en realidad varias partes ia mamps importante corresponde a la fase de multiplicacibn de tipo exponencia1 del micelio cuando estamp desarrollado en nume- ramificaciones y extremos a UM pmduccibn de biomasa IRoyssos 1985) c) La conidiwhesis

La conidicghesis consiste en UM sucesiEcl de eventos internos en la dlula micelial (proliferacib del retlculo endoplasmdtico de vacuolas y nkleos) que temira en la iontacibn de conidiosporas la produccibn y

I

x - 2 L - - A ~

d

liberncibn de estas (Imrpent 1972 Fewe eco111975 De hecho la conidiogbesis de hongos filmentosos es un proceso muy ample jo

22 FIS1OLLXIA E EsFcrRuLACION

La conidioghesis es una etapa fisioltgiccr muy importante para l o s horgos imperfectos eta etapa comesponde a la fonnacibn

y liberacih de conidiosporas

El coanplejo proceso de esparulacibn en la conidioghesis pede ser visto cano la integracibn de algunos eventos biolbgicos La habilidad para cambiar de una fonnn de desarrollo filamentoso vegetativo a UM fonne ae espora reproductiva y generalmente esfGrica es el resultado final de un metdbolismo que responde a cambios fisicoqufmicos especlficos del medio ambiente (pH CO O Z temperatura humedad o la aparicibn de al- metabolito secundario) l o s cuales ejercen cambios en los estTmulos internos que regulan la actividad celular

Es hitido que el desencadenamiento de la esporulacibn es inducido por un factor limitate que desaparece en el medio de cultivo durante el crecimiento del hoqo La naturaieza de este factor es muy variable Se supone que el agotamiento de la fuente de carbono-o de nitrbgeno es generalmente el factor limitante Sin embaqo no deben olvidarse ios demas factores fisicoqulmicos untes mencionados

Un desancollo n o r m a 1 de micelio y una tuena conidiog6nesis son l a s condiciones previas G m produccibn imporLante ae midiosporas (Rcysscs 1985 El nilmero ae conidiosporas producidas por un hongo filamentoso es principalmente funcibn de la cantidad de la fuente de carbono y de nitriquestgeno presente en el medio de cultivo

El efecto de induccibn-inhibicibn de la conidicgbesis de Aniger fua puesto en evidencia por Gnlbraith y S m i t h (1969) De la misma manera la irduccidn del riiLmo endbgeno de esporulacibn de Aniger es influenciaamp por la relacibr glucosapotusio y por l o s oligoelementos presentes en el nedicl de cultivo (Jerebzoff eta11976)

En los medios de cultivc las sales Icineraies a urle concentacibn elevada podrlan tener los efectos opuestas sobre el crecimiento y la conidioghesis de homos f i l m e n t o s o s (Girdruth 1977 Slayan y Tatm 1954 Lilly L9euro51 De a misna manera la aereacibn y la humedad poseer una influencia en la pduccibn cuantitativa de coniaiwpras ae P m p e f w t i (Maheva et col 1984)

T

___ ~ ~~ - ~- ~ ~ ~ -~

deben ser definidas para a especie h e 5 un medio amp4cultivo optimizado para la produccibn de conidiwporns de una especie puede no ser adecuado para alguna otra (Vezim y co11965)

23 PRclDuccION DE E S O R A S

Diferentes tecnicas sa conocidas para la produccibn masiva de esparas La mds antigua consiste en cultivar el mirrocqganismo sobre una superficie en UT ampio de cultivo con agar ya sea en cajas de Petri a nivel labratorio o en btellns Rolux para fines prticticcs Osta tecnica presenta graves problemas de recoleccibn y la manipuiacibn de u n h e m importante de frasccs ademas se debe llevar a cabo bajc asepsia canpleta

Se ha mostrado la posibilidad de producir esporas en cultivo llquido utilizardo fermentadores esterilizables y extrapolables a nivel industrial (Bmderic eta11982)

Se h a n hecho estudios para producir esporas utilizando sustratos nmilaceos en ferntadores de lecho fijo (Maheva y col 19841 y mediante el uso de charolas en l a s cuales se coloca el sustrato en capas y se pone en una estufa de incubacibn (Vezina 1975) y ~ s o b r e pan de cebamp para producir esporas de Penicillium laucun en la elaboracibn de quesos (Nougaret 19821 ~

p Ultimamente se ha desarrdllado un proceso de cultivo en

superficie sobe un medio amplido utilizando un fermentador de discos rotatorios el c u a l ha dado henos resultados pero no puede ser escalado a un nive mayor (RaimLault y Raussos 1985)

Se ha desarrollado tam5i8n otrc amptodo de pmduccibn de espus solre soporte amplido esto es con la utilizacibn de bagazo de camp (Roussos y coldboradores 1988 certificado de invencibn)

2 4 irsos DE LAS EspoRAs

Eb la produccibn industrial de productos derivados de las fementaciones con hongos filmentosos la inoculacibn de los sustratos requiere de una gran cantidad de conidiosporcs ya que constituyen el punto de inicio de estos procesos de fernentacidn

La importancia de l o s cinco hongos fitmentosos estudiados radica en lo siguiente

~ p ~ ~ ~ l ~ nigerhiunenta el contenido pmteicc de le yucs (hinhult 1980) ademris de poseer actividad pectinolltica

ASprgiIlus te-mm p e e actividad p - a e aprovechamiento de la cantildea de azucar (Brizuela 1987) ademamp elaboran dos substancias antihcteriens de toxicidad variabie (flakripinas citrirn] (Bottm etai965)

7 _

- - ~ ~ ~ - ~~ -- - - i -

B s a u w i a bassima es parbita de insectos por lo qua ayuda en lucha biol6gica adema de producir enzimas como quitiMeas y 1 ipaears

micjllirm sp egta 0CPa posee una alticapacidad ampa e la cafeina de la pllpa de cafe esto rice penuite eliminar uno de lo s principales toxicos en la pulpa y de esta manera disminuir la contaminacion que produce y emplearla para alimentacion animal

2)-ickdema hurzidoum es un pl0dUctor de celulasas y ayuda en lucha biol6gica ya que m la propiedad de em- un antagonista poderaeo con respecto a un cierto rimero de hongos fitoputiquestgeme

( R o w e o s 19851

- _I__I k -

--

l- probar el efecto del tipo de la fuente de carbono en la

empleados en l o s procesos de fermentacioacuten dlida I produccioacuten masiva de midiosporas de l o s p-incipales horqcs

2- Probar el efecto combinado del tipo de la fuente de carbm y la relacioacuten CN en la produccioacuten masiva ae amidiosporas

3- Llevar a cabo la produccioacuten rnasiv de conidiospwas en un fermentador de discos rotatorios de 2 i

9

IDS micmotyanismas estudiados en este t r a j o fueron P s P w g i I I u s n i p ORSIUH NlO A s p e r g i l I u s t m u s cepa del ICIDCA (Instituto cubano para la Investigacioacuten de l o s Derivados de la Cantildea de Azucur) B e a u w i d hssiann cepa d e l ICIDCA Fanicillium sp cepa de la uA y Zkichoderma harzianum CCM F470 (Czechoslovak Collection of Microorganisms) ampliamente descrita por Rcwsg~os (1985)

4 2 MEDIOS DE CULTIVO

4 2 l Medios de comervaciOacuten

las cepas de Aniger A tanclrsus Fenicillium sp y Tharzianum son resembradas en un medio de PDA (papa- dextrasa-agar) y la cepa de B a i u n u es resenbada en PDA con 05 de extracto de levadura cada 6 meses e incubadas durante 7 dias a 29C para despueacutes ser conservadas en refrigeracioacuten durante 6

- meses apracimadamente ~ ~

4 2 2 Medios de esparulacidn

Se probaran l a s siguientes fuentes de cwbmHarina de Yuca Harina de P i g o M e l a z a y Sacarosa con relacioacuten CN de 10 14 24 Y 4 0

a) FmlaciOacuten de los medios

i

t

Lxw medios de cultivo utilizados para la produccioacuten de conidiospwas de Aniger A terreus Bampiana Amicillium p y Thamianum se muestran en l a s tablas I 11 I11 y IV

43 CONDICIONB DE CULTIVO

4 3 1 Inoculacioacuten

El medio de cultivo se inocula en masa este modo de inoculacioacuten consiste en mantener a 40C el medio de cultivo para posteriannente agregar uryt suspensidn de conidiospm-as de concentracioacuten conocida (2 x lo7 esporaWgr de sustrato) El ampio inoculado se agita para obtener una disiribucioacuten hamogenea en el cam ae maeaces Nand0 se utiiiza el fermentaamp de discos se pone en funcionamiento el sistema rotatwio para que SS distribuya el medio de cultivo inocuiaao en l o s discos de forma hmcqenea

F

432 Crecimiento--yespwulacion - - - -

Los cultivos se incuban a temperatura de laboratorio de 18 a 23C durante 7 y 14 dias Al fermentada- de discos se le suministra un flujo de aire estdril con un gasto de 4 lhr durante el periacuteodo de incubncioacuten

44 MEXDO PARA LA F9OJXJEION DE CONIDICSRXA5

Se conocen divemos amptodos para la pmducci6n de conidiosporas nosotras utilizaremos mntraces Erlen Meyer de 250 m1 y Fermentazdares de Discos

441 Matraces Erlen Heyer de 250 ml

El medio de cultivo se reparte en matraces Erlen Meyer de 250 m1 a rampn de 20 m1 par matraz y se obtura con un tapamp de algodoacuten se esteriliza en autoclave a 121C durante 20 min

442 Fermentada- de discos

El esquema del fermentada- de discos rotutorios utilizado se muestra en fmma detallada en la figura 1 El fermentador conteniendo300 m1 de medio de cultivo se esteriliza en autoclave a 121C por 45 min

-

e

a) Descripcioacuten del fermentada-

El fermentador de discos que se presenta en la fig 1 esta fannado por una cuba de vidrio la c u a l tiene una entrada y una salida en la parte superiorde la cuke se coloca una platina que tiene dos entradas una para realizar la inoculacioacuten del medio de cultivo y otra para airear esta platina sostiene un eje en el centro satre el eje se colocan 11 pares de discos formados por 2 m a l l a s de acero inoxidable de 2 mm de espesor y tamantildeo de malla de 4 mm c m un diaacutemetro de 10 c m y separados cuda par por 10 mm con unas rondanas especiales de acero inoxidable en el extremo inferior del eje se coloca una abrazadera la c u a l ejece presioacuten s e e l o s discos y con esto se mantienen fijos el total de 22 discos nos proporciona una superficie uacutetii de 172787 cm2 en la parte superior del eje se localiza un T la omi nos pemitlra colocar un motor y con esto hacer girar los disc-

b) Fimcionamiento y uso

El funcionamiento del fementaaor ae discos es de la siguiente manera LKB vez que se ha agregado e medic de cultivo y se ha esterilizado se coloca a un rotor de marera harizontal lo que nos permitiraacute mantener a l o s discos inmerso= en el medio ae cultivo y de esta forma una vezque se va enfrianio se adhiera a ellos el medic de cultivo se i m l a cunni0 se sncuentra en un promedio de

11

I ~

tempertura de 30 y 35CYTbl medio aun se encuentra licfuido) y asi poder tener una distriMciOacuten hanogenea de l a s esparas en el medio de cultivo (inoculacioacuten en masa) Una vez que el medio de cultivo se ha impregnado a l o s diecog el farmentador puede ser colocado de manera vertical en un l u g = adecuado

__ - - - - -

45 COSECHA Y CxlENrA DE EspoRAs

a) Para l o s cultivos en matraces se agmgu a cada uno 100 m1 de agua destilada estkil adicionada de Tbreen 80 (01) y se hunogeniza mediante agitacih magrktica

b) Para l o s cultivos en fementadares de discos 58 introduce al fermentadar 300 m1 de agua desti lada estampil adicionada de Tween 80 (01) y se mantienen los discos en rotaci6n durante 10 min

El conteo de l a s mas 88 realiza mediante el uso de kas de Malassez con suspensiones convenientemente diluidas y aplicando la siguiente f b l a

A + B + CJ = X 10 = N

A + B + C J = cuenta total de esporas en 10 cuhdros de la celda - x N - mimero de espmas pranedio

1D = factor de dilucioacuten 3

t

1 -Cuva

2 - P l a r i n a

3-Eje

4 -Disc05

5 - E n t rad2 zuper i or de l a cuva

6 - Sal ida i n f e r i o r d e l a cuva

- - Tapon d e entrada y s a l ida

r - 12

-

Medio I I I 3 I 4 I

I I 1 I I I I I Harim de I I I I

Yuca 4 0 4 0 4 0 I 4

I I I

Cgl) 1 1 I 2

I

I I I I I I

I I I I I I

(NH4)2904 402 287 167 100 I I I I

I 1 I I I

Urea 091 065 038 022

cac12 1 1 1 1 1 I 1 I

I I I I I I

I I I I

1 I 1 I I I

I ~~~ ~ ~ ~

I I I I

K H 2 p o 9 2 I 2 I 2 I 2 I I I I t I

I I I - I I I

Ag8r 15 15 I 15 I 15 I I I I 1 I I

I I I I I Agua (ml) loo0 1000 1000 1000

I I I I I

1 I I I I

I CN 10 I 14 I 24 I 40 I

I I I I I

I I I 1 I I

1 pH 56 56 156 56

I I I I I 1

Medio I I I I

Harim de I I I I

Trigo 5714 5714 5714 5714

(gl) I 1 1 2 I 3 I 4 I I I I I

I I I I I I

I I I I I 1

I I I I I I

(NH4)ZSX 402 287 167 100 I I I I I I

I I I I I I

u r e a 091 065 038 (322 I I I I I 1

1 I I I I I ~~ ~~ ~~~

I cac12 1 I 1 I 1 I 1 I

I I

~ I - s 2 I 2 I 2 I 2 I

e I I I I I

J q a r 15 15 I 15 I 15 I

I I

I I I I I I

I 1 I I I I

I I I I I

I I I I I I

Agua (m11 loo0 1000 1000 1000 I I 1 I I I

I I I I I I

I pH 56 56 56 56 I I I I I I

1 I I I I I

I cm 10 I 14 I 24 I 40 I I I I I I I

r

t

14

c

C_ de l o s medios S a m a camo

r

de cultivo para fuente de carbono

Hedio I I I I

(gl) 1 2 3 I 4 I

I I I I I I I I

I I

I I I I I

SaculmBa 3040 3 0 4 0 3040 3040 I I

I I

~ N l i 4 ) 2 S X 402 287 167 100 I I I

I I

1 I 1 I 1 I

I

I 2 I 2 I 2 I I I I

95

I I

I I

I I

I I

I I I I

urea 091 065 038 022 I I I

I I I I I I

cac12 1 m 2

I I I

I I I I

I I I

I I

Agar I 15 15 I 15 I I

I I I I I

Agua (m11 1000 1000 1000 1000 I I I I I I

56 56 56

L -

I I I

I I I I I

I pH 56

cN 10 14 24 4 0

I I I I I I

I I

I I

I I

I I

I I

I

r

Hedio

I I I

I I I I

(gl) 1

I I

I 2 I 3 4 I

I I

I I

I I I I I

M e l a z a 5470 5470 5470 5470 I I I I I I I (W)2S34 402 287 167 1-00 I I I I I I

I I I

I Urea 091 065 038 022 I I I

cac12 I 1 1 1 1 1 1

I

I I I

I

I

I I I

I I I I I

I I 1 I I I

m 2 I I I I

Agar 15 15

I 2 I 2 I 2 I

I

I I

e

I I I I

I 15 I 15 I

I -

I I

I I 1 I I I

Agw (m11 loo0 1000 1000 1000 1 I t I I

I I I p H 56 56 56 56 I I I I

CN 10 1 I 14 I 24 4 0 I I I I I I

I I I I I I

511- AsparYillus n i p -

de 3 dias aparecen farmas especializadas de reploduccian asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este se desarrolla UM vesicula y sobre la vesicula se

conidicsporas Estas conidospwas presentan un color cafe obscuro y n e g r o son gldbulares ornamentadas con un diumetro aproximado de 35 a 5 m La colonia cambia al c o l o r negro del centro B los ext remos

El micelio de este horgo es septa30 y de color blanco despues

desarrollan lae f ialides de las cuales se farmaran l a s

LA estructura de la fama de repruduccion se p-esenta en la figura 2

ru LA 7 V E S I CULA

ESTI P E

ELULA P O D A L

Figura 2 - Conidioforas y conidias de Aniger

El micelio de este h q o e8 septado de color blanco depea de 3 dias aparecen fonoas especializades de repmduccion asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este crecen fialides y de l a s fialides se forman las conidiosparas y presenta exudados ambarinoe Eetas conidiceparas presentan un color amarillo l a s conidiceporas son lisas glokulares con un diametro aproximado de 15 - 25 m

Figura 3 la estructura de la f a r m a de reproduction presenta en la

FIA

Figura 3- Conidioforos y coniaias de X t e

Este hongo presenta un micelio atercipelado y coposo inicialmente blanco presenta un raacutenquis genicula denticulado o en zigzag posteriarmente se tans amarillento Posee conidias hialinas y gldlxllams can un diaacutemetro aproximado de 15 a 3ym La estructura se presenta en la Figura 4

RANQU I S

c

Figura 4 - ConidiOacutefaros y conidias de E h s s i e n o

m cepa se ha identificado corno Penicillium W f a r t i i presenta un micelio septado con produccioacuten de micelio vegetativo aerial d e y e e de un tiempo aparecen estructurns especializadas de repocoduccion a s e x u a l Se presenta un estipe m e n t a d o unas brancpeas meacutetulas f M i d e s y conidias Elstas conidiosporas presentan un colap- verduzco son globdares y lisas con un dibtro apmximado de 4 a 6p Lae conidias son producidas en cadenas cortas La estructura se presenta en la Figura 5

C O N l D l A S

1 O r r m

Figura 5- Conidioacuteforos y coniaias de Fenicilliun

Al inicio este h q o presenta un micelio blanco pterionnente aprecen farmas especializadas de reproduccion asexual fialidee y conidicepuras I m conidiofaros se presentan en farmas piramidalee y en estos sistemas las fialidee Be localizan en g r u ~ w de dos a cuatro Las conidia3 Bon de color verde olivo son de superficie lisas subglobulares con un diametm apmximado de 2 a 3 m

La egtructura de la fcwma de reproduccion se presenta en la figura 6

Las colonias de Thnnianum en FDA se caracterizan pol tener un color verde con circulos concentricos Hay que mencionar que las colanias pmducen un olor a coco (coconut) muy caracteristico

CONlDl

Figura 6 - Conidioforos y conidias de Thanianum

516- Conclusiones v 4

_ _

el curse) de este capitulo se describieron los sietemas de reproduccioacuten de las cinco cepas de hongos filamentosos estudiados Todos estos hongos se repaoducen de manera a s e x u a l Se que l a s 5 cepas presentan estructuras muy diferentes a s i co~po diversos colores en l o s estadios de crecimiento vegetativo y ccmidiogdnesie ademds presentan conidimporas glohlares de muy diversos tamafios

c

093039 t

2 2

- La composicioacuten de l o s diferentes meampicsde cultvoutQizados pera llevar a cabo este estudio fueron medio N 2 de l a s tablas I 11111 y IV y se establecioacute prabay las diferentes fuentes de carbno (Harina de Yuca Harina de Pigo M e l a z a y Sacarosa) en matraces a una relaci6n CN de 14 para de esta manera poder observar el efecto que cada una de ell- ejerce solre la conidicgbesis de l o s hongos filamentosos estudiadas L m resultados se reman en l a s tablas V VI VII VI11 y XI y se exp-esan en base al Indice de Bporulacidn (Ie - N de esporas g de sustrato carbonado) para 7 dias de incubacion a temperatura ambiente (15-22C)

~ - -4

La Harim de Yuca es un producto amilaceo que ha demostrado ser un sustrato de gran eficiencia para la produccion de conidiosparas de hongos filamentosos ademds de ser un producto tropical de facil acceso su principal componente es el almidoacuten que corresponde al 80 en materia seca se encuentran en esta Harina pteiacutenas grasas y vitaminas del tipo B y C adamp de fibras y cenizas (Grace 1977)

la Harina de Pigo es otro sustrato amilaceo que se considerd importante utilizar debido a su alta disponibilidad en su canposicioacuten estan presentes pteiacutenas grw calcio f oacute s f m h i m tiamina riboflavina y niacina esto lo hace un sustrato interesante

La M e l a z a es el subproducto final de la fakicacioacuten de azucar es un liquido o b s c u r o denso y viscoso que se separa de la masa cocida de baja-calidad y del cual no se pede cristalizar ampamcar por amptodos mencionales y econoacutemicos en su composicioacuten estdn presentes 1 0 s amcares y otras sustancias entre l a s cuales se pueden citar l o s corapuestos nitrogenados aacutecidos aminoacidos albiminas vitaminas ceras esteroles lipid- sales minerales y cenizas etc (ICIDCA1986) Como se puede ver es un producto muy complejo por lo que puede ser un sustrato muy atractivo para su utilizaci6n como fuente de carbono en ipedios de cultivo pura la espomlaci6n de hongos filamentosos (Brinela 1987)

la s a c m a es un producto de facil adquisicioacuten y de pmduccioacuten idustrial importante por lo que se considem un sustrato atractivo para la produccioacuten de amidiosporas de hongos filamentosos La sacarosa se encuentra fonnada por una molecula de fructosa y una de glucosa l o s medios de cultivo que contienen sacarosa pcdriamos decir que son medios simples en comparacioacuten con la complejidad de la melaza y l a s harinas

521- A n i g ~

Fh la tabla V se muestran l o s Ie obtenidos para Anigerutilizardo l a s 4 fuentes de carbono antes mencionadas El mayor Ie se alcanzoacute en el medio de cultivo con k i n a de Yuca seguido de la M e l a z a la k i n a de Pigo y por Gltimo la Sacarosa se ha demostrado que durante el proceso de esterilizacioacuten la Harina de Yuca sufre un tratamiento teacutermico que hace que las moleacuteculas de almidh pasen cie una forma cristalina a un estado amdrfo (gelatinizacion) y que Ani_mr es un productm de amilasas (Raimbault 19801 lo que sugiere que la gelatinizacioacuten podriacutea facilitar el ataque enzimdtico y con esto i iberar cantidades importantes de glucosa que favoreced el crecilriiento del hongo lo que normalmente estaacute reiacionado con una produccioacuten importante de conidias

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I

I

I c- 7 DIAS

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 509xl0^9 I I I I

I I 1 I

Harina de Trigo 14 367X1^9 I I I

I I I I

Melaza 14 424x10-9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 16Ox10^8 I I I I

522- d t ~ 1 7 9 ~ ~

Eh la tabla VI se muestran l o s Ie obtenidos para A termus -utiliZando__las 4 fuentes de carbono antes mencionadas El Ie mas alto se encmtroacute en el medio de cultivo con M e l a z a seguido de la Yprina de Yuca y Trigo y por uacuteltimo la Sacarosa d t m u s es utilizado en lo s procesos de aprovechamiento de eubproductos de la industria cantildeera en cuba (meollo y bagazo) (Blanco bpez Villarl968) Esta cepa estaacute adaptada a l o s procesos de la industria cuntildeera de c u b a por lo que se esperariacutea que espurulara mejor en Melaza tal como ocurrioacute

TXBLA VI- Indices de espwulacibn para dtwreus utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa como fuente de carbono para tiempos de incubacidn de 7 dias y relacioacuten CN de 14

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I I I I I I 7 DIAS I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 60x10n9 I I I

Harina de pigo 14 403xlO-9

I I I

1 I I I

I I I I

M e l a z a 14 612xlOA9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 S40~107 1 I I

211

523- Bbassi= 1

Las resulta- 5e rem en la t ~ ~ h ~ f - - - ~ ~ - - ~ ~ e se -obtwo en el medio con Harina de Trigo m i d o de la H a r i n a de Yuca Melnza y Sacarosa Se puede obeervar que 1 0 s Ie amp altos se logran con los sustratos amiluceos que tal vez puedan ser mamp facilmente utilizados por el microoqanimno debido a l - v e s o de gelatinizacioacuten que Wren

524- Penicillium sp

Los resultados se muestran en la tabla VIII Los mayores le se alcanzaron con las Harims de Yuca y Trigo con respecto a los atros dos sustratos Se observoacute una mayor produccioacuten de micelio en los sustratos amilaceos lo que podria justificar la produccibn maacutes alta de conidias

525- Thnmianum

LBS resultados se reportan en la tabla XI Estudios hechos par Raussos (1985) demostraron la capacidad de Thanianum en la produccidn de ami la s a s utilizando almidoacuten cam0 fuente de carbono pesto que la harim de yuca y la harina de trigo son sustratos amilacecs se esperariacutea una produccioacuten impcortante de esporras tal COQLO sucedioacute para la harina de yuca y no asi para la harina de trigo Con respecto a la s a c m a el Ie tan bajo que se obtuvo con relacidn a la melaza pede ser debido a todos los compuestos que se encuentran en las m e l a z a s

c TABLA VI1- Inlices de esparcllacibn para Bhssiana utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo M e i u z a y Sacarosa axno fuente de carbono para tiempos de incubacioacuten de 7 dias y relacion CN de 14

I I I

I I I Ie I

Summ CN I I

1 I I I

I I

1 I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 1 8 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

7 DIAS

Harina de Pigo 14 702~10~9 I I I I

I I I

Melaza 14 217~10~9 I I I I

I I I I

Sacarosa i 14 8 5 8 ~ 1 0 ~ 6 I I I I

r

I I

I Ie 1

I Summ CN I

I 1 i I

I I 7 DIAS

I I I I

I 1 I I

Harina de Yuca 14 142x10^10 I I I I

I I I I

Harina de Pigo 14 832xlO-9 1 1 I I

I I I I

M e l a z a 14 293~10~9

I I I

Sacarosa 14 103x10n9

I I I I

I I I I

m IX-Indices de espauulacian para Thamianum utilizando Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa corno fuente de carbono para tiapos de incubacich de 7 dim y relacioacuten CN de 14

I I I I

I -

1 I Ie I

I Summ CN I

I I 7 D I A S t I I I

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 11ox1On1O I I I I

I I I I

Harina de Trigo 14 12Ox10-9 I I I I

I I I I

M e l a z a 14 875~10~9 I I I I

I

Sacarosa I

I i I

14 11Ox10^8 I I I

526- Conclusiones

Varios autores han demostrado la importancia de la fuente de carbono sobre la conidiogenesis de hongos f ilamentosos (Vezina y co11965 Martinelli1976) en este estudio se pudo observar que cada cepa tiene caracteristicas fisiolcjgicas de esporulacidn propias con respecto al tipo de fuente de carbono que se le proporcione Para este caso en especial la cepa de Aniper esporuld mejor en Harina de Yuca A termus en M e l a z a B m i a m en Harinri de Trigo y T harzinnum en Harina de Yuca

------Esttuiaa - - h - - i s o s (lE5) han demostrado que la concentracidn de Nieeno prwente en el mampio de cup170 ejerce una influencia directa en el nuacutemero de conidiosporas producidas por Thurzjmm par 10 que era necesario seleccionar la relacioacuten CN oacuteptima para cada cepa y para cada sustrato

la composicioacuten de l o s medios de cultivo utilizados para llevar a cabo este estudio estb presentados en las tablas I 11 I11 y IV Se utilizaron 4 diferentes relaciones CN estas fueron de 101424 y 40 empleanda UM mezcla de 23 panes de Sulfato de Amonio y 13 parte de h a toanando- 128 g de carbono como base de caacutelculo y tiempos de incubacioacuten de 7 y 14 dias l o s experimentos se realizaron en matraces de 250 ml

Ln relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despueacutes de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Anigw son mostrados en la tabla X

h datos obtenidos para Aniger nos indican que cuardo se emplea Harina de Yuca en concentracich de 40 gl y la reiaci6n CN estaacute entre 10 y 40 no es un factor determinante en la conidiogeacutenesis ya que esporula de rnanera similar entre estos r a n g o s para l o s medio a base de Harina de Trigo la CN entre 40 y 24 es donde mejm esporulacidn se obtiene

r 5 3 2 - A s m i l ~ s t

h relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de espomlaci6n obtenidos aespuk de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Rtemxs son mostradrx en la tabla XI

Lns medios de cultivo con 14 dias de incubacidn presentan el mayor ntUnero de conidiospwas a una relaci6n CN de 14 con excepcih de l o s medios con Sacarosa que mostramn en todos l o s cc~sos un compm-tamiento muy pobre con respecto al n h de conidias producidas Los mejores Ie se log-amn con Harina de Yuca y M e l a z a con una relacidn CN de-14 para 14 dias de incubacidn

Lo relaci6n que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despuds de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para B b s s i a n a son mostrados en la tabla XII

b Ie logrados para B b n s s i m e son muy similares entre si es decir no cambian significativamente l o s Ie para l o s cultivos con 14 dias de inmbacidn son bastante altos siendo el medio de cultivo con una relaci6n CN de 14 y Melaza como fuente de carbono ei queposee el mejor Ie con un tiempo de incuhcidn de 14 dias BI esta cepa se ve su capacidad de adaptacioacuten con respecto a l a s anteriores para crecer en Sackrosa

~ r

27 534- Psnicilliue sp

kiaeiampi que exiate entre 1- necG~-edt-~vcv - y h rendimientos de esparulaciOacutentilde-6btenidos despds de 7 -_Fl4 dias de cultivo en matraces para FbnciIlium sp son mostrados en la tabla XILI

_

La relacidn CN entre 10 y40 no tiene una influencia directa en la conidioghnesis de esta cepa sin embargo se dbeewa una tendencia a la disminucioacuten del N de conidiospcwas producidas en los cultivos con 14 dias de incubacih Los mayores Ie se lcgrarcm con los medios de cultivo a bnse de Harina de Yuca y Harina de Trigo

La relaci6n que existe entre la composiciiquestn quiacutemica del medio de cultivo y l a s rendimientos de esporulaci6n obtenidos desples de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Thurzzanum son mostrados en la tabla XIV

Las resultados obtenidos 1x1s mestran unatendencia hacia la obtencioacuten del m y m Ie en rangos de CN de 10 a 14 y estudios hechos par Raussos (1985) sohre el efecto de la concentraci6n de Nitriquestgeno en la oanidiogdnesis de Thaniunum pnmporcionaron una CN optima de 14 utilizando Harina de Yuca corno fuente de curbno

Sin embxqo pura una CN de 3253 obtiene un Ie para 7 dias --de incubacidn de Q16x1On9 cmparando este resultado con el resultado obtenido en mi estudio encuentro que a una CN de 40 para 7 diQs de incubacibn tengo un Ie de 132xlO-9 esto es 13 veces mamp por lo que es dificil comparar estos datos en l o s resultados obtenidos se obsewa una tendencia para los cultivos con 14 dias de incubacidn de disminuir el Ie confarme aumenta la relacidn CN y para l a s cultivos con 7 dias se observn lo contrario Los Ie mus altos se logran con l o s medios de cultivo a base de Harinu de Yuca y Melaza

536- Conclusiones

Las cepas estudiadas eSp0IWlUn dependiendo del tipo de fuente de carbono la fuente de carbono y su naturaleza tiene m infiuencia directa en la conidiogeacutenesis de l o s hongos f ilamentosos que la concentracioacuten de nitrdgeno sin embargo es recamendable la adlcidn ae nitdgeno entre l o s rargos de CN de 10 a 4 0

Para disminuir l o s costos de pmduccioacuten de conidiosporas hay que optimizar los medics de cultivo nacer la seleccioacuten de una h e m fuente de carbono para cada cepa y trhjar en rangos de CN de 14 a 4 0

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
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                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
                                          • -- A
                                          • --
                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
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c

INDICE

Pagina

1 I r n C C I r n GIJEFK 1

11 ANAZISIS BI8LIWIZ 3

21 Fisiologia de crecimiento 3 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento 4

22 Fisiologia de espomlacion 5 23 Prduccion de espor as 6 24 Usos de l a s espor as 6

111 9mIVB 8

VI MrnIAL Y m 9

41 Microoqmi smos

42 M e d i o s de cultivo 9 421 Medios de conservation 9 422 Medios de esprulacion 9

a) Falacion de los medi os 9

43 Condiciones de cultivo 9 431 Inoculacion 9 432 Q-ecimiento y espomlacion 10

44 Yetodos FE lo procluc~cion ae esparos 10 44 i KE-waces Erlen k y e r de 25C mi 10 442 Fe-mentaaor de disc os 1C

a) Descripcion del fermentad or lG b) fixiorzmiento y uso 1C

45 Cceecha y cuenta de espr as 11

v mm Y DImldW 16 w w

51 Descripcioacuten morfoldgica del sistema de reproduccioacuten 16 511 Ani ger 16 512 At errstls 17 513 B h t s s i a m 10 514 Fenicillium sp 19 515 T h a n i anum 20 516 Conclusiones 21

52 Seleccioacuten de la fuente de carbono 22 521 A n i p 22 522 Aterrrstts 23 523 3htssiana 24 524 Penici1lium sp 24 525 Thami anum 24 526 Conclusiones 25

53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN 26 531 Ani gw 26 532 At erreus 26 533 B h s s i m 26 534 Pencillium sp 27 533 T h a m i anum 27 536 Conclusiones 27

54 Cineacuteticas de p-oduccioacuten de canidiosporas en esporulador de discos 33 541 Ani gar 33 542 Atam~= 33 543 Bh=ssiana B 544 Penici1lirmr sp 34 545 Thnnianum 34 546 Conclusiones 37

55 Prducciiquestn comparada de conidimporas en fermentador matraz 38

56 Recopilrsquoacioacuten de conciiciones Oacutep~lsquoimas de esporulacioacuten

VI mzus10m GElmWs 45

111 mwm4 46

-I 11 ~ BiFllrnIA 47

1 - 1mccCIm m Recientemente se ha dado un gran intereacutes en el desarrollo de

fermentaciones en medio soacutelido para la produccidn de alimentos enriquecidos con proteiacutena microbiana a partir de sustratos amilaceos (Raimbault 19801 detoxificacioacuten de p u i p a de cafe (Aquiahuati y col 19871 produccioacuten de enzimas celulasas (Raussosl985) asi cogpo de diversos metabolitos secwdarios tales carno aflataxinas antibioacuteticos (Eiawios 1987) Btos procesos implican el crecimiento de hongos f i l a m e n t o s o s sobre susCaatos soacutelidos le inoculacioacuten de estos sustratos requiere de una gran cantidad de esparas

las esporas de hongas filament- son la fonna ae resistencia y reprcduccioacuten de estos mirroarganismos y constituyen el punto de inicio de l o s procesas de fermentacioacuten en medio soacuteliao dado que se requiere de unu inoculacioacuten masiva y homogenea en el medio de cultivo y bajo ciertas condiciones puedan llevarse a cabo l a s transformaciones de bioconversioacuten deseables Por io tanto se necesita disponer de cantidades importantes de esporas (Raussos 19B51

El nuacutemero de esparas producidas por UT hongo filanentoso es principalmente funcioacuten de la composicioacuten del medio de cultivo tal como se reporta pura Aspryil Ius n i d u l m que cuando se cambia la naturaleza o la cantidad de la fuente ae carbono o de nieeno del medio de cultivo optimizado se observa ma disminucidnde la produccioacuten de esporas de este hongo filamentoso [Martimlli 1976

tos hongos filamentosos Aniger Atemetls Ebss iam Fenicillim sp y Thamianum se clasifican aentro ae l o s hongos imwrfectos o aeuteroanicetos ya que no se les conoce reproduccih s e d 1 (Alexopoulos 1962)

El intereacutes de estudiar estos cuatro homos filumentosos radica en lo siguiente

A n i m posamp la capacidad de -air amilasas dependiencio de l a s condiciones de cuitivo debido a esta caracteristica la utilizacidr de Ari-aar para mmx-Jtar e conteniac proteico de la yuca (Raimbauit 1980 tlene relevante imponancia aaemb prcduce pectinasas

A t m m tiene la capacidad de desnncoliawse s o b e 1~ celulosa microcristalina lo que ie permite apmvecna- el bagam de la cantildea de m c a r (Brizuela et al 1987) ademamp elabma sui=stancies antiiacterianas ae toxicidaci variabie (flavipinas terreina citrina emim etc)(bttm etal 1985)

$ lt- 46

I u v

- -

B m i a m El geacutenero comprende S c 4 especies snpdf itas o paraacutesitcs de insectos entre los que se enmen-wa B h z s s i m la c u a l parasita art6pteros como Melanoplus smvinipes (Mercardier y Khachataurians 1987) contra coieoacutepteros tales como b p t i m t a r s a ecernilineata (Hajek etmal 1987) Anartis sahlifara Apim rchari Nisotra arbiculata Desmidopkms hebes Chilo onellus (Padit y Sam 1988)

Amicillium sp la imprtancia de este hongo es sobre todo en la industria lactea de antibioacuteticos y recientemente para la detoxificacioacuten de la p u l p a de cafe (Aquiahuatl y col 1988)

T harzianum Las especies de3 genero Zl-i~~nna sor frecuentemente empleadas en los p-ocesos de hidrdlisis de le celulosa Estos horgcs pmducen cantidades importantes de exoenzimas capaces de hidmlisar completamente la celuiosa en glucosa (Raussos 1981) Ademaacutes la cepa de T hruzianum fue utilizada con eacutexito para el enriquecimiento en pteinas de la harina de yuca por fermentacioacuten en medio liacutequido (Muindi y Hanssen 1981)

Otra caracteriacutestica impartante es que T harziunum es un antagonista micrdbiano poderoso Olivjer y Germain (1983) demostraron claramente que T viride y T hnrzimurc producen UM

tales como Botrytis c i m lampizoctonin solunipetc - inhibicioacuten en ciertns fases aei desarrollo de hongos fitopatoacutegenos

3

21 F ISIWIA DE CRD2IMW

Lx horgos filamentaeos m microoapnnismos eucaribticos quimiarganotrdficog estrictamente aarbbios y se repmducen de manara natural por medio de conidicepmas

La clasificacih de los horgoe esth basaamp principalmente en las caracterlsticaa de las agpcrras e e x u a l e e y de l o e cuarpos fructZfaroe presentes durante l o s estadlos s e x u a l e s de w1 ciclo biolbgico Loe hangoe con un estado e e x u a l conocido em denaninan h v perfectos Sin embaryo rmuchcs h o w eo10 producen eapcrras s e x u a l e s y cue- fructlf imx bajo ciertas corwiiciones exprimentales m y precisas si ea que las pmducen

Asi pues todavila no 8e conocen l o s ciclos biolQicos cunpleto8 con l o s estadroe sexuales ccmpletoe de muchos hongog Para estos hongos ein estadbs sexuales conocidos les conoce como how imperfectas (Talbot 1978)

La vida de un hongo imperfecto 8e divide en CUEltro etapas fisiolbgiacutecas impctantes que son la latencia la germinacibn la marltiplicacitm vegetativa y la conidiogbnesis (Rcrussosl985) - P

La conidioapora de un hongo f i lamentoso e8 una parte altamente espetcializada de mproduccibn Bupewivencia y dierparsibn ncamalmente delimitadas de iexclas muchas partes de l o s hongos y caracterizada por un metabolismo minim bajo conteniao de agua y carece da movimiento IcitoplasmCttim Aparte de m obvio p a p e l ecolbgico en la naturaleza l a s conidiosporas son usah en el laboratorio colpa irdculo en la pmduccibn de biomass para egtcperimentos o pmcm industriales y mhs recientemente para real izar directamente transformaciones qulmicas especff icas (Vezina y Sing 1975)

La conidiospwa esta en latencia cuando no gemina ampampa latencia pede ser de dos tipos constitucional o exQena

Con respecto Q la latencia constitucional la conidiospara puede IX) genninar aunque se encuentre bajo condiciones ambientales ade- pem primero requiere un proceso de activacibn para vencer una propiedad inata en el estado latente el cual pede ser una bancera pura la penetracibn de nutrientes una dDstruccih metab3lica o una auto-irhibiciamp~

Por otra parte en la latencia exwena la conidiospra es inactiva porque hay cordiciones ambientalee aesfavaruhles qulmicas yo flsicas y Pplede rapidamente reanudar m d e m l lo en un medio ambiente favorable E T 1 este tipc de

4

latencia la ganninacitm es contmlmamp p o r la necesidad esencial fact de- ampg2--r io - 2

Charamp todas la6 barreras de latencia han sido removidas la amidiospara normalmente requiere de niveles de temperatura de humedad favorable8 y ademhe de ciertas subetancias en el medio ambiente para canenzar el proceeo de germinacibn DespUes del inicio de esta nueva fase de genninacidn aparece la reepiracibn aardbica que 88 un requerimiento m 1 para todas las espocras Alguna8 canidiasparaa pueden exigir ademhs de estos factores un requerimiento de CDZ la mayor3a de las esporas requiere de una fuente externa de carbohidratos para germins aigunas otras pceeen adecuadamente res~nms oryhicas pero tienen la necesidad solamente del agua (Smith 1978)

BJ 1- siguientes gheros de hongos filamentosos que ee estuiian en este trabajo c u m Aspargillus Beauveria Axicillim sp y Zl-ichoderrpa (hongos imperfectos) las conidiosporas repmeentan la fama de reproduccibn a s e x u a l La definicibn que Sussman (1965) ha dado de l a s conidiceporas es la siguiente Todo perPodo de vida lento o intarrupcih reversible de desarrollo del cuyaniemo la caracterhtica fundamental de la oonidiospaota es que hay un irdividuo en potencialidad esta potencialidad esta reportada en el tiempo de latencia

211 Las etapas fieiologicas de crecimiento

a) La geminacih de mnidiospmas

La genninacidn es la suma de l o s procesce y de los cambios que intervienen en la recuperacibn del desarrollo de la fanm en la latencia y en la transformacibn de una estructura diferente (Allen1965) EB decir tambian el -pocimer estad30 imvemible que es abservado cano una diferencia del organismo en latencia el juicio pede ser formado soh l o s criterios morfoltrgicos citol6gicos fisiolbgicce o bioqulmicos (Sussman 1975)

b) La multiplicacibn vegetativa

Esta etapa romprende en realidad varias partes ia mamps importante corresponde a la fase de multiplicacibn de tipo exponencia1 del micelio cuando estamp desarrollado en nume- ramificaciones y extremos a UM pmduccibn de biomasa IRoyssos 1985) c) La conidiwhesis

La conidicghesis consiste en UM sucesiEcl de eventos internos en la dlula micelial (proliferacib del retlculo endoplasmdtico de vacuolas y nkleos) que temira en la iontacibn de conidiosporas la produccibn y

I

x - 2 L - - A ~

d

liberncibn de estas (Imrpent 1972 Fewe eco111975 De hecho la conidiogbesis de hongos filmentosos es un proceso muy ample jo

22 FIS1OLLXIA E EsFcrRuLACION

La conidioghesis es una etapa fisioltgiccr muy importante para l o s horgos imperfectos eta etapa comesponde a la fonnacibn

y liberacih de conidiosporas

El coanplejo proceso de esparulacibn en la conidioghesis pede ser visto cano la integracibn de algunos eventos biolbgicos La habilidad para cambiar de una fonnn de desarrollo filamentoso vegetativo a UM fonne ae espora reproductiva y generalmente esfGrica es el resultado final de un metdbolismo que responde a cambios fisicoqufmicos especlficos del medio ambiente (pH CO O Z temperatura humedad o la aparicibn de al- metabolito secundario) l o s cuales ejercen cambios en los estTmulos internos que regulan la actividad celular

Es hitido que el desencadenamiento de la esporulacibn es inducido por un factor limitate que desaparece en el medio de cultivo durante el crecimiento del hoqo La naturaieza de este factor es muy variable Se supone que el agotamiento de la fuente de carbono-o de nitrbgeno es generalmente el factor limitante Sin embaqo no deben olvidarse ios demas factores fisicoqulmicos untes mencionados

Un desancollo n o r m a 1 de micelio y una tuena conidiog6nesis son l a s condiciones previas G m produccibn imporLante ae midiosporas (Rcysscs 1985 El nilmero ae conidiosporas producidas por un hongo filamentoso es principalmente funcibn de la cantidad de la fuente de carbono y de nitriquestgeno presente en el medio de cultivo

El efecto de induccibn-inhibicibn de la conidicgbesis de Aniger fua puesto en evidencia por Gnlbraith y S m i t h (1969) De la misma manera la irduccidn del riiLmo endbgeno de esporulacibn de Aniger es influenciaamp por la relacibr glucosapotusio y por l o s oligoelementos presentes en el nedicl de cultivo (Jerebzoff eta11976)

En los medios de cultivc las sales Icineraies a urle concentacibn elevada podrlan tener los efectos opuestas sobre el crecimiento y la conidioghesis de homos f i l m e n t o s o s (Girdruth 1977 Slayan y Tatm 1954 Lilly L9euro51 De a misna manera la aereacibn y la humedad poseer una influencia en la pduccibn cuantitativa de coniaiwpras ae P m p e f w t i (Maheva et col 1984)

T

___ ~ ~~ - ~- ~ ~ ~ -~

deben ser definidas para a especie h e 5 un medio amp4cultivo optimizado para la produccibn de conidiwporns de una especie puede no ser adecuado para alguna otra (Vezim y co11965)

23 PRclDuccION DE E S O R A S

Diferentes tecnicas sa conocidas para la produccibn masiva de esparas La mds antigua consiste en cultivar el mirrocqganismo sobre una superficie en UT ampio de cultivo con agar ya sea en cajas de Petri a nivel labratorio o en btellns Rolux para fines prticticcs Osta tecnica presenta graves problemas de recoleccibn y la manipuiacibn de u n h e m importante de frasccs ademas se debe llevar a cabo bajc asepsia canpleta

Se ha mostrado la posibilidad de producir esporas en cultivo llquido utilizardo fermentadores esterilizables y extrapolables a nivel industrial (Bmderic eta11982)

Se h a n hecho estudios para producir esporas utilizando sustratos nmilaceos en ferntadores de lecho fijo (Maheva y col 19841 y mediante el uso de charolas en l a s cuales se coloca el sustrato en capas y se pone en una estufa de incubacibn (Vezina 1975) y ~ s o b r e pan de cebamp para producir esporas de Penicillium laucun en la elaboracibn de quesos (Nougaret 19821 ~

p Ultimamente se ha desarrdllado un proceso de cultivo en

superficie sobe un medio amplido utilizando un fermentador de discos rotatorios el c u a l ha dado henos resultados pero no puede ser escalado a un nive mayor (RaimLault y Raussos 1985)

Se ha desarrollado tam5i8n otrc amptodo de pmduccibn de espus solre soporte amplido esto es con la utilizacibn de bagazo de camp (Roussos y coldboradores 1988 certificado de invencibn)

2 4 irsos DE LAS EspoRAs

Eb la produccibn industrial de productos derivados de las fementaciones con hongos filmentosos la inoculacibn de los sustratos requiere de una gran cantidad de conidiosporcs ya que constituyen el punto de inicio de estos procesos de fernentacidn

La importancia de l o s cinco hongos fitmentosos estudiados radica en lo siguiente

~ p ~ ~ ~ l ~ nigerhiunenta el contenido pmteicc de le yucs (hinhult 1980) ademris de poseer actividad pectinolltica

ASprgiIlus te-mm p e e actividad p - a e aprovechamiento de la cantildea de azucar (Brizuela 1987) ademamp elaboran dos substancias antihcteriens de toxicidad variabie (flakripinas citrirn] (Bottm etai965)

7 _

- - ~ ~ ~ - ~~ -- - - i -

B s a u w i a bassima es parbita de insectos por lo qua ayuda en lucha biol6gica adema de producir enzimas como quitiMeas y 1 ipaears

micjllirm sp egta 0CPa posee una alticapacidad ampa e la cafeina de la pllpa de cafe esto rice penuite eliminar uno de lo s principales toxicos en la pulpa y de esta manera disminuir la contaminacion que produce y emplearla para alimentacion animal

2)-ickdema hurzidoum es un pl0dUctor de celulasas y ayuda en lucha biol6gica ya que m la propiedad de em- un antagonista poderaeo con respecto a un cierto rimero de hongos fitoputiquestgeme

( R o w e o s 19851

- _I__I k -

--

l- probar el efecto del tipo de la fuente de carbono en la

empleados en l o s procesos de fermentacioacuten dlida I produccioacuten masiva de midiosporas de l o s p-incipales horqcs

2- Probar el efecto combinado del tipo de la fuente de carbm y la relacioacuten CN en la produccioacuten masiva ae amidiosporas

3- Llevar a cabo la produccioacuten rnasiv de conidiospwas en un fermentador de discos rotatorios de 2 i

9

IDS micmotyanismas estudiados en este t r a j o fueron P s P w g i I I u s n i p ORSIUH NlO A s p e r g i l I u s t m u s cepa del ICIDCA (Instituto cubano para la Investigacioacuten de l o s Derivados de la Cantildea de Azucur) B e a u w i d hssiann cepa d e l ICIDCA Fanicillium sp cepa de la uA y Zkichoderma harzianum CCM F470 (Czechoslovak Collection of Microorganisms) ampliamente descrita por Rcwsg~os (1985)

4 2 MEDIOS DE CULTIVO

4 2 l Medios de comervaciOacuten

las cepas de Aniger A tanclrsus Fenicillium sp y Tharzianum son resembradas en un medio de PDA (papa- dextrasa-agar) y la cepa de B a i u n u es resenbada en PDA con 05 de extracto de levadura cada 6 meses e incubadas durante 7 dias a 29C para despueacutes ser conservadas en refrigeracioacuten durante 6

- meses apracimadamente ~ ~

4 2 2 Medios de esparulacidn

Se probaran l a s siguientes fuentes de cwbmHarina de Yuca Harina de P i g o M e l a z a y Sacarosa con relacioacuten CN de 10 14 24 Y 4 0

a) FmlaciOacuten de los medios

i

t

Lxw medios de cultivo utilizados para la produccioacuten de conidiospwas de Aniger A terreus Bampiana Amicillium p y Thamianum se muestran en l a s tablas I 11 I11 y IV

43 CONDICIONB DE CULTIVO

4 3 1 Inoculacioacuten

El medio de cultivo se inocula en masa este modo de inoculacioacuten consiste en mantener a 40C el medio de cultivo para posteriannente agregar uryt suspensidn de conidiospm-as de concentracioacuten conocida (2 x lo7 esporaWgr de sustrato) El ampio inoculado se agita para obtener una disiribucioacuten hamogenea en el cam ae maeaces Nand0 se utiiiza el fermentaamp de discos se pone en funcionamiento el sistema rotatwio para que SS distribuya el medio de cultivo inocuiaao en l o s discos de forma hmcqenea

F

432 Crecimiento--yespwulacion - - - -

Los cultivos se incuban a temperatura de laboratorio de 18 a 23C durante 7 y 14 dias Al fermentada- de discos se le suministra un flujo de aire estdril con un gasto de 4 lhr durante el periacuteodo de incubncioacuten

44 MEXDO PARA LA F9OJXJEION DE CONIDICSRXA5

Se conocen divemos amptodos para la pmducci6n de conidiosporas nosotras utilizaremos mntraces Erlen Meyer de 250 m1 y Fermentazdares de Discos

441 Matraces Erlen Heyer de 250 ml

El medio de cultivo se reparte en matraces Erlen Meyer de 250 m1 a rampn de 20 m1 par matraz y se obtura con un tapamp de algodoacuten se esteriliza en autoclave a 121C durante 20 min

442 Fermentada- de discos

El esquema del fermentada- de discos rotutorios utilizado se muestra en fmma detallada en la figura 1 El fermentador conteniendo300 m1 de medio de cultivo se esteriliza en autoclave a 121C por 45 min

-

e

a) Descripcioacuten del fermentada-

El fermentador de discos que se presenta en la fig 1 esta fannado por una cuba de vidrio la c u a l tiene una entrada y una salida en la parte superiorde la cuke se coloca una platina que tiene dos entradas una para realizar la inoculacioacuten del medio de cultivo y otra para airear esta platina sostiene un eje en el centro satre el eje se colocan 11 pares de discos formados por 2 m a l l a s de acero inoxidable de 2 mm de espesor y tamantildeo de malla de 4 mm c m un diaacutemetro de 10 c m y separados cuda par por 10 mm con unas rondanas especiales de acero inoxidable en el extremo inferior del eje se coloca una abrazadera la c u a l ejece presioacuten s e e l o s discos y con esto se mantienen fijos el total de 22 discos nos proporciona una superficie uacutetii de 172787 cm2 en la parte superior del eje se localiza un T la omi nos pemitlra colocar un motor y con esto hacer girar los disc-

b) Fimcionamiento y uso

El funcionamiento del fementaaor ae discos es de la siguiente manera LKB vez que se ha agregado e medic de cultivo y se ha esterilizado se coloca a un rotor de marera harizontal lo que nos permitiraacute mantener a l o s discos inmerso= en el medio ae cultivo y de esta forma una vezque se va enfrianio se adhiera a ellos el medic de cultivo se i m l a cunni0 se sncuentra en un promedio de

11

I ~

tempertura de 30 y 35CYTbl medio aun se encuentra licfuido) y asi poder tener una distriMciOacuten hanogenea de l a s esparas en el medio de cultivo (inoculacioacuten en masa) Una vez que el medio de cultivo se ha impregnado a l o s diecog el farmentador puede ser colocado de manera vertical en un l u g = adecuado

__ - - - - -

45 COSECHA Y CxlENrA DE EspoRAs

a) Para l o s cultivos en matraces se agmgu a cada uno 100 m1 de agua destilada estkil adicionada de Tbreen 80 (01) y se hunogeniza mediante agitacih magrktica

b) Para l o s cultivos en fementadares de discos 58 introduce al fermentadar 300 m1 de agua desti lada estampil adicionada de Tween 80 (01) y se mantienen los discos en rotaci6n durante 10 min

El conteo de l a s mas 88 realiza mediante el uso de kas de Malassez con suspensiones convenientemente diluidas y aplicando la siguiente f b l a

A + B + CJ = X 10 = N

A + B + C J = cuenta total de esporas en 10 cuhdros de la celda - x N - mimero de espmas pranedio

1D = factor de dilucioacuten 3

t

1 -Cuva

2 - P l a r i n a

3-Eje

4 -Disc05

5 - E n t rad2 zuper i or de l a cuva

6 - Sal ida i n f e r i o r d e l a cuva

- - Tapon d e entrada y s a l ida

r - 12

-

Medio I I I 3 I 4 I

I I 1 I I I I I Harim de I I I I

Yuca 4 0 4 0 4 0 I 4

I I I

Cgl) 1 1 I 2

I

I I I I I I

I I I I I I

(NH4)2904 402 287 167 100 I I I I

I 1 I I I

Urea 091 065 038 022

cac12 1 1 1 1 1 I 1 I

I I I I I I

I I I I

1 I 1 I I I

I ~~~ ~ ~ ~

I I I I

K H 2 p o 9 2 I 2 I 2 I 2 I I I I t I

I I I - I I I

Ag8r 15 15 I 15 I 15 I I I I 1 I I

I I I I I Agua (ml) loo0 1000 1000 1000

I I I I I

1 I I I I

I CN 10 I 14 I 24 I 40 I

I I I I I

I I I 1 I I

1 pH 56 56 156 56

I I I I I 1

Medio I I I I

Harim de I I I I

Trigo 5714 5714 5714 5714

(gl) I 1 1 2 I 3 I 4 I I I I I

I I I I I I

I I I I I 1

I I I I I I

(NH4)ZSX 402 287 167 100 I I I I I I

I I I I I I

u r e a 091 065 038 (322 I I I I I 1

1 I I I I I ~~ ~~ ~~~

I cac12 1 I 1 I 1 I 1 I

I I

~ I - s 2 I 2 I 2 I 2 I

e I I I I I

J q a r 15 15 I 15 I 15 I

I I

I I I I I I

I 1 I I I I

I I I I I

I I I I I I

Agua (m11 loo0 1000 1000 1000 I I 1 I I I

I I I I I I

I pH 56 56 56 56 I I I I I I

1 I I I I I

I cm 10 I 14 I 24 I 40 I I I I I I I

r

t

14

c

C_ de l o s medios S a m a camo

r

de cultivo para fuente de carbono

Hedio I I I I

(gl) 1 2 3 I 4 I

I I I I I I I I

I I

I I I I I

SaculmBa 3040 3 0 4 0 3040 3040 I I

I I

~ N l i 4 ) 2 S X 402 287 167 100 I I I

I I

1 I 1 I 1 I

I

I 2 I 2 I 2 I I I I

95

I I

I I

I I

I I

I I I I

urea 091 065 038 022 I I I

I I I I I I

cac12 1 m 2

I I I

I I I I

I I I

I I

Agar I 15 15 I 15 I I

I I I I I

Agua (m11 1000 1000 1000 1000 I I I I I I

56 56 56

L -

I I I

I I I I I

I pH 56

cN 10 14 24 4 0

I I I I I I

I I

I I

I I

I I

I I

I

r

Hedio

I I I

I I I I

(gl) 1

I I

I 2 I 3 4 I

I I

I I

I I I I I

M e l a z a 5470 5470 5470 5470 I I I I I I I (W)2S34 402 287 167 1-00 I I I I I I

I I I

I Urea 091 065 038 022 I I I

cac12 I 1 1 1 1 1 1

I

I I I

I

I

I I I

I I I I I

I I 1 I I I

m 2 I I I I

Agar 15 15

I 2 I 2 I 2 I

I

I I

e

I I I I

I 15 I 15 I

I -

I I

I I 1 I I I

Agw (m11 loo0 1000 1000 1000 1 I t I I

I I I p H 56 56 56 56 I I I I

CN 10 1 I 14 I 24 4 0 I I I I I I

I I I I I I

511- AsparYillus n i p -

de 3 dias aparecen farmas especializadas de reploduccian asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este se desarrolla UM vesicula y sobre la vesicula se

conidicsporas Estas conidospwas presentan un color cafe obscuro y n e g r o son gldbulares ornamentadas con un diumetro aproximado de 35 a 5 m La colonia cambia al c o l o r negro del centro B los ext remos

El micelio de este horgo es septa30 y de color blanco despues

desarrollan lae f ialides de las cuales se farmaran l a s

LA estructura de la fama de repruduccion se p-esenta en la figura 2

ru LA 7 V E S I CULA

ESTI P E

ELULA P O D A L

Figura 2 - Conidioforas y conidias de Aniger

El micelio de este h q o e8 septado de color blanco depea de 3 dias aparecen fonoas especializades de repmduccion asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este crecen fialides y de l a s fialides se forman las conidiosparas y presenta exudados ambarinoe Eetas conidiceparas presentan un color amarillo l a s conidiceporas son lisas glokulares con un diametro aproximado de 15 - 25 m

Figura 3 la estructura de la f a r m a de reproduction presenta en la

FIA

Figura 3- Conidioforos y coniaias de X t e

Este hongo presenta un micelio atercipelado y coposo inicialmente blanco presenta un raacutenquis genicula denticulado o en zigzag posteriarmente se tans amarillento Posee conidias hialinas y gldlxllams can un diaacutemetro aproximado de 15 a 3ym La estructura se presenta en la Figura 4

RANQU I S

c

Figura 4 - ConidiOacutefaros y conidias de E h s s i e n o

m cepa se ha identificado corno Penicillium W f a r t i i presenta un micelio septado con produccioacuten de micelio vegetativo aerial d e y e e de un tiempo aparecen estructurns especializadas de repocoduccion a s e x u a l Se presenta un estipe m e n t a d o unas brancpeas meacutetulas f M i d e s y conidias Elstas conidiosporas presentan un colap- verduzco son globdares y lisas con un dibtro apmximado de 4 a 6p Lae conidias son producidas en cadenas cortas La estructura se presenta en la Figura 5

C O N l D l A S

1 O r r m

Figura 5- Conidioacuteforos y coniaias de Fenicilliun

Al inicio este h q o presenta un micelio blanco pterionnente aprecen farmas especializadas de reproduccion asexual fialidee y conidicepuras I m conidiofaros se presentan en farmas piramidalee y en estos sistemas las fialidee Be localizan en g r u ~ w de dos a cuatro Las conidia3 Bon de color verde olivo son de superficie lisas subglobulares con un diametm apmximado de 2 a 3 m

La egtructura de la fcwma de reproduccion se presenta en la figura 6

Las colonias de Thnnianum en FDA se caracterizan pol tener un color verde con circulos concentricos Hay que mencionar que las colanias pmducen un olor a coco (coconut) muy caracteristico

CONlDl

Figura 6 - Conidioforos y conidias de Thanianum

516- Conclusiones v 4

_ _

el curse) de este capitulo se describieron los sietemas de reproduccioacuten de las cinco cepas de hongos filamentosos estudiados Todos estos hongos se repaoducen de manera a s e x u a l Se que l a s 5 cepas presentan estructuras muy diferentes a s i co~po diversos colores en l o s estadios de crecimiento vegetativo y ccmidiogdnesie ademds presentan conidimporas glohlares de muy diversos tamafios

c

093039 t

2 2

- La composicioacuten de l o s diferentes meampicsde cultvoutQizados pera llevar a cabo este estudio fueron medio N 2 de l a s tablas I 11111 y IV y se establecioacute prabay las diferentes fuentes de carbno (Harina de Yuca Harina de Pigo M e l a z a y Sacarosa) en matraces a una relaci6n CN de 14 para de esta manera poder observar el efecto que cada una de ell- ejerce solre la conidicgbesis de l o s hongos filamentosos estudiadas L m resultados se reman en l a s tablas V VI VII VI11 y XI y se exp-esan en base al Indice de Bporulacidn (Ie - N de esporas g de sustrato carbonado) para 7 dias de incubacion a temperatura ambiente (15-22C)

~ - -4

La Harim de Yuca es un producto amilaceo que ha demostrado ser un sustrato de gran eficiencia para la produccion de conidiosparas de hongos filamentosos ademds de ser un producto tropical de facil acceso su principal componente es el almidoacuten que corresponde al 80 en materia seca se encuentran en esta Harina pteiacutenas grasas y vitaminas del tipo B y C adamp de fibras y cenizas (Grace 1977)

la Harina de Pigo es otro sustrato amilaceo que se considerd importante utilizar debido a su alta disponibilidad en su canposicioacuten estan presentes pteiacutenas grw calcio f oacute s f m h i m tiamina riboflavina y niacina esto lo hace un sustrato interesante

La M e l a z a es el subproducto final de la fakicacioacuten de azucar es un liquido o b s c u r o denso y viscoso que se separa de la masa cocida de baja-calidad y del cual no se pede cristalizar ampamcar por amptodos mencionales y econoacutemicos en su composicioacuten estdn presentes 1 0 s amcares y otras sustancias entre l a s cuales se pueden citar l o s corapuestos nitrogenados aacutecidos aminoacidos albiminas vitaminas ceras esteroles lipid- sales minerales y cenizas etc (ICIDCA1986) Como se puede ver es un producto muy complejo por lo que puede ser un sustrato muy atractivo para su utilizaci6n como fuente de carbono en ipedios de cultivo pura la espomlaci6n de hongos filamentosos (Brinela 1987)

la s a c m a es un producto de facil adquisicioacuten y de pmduccioacuten idustrial importante por lo que se considem un sustrato atractivo para la produccioacuten de amidiosporas de hongos filamentosos La sacarosa se encuentra fonnada por una molecula de fructosa y una de glucosa l o s medios de cultivo que contienen sacarosa pcdriamos decir que son medios simples en comparacioacuten con la complejidad de la melaza y l a s harinas

521- A n i g ~

Fh la tabla V se muestran l o s Ie obtenidos para Anigerutilizardo l a s 4 fuentes de carbono antes mencionadas El mayor Ie se alcanzoacute en el medio de cultivo con k i n a de Yuca seguido de la M e l a z a la k i n a de Pigo y por Gltimo la Sacarosa se ha demostrado que durante el proceso de esterilizacioacuten la Harina de Yuca sufre un tratamiento teacutermico que hace que las moleacuteculas de almidh pasen cie una forma cristalina a un estado amdrfo (gelatinizacion) y que Ani_mr es un productm de amilasas (Raimbault 19801 lo que sugiere que la gelatinizacioacuten podriacutea facilitar el ataque enzimdtico y con esto i iberar cantidades importantes de glucosa que favoreced el crecilriiento del hongo lo que normalmente estaacute reiacionado con una produccioacuten importante de conidias

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I

I

I c- 7 DIAS

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 509xl0^9 I I I I

I I 1 I

Harina de Trigo 14 367X1^9 I I I

I I I I

Melaza 14 424x10-9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 16Ox10^8 I I I I

522- d t ~ 1 7 9 ~ ~

Eh la tabla VI se muestran l o s Ie obtenidos para A termus -utiliZando__las 4 fuentes de carbono antes mencionadas El Ie mas alto se encmtroacute en el medio de cultivo con M e l a z a seguido de la Yprina de Yuca y Trigo y por uacuteltimo la Sacarosa d t m u s es utilizado en lo s procesos de aprovechamiento de eubproductos de la industria cantildeera en cuba (meollo y bagazo) (Blanco bpez Villarl968) Esta cepa estaacute adaptada a l o s procesos de la industria cuntildeera de c u b a por lo que se esperariacutea que espurulara mejor en Melaza tal como ocurrioacute

TXBLA VI- Indices de espwulacibn para dtwreus utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa como fuente de carbono para tiempos de incubacidn de 7 dias y relacioacuten CN de 14

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I I I I I I 7 DIAS I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 60x10n9 I I I

Harina de pigo 14 403xlO-9

I I I

1 I I I

I I I I

M e l a z a 14 612xlOA9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 S40~107 1 I I

211

523- Bbassi= 1

Las resulta- 5e rem en la t ~ ~ h ~ f - - - ~ ~ - - ~ ~ e se -obtwo en el medio con Harina de Trigo m i d o de la H a r i n a de Yuca Melnza y Sacarosa Se puede obeervar que 1 0 s Ie amp altos se logran con los sustratos amiluceos que tal vez puedan ser mamp facilmente utilizados por el microoqanimno debido a l - v e s o de gelatinizacioacuten que Wren

524- Penicillium sp

Los resultados se muestran en la tabla VIII Los mayores le se alcanzaron con las Harims de Yuca y Trigo con respecto a los atros dos sustratos Se observoacute una mayor produccioacuten de micelio en los sustratos amilaceos lo que podria justificar la produccibn maacutes alta de conidias

525- Thnmianum

LBS resultados se reportan en la tabla XI Estudios hechos par Raussos (1985) demostraron la capacidad de Thanianum en la produccidn de ami la s a s utilizando almidoacuten cam0 fuente de carbono pesto que la harim de yuca y la harina de trigo son sustratos amilacecs se esperariacutea una produccioacuten impcortante de esporras tal COQLO sucedioacute para la harina de yuca y no asi para la harina de trigo Con respecto a la s a c m a el Ie tan bajo que se obtuvo con relacidn a la melaza pede ser debido a todos los compuestos que se encuentran en las m e l a z a s

c TABLA VI1- Inlices de esparcllacibn para Bhssiana utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo M e i u z a y Sacarosa axno fuente de carbono para tiempos de incubacioacuten de 7 dias y relacion CN de 14

I I I

I I I Ie I

Summ CN I I

1 I I I

I I

1 I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 1 8 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

7 DIAS

Harina de Pigo 14 702~10~9 I I I I

I I I

Melaza 14 217~10~9 I I I I

I I I I

Sacarosa i 14 8 5 8 ~ 1 0 ~ 6 I I I I

r

I I

I Ie 1

I Summ CN I

I 1 i I

I I 7 DIAS

I I I I

I 1 I I

Harina de Yuca 14 142x10^10 I I I I

I I I I

Harina de Pigo 14 832xlO-9 1 1 I I

I I I I

M e l a z a 14 293~10~9

I I I

Sacarosa 14 103x10n9

I I I I

I I I I

m IX-Indices de espauulacian para Thamianum utilizando Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa corno fuente de carbono para tiapos de incubacich de 7 dim y relacioacuten CN de 14

I I I I

I -

1 I Ie I

I Summ CN I

I I 7 D I A S t I I I

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 11ox1On1O I I I I

I I I I

Harina de Trigo 14 12Ox10-9 I I I I

I I I I

M e l a z a 14 875~10~9 I I I I

I

Sacarosa I

I i I

14 11Ox10^8 I I I

526- Conclusiones

Varios autores han demostrado la importancia de la fuente de carbono sobre la conidiogenesis de hongos f ilamentosos (Vezina y co11965 Martinelli1976) en este estudio se pudo observar que cada cepa tiene caracteristicas fisiolcjgicas de esporulacidn propias con respecto al tipo de fuente de carbono que se le proporcione Para este caso en especial la cepa de Aniper esporuld mejor en Harina de Yuca A termus en M e l a z a B m i a m en Harinri de Trigo y T harzinnum en Harina de Yuca

------Esttuiaa - - h - - i s o s (lE5) han demostrado que la concentracidn de Nieeno prwente en el mampio de cup170 ejerce una influencia directa en el nuacutemero de conidiosporas producidas por Thurzjmm par 10 que era necesario seleccionar la relacioacuten CN oacuteptima para cada cepa y para cada sustrato

la composicioacuten de l o s medios de cultivo utilizados para llevar a cabo este estudio estb presentados en las tablas I 11 I11 y IV Se utilizaron 4 diferentes relaciones CN estas fueron de 101424 y 40 empleanda UM mezcla de 23 panes de Sulfato de Amonio y 13 parte de h a toanando- 128 g de carbono como base de caacutelculo y tiempos de incubacioacuten de 7 y 14 dias l o s experimentos se realizaron en matraces de 250 ml

Ln relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despueacutes de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Anigw son mostrados en la tabla X

h datos obtenidos para Aniger nos indican que cuardo se emplea Harina de Yuca en concentracich de 40 gl y la reiaci6n CN estaacute entre 10 y 40 no es un factor determinante en la conidiogeacutenesis ya que esporula de rnanera similar entre estos r a n g o s para l o s medio a base de Harina de Trigo la CN entre 40 y 24 es donde mejm esporulacidn se obtiene

r 5 3 2 - A s m i l ~ s t

h relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de espomlaci6n obtenidos aespuk de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Rtemxs son mostradrx en la tabla XI

Lns medios de cultivo con 14 dias de incubacidn presentan el mayor ntUnero de conidiospwas a una relaci6n CN de 14 con excepcih de l o s medios con Sacarosa que mostramn en todos l o s cc~sos un compm-tamiento muy pobre con respecto al n h de conidias producidas Los mejores Ie se log-amn con Harina de Yuca y M e l a z a con una relacidn CN de-14 para 14 dias de incubacidn

Lo relaci6n que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despuds de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para B b s s i a n a son mostrados en la tabla XII

b Ie logrados para B b n s s i m e son muy similares entre si es decir no cambian significativamente l o s Ie para l o s cultivos con 14 dias de inmbacidn son bastante altos siendo el medio de cultivo con una relaci6n CN de 14 y Melaza como fuente de carbono ei queposee el mejor Ie con un tiempo de incuhcidn de 14 dias BI esta cepa se ve su capacidad de adaptacioacuten con respecto a l a s anteriores para crecer en Sackrosa

~ r

27 534- Psnicilliue sp

kiaeiampi que exiate entre 1- necG~-edt-~vcv - y h rendimientos de esparulaciOacutentilde-6btenidos despds de 7 -_Fl4 dias de cultivo en matraces para FbnciIlium sp son mostrados en la tabla XILI

_

La relacidn CN entre 10 y40 no tiene una influencia directa en la conidioghnesis de esta cepa sin embargo se dbeewa una tendencia a la disminucioacuten del N de conidiospcwas producidas en los cultivos con 14 dias de incubacih Los mayores Ie se lcgrarcm con los medios de cultivo a bnse de Harina de Yuca y Harina de Trigo

La relaci6n que existe entre la composiciiquestn quiacutemica del medio de cultivo y l a s rendimientos de esporulaci6n obtenidos desples de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Thurzzanum son mostrados en la tabla XIV

Las resultados obtenidos 1x1s mestran unatendencia hacia la obtencioacuten del m y m Ie en rangos de CN de 10 a 14 y estudios hechos par Raussos (1985) sohre el efecto de la concentraci6n de Nitriquestgeno en la oanidiogdnesis de Thaniunum pnmporcionaron una CN optima de 14 utilizando Harina de Yuca corno fuente de curbno

Sin embxqo pura una CN de 3253 obtiene un Ie para 7 dias --de incubacidn de Q16x1On9 cmparando este resultado con el resultado obtenido en mi estudio encuentro que a una CN de 40 para 7 diQs de incubacibn tengo un Ie de 132xlO-9 esto es 13 veces mamp por lo que es dificil comparar estos datos en l o s resultados obtenidos se obsewa una tendencia para los cultivos con 14 dias de incubacidn de disminuir el Ie confarme aumenta la relacidn CN y para l a s cultivos con 7 dias se observn lo contrario Los Ie mus altos se logran con l o s medios de cultivo a base de Harinu de Yuca y Melaza

536- Conclusiones

Las cepas estudiadas eSp0IWlUn dependiendo del tipo de fuente de carbono la fuente de carbono y su naturaleza tiene m infiuencia directa en la conidiogeacutenesis de l o s hongos f ilamentosos que la concentracioacuten de nitrdgeno sin embargo es recamendable la adlcidn ae nitdgeno entre l o s rargos de CN de 10 a 4 0

Para disminuir l o s costos de pmduccioacuten de conidiosporas hay que optimizar los medics de cultivo nacer la seleccioacuten de una h e m fuente de carbono para cada cepa y trhjar en rangos de CN de 14 a 4 0

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
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v mm Y DImldW 16 w w

51 Descripcioacuten morfoldgica del sistema de reproduccioacuten 16 511 Ani ger 16 512 At errstls 17 513 B h t s s i a m 10 514 Fenicillium sp 19 515 T h a n i anum 20 516 Conclusiones 21

52 Seleccioacuten de la fuente de carbono 22 521 A n i p 22 522 Aterrrstts 23 523 3htssiana 24 524 Penici1lium sp 24 525 Thami anum 24 526 Conclusiones 25

53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN 26 531 Ani gw 26 532 At erreus 26 533 B h s s i m 26 534 Pencillium sp 27 533 T h a m i anum 27 536 Conclusiones 27

54 Cineacuteticas de p-oduccioacuten de canidiosporas en esporulador de discos 33 541 Ani gar 33 542 Atam~= 33 543 Bh=ssiana B 544 Penici1lirmr sp 34 545 Thnnianum 34 546 Conclusiones 37

55 Prducciiquestn comparada de conidimporas en fermentador matraz 38

56 Recopilrsquoacioacuten de conciiciones Oacutep~lsquoimas de esporulacioacuten

VI mzus10m GElmWs 45

111 mwm4 46

-I 11 ~ BiFllrnIA 47

1 - 1mccCIm m Recientemente se ha dado un gran intereacutes en el desarrollo de

fermentaciones en medio soacutelido para la produccidn de alimentos enriquecidos con proteiacutena microbiana a partir de sustratos amilaceos (Raimbault 19801 detoxificacioacuten de p u i p a de cafe (Aquiahuati y col 19871 produccioacuten de enzimas celulasas (Raussosl985) asi cogpo de diversos metabolitos secwdarios tales carno aflataxinas antibioacuteticos (Eiawios 1987) Btos procesos implican el crecimiento de hongos f i l a m e n t o s o s sobre susCaatos soacutelidos le inoculacioacuten de estos sustratos requiere de una gran cantidad de esparas

las esporas de hongas filament- son la fonna ae resistencia y reprcduccioacuten de estos mirroarganismos y constituyen el punto de inicio de l o s procesas de fermentacioacuten en medio soacuteliao dado que se requiere de unu inoculacioacuten masiva y homogenea en el medio de cultivo y bajo ciertas condiciones puedan llevarse a cabo l a s transformaciones de bioconversioacuten deseables Por io tanto se necesita disponer de cantidades importantes de esporas (Raussos 19B51

El nuacutemero de esparas producidas por UT hongo filanentoso es principalmente funcioacuten de la composicioacuten del medio de cultivo tal como se reporta pura Aspryil Ius n i d u l m que cuando se cambia la naturaleza o la cantidad de la fuente ae carbono o de nieeno del medio de cultivo optimizado se observa ma disminucidnde la produccioacuten de esporas de este hongo filamentoso [Martimlli 1976

tos hongos filamentosos Aniger Atemetls Ebss iam Fenicillim sp y Thamianum se clasifican aentro ae l o s hongos imwrfectos o aeuteroanicetos ya que no se les conoce reproduccih s e d 1 (Alexopoulos 1962)

El intereacutes de estudiar estos cuatro homos filumentosos radica en lo siguiente

A n i m posamp la capacidad de -air amilasas dependiencio de l a s condiciones de cuitivo debido a esta caracteristica la utilizacidr de Ari-aar para mmx-Jtar e conteniac proteico de la yuca (Raimbauit 1980 tlene relevante imponancia aaemb prcduce pectinasas

A t m m tiene la capacidad de desnncoliawse s o b e 1~ celulosa microcristalina lo que ie permite apmvecna- el bagam de la cantildea de m c a r (Brizuela et al 1987) ademamp elabma sui=stancies antiiacterianas ae toxicidaci variabie (flavipinas terreina citrina emim etc)(bttm etal 1985)

$ lt- 46

I u v

- -

B m i a m El geacutenero comprende S c 4 especies snpdf itas o paraacutesitcs de insectos entre los que se enmen-wa B h z s s i m la c u a l parasita art6pteros como Melanoplus smvinipes (Mercardier y Khachataurians 1987) contra coieoacutepteros tales como b p t i m t a r s a ecernilineata (Hajek etmal 1987) Anartis sahlifara Apim rchari Nisotra arbiculata Desmidopkms hebes Chilo onellus (Padit y Sam 1988)

Amicillium sp la imprtancia de este hongo es sobre todo en la industria lactea de antibioacuteticos y recientemente para la detoxificacioacuten de la p u l p a de cafe (Aquiahuatl y col 1988)

T harzianum Las especies de3 genero Zl-i~~nna sor frecuentemente empleadas en los p-ocesos de hidrdlisis de le celulosa Estos horgcs pmducen cantidades importantes de exoenzimas capaces de hidmlisar completamente la celuiosa en glucosa (Raussos 1981) Ademaacutes la cepa de T hruzianum fue utilizada con eacutexito para el enriquecimiento en pteinas de la harina de yuca por fermentacioacuten en medio liacutequido (Muindi y Hanssen 1981)

Otra caracteriacutestica impartante es que T harziunum es un antagonista micrdbiano poderoso Olivjer y Germain (1983) demostraron claramente que T viride y T hnrzimurc producen UM

tales como Botrytis c i m lampizoctonin solunipetc - inhibicioacuten en ciertns fases aei desarrollo de hongos fitopatoacutegenos

3

21 F ISIWIA DE CRD2IMW

Lx horgos filamentaeos m microoapnnismos eucaribticos quimiarganotrdficog estrictamente aarbbios y se repmducen de manara natural por medio de conidicepmas

La clasificacih de los horgoe esth basaamp principalmente en las caracterlsticaa de las agpcrras e e x u a l e e y de l o e cuarpos fructZfaroe presentes durante l o s estadlos s e x u a l e s de w1 ciclo biolbgico Loe hangoe con un estado e e x u a l conocido em denaninan h v perfectos Sin embaryo rmuchcs h o w eo10 producen eapcrras s e x u a l e s y cue- fructlf imx bajo ciertas corwiiciones exprimentales m y precisas si ea que las pmducen

Asi pues todavila no 8e conocen l o s ciclos biolQicos cunpleto8 con l o s estadroe sexuales ccmpletoe de muchos hongog Para estos hongos ein estadbs sexuales conocidos les conoce como how imperfectas (Talbot 1978)

La vida de un hongo imperfecto 8e divide en CUEltro etapas fisiolbgiacutecas impctantes que son la latencia la germinacibn la marltiplicacitm vegetativa y la conidiogbnesis (Rcrussosl985) - P

La conidioapora de un hongo f i lamentoso e8 una parte altamente espetcializada de mproduccibn Bupewivencia y dierparsibn ncamalmente delimitadas de iexclas muchas partes de l o s hongos y caracterizada por un metabolismo minim bajo conteniao de agua y carece da movimiento IcitoplasmCttim Aparte de m obvio p a p e l ecolbgico en la naturaleza l a s conidiosporas son usah en el laboratorio colpa irdculo en la pmduccibn de biomass para egtcperimentos o pmcm industriales y mhs recientemente para real izar directamente transformaciones qulmicas especff icas (Vezina y Sing 1975)

La conidiospwa esta en latencia cuando no gemina ampampa latencia pede ser de dos tipos constitucional o exQena

Con respecto Q la latencia constitucional la conidiospara puede IX) genninar aunque se encuentre bajo condiciones ambientales ade- pem primero requiere un proceso de activacibn para vencer una propiedad inata en el estado latente el cual pede ser una bancera pura la penetracibn de nutrientes una dDstruccih metab3lica o una auto-irhibiciamp~

Por otra parte en la latencia exwena la conidiospra es inactiva porque hay cordiciones ambientalee aesfavaruhles qulmicas yo flsicas y Pplede rapidamente reanudar m d e m l lo en un medio ambiente favorable E T 1 este tipc de

4

latencia la ganninacitm es contmlmamp p o r la necesidad esencial fact de- ampg2--r io - 2

Charamp todas la6 barreras de latencia han sido removidas la amidiospara normalmente requiere de niveles de temperatura de humedad favorable8 y ademhe de ciertas subetancias en el medio ambiente para canenzar el proceeo de germinacibn DespUes del inicio de esta nueva fase de genninacidn aparece la reepiracibn aardbica que 88 un requerimiento m 1 para todas las espocras Alguna8 canidiasparaa pueden exigir ademhs de estos factores un requerimiento de CDZ la mayor3a de las esporas requiere de una fuente externa de carbohidratos para germins aigunas otras pceeen adecuadamente res~nms oryhicas pero tienen la necesidad solamente del agua (Smith 1978)

BJ 1- siguientes gheros de hongos filamentosos que ee estuiian en este trabajo c u m Aspargillus Beauveria Axicillim sp y Zl-ichoderrpa (hongos imperfectos) las conidiosporas repmeentan la fama de reproduccibn a s e x u a l La definicibn que Sussman (1965) ha dado de l a s conidiceporas es la siguiente Todo perPodo de vida lento o intarrupcih reversible de desarrollo del cuyaniemo la caracterhtica fundamental de la oonidiospaota es que hay un irdividuo en potencialidad esta potencialidad esta reportada en el tiempo de latencia

211 Las etapas fieiologicas de crecimiento

a) La geminacih de mnidiospmas

La genninacidn es la suma de l o s procesce y de los cambios que intervienen en la recuperacibn del desarrollo de la fanm en la latencia y en la transformacibn de una estructura diferente (Allen1965) EB decir tambian el -pocimer estad30 imvemible que es abservado cano una diferencia del organismo en latencia el juicio pede ser formado soh l o s criterios morfoltrgicos citol6gicos fisiolbgicce o bioqulmicos (Sussman 1975)

b) La multiplicacibn vegetativa

Esta etapa romprende en realidad varias partes ia mamps importante corresponde a la fase de multiplicacibn de tipo exponencia1 del micelio cuando estamp desarrollado en nume- ramificaciones y extremos a UM pmduccibn de biomasa IRoyssos 1985) c) La conidiwhesis

La conidicghesis consiste en UM sucesiEcl de eventos internos en la dlula micelial (proliferacib del retlculo endoplasmdtico de vacuolas y nkleos) que temira en la iontacibn de conidiosporas la produccibn y

I

x - 2 L - - A ~

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liberncibn de estas (Imrpent 1972 Fewe eco111975 De hecho la conidiogbesis de hongos filmentosos es un proceso muy ample jo

22 FIS1OLLXIA E EsFcrRuLACION

La conidioghesis es una etapa fisioltgiccr muy importante para l o s horgos imperfectos eta etapa comesponde a la fonnacibn

y liberacih de conidiosporas

El coanplejo proceso de esparulacibn en la conidioghesis pede ser visto cano la integracibn de algunos eventos biolbgicos La habilidad para cambiar de una fonnn de desarrollo filamentoso vegetativo a UM fonne ae espora reproductiva y generalmente esfGrica es el resultado final de un metdbolismo que responde a cambios fisicoqufmicos especlficos del medio ambiente (pH CO O Z temperatura humedad o la aparicibn de al- metabolito secundario) l o s cuales ejercen cambios en los estTmulos internos que regulan la actividad celular

Es hitido que el desencadenamiento de la esporulacibn es inducido por un factor limitate que desaparece en el medio de cultivo durante el crecimiento del hoqo La naturaieza de este factor es muy variable Se supone que el agotamiento de la fuente de carbono-o de nitrbgeno es generalmente el factor limitante Sin embaqo no deben olvidarse ios demas factores fisicoqulmicos untes mencionados

Un desancollo n o r m a 1 de micelio y una tuena conidiog6nesis son l a s condiciones previas G m produccibn imporLante ae midiosporas (Rcysscs 1985 El nilmero ae conidiosporas producidas por un hongo filamentoso es principalmente funcibn de la cantidad de la fuente de carbono y de nitriquestgeno presente en el medio de cultivo

El efecto de induccibn-inhibicibn de la conidicgbesis de Aniger fua puesto en evidencia por Gnlbraith y S m i t h (1969) De la misma manera la irduccidn del riiLmo endbgeno de esporulacibn de Aniger es influenciaamp por la relacibr glucosapotusio y por l o s oligoelementos presentes en el nedicl de cultivo (Jerebzoff eta11976)

En los medios de cultivc las sales Icineraies a urle concentacibn elevada podrlan tener los efectos opuestas sobre el crecimiento y la conidioghesis de homos f i l m e n t o s o s (Girdruth 1977 Slayan y Tatm 1954 Lilly L9euro51 De a misna manera la aereacibn y la humedad poseer una influencia en la pduccibn cuantitativa de coniaiwpras ae P m p e f w t i (Maheva et col 1984)

T

___ ~ ~~ - ~- ~ ~ ~ -~

deben ser definidas para a especie h e 5 un medio amp4cultivo optimizado para la produccibn de conidiwporns de una especie puede no ser adecuado para alguna otra (Vezim y co11965)

23 PRclDuccION DE E S O R A S

Diferentes tecnicas sa conocidas para la produccibn masiva de esparas La mds antigua consiste en cultivar el mirrocqganismo sobre una superficie en UT ampio de cultivo con agar ya sea en cajas de Petri a nivel labratorio o en btellns Rolux para fines prticticcs Osta tecnica presenta graves problemas de recoleccibn y la manipuiacibn de u n h e m importante de frasccs ademas se debe llevar a cabo bajc asepsia canpleta

Se ha mostrado la posibilidad de producir esporas en cultivo llquido utilizardo fermentadores esterilizables y extrapolables a nivel industrial (Bmderic eta11982)

Se h a n hecho estudios para producir esporas utilizando sustratos nmilaceos en ferntadores de lecho fijo (Maheva y col 19841 y mediante el uso de charolas en l a s cuales se coloca el sustrato en capas y se pone en una estufa de incubacibn (Vezina 1975) y ~ s o b r e pan de cebamp para producir esporas de Penicillium laucun en la elaboracibn de quesos (Nougaret 19821 ~

p Ultimamente se ha desarrdllado un proceso de cultivo en

superficie sobe un medio amplido utilizando un fermentador de discos rotatorios el c u a l ha dado henos resultados pero no puede ser escalado a un nive mayor (RaimLault y Raussos 1985)

Se ha desarrollado tam5i8n otrc amptodo de pmduccibn de espus solre soporte amplido esto es con la utilizacibn de bagazo de camp (Roussos y coldboradores 1988 certificado de invencibn)

2 4 irsos DE LAS EspoRAs

Eb la produccibn industrial de productos derivados de las fementaciones con hongos filmentosos la inoculacibn de los sustratos requiere de una gran cantidad de conidiosporcs ya que constituyen el punto de inicio de estos procesos de fernentacidn

La importancia de l o s cinco hongos fitmentosos estudiados radica en lo siguiente

~ p ~ ~ ~ l ~ nigerhiunenta el contenido pmteicc de le yucs (hinhult 1980) ademris de poseer actividad pectinolltica

ASprgiIlus te-mm p e e actividad p - a e aprovechamiento de la cantildea de azucar (Brizuela 1987) ademamp elaboran dos substancias antihcteriens de toxicidad variabie (flakripinas citrirn] (Bottm etai965)

7 _

- - ~ ~ ~ - ~~ -- - - i -

B s a u w i a bassima es parbita de insectos por lo qua ayuda en lucha biol6gica adema de producir enzimas como quitiMeas y 1 ipaears

micjllirm sp egta 0CPa posee una alticapacidad ampa e la cafeina de la pllpa de cafe esto rice penuite eliminar uno de lo s principales toxicos en la pulpa y de esta manera disminuir la contaminacion que produce y emplearla para alimentacion animal

2)-ickdema hurzidoum es un pl0dUctor de celulasas y ayuda en lucha biol6gica ya que m la propiedad de em- un antagonista poderaeo con respecto a un cierto rimero de hongos fitoputiquestgeme

( R o w e o s 19851

- _I__I k -

--

l- probar el efecto del tipo de la fuente de carbono en la

empleados en l o s procesos de fermentacioacuten dlida I produccioacuten masiva de midiosporas de l o s p-incipales horqcs

2- Probar el efecto combinado del tipo de la fuente de carbm y la relacioacuten CN en la produccioacuten masiva ae amidiosporas

3- Llevar a cabo la produccioacuten rnasiv de conidiospwas en un fermentador de discos rotatorios de 2 i

9

IDS micmotyanismas estudiados en este t r a j o fueron P s P w g i I I u s n i p ORSIUH NlO A s p e r g i l I u s t m u s cepa del ICIDCA (Instituto cubano para la Investigacioacuten de l o s Derivados de la Cantildea de Azucur) B e a u w i d hssiann cepa d e l ICIDCA Fanicillium sp cepa de la uA y Zkichoderma harzianum CCM F470 (Czechoslovak Collection of Microorganisms) ampliamente descrita por Rcwsg~os (1985)

4 2 MEDIOS DE CULTIVO

4 2 l Medios de comervaciOacuten

las cepas de Aniger A tanclrsus Fenicillium sp y Tharzianum son resembradas en un medio de PDA (papa- dextrasa-agar) y la cepa de B a i u n u es resenbada en PDA con 05 de extracto de levadura cada 6 meses e incubadas durante 7 dias a 29C para despueacutes ser conservadas en refrigeracioacuten durante 6

- meses apracimadamente ~ ~

4 2 2 Medios de esparulacidn

Se probaran l a s siguientes fuentes de cwbmHarina de Yuca Harina de P i g o M e l a z a y Sacarosa con relacioacuten CN de 10 14 24 Y 4 0

a) FmlaciOacuten de los medios

i

t

Lxw medios de cultivo utilizados para la produccioacuten de conidiospwas de Aniger A terreus Bampiana Amicillium p y Thamianum se muestran en l a s tablas I 11 I11 y IV

43 CONDICIONB DE CULTIVO

4 3 1 Inoculacioacuten

El medio de cultivo se inocula en masa este modo de inoculacioacuten consiste en mantener a 40C el medio de cultivo para posteriannente agregar uryt suspensidn de conidiospm-as de concentracioacuten conocida (2 x lo7 esporaWgr de sustrato) El ampio inoculado se agita para obtener una disiribucioacuten hamogenea en el cam ae maeaces Nand0 se utiiiza el fermentaamp de discos se pone en funcionamiento el sistema rotatwio para que SS distribuya el medio de cultivo inocuiaao en l o s discos de forma hmcqenea

F

432 Crecimiento--yespwulacion - - - -

Los cultivos se incuban a temperatura de laboratorio de 18 a 23C durante 7 y 14 dias Al fermentada- de discos se le suministra un flujo de aire estdril con un gasto de 4 lhr durante el periacuteodo de incubncioacuten

44 MEXDO PARA LA F9OJXJEION DE CONIDICSRXA5

Se conocen divemos amptodos para la pmducci6n de conidiosporas nosotras utilizaremos mntraces Erlen Meyer de 250 m1 y Fermentazdares de Discos

441 Matraces Erlen Heyer de 250 ml

El medio de cultivo se reparte en matraces Erlen Meyer de 250 m1 a rampn de 20 m1 par matraz y se obtura con un tapamp de algodoacuten se esteriliza en autoclave a 121C durante 20 min

442 Fermentada- de discos

El esquema del fermentada- de discos rotutorios utilizado se muestra en fmma detallada en la figura 1 El fermentador conteniendo300 m1 de medio de cultivo se esteriliza en autoclave a 121C por 45 min

-

e

a) Descripcioacuten del fermentada-

El fermentador de discos que se presenta en la fig 1 esta fannado por una cuba de vidrio la c u a l tiene una entrada y una salida en la parte superiorde la cuke se coloca una platina que tiene dos entradas una para realizar la inoculacioacuten del medio de cultivo y otra para airear esta platina sostiene un eje en el centro satre el eje se colocan 11 pares de discos formados por 2 m a l l a s de acero inoxidable de 2 mm de espesor y tamantildeo de malla de 4 mm c m un diaacutemetro de 10 c m y separados cuda par por 10 mm con unas rondanas especiales de acero inoxidable en el extremo inferior del eje se coloca una abrazadera la c u a l ejece presioacuten s e e l o s discos y con esto se mantienen fijos el total de 22 discos nos proporciona una superficie uacutetii de 172787 cm2 en la parte superior del eje se localiza un T la omi nos pemitlra colocar un motor y con esto hacer girar los disc-

b) Fimcionamiento y uso

El funcionamiento del fementaaor ae discos es de la siguiente manera LKB vez que se ha agregado e medic de cultivo y se ha esterilizado se coloca a un rotor de marera harizontal lo que nos permitiraacute mantener a l o s discos inmerso= en el medio ae cultivo y de esta forma una vezque se va enfrianio se adhiera a ellos el medic de cultivo se i m l a cunni0 se sncuentra en un promedio de

11

I ~

tempertura de 30 y 35CYTbl medio aun se encuentra licfuido) y asi poder tener una distriMciOacuten hanogenea de l a s esparas en el medio de cultivo (inoculacioacuten en masa) Una vez que el medio de cultivo se ha impregnado a l o s diecog el farmentador puede ser colocado de manera vertical en un l u g = adecuado

__ - - - - -

45 COSECHA Y CxlENrA DE EspoRAs

a) Para l o s cultivos en matraces se agmgu a cada uno 100 m1 de agua destilada estkil adicionada de Tbreen 80 (01) y se hunogeniza mediante agitacih magrktica

b) Para l o s cultivos en fementadares de discos 58 introduce al fermentadar 300 m1 de agua desti lada estampil adicionada de Tween 80 (01) y se mantienen los discos en rotaci6n durante 10 min

El conteo de l a s mas 88 realiza mediante el uso de kas de Malassez con suspensiones convenientemente diluidas y aplicando la siguiente f b l a

A + B + CJ = X 10 = N

A + B + C J = cuenta total de esporas en 10 cuhdros de la celda - x N - mimero de espmas pranedio

1D = factor de dilucioacuten 3

t

1 -Cuva

2 - P l a r i n a

3-Eje

4 -Disc05

5 - E n t rad2 zuper i or de l a cuva

6 - Sal ida i n f e r i o r d e l a cuva

- - Tapon d e entrada y s a l ida

r - 12

-

Medio I I I 3 I 4 I

I I 1 I I I I I Harim de I I I I

Yuca 4 0 4 0 4 0 I 4

I I I

Cgl) 1 1 I 2

I

I I I I I I

I I I I I I

(NH4)2904 402 287 167 100 I I I I

I 1 I I I

Urea 091 065 038 022

cac12 1 1 1 1 1 I 1 I

I I I I I I

I I I I

1 I 1 I I I

I ~~~ ~ ~ ~

I I I I

K H 2 p o 9 2 I 2 I 2 I 2 I I I I t I

I I I - I I I

Ag8r 15 15 I 15 I 15 I I I I 1 I I

I I I I I Agua (ml) loo0 1000 1000 1000

I I I I I

1 I I I I

I CN 10 I 14 I 24 I 40 I

I I I I I

I I I 1 I I

1 pH 56 56 156 56

I I I I I 1

Medio I I I I

Harim de I I I I

Trigo 5714 5714 5714 5714

(gl) I 1 1 2 I 3 I 4 I I I I I

I I I I I I

I I I I I 1

I I I I I I

(NH4)ZSX 402 287 167 100 I I I I I I

I I I I I I

u r e a 091 065 038 (322 I I I I I 1

1 I I I I I ~~ ~~ ~~~

I cac12 1 I 1 I 1 I 1 I

I I

~ I - s 2 I 2 I 2 I 2 I

e I I I I I

J q a r 15 15 I 15 I 15 I

I I

I I I I I I

I 1 I I I I

I I I I I

I I I I I I

Agua (m11 loo0 1000 1000 1000 I I 1 I I I

I I I I I I

I pH 56 56 56 56 I I I I I I

1 I I I I I

I cm 10 I 14 I 24 I 40 I I I I I I I

r

t

14

c

C_ de l o s medios S a m a camo

r

de cultivo para fuente de carbono

Hedio I I I I

(gl) 1 2 3 I 4 I

I I I I I I I I

I I

I I I I I

SaculmBa 3040 3 0 4 0 3040 3040 I I

I I

~ N l i 4 ) 2 S X 402 287 167 100 I I I

I I

1 I 1 I 1 I

I

I 2 I 2 I 2 I I I I

95

I I

I I

I I

I I

I I I I

urea 091 065 038 022 I I I

I I I I I I

cac12 1 m 2

I I I

I I I I

I I I

I I

Agar I 15 15 I 15 I I

I I I I I

Agua (m11 1000 1000 1000 1000 I I I I I I

56 56 56

L -

I I I

I I I I I

I pH 56

cN 10 14 24 4 0

I I I I I I

I I

I I

I I

I I

I I

I

r

Hedio

I I I

I I I I

(gl) 1

I I

I 2 I 3 4 I

I I

I I

I I I I I

M e l a z a 5470 5470 5470 5470 I I I I I I I (W)2S34 402 287 167 1-00 I I I I I I

I I I

I Urea 091 065 038 022 I I I

cac12 I 1 1 1 1 1 1

I

I I I

I

I

I I I

I I I I I

I I 1 I I I

m 2 I I I I

Agar 15 15

I 2 I 2 I 2 I

I

I I

e

I I I I

I 15 I 15 I

I -

I I

I I 1 I I I

Agw (m11 loo0 1000 1000 1000 1 I t I I

I I I p H 56 56 56 56 I I I I

CN 10 1 I 14 I 24 4 0 I I I I I I

I I I I I I

511- AsparYillus n i p -

de 3 dias aparecen farmas especializadas de reploduccian asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este se desarrolla UM vesicula y sobre la vesicula se

conidicsporas Estas conidospwas presentan un color cafe obscuro y n e g r o son gldbulares ornamentadas con un diumetro aproximado de 35 a 5 m La colonia cambia al c o l o r negro del centro B los ext remos

El micelio de este horgo es septa30 y de color blanco despues

desarrollan lae f ialides de las cuales se farmaran l a s

LA estructura de la fama de repruduccion se p-esenta en la figura 2

ru LA 7 V E S I CULA

ESTI P E

ELULA P O D A L

Figura 2 - Conidioforas y conidias de Aniger

El micelio de este h q o e8 septado de color blanco depea de 3 dias aparecen fonoas especializades de repmduccion asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este crecen fialides y de l a s fialides se forman las conidiosparas y presenta exudados ambarinoe Eetas conidiceparas presentan un color amarillo l a s conidiceporas son lisas glokulares con un diametro aproximado de 15 - 25 m

Figura 3 la estructura de la f a r m a de reproduction presenta en la

FIA

Figura 3- Conidioforos y coniaias de X t e

Este hongo presenta un micelio atercipelado y coposo inicialmente blanco presenta un raacutenquis genicula denticulado o en zigzag posteriarmente se tans amarillento Posee conidias hialinas y gldlxllams can un diaacutemetro aproximado de 15 a 3ym La estructura se presenta en la Figura 4

RANQU I S

c

Figura 4 - ConidiOacutefaros y conidias de E h s s i e n o

m cepa se ha identificado corno Penicillium W f a r t i i presenta un micelio septado con produccioacuten de micelio vegetativo aerial d e y e e de un tiempo aparecen estructurns especializadas de repocoduccion a s e x u a l Se presenta un estipe m e n t a d o unas brancpeas meacutetulas f M i d e s y conidias Elstas conidiosporas presentan un colap- verduzco son globdares y lisas con un dibtro apmximado de 4 a 6p Lae conidias son producidas en cadenas cortas La estructura se presenta en la Figura 5

C O N l D l A S

1 O r r m

Figura 5- Conidioacuteforos y coniaias de Fenicilliun

Al inicio este h q o presenta un micelio blanco pterionnente aprecen farmas especializadas de reproduccion asexual fialidee y conidicepuras I m conidiofaros se presentan en farmas piramidalee y en estos sistemas las fialidee Be localizan en g r u ~ w de dos a cuatro Las conidia3 Bon de color verde olivo son de superficie lisas subglobulares con un diametm apmximado de 2 a 3 m

La egtructura de la fcwma de reproduccion se presenta en la figura 6

Las colonias de Thnnianum en FDA se caracterizan pol tener un color verde con circulos concentricos Hay que mencionar que las colanias pmducen un olor a coco (coconut) muy caracteristico

CONlDl

Figura 6 - Conidioforos y conidias de Thanianum

516- Conclusiones v 4

_ _

el curse) de este capitulo se describieron los sietemas de reproduccioacuten de las cinco cepas de hongos filamentosos estudiados Todos estos hongos se repaoducen de manera a s e x u a l Se que l a s 5 cepas presentan estructuras muy diferentes a s i co~po diversos colores en l o s estadios de crecimiento vegetativo y ccmidiogdnesie ademds presentan conidimporas glohlares de muy diversos tamafios

c

093039 t

2 2

- La composicioacuten de l o s diferentes meampicsde cultvoutQizados pera llevar a cabo este estudio fueron medio N 2 de l a s tablas I 11111 y IV y se establecioacute prabay las diferentes fuentes de carbno (Harina de Yuca Harina de Pigo M e l a z a y Sacarosa) en matraces a una relaci6n CN de 14 para de esta manera poder observar el efecto que cada una de ell- ejerce solre la conidicgbesis de l o s hongos filamentosos estudiadas L m resultados se reman en l a s tablas V VI VII VI11 y XI y se exp-esan en base al Indice de Bporulacidn (Ie - N de esporas g de sustrato carbonado) para 7 dias de incubacion a temperatura ambiente (15-22C)

~ - -4

La Harim de Yuca es un producto amilaceo que ha demostrado ser un sustrato de gran eficiencia para la produccion de conidiosparas de hongos filamentosos ademds de ser un producto tropical de facil acceso su principal componente es el almidoacuten que corresponde al 80 en materia seca se encuentran en esta Harina pteiacutenas grasas y vitaminas del tipo B y C adamp de fibras y cenizas (Grace 1977)

la Harina de Pigo es otro sustrato amilaceo que se considerd importante utilizar debido a su alta disponibilidad en su canposicioacuten estan presentes pteiacutenas grw calcio f oacute s f m h i m tiamina riboflavina y niacina esto lo hace un sustrato interesante

La M e l a z a es el subproducto final de la fakicacioacuten de azucar es un liquido o b s c u r o denso y viscoso que se separa de la masa cocida de baja-calidad y del cual no se pede cristalizar ampamcar por amptodos mencionales y econoacutemicos en su composicioacuten estdn presentes 1 0 s amcares y otras sustancias entre l a s cuales se pueden citar l o s corapuestos nitrogenados aacutecidos aminoacidos albiminas vitaminas ceras esteroles lipid- sales minerales y cenizas etc (ICIDCA1986) Como se puede ver es un producto muy complejo por lo que puede ser un sustrato muy atractivo para su utilizaci6n como fuente de carbono en ipedios de cultivo pura la espomlaci6n de hongos filamentosos (Brinela 1987)

la s a c m a es un producto de facil adquisicioacuten y de pmduccioacuten idustrial importante por lo que se considem un sustrato atractivo para la produccioacuten de amidiosporas de hongos filamentosos La sacarosa se encuentra fonnada por una molecula de fructosa y una de glucosa l o s medios de cultivo que contienen sacarosa pcdriamos decir que son medios simples en comparacioacuten con la complejidad de la melaza y l a s harinas

521- A n i g ~

Fh la tabla V se muestran l o s Ie obtenidos para Anigerutilizardo l a s 4 fuentes de carbono antes mencionadas El mayor Ie se alcanzoacute en el medio de cultivo con k i n a de Yuca seguido de la M e l a z a la k i n a de Pigo y por Gltimo la Sacarosa se ha demostrado que durante el proceso de esterilizacioacuten la Harina de Yuca sufre un tratamiento teacutermico que hace que las moleacuteculas de almidh pasen cie una forma cristalina a un estado amdrfo (gelatinizacion) y que Ani_mr es un productm de amilasas (Raimbault 19801 lo que sugiere que la gelatinizacioacuten podriacutea facilitar el ataque enzimdtico y con esto i iberar cantidades importantes de glucosa que favoreced el crecilriiento del hongo lo que normalmente estaacute reiacionado con una produccioacuten importante de conidias

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I

I

I c- 7 DIAS

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 509xl0^9 I I I I

I I 1 I

Harina de Trigo 14 367X1^9 I I I

I I I I

Melaza 14 424x10-9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 16Ox10^8 I I I I

522- d t ~ 1 7 9 ~ ~

Eh la tabla VI se muestran l o s Ie obtenidos para A termus -utiliZando__las 4 fuentes de carbono antes mencionadas El Ie mas alto se encmtroacute en el medio de cultivo con M e l a z a seguido de la Yprina de Yuca y Trigo y por uacuteltimo la Sacarosa d t m u s es utilizado en lo s procesos de aprovechamiento de eubproductos de la industria cantildeera en cuba (meollo y bagazo) (Blanco bpez Villarl968) Esta cepa estaacute adaptada a l o s procesos de la industria cuntildeera de c u b a por lo que se esperariacutea que espurulara mejor en Melaza tal como ocurrioacute

TXBLA VI- Indices de espwulacibn para dtwreus utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa como fuente de carbono para tiempos de incubacidn de 7 dias y relacioacuten CN de 14

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I I I I I I 7 DIAS I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 60x10n9 I I I

Harina de pigo 14 403xlO-9

I I I

1 I I I

I I I I

M e l a z a 14 612xlOA9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 S40~107 1 I I

211

523- Bbassi= 1

Las resulta- 5e rem en la t ~ ~ h ~ f - - - ~ ~ - - ~ ~ e se -obtwo en el medio con Harina de Trigo m i d o de la H a r i n a de Yuca Melnza y Sacarosa Se puede obeervar que 1 0 s Ie amp altos se logran con los sustratos amiluceos que tal vez puedan ser mamp facilmente utilizados por el microoqanimno debido a l - v e s o de gelatinizacioacuten que Wren

524- Penicillium sp

Los resultados se muestran en la tabla VIII Los mayores le se alcanzaron con las Harims de Yuca y Trigo con respecto a los atros dos sustratos Se observoacute una mayor produccioacuten de micelio en los sustratos amilaceos lo que podria justificar la produccibn maacutes alta de conidias

525- Thnmianum

LBS resultados se reportan en la tabla XI Estudios hechos par Raussos (1985) demostraron la capacidad de Thanianum en la produccidn de ami la s a s utilizando almidoacuten cam0 fuente de carbono pesto que la harim de yuca y la harina de trigo son sustratos amilacecs se esperariacutea una produccioacuten impcortante de esporras tal COQLO sucedioacute para la harina de yuca y no asi para la harina de trigo Con respecto a la s a c m a el Ie tan bajo que se obtuvo con relacidn a la melaza pede ser debido a todos los compuestos que se encuentran en las m e l a z a s

c TABLA VI1- Inlices de esparcllacibn para Bhssiana utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo M e i u z a y Sacarosa axno fuente de carbono para tiempos de incubacioacuten de 7 dias y relacion CN de 14

I I I

I I I Ie I

Summ CN I I

1 I I I

I I

1 I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 1 8 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

7 DIAS

Harina de Pigo 14 702~10~9 I I I I

I I I

Melaza 14 217~10~9 I I I I

I I I I

Sacarosa i 14 8 5 8 ~ 1 0 ~ 6 I I I I

r

I I

I Ie 1

I Summ CN I

I 1 i I

I I 7 DIAS

I I I I

I 1 I I

Harina de Yuca 14 142x10^10 I I I I

I I I I

Harina de Pigo 14 832xlO-9 1 1 I I

I I I I

M e l a z a 14 293~10~9

I I I

Sacarosa 14 103x10n9

I I I I

I I I I

m IX-Indices de espauulacian para Thamianum utilizando Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa corno fuente de carbono para tiapos de incubacich de 7 dim y relacioacuten CN de 14

I I I I

I -

1 I Ie I

I Summ CN I

I I 7 D I A S t I I I

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 11ox1On1O I I I I

I I I I

Harina de Trigo 14 12Ox10-9 I I I I

I I I I

M e l a z a 14 875~10~9 I I I I

I

Sacarosa I

I i I

14 11Ox10^8 I I I

526- Conclusiones

Varios autores han demostrado la importancia de la fuente de carbono sobre la conidiogenesis de hongos f ilamentosos (Vezina y co11965 Martinelli1976) en este estudio se pudo observar que cada cepa tiene caracteristicas fisiolcjgicas de esporulacidn propias con respecto al tipo de fuente de carbono que se le proporcione Para este caso en especial la cepa de Aniper esporuld mejor en Harina de Yuca A termus en M e l a z a B m i a m en Harinri de Trigo y T harzinnum en Harina de Yuca

------Esttuiaa - - h - - i s o s (lE5) han demostrado que la concentracidn de Nieeno prwente en el mampio de cup170 ejerce una influencia directa en el nuacutemero de conidiosporas producidas por Thurzjmm par 10 que era necesario seleccionar la relacioacuten CN oacuteptima para cada cepa y para cada sustrato

la composicioacuten de l o s medios de cultivo utilizados para llevar a cabo este estudio estb presentados en las tablas I 11 I11 y IV Se utilizaron 4 diferentes relaciones CN estas fueron de 101424 y 40 empleanda UM mezcla de 23 panes de Sulfato de Amonio y 13 parte de h a toanando- 128 g de carbono como base de caacutelculo y tiempos de incubacioacuten de 7 y 14 dias l o s experimentos se realizaron en matraces de 250 ml

Ln relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despueacutes de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Anigw son mostrados en la tabla X

h datos obtenidos para Aniger nos indican que cuardo se emplea Harina de Yuca en concentracich de 40 gl y la reiaci6n CN estaacute entre 10 y 40 no es un factor determinante en la conidiogeacutenesis ya que esporula de rnanera similar entre estos r a n g o s para l o s medio a base de Harina de Trigo la CN entre 40 y 24 es donde mejm esporulacidn se obtiene

r 5 3 2 - A s m i l ~ s t

h relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de espomlaci6n obtenidos aespuk de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Rtemxs son mostradrx en la tabla XI

Lns medios de cultivo con 14 dias de incubacidn presentan el mayor ntUnero de conidiospwas a una relaci6n CN de 14 con excepcih de l o s medios con Sacarosa que mostramn en todos l o s cc~sos un compm-tamiento muy pobre con respecto al n h de conidias producidas Los mejores Ie se log-amn con Harina de Yuca y M e l a z a con una relacidn CN de-14 para 14 dias de incubacidn

Lo relaci6n que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despuds de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para B b s s i a n a son mostrados en la tabla XII

b Ie logrados para B b n s s i m e son muy similares entre si es decir no cambian significativamente l o s Ie para l o s cultivos con 14 dias de inmbacidn son bastante altos siendo el medio de cultivo con una relaci6n CN de 14 y Melaza como fuente de carbono ei queposee el mejor Ie con un tiempo de incuhcidn de 14 dias BI esta cepa se ve su capacidad de adaptacioacuten con respecto a l a s anteriores para crecer en Sackrosa

~ r

27 534- Psnicilliue sp

kiaeiampi que exiate entre 1- necG~-edt-~vcv - y h rendimientos de esparulaciOacutentilde-6btenidos despds de 7 -_Fl4 dias de cultivo en matraces para FbnciIlium sp son mostrados en la tabla XILI

_

La relacidn CN entre 10 y40 no tiene una influencia directa en la conidioghnesis de esta cepa sin embargo se dbeewa una tendencia a la disminucioacuten del N de conidiospcwas producidas en los cultivos con 14 dias de incubacih Los mayores Ie se lcgrarcm con los medios de cultivo a bnse de Harina de Yuca y Harina de Trigo

La relaci6n que existe entre la composiciiquestn quiacutemica del medio de cultivo y l a s rendimientos de esporulaci6n obtenidos desples de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Thurzzanum son mostrados en la tabla XIV

Las resultados obtenidos 1x1s mestran unatendencia hacia la obtencioacuten del m y m Ie en rangos de CN de 10 a 14 y estudios hechos par Raussos (1985) sohre el efecto de la concentraci6n de Nitriquestgeno en la oanidiogdnesis de Thaniunum pnmporcionaron una CN optima de 14 utilizando Harina de Yuca corno fuente de curbno

Sin embxqo pura una CN de 3253 obtiene un Ie para 7 dias --de incubacidn de Q16x1On9 cmparando este resultado con el resultado obtenido en mi estudio encuentro que a una CN de 40 para 7 diQs de incubacibn tengo un Ie de 132xlO-9 esto es 13 veces mamp por lo que es dificil comparar estos datos en l o s resultados obtenidos se obsewa una tendencia para los cultivos con 14 dias de incubacidn de disminuir el Ie confarme aumenta la relacidn CN y para l a s cultivos con 7 dias se observn lo contrario Los Ie mus altos se logran con l o s medios de cultivo a base de Harinu de Yuca y Melaza

536- Conclusiones

Las cepas estudiadas eSp0IWlUn dependiendo del tipo de fuente de carbono la fuente de carbono y su naturaleza tiene m infiuencia directa en la conidiogeacutenesis de l o s hongos f ilamentosos que la concentracioacuten de nitrdgeno sin embargo es recamendable la adlcidn ae nitdgeno entre l o s rargos de CN de 10 a 4 0

Para disminuir l o s costos de pmduccioacuten de conidiosporas hay que optimizar los medics de cultivo nacer la seleccioacuten de una h e m fuente de carbono para cada cepa y trhjar en rangos de CN de 14 a 4 0

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
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                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
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                                          • M
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1 - 1mccCIm m Recientemente se ha dado un gran intereacutes en el desarrollo de

fermentaciones en medio soacutelido para la produccidn de alimentos enriquecidos con proteiacutena microbiana a partir de sustratos amilaceos (Raimbault 19801 detoxificacioacuten de p u i p a de cafe (Aquiahuati y col 19871 produccioacuten de enzimas celulasas (Raussosl985) asi cogpo de diversos metabolitos secwdarios tales carno aflataxinas antibioacuteticos (Eiawios 1987) Btos procesos implican el crecimiento de hongos f i l a m e n t o s o s sobre susCaatos soacutelidos le inoculacioacuten de estos sustratos requiere de una gran cantidad de esparas

las esporas de hongas filament- son la fonna ae resistencia y reprcduccioacuten de estos mirroarganismos y constituyen el punto de inicio de l o s procesas de fermentacioacuten en medio soacuteliao dado que se requiere de unu inoculacioacuten masiva y homogenea en el medio de cultivo y bajo ciertas condiciones puedan llevarse a cabo l a s transformaciones de bioconversioacuten deseables Por io tanto se necesita disponer de cantidades importantes de esporas (Raussos 19B51

El nuacutemero de esparas producidas por UT hongo filanentoso es principalmente funcioacuten de la composicioacuten del medio de cultivo tal como se reporta pura Aspryil Ius n i d u l m que cuando se cambia la naturaleza o la cantidad de la fuente ae carbono o de nieeno del medio de cultivo optimizado se observa ma disminucidnde la produccioacuten de esporas de este hongo filamentoso [Martimlli 1976

tos hongos filamentosos Aniger Atemetls Ebss iam Fenicillim sp y Thamianum se clasifican aentro ae l o s hongos imwrfectos o aeuteroanicetos ya que no se les conoce reproduccih s e d 1 (Alexopoulos 1962)

El intereacutes de estudiar estos cuatro homos filumentosos radica en lo siguiente

A n i m posamp la capacidad de -air amilasas dependiencio de l a s condiciones de cuitivo debido a esta caracteristica la utilizacidr de Ari-aar para mmx-Jtar e conteniac proteico de la yuca (Raimbauit 1980 tlene relevante imponancia aaemb prcduce pectinasas

A t m m tiene la capacidad de desnncoliawse s o b e 1~ celulosa microcristalina lo que ie permite apmvecna- el bagam de la cantildea de m c a r (Brizuela et al 1987) ademamp elabma sui=stancies antiiacterianas ae toxicidaci variabie (flavipinas terreina citrina emim etc)(bttm etal 1985)

$ lt- 46

I u v

- -

B m i a m El geacutenero comprende S c 4 especies snpdf itas o paraacutesitcs de insectos entre los que se enmen-wa B h z s s i m la c u a l parasita art6pteros como Melanoplus smvinipes (Mercardier y Khachataurians 1987) contra coieoacutepteros tales como b p t i m t a r s a ecernilineata (Hajek etmal 1987) Anartis sahlifara Apim rchari Nisotra arbiculata Desmidopkms hebes Chilo onellus (Padit y Sam 1988)

Amicillium sp la imprtancia de este hongo es sobre todo en la industria lactea de antibioacuteticos y recientemente para la detoxificacioacuten de la p u l p a de cafe (Aquiahuatl y col 1988)

T harzianum Las especies de3 genero Zl-i~~nna sor frecuentemente empleadas en los p-ocesos de hidrdlisis de le celulosa Estos horgcs pmducen cantidades importantes de exoenzimas capaces de hidmlisar completamente la celuiosa en glucosa (Raussos 1981) Ademaacutes la cepa de T hruzianum fue utilizada con eacutexito para el enriquecimiento en pteinas de la harina de yuca por fermentacioacuten en medio liacutequido (Muindi y Hanssen 1981)

Otra caracteriacutestica impartante es que T harziunum es un antagonista micrdbiano poderoso Olivjer y Germain (1983) demostraron claramente que T viride y T hnrzimurc producen UM

tales como Botrytis c i m lampizoctonin solunipetc - inhibicioacuten en ciertns fases aei desarrollo de hongos fitopatoacutegenos

3

21 F ISIWIA DE CRD2IMW

Lx horgos filamentaeos m microoapnnismos eucaribticos quimiarganotrdficog estrictamente aarbbios y se repmducen de manara natural por medio de conidicepmas

La clasificacih de los horgoe esth basaamp principalmente en las caracterlsticaa de las agpcrras e e x u a l e e y de l o e cuarpos fructZfaroe presentes durante l o s estadlos s e x u a l e s de w1 ciclo biolbgico Loe hangoe con un estado e e x u a l conocido em denaninan h v perfectos Sin embaryo rmuchcs h o w eo10 producen eapcrras s e x u a l e s y cue- fructlf imx bajo ciertas corwiiciones exprimentales m y precisas si ea que las pmducen

Asi pues todavila no 8e conocen l o s ciclos biolQicos cunpleto8 con l o s estadroe sexuales ccmpletoe de muchos hongog Para estos hongos ein estadbs sexuales conocidos les conoce como how imperfectas (Talbot 1978)

La vida de un hongo imperfecto 8e divide en CUEltro etapas fisiolbgiacutecas impctantes que son la latencia la germinacibn la marltiplicacitm vegetativa y la conidiogbnesis (Rcrussosl985) - P

La conidioapora de un hongo f i lamentoso e8 una parte altamente espetcializada de mproduccibn Bupewivencia y dierparsibn ncamalmente delimitadas de iexclas muchas partes de l o s hongos y caracterizada por un metabolismo minim bajo conteniao de agua y carece da movimiento IcitoplasmCttim Aparte de m obvio p a p e l ecolbgico en la naturaleza l a s conidiosporas son usah en el laboratorio colpa irdculo en la pmduccibn de biomass para egtcperimentos o pmcm industriales y mhs recientemente para real izar directamente transformaciones qulmicas especff icas (Vezina y Sing 1975)

La conidiospwa esta en latencia cuando no gemina ampampa latencia pede ser de dos tipos constitucional o exQena

Con respecto Q la latencia constitucional la conidiospara puede IX) genninar aunque se encuentre bajo condiciones ambientales ade- pem primero requiere un proceso de activacibn para vencer una propiedad inata en el estado latente el cual pede ser una bancera pura la penetracibn de nutrientes una dDstruccih metab3lica o una auto-irhibiciamp~

Por otra parte en la latencia exwena la conidiospra es inactiva porque hay cordiciones ambientalee aesfavaruhles qulmicas yo flsicas y Pplede rapidamente reanudar m d e m l lo en un medio ambiente favorable E T 1 este tipc de

4

latencia la ganninacitm es contmlmamp p o r la necesidad esencial fact de- ampg2--r io - 2

Charamp todas la6 barreras de latencia han sido removidas la amidiospara normalmente requiere de niveles de temperatura de humedad favorable8 y ademhe de ciertas subetancias en el medio ambiente para canenzar el proceeo de germinacibn DespUes del inicio de esta nueva fase de genninacidn aparece la reepiracibn aardbica que 88 un requerimiento m 1 para todas las espocras Alguna8 canidiasparaa pueden exigir ademhs de estos factores un requerimiento de CDZ la mayor3a de las esporas requiere de una fuente externa de carbohidratos para germins aigunas otras pceeen adecuadamente res~nms oryhicas pero tienen la necesidad solamente del agua (Smith 1978)

BJ 1- siguientes gheros de hongos filamentosos que ee estuiian en este trabajo c u m Aspargillus Beauveria Axicillim sp y Zl-ichoderrpa (hongos imperfectos) las conidiosporas repmeentan la fama de reproduccibn a s e x u a l La definicibn que Sussman (1965) ha dado de l a s conidiceporas es la siguiente Todo perPodo de vida lento o intarrupcih reversible de desarrollo del cuyaniemo la caracterhtica fundamental de la oonidiospaota es que hay un irdividuo en potencialidad esta potencialidad esta reportada en el tiempo de latencia

211 Las etapas fieiologicas de crecimiento

a) La geminacih de mnidiospmas

La genninacidn es la suma de l o s procesce y de los cambios que intervienen en la recuperacibn del desarrollo de la fanm en la latencia y en la transformacibn de una estructura diferente (Allen1965) EB decir tambian el -pocimer estad30 imvemible que es abservado cano una diferencia del organismo en latencia el juicio pede ser formado soh l o s criterios morfoltrgicos citol6gicos fisiolbgicce o bioqulmicos (Sussman 1975)

b) La multiplicacibn vegetativa

Esta etapa romprende en realidad varias partes ia mamps importante corresponde a la fase de multiplicacibn de tipo exponencia1 del micelio cuando estamp desarrollado en nume- ramificaciones y extremos a UM pmduccibn de biomasa IRoyssos 1985) c) La conidiwhesis

La conidicghesis consiste en UM sucesiEcl de eventos internos en la dlula micelial (proliferacib del retlculo endoplasmdtico de vacuolas y nkleos) que temira en la iontacibn de conidiosporas la produccibn y

I

x - 2 L - - A ~

d

liberncibn de estas (Imrpent 1972 Fewe eco111975 De hecho la conidiogbesis de hongos filmentosos es un proceso muy ample jo

22 FIS1OLLXIA E EsFcrRuLACION

La conidioghesis es una etapa fisioltgiccr muy importante para l o s horgos imperfectos eta etapa comesponde a la fonnacibn

y liberacih de conidiosporas

El coanplejo proceso de esparulacibn en la conidioghesis pede ser visto cano la integracibn de algunos eventos biolbgicos La habilidad para cambiar de una fonnn de desarrollo filamentoso vegetativo a UM fonne ae espora reproductiva y generalmente esfGrica es el resultado final de un metdbolismo que responde a cambios fisicoqufmicos especlficos del medio ambiente (pH CO O Z temperatura humedad o la aparicibn de al- metabolito secundario) l o s cuales ejercen cambios en los estTmulos internos que regulan la actividad celular

Es hitido que el desencadenamiento de la esporulacibn es inducido por un factor limitate que desaparece en el medio de cultivo durante el crecimiento del hoqo La naturaieza de este factor es muy variable Se supone que el agotamiento de la fuente de carbono-o de nitrbgeno es generalmente el factor limitante Sin embaqo no deben olvidarse ios demas factores fisicoqulmicos untes mencionados

Un desancollo n o r m a 1 de micelio y una tuena conidiog6nesis son l a s condiciones previas G m produccibn imporLante ae midiosporas (Rcysscs 1985 El nilmero ae conidiosporas producidas por un hongo filamentoso es principalmente funcibn de la cantidad de la fuente de carbono y de nitriquestgeno presente en el medio de cultivo

El efecto de induccibn-inhibicibn de la conidicgbesis de Aniger fua puesto en evidencia por Gnlbraith y S m i t h (1969) De la misma manera la irduccidn del riiLmo endbgeno de esporulacibn de Aniger es influenciaamp por la relacibr glucosapotusio y por l o s oligoelementos presentes en el nedicl de cultivo (Jerebzoff eta11976)

En los medios de cultivc las sales Icineraies a urle concentacibn elevada podrlan tener los efectos opuestas sobre el crecimiento y la conidioghesis de homos f i l m e n t o s o s (Girdruth 1977 Slayan y Tatm 1954 Lilly L9euro51 De a misna manera la aereacibn y la humedad poseer una influencia en la pduccibn cuantitativa de coniaiwpras ae P m p e f w t i (Maheva et col 1984)

T

___ ~ ~~ - ~- ~ ~ ~ -~

deben ser definidas para a especie h e 5 un medio amp4cultivo optimizado para la produccibn de conidiwporns de una especie puede no ser adecuado para alguna otra (Vezim y co11965)

23 PRclDuccION DE E S O R A S

Diferentes tecnicas sa conocidas para la produccibn masiva de esparas La mds antigua consiste en cultivar el mirrocqganismo sobre una superficie en UT ampio de cultivo con agar ya sea en cajas de Petri a nivel labratorio o en btellns Rolux para fines prticticcs Osta tecnica presenta graves problemas de recoleccibn y la manipuiacibn de u n h e m importante de frasccs ademas se debe llevar a cabo bajc asepsia canpleta

Se ha mostrado la posibilidad de producir esporas en cultivo llquido utilizardo fermentadores esterilizables y extrapolables a nivel industrial (Bmderic eta11982)

Se h a n hecho estudios para producir esporas utilizando sustratos nmilaceos en ferntadores de lecho fijo (Maheva y col 19841 y mediante el uso de charolas en l a s cuales se coloca el sustrato en capas y se pone en una estufa de incubacibn (Vezina 1975) y ~ s o b r e pan de cebamp para producir esporas de Penicillium laucun en la elaboracibn de quesos (Nougaret 19821 ~

p Ultimamente se ha desarrdllado un proceso de cultivo en

superficie sobe un medio amplido utilizando un fermentador de discos rotatorios el c u a l ha dado henos resultados pero no puede ser escalado a un nive mayor (RaimLault y Raussos 1985)

Se ha desarrollado tam5i8n otrc amptodo de pmduccibn de espus solre soporte amplido esto es con la utilizacibn de bagazo de camp (Roussos y coldboradores 1988 certificado de invencibn)

2 4 irsos DE LAS EspoRAs

Eb la produccibn industrial de productos derivados de las fementaciones con hongos filmentosos la inoculacibn de los sustratos requiere de una gran cantidad de conidiosporcs ya que constituyen el punto de inicio de estos procesos de fernentacidn

La importancia de l o s cinco hongos fitmentosos estudiados radica en lo siguiente

~ p ~ ~ ~ l ~ nigerhiunenta el contenido pmteicc de le yucs (hinhult 1980) ademris de poseer actividad pectinolltica

ASprgiIlus te-mm p e e actividad p - a e aprovechamiento de la cantildea de azucar (Brizuela 1987) ademamp elaboran dos substancias antihcteriens de toxicidad variabie (flakripinas citrirn] (Bottm etai965)

7 _

- - ~ ~ ~ - ~~ -- - - i -

B s a u w i a bassima es parbita de insectos por lo qua ayuda en lucha biol6gica adema de producir enzimas como quitiMeas y 1 ipaears

micjllirm sp egta 0CPa posee una alticapacidad ampa e la cafeina de la pllpa de cafe esto rice penuite eliminar uno de lo s principales toxicos en la pulpa y de esta manera disminuir la contaminacion que produce y emplearla para alimentacion animal

2)-ickdema hurzidoum es un pl0dUctor de celulasas y ayuda en lucha biol6gica ya que m la propiedad de em- un antagonista poderaeo con respecto a un cierto rimero de hongos fitoputiquestgeme

( R o w e o s 19851

- _I__I k -

--

l- probar el efecto del tipo de la fuente de carbono en la

empleados en l o s procesos de fermentacioacuten dlida I produccioacuten masiva de midiosporas de l o s p-incipales horqcs

2- Probar el efecto combinado del tipo de la fuente de carbm y la relacioacuten CN en la produccioacuten masiva ae amidiosporas

3- Llevar a cabo la produccioacuten rnasiv de conidiospwas en un fermentador de discos rotatorios de 2 i

9

IDS micmotyanismas estudiados en este t r a j o fueron P s P w g i I I u s n i p ORSIUH NlO A s p e r g i l I u s t m u s cepa del ICIDCA (Instituto cubano para la Investigacioacuten de l o s Derivados de la Cantildea de Azucur) B e a u w i d hssiann cepa d e l ICIDCA Fanicillium sp cepa de la uA y Zkichoderma harzianum CCM F470 (Czechoslovak Collection of Microorganisms) ampliamente descrita por Rcwsg~os (1985)

4 2 MEDIOS DE CULTIVO

4 2 l Medios de comervaciOacuten

las cepas de Aniger A tanclrsus Fenicillium sp y Tharzianum son resembradas en un medio de PDA (papa- dextrasa-agar) y la cepa de B a i u n u es resenbada en PDA con 05 de extracto de levadura cada 6 meses e incubadas durante 7 dias a 29C para despueacutes ser conservadas en refrigeracioacuten durante 6

- meses apracimadamente ~ ~

4 2 2 Medios de esparulacidn

Se probaran l a s siguientes fuentes de cwbmHarina de Yuca Harina de P i g o M e l a z a y Sacarosa con relacioacuten CN de 10 14 24 Y 4 0

a) FmlaciOacuten de los medios

i

t

Lxw medios de cultivo utilizados para la produccioacuten de conidiospwas de Aniger A terreus Bampiana Amicillium p y Thamianum se muestran en l a s tablas I 11 I11 y IV

43 CONDICIONB DE CULTIVO

4 3 1 Inoculacioacuten

El medio de cultivo se inocula en masa este modo de inoculacioacuten consiste en mantener a 40C el medio de cultivo para posteriannente agregar uryt suspensidn de conidiospm-as de concentracioacuten conocida (2 x lo7 esporaWgr de sustrato) El ampio inoculado se agita para obtener una disiribucioacuten hamogenea en el cam ae maeaces Nand0 se utiiiza el fermentaamp de discos se pone en funcionamiento el sistema rotatwio para que SS distribuya el medio de cultivo inocuiaao en l o s discos de forma hmcqenea

F

432 Crecimiento--yespwulacion - - - -

Los cultivos se incuban a temperatura de laboratorio de 18 a 23C durante 7 y 14 dias Al fermentada- de discos se le suministra un flujo de aire estdril con un gasto de 4 lhr durante el periacuteodo de incubncioacuten

44 MEXDO PARA LA F9OJXJEION DE CONIDICSRXA5

Se conocen divemos amptodos para la pmducci6n de conidiosporas nosotras utilizaremos mntraces Erlen Meyer de 250 m1 y Fermentazdares de Discos

441 Matraces Erlen Heyer de 250 ml

El medio de cultivo se reparte en matraces Erlen Meyer de 250 m1 a rampn de 20 m1 par matraz y se obtura con un tapamp de algodoacuten se esteriliza en autoclave a 121C durante 20 min

442 Fermentada- de discos

El esquema del fermentada- de discos rotutorios utilizado se muestra en fmma detallada en la figura 1 El fermentador conteniendo300 m1 de medio de cultivo se esteriliza en autoclave a 121C por 45 min

-

e

a) Descripcioacuten del fermentada-

El fermentador de discos que se presenta en la fig 1 esta fannado por una cuba de vidrio la c u a l tiene una entrada y una salida en la parte superiorde la cuke se coloca una platina que tiene dos entradas una para realizar la inoculacioacuten del medio de cultivo y otra para airear esta platina sostiene un eje en el centro satre el eje se colocan 11 pares de discos formados por 2 m a l l a s de acero inoxidable de 2 mm de espesor y tamantildeo de malla de 4 mm c m un diaacutemetro de 10 c m y separados cuda par por 10 mm con unas rondanas especiales de acero inoxidable en el extremo inferior del eje se coloca una abrazadera la c u a l ejece presioacuten s e e l o s discos y con esto se mantienen fijos el total de 22 discos nos proporciona una superficie uacutetii de 172787 cm2 en la parte superior del eje se localiza un T la omi nos pemitlra colocar un motor y con esto hacer girar los disc-

b) Fimcionamiento y uso

El funcionamiento del fementaaor ae discos es de la siguiente manera LKB vez que se ha agregado e medic de cultivo y se ha esterilizado se coloca a un rotor de marera harizontal lo que nos permitiraacute mantener a l o s discos inmerso= en el medio ae cultivo y de esta forma una vezque se va enfrianio se adhiera a ellos el medic de cultivo se i m l a cunni0 se sncuentra en un promedio de

11

I ~

tempertura de 30 y 35CYTbl medio aun se encuentra licfuido) y asi poder tener una distriMciOacuten hanogenea de l a s esparas en el medio de cultivo (inoculacioacuten en masa) Una vez que el medio de cultivo se ha impregnado a l o s diecog el farmentador puede ser colocado de manera vertical en un l u g = adecuado

__ - - - - -

45 COSECHA Y CxlENrA DE EspoRAs

a) Para l o s cultivos en matraces se agmgu a cada uno 100 m1 de agua destilada estkil adicionada de Tbreen 80 (01) y se hunogeniza mediante agitacih magrktica

b) Para l o s cultivos en fementadares de discos 58 introduce al fermentadar 300 m1 de agua desti lada estampil adicionada de Tween 80 (01) y se mantienen los discos en rotaci6n durante 10 min

El conteo de l a s mas 88 realiza mediante el uso de kas de Malassez con suspensiones convenientemente diluidas y aplicando la siguiente f b l a

A + B + CJ = X 10 = N

A + B + C J = cuenta total de esporas en 10 cuhdros de la celda - x N - mimero de espmas pranedio

1D = factor de dilucioacuten 3

t

1 -Cuva

2 - P l a r i n a

3-Eje

4 -Disc05

5 - E n t rad2 zuper i or de l a cuva

6 - Sal ida i n f e r i o r d e l a cuva

- - Tapon d e entrada y s a l ida

r - 12

-

Medio I I I 3 I 4 I

I I 1 I I I I I Harim de I I I I

Yuca 4 0 4 0 4 0 I 4

I I I

Cgl) 1 1 I 2

I

I I I I I I

I I I I I I

(NH4)2904 402 287 167 100 I I I I

I 1 I I I

Urea 091 065 038 022

cac12 1 1 1 1 1 I 1 I

I I I I I I

I I I I

1 I 1 I I I

I ~~~ ~ ~ ~

I I I I

K H 2 p o 9 2 I 2 I 2 I 2 I I I I t I

I I I - I I I

Ag8r 15 15 I 15 I 15 I I I I 1 I I

I I I I I Agua (ml) loo0 1000 1000 1000

I I I I I

1 I I I I

I CN 10 I 14 I 24 I 40 I

I I I I I

I I I 1 I I

1 pH 56 56 156 56

I I I I I 1

Medio I I I I

Harim de I I I I

Trigo 5714 5714 5714 5714

(gl) I 1 1 2 I 3 I 4 I I I I I

I I I I I I

I I I I I 1

I I I I I I

(NH4)ZSX 402 287 167 100 I I I I I I

I I I I I I

u r e a 091 065 038 (322 I I I I I 1

1 I I I I I ~~ ~~ ~~~

I cac12 1 I 1 I 1 I 1 I

I I

~ I - s 2 I 2 I 2 I 2 I

e I I I I I

J q a r 15 15 I 15 I 15 I

I I

I I I I I I

I 1 I I I I

I I I I I

I I I I I I

Agua (m11 loo0 1000 1000 1000 I I 1 I I I

I I I I I I

I pH 56 56 56 56 I I I I I I

1 I I I I I

I cm 10 I 14 I 24 I 40 I I I I I I I

r

t

14

c

C_ de l o s medios S a m a camo

r

de cultivo para fuente de carbono

Hedio I I I I

(gl) 1 2 3 I 4 I

I I I I I I I I

I I

I I I I I

SaculmBa 3040 3 0 4 0 3040 3040 I I

I I

~ N l i 4 ) 2 S X 402 287 167 100 I I I

I I

1 I 1 I 1 I

I

I 2 I 2 I 2 I I I I

95

I I

I I

I I

I I

I I I I

urea 091 065 038 022 I I I

I I I I I I

cac12 1 m 2

I I I

I I I I

I I I

I I

Agar I 15 15 I 15 I I

I I I I I

Agua (m11 1000 1000 1000 1000 I I I I I I

56 56 56

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I I I

I I I I I

I pH 56

cN 10 14 24 4 0

I I I I I I

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Hedio

I I I

I I I I

(gl) 1

I I

I 2 I 3 4 I

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I I I I I

M e l a z a 5470 5470 5470 5470 I I I I I I I (W)2S34 402 287 167 1-00 I I I I I I

I I I

I Urea 091 065 038 022 I I I

cac12 I 1 1 1 1 1 1

I

I I I

I

I

I I I

I I I I I

I I 1 I I I

m 2 I I I I

Agar 15 15

I 2 I 2 I 2 I

I

I I

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I I I I

I 15 I 15 I

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I I

I I 1 I I I

Agw (m11 loo0 1000 1000 1000 1 I t I I

I I I p H 56 56 56 56 I I I I

CN 10 1 I 14 I 24 4 0 I I I I I I

I I I I I I

511- AsparYillus n i p -

de 3 dias aparecen farmas especializadas de reploduccian asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este se desarrolla UM vesicula y sobre la vesicula se

conidicsporas Estas conidospwas presentan un color cafe obscuro y n e g r o son gldbulares ornamentadas con un diumetro aproximado de 35 a 5 m La colonia cambia al c o l o r negro del centro B los ext remos

El micelio de este horgo es septa30 y de color blanco despues

desarrollan lae f ialides de las cuales se farmaran l a s

LA estructura de la fama de repruduccion se p-esenta en la figura 2

ru LA 7 V E S I CULA

ESTI P E

ELULA P O D A L

Figura 2 - Conidioforas y conidias de Aniger

El micelio de este h q o e8 septado de color blanco depea de 3 dias aparecen fonoas especializades de repmduccion asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este crecen fialides y de l a s fialides se forman las conidiosparas y presenta exudados ambarinoe Eetas conidiceparas presentan un color amarillo l a s conidiceporas son lisas glokulares con un diametro aproximado de 15 - 25 m

Figura 3 la estructura de la f a r m a de reproduction presenta en la

FIA

Figura 3- Conidioforos y coniaias de X t e

Este hongo presenta un micelio atercipelado y coposo inicialmente blanco presenta un raacutenquis genicula denticulado o en zigzag posteriarmente se tans amarillento Posee conidias hialinas y gldlxllams can un diaacutemetro aproximado de 15 a 3ym La estructura se presenta en la Figura 4

RANQU I S

c

Figura 4 - ConidiOacutefaros y conidias de E h s s i e n o

m cepa se ha identificado corno Penicillium W f a r t i i presenta un micelio septado con produccioacuten de micelio vegetativo aerial d e y e e de un tiempo aparecen estructurns especializadas de repocoduccion a s e x u a l Se presenta un estipe m e n t a d o unas brancpeas meacutetulas f M i d e s y conidias Elstas conidiosporas presentan un colap- verduzco son globdares y lisas con un dibtro apmximado de 4 a 6p Lae conidias son producidas en cadenas cortas La estructura se presenta en la Figura 5

C O N l D l A S

1 O r r m

Figura 5- Conidioacuteforos y coniaias de Fenicilliun

Al inicio este h q o presenta un micelio blanco pterionnente aprecen farmas especializadas de reproduccion asexual fialidee y conidicepuras I m conidiofaros se presentan en farmas piramidalee y en estos sistemas las fialidee Be localizan en g r u ~ w de dos a cuatro Las conidia3 Bon de color verde olivo son de superficie lisas subglobulares con un diametm apmximado de 2 a 3 m

La egtructura de la fcwma de reproduccion se presenta en la figura 6

Las colonias de Thnnianum en FDA se caracterizan pol tener un color verde con circulos concentricos Hay que mencionar que las colanias pmducen un olor a coco (coconut) muy caracteristico

CONlDl

Figura 6 - Conidioforos y conidias de Thanianum

516- Conclusiones v 4

_ _

el curse) de este capitulo se describieron los sietemas de reproduccioacuten de las cinco cepas de hongos filamentosos estudiados Todos estos hongos se repaoducen de manera a s e x u a l Se que l a s 5 cepas presentan estructuras muy diferentes a s i co~po diversos colores en l o s estadios de crecimiento vegetativo y ccmidiogdnesie ademds presentan conidimporas glohlares de muy diversos tamafios

c

093039 t

2 2

- La composicioacuten de l o s diferentes meampicsde cultvoutQizados pera llevar a cabo este estudio fueron medio N 2 de l a s tablas I 11111 y IV y se establecioacute prabay las diferentes fuentes de carbno (Harina de Yuca Harina de Pigo M e l a z a y Sacarosa) en matraces a una relaci6n CN de 14 para de esta manera poder observar el efecto que cada una de ell- ejerce solre la conidicgbesis de l o s hongos filamentosos estudiadas L m resultados se reman en l a s tablas V VI VII VI11 y XI y se exp-esan en base al Indice de Bporulacidn (Ie - N de esporas g de sustrato carbonado) para 7 dias de incubacion a temperatura ambiente (15-22C)

~ - -4

La Harim de Yuca es un producto amilaceo que ha demostrado ser un sustrato de gran eficiencia para la produccion de conidiosparas de hongos filamentosos ademds de ser un producto tropical de facil acceso su principal componente es el almidoacuten que corresponde al 80 en materia seca se encuentran en esta Harina pteiacutenas grasas y vitaminas del tipo B y C adamp de fibras y cenizas (Grace 1977)

la Harina de Pigo es otro sustrato amilaceo que se considerd importante utilizar debido a su alta disponibilidad en su canposicioacuten estan presentes pteiacutenas grw calcio f oacute s f m h i m tiamina riboflavina y niacina esto lo hace un sustrato interesante

La M e l a z a es el subproducto final de la fakicacioacuten de azucar es un liquido o b s c u r o denso y viscoso que se separa de la masa cocida de baja-calidad y del cual no se pede cristalizar ampamcar por amptodos mencionales y econoacutemicos en su composicioacuten estdn presentes 1 0 s amcares y otras sustancias entre l a s cuales se pueden citar l o s corapuestos nitrogenados aacutecidos aminoacidos albiminas vitaminas ceras esteroles lipid- sales minerales y cenizas etc (ICIDCA1986) Como se puede ver es un producto muy complejo por lo que puede ser un sustrato muy atractivo para su utilizaci6n como fuente de carbono en ipedios de cultivo pura la espomlaci6n de hongos filamentosos (Brinela 1987)

la s a c m a es un producto de facil adquisicioacuten y de pmduccioacuten idustrial importante por lo que se considem un sustrato atractivo para la produccioacuten de amidiosporas de hongos filamentosos La sacarosa se encuentra fonnada por una molecula de fructosa y una de glucosa l o s medios de cultivo que contienen sacarosa pcdriamos decir que son medios simples en comparacioacuten con la complejidad de la melaza y l a s harinas

521- A n i g ~

Fh la tabla V se muestran l o s Ie obtenidos para Anigerutilizardo l a s 4 fuentes de carbono antes mencionadas El mayor Ie se alcanzoacute en el medio de cultivo con k i n a de Yuca seguido de la M e l a z a la k i n a de Pigo y por Gltimo la Sacarosa se ha demostrado que durante el proceso de esterilizacioacuten la Harina de Yuca sufre un tratamiento teacutermico que hace que las moleacuteculas de almidh pasen cie una forma cristalina a un estado amdrfo (gelatinizacion) y que Ani_mr es un productm de amilasas (Raimbault 19801 lo que sugiere que la gelatinizacioacuten podriacutea facilitar el ataque enzimdtico y con esto i iberar cantidades importantes de glucosa que favoreced el crecilriiento del hongo lo que normalmente estaacute reiacionado con una produccioacuten importante de conidias

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I

I

I c- 7 DIAS

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 509xl0^9 I I I I

I I 1 I

Harina de Trigo 14 367X1^9 I I I

I I I I

Melaza 14 424x10-9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 16Ox10^8 I I I I

522- d t ~ 1 7 9 ~ ~

Eh la tabla VI se muestran l o s Ie obtenidos para A termus -utiliZando__las 4 fuentes de carbono antes mencionadas El Ie mas alto se encmtroacute en el medio de cultivo con M e l a z a seguido de la Yprina de Yuca y Trigo y por uacuteltimo la Sacarosa d t m u s es utilizado en lo s procesos de aprovechamiento de eubproductos de la industria cantildeera en cuba (meollo y bagazo) (Blanco bpez Villarl968) Esta cepa estaacute adaptada a l o s procesos de la industria cuntildeera de c u b a por lo que se esperariacutea que espurulara mejor en Melaza tal como ocurrioacute

TXBLA VI- Indices de espwulacibn para dtwreus utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa como fuente de carbono para tiempos de incubacidn de 7 dias y relacioacuten CN de 14

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I I I I I I 7 DIAS I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 60x10n9 I I I

Harina de pigo 14 403xlO-9

I I I

1 I I I

I I I I

M e l a z a 14 612xlOA9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 S40~107 1 I I

211

523- Bbassi= 1

Las resulta- 5e rem en la t ~ ~ h ~ f - - - ~ ~ - - ~ ~ e se -obtwo en el medio con Harina de Trigo m i d o de la H a r i n a de Yuca Melnza y Sacarosa Se puede obeervar que 1 0 s Ie amp altos se logran con los sustratos amiluceos que tal vez puedan ser mamp facilmente utilizados por el microoqanimno debido a l - v e s o de gelatinizacioacuten que Wren

524- Penicillium sp

Los resultados se muestran en la tabla VIII Los mayores le se alcanzaron con las Harims de Yuca y Trigo con respecto a los atros dos sustratos Se observoacute una mayor produccioacuten de micelio en los sustratos amilaceos lo que podria justificar la produccibn maacutes alta de conidias

525- Thnmianum

LBS resultados se reportan en la tabla XI Estudios hechos par Raussos (1985) demostraron la capacidad de Thanianum en la produccidn de ami la s a s utilizando almidoacuten cam0 fuente de carbono pesto que la harim de yuca y la harina de trigo son sustratos amilacecs se esperariacutea una produccioacuten impcortante de esporras tal COQLO sucedioacute para la harina de yuca y no asi para la harina de trigo Con respecto a la s a c m a el Ie tan bajo que se obtuvo con relacidn a la melaza pede ser debido a todos los compuestos que se encuentran en las m e l a z a s

c TABLA VI1- Inlices de esparcllacibn para Bhssiana utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo M e i u z a y Sacarosa axno fuente de carbono para tiempos de incubacioacuten de 7 dias y relacion CN de 14

I I I

I I I Ie I

Summ CN I I

1 I I I

I I

1 I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 1 8 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

7 DIAS

Harina de Pigo 14 702~10~9 I I I I

I I I

Melaza 14 217~10~9 I I I I

I I I I

Sacarosa i 14 8 5 8 ~ 1 0 ~ 6 I I I I

r

I I

I Ie 1

I Summ CN I

I 1 i I

I I 7 DIAS

I I I I

I 1 I I

Harina de Yuca 14 142x10^10 I I I I

I I I I

Harina de Pigo 14 832xlO-9 1 1 I I

I I I I

M e l a z a 14 293~10~9

I I I

Sacarosa 14 103x10n9

I I I I

I I I I

m IX-Indices de espauulacian para Thamianum utilizando Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa corno fuente de carbono para tiapos de incubacich de 7 dim y relacioacuten CN de 14

I I I I

I -

1 I Ie I

I Summ CN I

I I 7 D I A S t I I I

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 11ox1On1O I I I I

I I I I

Harina de Trigo 14 12Ox10-9 I I I I

I I I I

M e l a z a 14 875~10~9 I I I I

I

Sacarosa I

I i I

14 11Ox10^8 I I I

526- Conclusiones

Varios autores han demostrado la importancia de la fuente de carbono sobre la conidiogenesis de hongos f ilamentosos (Vezina y co11965 Martinelli1976) en este estudio se pudo observar que cada cepa tiene caracteristicas fisiolcjgicas de esporulacidn propias con respecto al tipo de fuente de carbono que se le proporcione Para este caso en especial la cepa de Aniper esporuld mejor en Harina de Yuca A termus en M e l a z a B m i a m en Harinri de Trigo y T harzinnum en Harina de Yuca

------Esttuiaa - - h - - i s o s (lE5) han demostrado que la concentracidn de Nieeno prwente en el mampio de cup170 ejerce una influencia directa en el nuacutemero de conidiosporas producidas por Thurzjmm par 10 que era necesario seleccionar la relacioacuten CN oacuteptima para cada cepa y para cada sustrato

la composicioacuten de l o s medios de cultivo utilizados para llevar a cabo este estudio estb presentados en las tablas I 11 I11 y IV Se utilizaron 4 diferentes relaciones CN estas fueron de 101424 y 40 empleanda UM mezcla de 23 panes de Sulfato de Amonio y 13 parte de h a toanando- 128 g de carbono como base de caacutelculo y tiempos de incubacioacuten de 7 y 14 dias l o s experimentos se realizaron en matraces de 250 ml

Ln relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despueacutes de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Anigw son mostrados en la tabla X

h datos obtenidos para Aniger nos indican que cuardo se emplea Harina de Yuca en concentracich de 40 gl y la reiaci6n CN estaacute entre 10 y 40 no es un factor determinante en la conidiogeacutenesis ya que esporula de rnanera similar entre estos r a n g o s para l o s medio a base de Harina de Trigo la CN entre 40 y 24 es donde mejm esporulacidn se obtiene

r 5 3 2 - A s m i l ~ s t

h relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de espomlaci6n obtenidos aespuk de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Rtemxs son mostradrx en la tabla XI

Lns medios de cultivo con 14 dias de incubacidn presentan el mayor ntUnero de conidiospwas a una relaci6n CN de 14 con excepcih de l o s medios con Sacarosa que mostramn en todos l o s cc~sos un compm-tamiento muy pobre con respecto al n h de conidias producidas Los mejores Ie se log-amn con Harina de Yuca y M e l a z a con una relacidn CN de-14 para 14 dias de incubacidn

Lo relaci6n que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despuds de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para B b s s i a n a son mostrados en la tabla XII

b Ie logrados para B b n s s i m e son muy similares entre si es decir no cambian significativamente l o s Ie para l o s cultivos con 14 dias de inmbacidn son bastante altos siendo el medio de cultivo con una relaci6n CN de 14 y Melaza como fuente de carbono ei queposee el mejor Ie con un tiempo de incuhcidn de 14 dias BI esta cepa se ve su capacidad de adaptacioacuten con respecto a l a s anteriores para crecer en Sackrosa

~ r

27 534- Psnicilliue sp

kiaeiampi que exiate entre 1- necG~-edt-~vcv - y h rendimientos de esparulaciOacutentilde-6btenidos despds de 7 -_Fl4 dias de cultivo en matraces para FbnciIlium sp son mostrados en la tabla XILI

_

La relacidn CN entre 10 y40 no tiene una influencia directa en la conidioghnesis de esta cepa sin embargo se dbeewa una tendencia a la disminucioacuten del N de conidiospcwas producidas en los cultivos con 14 dias de incubacih Los mayores Ie se lcgrarcm con los medios de cultivo a bnse de Harina de Yuca y Harina de Trigo

La relaci6n que existe entre la composiciiquestn quiacutemica del medio de cultivo y l a s rendimientos de esporulaci6n obtenidos desples de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Thurzzanum son mostrados en la tabla XIV

Las resultados obtenidos 1x1s mestran unatendencia hacia la obtencioacuten del m y m Ie en rangos de CN de 10 a 14 y estudios hechos par Raussos (1985) sohre el efecto de la concentraci6n de Nitriquestgeno en la oanidiogdnesis de Thaniunum pnmporcionaron una CN optima de 14 utilizando Harina de Yuca corno fuente de curbno

Sin embxqo pura una CN de 3253 obtiene un Ie para 7 dias --de incubacidn de Q16x1On9 cmparando este resultado con el resultado obtenido en mi estudio encuentro que a una CN de 40 para 7 diQs de incubacibn tengo un Ie de 132xlO-9 esto es 13 veces mamp por lo que es dificil comparar estos datos en l o s resultados obtenidos se obsewa una tendencia para los cultivos con 14 dias de incubacidn de disminuir el Ie confarme aumenta la relacidn CN y para l a s cultivos con 7 dias se observn lo contrario Los Ie mus altos se logran con l o s medios de cultivo a base de Harinu de Yuca y Melaza

536- Conclusiones

Las cepas estudiadas eSp0IWlUn dependiendo del tipo de fuente de carbono la fuente de carbono y su naturaleza tiene m infiuencia directa en la conidiogeacutenesis de l o s hongos f ilamentosos que la concentracioacuten de nitrdgeno sin embargo es recamendable la adlcidn ae nitdgeno entre l o s rargos de CN de 10 a 4 0

Para disminuir l o s costos de pmduccioacuten de conidiosporas hay que optimizar los medics de cultivo nacer la seleccioacuten de una h e m fuente de carbono para cada cepa y trhjar en rangos de CN de 14 a 4 0

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
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$ lt- 46

I u v

- -

B m i a m El geacutenero comprende S c 4 especies snpdf itas o paraacutesitcs de insectos entre los que se enmen-wa B h z s s i m la c u a l parasita art6pteros como Melanoplus smvinipes (Mercardier y Khachataurians 1987) contra coieoacutepteros tales como b p t i m t a r s a ecernilineata (Hajek etmal 1987) Anartis sahlifara Apim rchari Nisotra arbiculata Desmidopkms hebes Chilo onellus (Padit y Sam 1988)

Amicillium sp la imprtancia de este hongo es sobre todo en la industria lactea de antibioacuteticos y recientemente para la detoxificacioacuten de la p u l p a de cafe (Aquiahuatl y col 1988)

T harzianum Las especies de3 genero Zl-i~~nna sor frecuentemente empleadas en los p-ocesos de hidrdlisis de le celulosa Estos horgcs pmducen cantidades importantes de exoenzimas capaces de hidmlisar completamente la celuiosa en glucosa (Raussos 1981) Ademaacutes la cepa de T hruzianum fue utilizada con eacutexito para el enriquecimiento en pteinas de la harina de yuca por fermentacioacuten en medio liacutequido (Muindi y Hanssen 1981)

Otra caracteriacutestica impartante es que T harziunum es un antagonista micrdbiano poderoso Olivjer y Germain (1983) demostraron claramente que T viride y T hnrzimurc producen UM

tales como Botrytis c i m lampizoctonin solunipetc - inhibicioacuten en ciertns fases aei desarrollo de hongos fitopatoacutegenos

3

21 F ISIWIA DE CRD2IMW

Lx horgos filamentaeos m microoapnnismos eucaribticos quimiarganotrdficog estrictamente aarbbios y se repmducen de manara natural por medio de conidicepmas

La clasificacih de los horgoe esth basaamp principalmente en las caracterlsticaa de las agpcrras e e x u a l e e y de l o e cuarpos fructZfaroe presentes durante l o s estadlos s e x u a l e s de w1 ciclo biolbgico Loe hangoe con un estado e e x u a l conocido em denaninan h v perfectos Sin embaryo rmuchcs h o w eo10 producen eapcrras s e x u a l e s y cue- fructlf imx bajo ciertas corwiiciones exprimentales m y precisas si ea que las pmducen

Asi pues todavila no 8e conocen l o s ciclos biolQicos cunpleto8 con l o s estadroe sexuales ccmpletoe de muchos hongog Para estos hongos ein estadbs sexuales conocidos les conoce como how imperfectas (Talbot 1978)

La vida de un hongo imperfecto 8e divide en CUEltro etapas fisiolbgiacutecas impctantes que son la latencia la germinacibn la marltiplicacitm vegetativa y la conidiogbnesis (Rcrussosl985) - P

La conidioapora de un hongo f i lamentoso e8 una parte altamente espetcializada de mproduccibn Bupewivencia y dierparsibn ncamalmente delimitadas de iexclas muchas partes de l o s hongos y caracterizada por un metabolismo minim bajo conteniao de agua y carece da movimiento IcitoplasmCttim Aparte de m obvio p a p e l ecolbgico en la naturaleza l a s conidiosporas son usah en el laboratorio colpa irdculo en la pmduccibn de biomass para egtcperimentos o pmcm industriales y mhs recientemente para real izar directamente transformaciones qulmicas especff icas (Vezina y Sing 1975)

La conidiospwa esta en latencia cuando no gemina ampampa latencia pede ser de dos tipos constitucional o exQena

Con respecto Q la latencia constitucional la conidiospara puede IX) genninar aunque se encuentre bajo condiciones ambientales ade- pem primero requiere un proceso de activacibn para vencer una propiedad inata en el estado latente el cual pede ser una bancera pura la penetracibn de nutrientes una dDstruccih metab3lica o una auto-irhibiciamp~

Por otra parte en la latencia exwena la conidiospra es inactiva porque hay cordiciones ambientalee aesfavaruhles qulmicas yo flsicas y Pplede rapidamente reanudar m d e m l lo en un medio ambiente favorable E T 1 este tipc de

4

latencia la ganninacitm es contmlmamp p o r la necesidad esencial fact de- ampg2--r io - 2

Charamp todas la6 barreras de latencia han sido removidas la amidiospara normalmente requiere de niveles de temperatura de humedad favorable8 y ademhe de ciertas subetancias en el medio ambiente para canenzar el proceeo de germinacibn DespUes del inicio de esta nueva fase de genninacidn aparece la reepiracibn aardbica que 88 un requerimiento m 1 para todas las espocras Alguna8 canidiasparaa pueden exigir ademhs de estos factores un requerimiento de CDZ la mayor3a de las esporas requiere de una fuente externa de carbohidratos para germins aigunas otras pceeen adecuadamente res~nms oryhicas pero tienen la necesidad solamente del agua (Smith 1978)

BJ 1- siguientes gheros de hongos filamentosos que ee estuiian en este trabajo c u m Aspargillus Beauveria Axicillim sp y Zl-ichoderrpa (hongos imperfectos) las conidiosporas repmeentan la fama de reproduccibn a s e x u a l La definicibn que Sussman (1965) ha dado de l a s conidiceporas es la siguiente Todo perPodo de vida lento o intarrupcih reversible de desarrollo del cuyaniemo la caracterhtica fundamental de la oonidiospaota es que hay un irdividuo en potencialidad esta potencialidad esta reportada en el tiempo de latencia

211 Las etapas fieiologicas de crecimiento

a) La geminacih de mnidiospmas

La genninacidn es la suma de l o s procesce y de los cambios que intervienen en la recuperacibn del desarrollo de la fanm en la latencia y en la transformacibn de una estructura diferente (Allen1965) EB decir tambian el -pocimer estad30 imvemible que es abservado cano una diferencia del organismo en latencia el juicio pede ser formado soh l o s criterios morfoltrgicos citol6gicos fisiolbgicce o bioqulmicos (Sussman 1975)

b) La multiplicacibn vegetativa

Esta etapa romprende en realidad varias partes ia mamps importante corresponde a la fase de multiplicacibn de tipo exponencia1 del micelio cuando estamp desarrollado en nume- ramificaciones y extremos a UM pmduccibn de biomasa IRoyssos 1985) c) La conidiwhesis

La conidicghesis consiste en UM sucesiEcl de eventos internos en la dlula micelial (proliferacib del retlculo endoplasmdtico de vacuolas y nkleos) que temira en la iontacibn de conidiosporas la produccibn y

I

x - 2 L - - A ~

d

liberncibn de estas (Imrpent 1972 Fewe eco111975 De hecho la conidiogbesis de hongos filmentosos es un proceso muy ample jo

22 FIS1OLLXIA E EsFcrRuLACION

La conidioghesis es una etapa fisioltgiccr muy importante para l o s horgos imperfectos eta etapa comesponde a la fonnacibn

y liberacih de conidiosporas

El coanplejo proceso de esparulacibn en la conidioghesis pede ser visto cano la integracibn de algunos eventos biolbgicos La habilidad para cambiar de una fonnn de desarrollo filamentoso vegetativo a UM fonne ae espora reproductiva y generalmente esfGrica es el resultado final de un metdbolismo que responde a cambios fisicoqufmicos especlficos del medio ambiente (pH CO O Z temperatura humedad o la aparicibn de al- metabolito secundario) l o s cuales ejercen cambios en los estTmulos internos que regulan la actividad celular

Es hitido que el desencadenamiento de la esporulacibn es inducido por un factor limitate que desaparece en el medio de cultivo durante el crecimiento del hoqo La naturaieza de este factor es muy variable Se supone que el agotamiento de la fuente de carbono-o de nitrbgeno es generalmente el factor limitante Sin embaqo no deben olvidarse ios demas factores fisicoqulmicos untes mencionados

Un desancollo n o r m a 1 de micelio y una tuena conidiog6nesis son l a s condiciones previas G m produccibn imporLante ae midiosporas (Rcysscs 1985 El nilmero ae conidiosporas producidas por un hongo filamentoso es principalmente funcibn de la cantidad de la fuente de carbono y de nitriquestgeno presente en el medio de cultivo

El efecto de induccibn-inhibicibn de la conidicgbesis de Aniger fua puesto en evidencia por Gnlbraith y S m i t h (1969) De la misma manera la irduccidn del riiLmo endbgeno de esporulacibn de Aniger es influenciaamp por la relacibr glucosapotusio y por l o s oligoelementos presentes en el nedicl de cultivo (Jerebzoff eta11976)

En los medios de cultivc las sales Icineraies a urle concentacibn elevada podrlan tener los efectos opuestas sobre el crecimiento y la conidioghesis de homos f i l m e n t o s o s (Girdruth 1977 Slayan y Tatm 1954 Lilly L9euro51 De a misna manera la aereacibn y la humedad poseer una influencia en la pduccibn cuantitativa de coniaiwpras ae P m p e f w t i (Maheva et col 1984)

T

___ ~ ~~ - ~- ~ ~ ~ -~

deben ser definidas para a especie h e 5 un medio amp4cultivo optimizado para la produccibn de conidiwporns de una especie puede no ser adecuado para alguna otra (Vezim y co11965)

23 PRclDuccION DE E S O R A S

Diferentes tecnicas sa conocidas para la produccibn masiva de esparas La mds antigua consiste en cultivar el mirrocqganismo sobre una superficie en UT ampio de cultivo con agar ya sea en cajas de Petri a nivel labratorio o en btellns Rolux para fines prticticcs Osta tecnica presenta graves problemas de recoleccibn y la manipuiacibn de u n h e m importante de frasccs ademas se debe llevar a cabo bajc asepsia canpleta

Se ha mostrado la posibilidad de producir esporas en cultivo llquido utilizardo fermentadores esterilizables y extrapolables a nivel industrial (Bmderic eta11982)

Se h a n hecho estudios para producir esporas utilizando sustratos nmilaceos en ferntadores de lecho fijo (Maheva y col 19841 y mediante el uso de charolas en l a s cuales se coloca el sustrato en capas y se pone en una estufa de incubacibn (Vezina 1975) y ~ s o b r e pan de cebamp para producir esporas de Penicillium laucun en la elaboracibn de quesos (Nougaret 19821 ~

p Ultimamente se ha desarrdllado un proceso de cultivo en

superficie sobe un medio amplido utilizando un fermentador de discos rotatorios el c u a l ha dado henos resultados pero no puede ser escalado a un nive mayor (RaimLault y Raussos 1985)

Se ha desarrollado tam5i8n otrc amptodo de pmduccibn de espus solre soporte amplido esto es con la utilizacibn de bagazo de camp (Roussos y coldboradores 1988 certificado de invencibn)

2 4 irsos DE LAS EspoRAs

Eb la produccibn industrial de productos derivados de las fementaciones con hongos filmentosos la inoculacibn de los sustratos requiere de una gran cantidad de conidiosporcs ya que constituyen el punto de inicio de estos procesos de fernentacidn

La importancia de l o s cinco hongos fitmentosos estudiados radica en lo siguiente

~ p ~ ~ ~ l ~ nigerhiunenta el contenido pmteicc de le yucs (hinhult 1980) ademris de poseer actividad pectinolltica

ASprgiIlus te-mm p e e actividad p - a e aprovechamiento de la cantildea de azucar (Brizuela 1987) ademamp elaboran dos substancias antihcteriens de toxicidad variabie (flakripinas citrirn] (Bottm etai965)

7 _

- - ~ ~ ~ - ~~ -- - - i -

B s a u w i a bassima es parbita de insectos por lo qua ayuda en lucha biol6gica adema de producir enzimas como quitiMeas y 1 ipaears

micjllirm sp egta 0CPa posee una alticapacidad ampa e la cafeina de la pllpa de cafe esto rice penuite eliminar uno de lo s principales toxicos en la pulpa y de esta manera disminuir la contaminacion que produce y emplearla para alimentacion animal

2)-ickdema hurzidoum es un pl0dUctor de celulasas y ayuda en lucha biol6gica ya que m la propiedad de em- un antagonista poderaeo con respecto a un cierto rimero de hongos fitoputiquestgeme

( R o w e o s 19851

- _I__I k -

--

l- probar el efecto del tipo de la fuente de carbono en la

empleados en l o s procesos de fermentacioacuten dlida I produccioacuten masiva de midiosporas de l o s p-incipales horqcs

2- Probar el efecto combinado del tipo de la fuente de carbm y la relacioacuten CN en la produccioacuten masiva ae amidiosporas

3- Llevar a cabo la produccioacuten rnasiv de conidiospwas en un fermentador de discos rotatorios de 2 i

9

IDS micmotyanismas estudiados en este t r a j o fueron P s P w g i I I u s n i p ORSIUH NlO A s p e r g i l I u s t m u s cepa del ICIDCA (Instituto cubano para la Investigacioacuten de l o s Derivados de la Cantildea de Azucur) B e a u w i d hssiann cepa d e l ICIDCA Fanicillium sp cepa de la uA y Zkichoderma harzianum CCM F470 (Czechoslovak Collection of Microorganisms) ampliamente descrita por Rcwsg~os (1985)

4 2 MEDIOS DE CULTIVO

4 2 l Medios de comervaciOacuten

las cepas de Aniger A tanclrsus Fenicillium sp y Tharzianum son resembradas en un medio de PDA (papa- dextrasa-agar) y la cepa de B a i u n u es resenbada en PDA con 05 de extracto de levadura cada 6 meses e incubadas durante 7 dias a 29C para despueacutes ser conservadas en refrigeracioacuten durante 6

- meses apracimadamente ~ ~

4 2 2 Medios de esparulacidn

Se probaran l a s siguientes fuentes de cwbmHarina de Yuca Harina de P i g o M e l a z a y Sacarosa con relacioacuten CN de 10 14 24 Y 4 0

a) FmlaciOacuten de los medios

i

t

Lxw medios de cultivo utilizados para la produccioacuten de conidiospwas de Aniger A terreus Bampiana Amicillium p y Thamianum se muestran en l a s tablas I 11 I11 y IV

43 CONDICIONB DE CULTIVO

4 3 1 Inoculacioacuten

El medio de cultivo se inocula en masa este modo de inoculacioacuten consiste en mantener a 40C el medio de cultivo para posteriannente agregar uryt suspensidn de conidiospm-as de concentracioacuten conocida (2 x lo7 esporaWgr de sustrato) El ampio inoculado se agita para obtener una disiribucioacuten hamogenea en el cam ae maeaces Nand0 se utiiiza el fermentaamp de discos se pone en funcionamiento el sistema rotatwio para que SS distribuya el medio de cultivo inocuiaao en l o s discos de forma hmcqenea

F

432 Crecimiento--yespwulacion - - - -

Los cultivos se incuban a temperatura de laboratorio de 18 a 23C durante 7 y 14 dias Al fermentada- de discos se le suministra un flujo de aire estdril con un gasto de 4 lhr durante el periacuteodo de incubncioacuten

44 MEXDO PARA LA F9OJXJEION DE CONIDICSRXA5

Se conocen divemos amptodos para la pmducci6n de conidiosporas nosotras utilizaremos mntraces Erlen Meyer de 250 m1 y Fermentazdares de Discos

441 Matraces Erlen Heyer de 250 ml

El medio de cultivo se reparte en matraces Erlen Meyer de 250 m1 a rampn de 20 m1 par matraz y se obtura con un tapamp de algodoacuten se esteriliza en autoclave a 121C durante 20 min

442 Fermentada- de discos

El esquema del fermentada- de discos rotutorios utilizado se muestra en fmma detallada en la figura 1 El fermentador conteniendo300 m1 de medio de cultivo se esteriliza en autoclave a 121C por 45 min

-

e

a) Descripcioacuten del fermentada-

El fermentador de discos que se presenta en la fig 1 esta fannado por una cuba de vidrio la c u a l tiene una entrada y una salida en la parte superiorde la cuke se coloca una platina que tiene dos entradas una para realizar la inoculacioacuten del medio de cultivo y otra para airear esta platina sostiene un eje en el centro satre el eje se colocan 11 pares de discos formados por 2 m a l l a s de acero inoxidable de 2 mm de espesor y tamantildeo de malla de 4 mm c m un diaacutemetro de 10 c m y separados cuda par por 10 mm con unas rondanas especiales de acero inoxidable en el extremo inferior del eje se coloca una abrazadera la c u a l ejece presioacuten s e e l o s discos y con esto se mantienen fijos el total de 22 discos nos proporciona una superficie uacutetii de 172787 cm2 en la parte superior del eje se localiza un T la omi nos pemitlra colocar un motor y con esto hacer girar los disc-

b) Fimcionamiento y uso

El funcionamiento del fementaaor ae discos es de la siguiente manera LKB vez que se ha agregado e medic de cultivo y se ha esterilizado se coloca a un rotor de marera harizontal lo que nos permitiraacute mantener a l o s discos inmerso= en el medio ae cultivo y de esta forma una vezque se va enfrianio se adhiera a ellos el medic de cultivo se i m l a cunni0 se sncuentra en un promedio de

11

I ~

tempertura de 30 y 35CYTbl medio aun se encuentra licfuido) y asi poder tener una distriMciOacuten hanogenea de l a s esparas en el medio de cultivo (inoculacioacuten en masa) Una vez que el medio de cultivo se ha impregnado a l o s diecog el farmentador puede ser colocado de manera vertical en un l u g = adecuado

__ - - - - -

45 COSECHA Y CxlENrA DE EspoRAs

a) Para l o s cultivos en matraces se agmgu a cada uno 100 m1 de agua destilada estkil adicionada de Tbreen 80 (01) y se hunogeniza mediante agitacih magrktica

b) Para l o s cultivos en fementadares de discos 58 introduce al fermentadar 300 m1 de agua desti lada estampil adicionada de Tween 80 (01) y se mantienen los discos en rotaci6n durante 10 min

El conteo de l a s mas 88 realiza mediante el uso de kas de Malassez con suspensiones convenientemente diluidas y aplicando la siguiente f b l a

A + B + CJ = X 10 = N

A + B + C J = cuenta total de esporas en 10 cuhdros de la celda - x N - mimero de espmas pranedio

1D = factor de dilucioacuten 3

t

1 -Cuva

2 - P l a r i n a

3-Eje

4 -Disc05

5 - E n t rad2 zuper i or de l a cuva

6 - Sal ida i n f e r i o r d e l a cuva

- - Tapon d e entrada y s a l ida

r - 12

-

Medio I I I 3 I 4 I

I I 1 I I I I I Harim de I I I I

Yuca 4 0 4 0 4 0 I 4

I I I

Cgl) 1 1 I 2

I

I I I I I I

I I I I I I

(NH4)2904 402 287 167 100 I I I I

I 1 I I I

Urea 091 065 038 022

cac12 1 1 1 1 1 I 1 I

I I I I I I

I I I I

1 I 1 I I I

I ~~~ ~ ~ ~

I I I I

K H 2 p o 9 2 I 2 I 2 I 2 I I I I t I

I I I - I I I

Ag8r 15 15 I 15 I 15 I I I I 1 I I

I I I I I Agua (ml) loo0 1000 1000 1000

I I I I I

1 I I I I

I CN 10 I 14 I 24 I 40 I

I I I I I

I I I 1 I I

1 pH 56 56 156 56

I I I I I 1

Medio I I I I

Harim de I I I I

Trigo 5714 5714 5714 5714

(gl) I 1 1 2 I 3 I 4 I I I I I

I I I I I I

I I I I I 1

I I I I I I

(NH4)ZSX 402 287 167 100 I I I I I I

I I I I I I

u r e a 091 065 038 (322 I I I I I 1

1 I I I I I ~~ ~~ ~~~

I cac12 1 I 1 I 1 I 1 I

I I

~ I - s 2 I 2 I 2 I 2 I

e I I I I I

J q a r 15 15 I 15 I 15 I

I I

I I I I I I

I 1 I I I I

I I I I I

I I I I I I

Agua (m11 loo0 1000 1000 1000 I I 1 I I I

I I I I I I

I pH 56 56 56 56 I I I I I I

1 I I I I I

I cm 10 I 14 I 24 I 40 I I I I I I I

r

t

14

c

C_ de l o s medios S a m a camo

r

de cultivo para fuente de carbono

Hedio I I I I

(gl) 1 2 3 I 4 I

I I I I I I I I

I I

I I I I I

SaculmBa 3040 3 0 4 0 3040 3040 I I

I I

~ N l i 4 ) 2 S X 402 287 167 100 I I I

I I

1 I 1 I 1 I

I

I 2 I 2 I 2 I I I I

95

I I

I I

I I

I I

I I I I

urea 091 065 038 022 I I I

I I I I I I

cac12 1 m 2

I I I

I I I I

I I I

I I

Agar I 15 15 I 15 I I

I I I I I

Agua (m11 1000 1000 1000 1000 I I I I I I

56 56 56

L -

I I I

I I I I I

I pH 56

cN 10 14 24 4 0

I I I I I I

I I

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I

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Hedio

I I I

I I I I

(gl) 1

I I

I 2 I 3 4 I

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I I I I I

M e l a z a 5470 5470 5470 5470 I I I I I I I (W)2S34 402 287 167 1-00 I I I I I I

I I I

I Urea 091 065 038 022 I I I

cac12 I 1 1 1 1 1 1

I

I I I

I

I

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I I I I I

I I 1 I I I

m 2 I I I I

Agar 15 15

I 2 I 2 I 2 I

I

I I

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I I I I

I 15 I 15 I

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I I 1 I I I

Agw (m11 loo0 1000 1000 1000 1 I t I I

I I I p H 56 56 56 56 I I I I

CN 10 1 I 14 I 24 4 0 I I I I I I

I I I I I I

511- AsparYillus n i p -

de 3 dias aparecen farmas especializadas de reploduccian asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este se desarrolla UM vesicula y sobre la vesicula se

conidicsporas Estas conidospwas presentan un color cafe obscuro y n e g r o son gldbulares ornamentadas con un diumetro aproximado de 35 a 5 m La colonia cambia al c o l o r negro del centro B los ext remos

El micelio de este horgo es septa30 y de color blanco despues

desarrollan lae f ialides de las cuales se farmaran l a s

LA estructura de la fama de repruduccion se p-esenta en la figura 2

ru LA 7 V E S I CULA

ESTI P E

ELULA P O D A L

Figura 2 - Conidioforas y conidias de Aniger

El micelio de este h q o e8 septado de color blanco depea de 3 dias aparecen fonoas especializades de repmduccion asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este crecen fialides y de l a s fialides se forman las conidiosparas y presenta exudados ambarinoe Eetas conidiceparas presentan un color amarillo l a s conidiceporas son lisas glokulares con un diametro aproximado de 15 - 25 m

Figura 3 la estructura de la f a r m a de reproduction presenta en la

FIA

Figura 3- Conidioforos y coniaias de X t e

Este hongo presenta un micelio atercipelado y coposo inicialmente blanco presenta un raacutenquis genicula denticulado o en zigzag posteriarmente se tans amarillento Posee conidias hialinas y gldlxllams can un diaacutemetro aproximado de 15 a 3ym La estructura se presenta en la Figura 4

RANQU I S

c

Figura 4 - ConidiOacutefaros y conidias de E h s s i e n o

m cepa se ha identificado corno Penicillium W f a r t i i presenta un micelio septado con produccioacuten de micelio vegetativo aerial d e y e e de un tiempo aparecen estructurns especializadas de repocoduccion a s e x u a l Se presenta un estipe m e n t a d o unas brancpeas meacutetulas f M i d e s y conidias Elstas conidiosporas presentan un colap- verduzco son globdares y lisas con un dibtro apmximado de 4 a 6p Lae conidias son producidas en cadenas cortas La estructura se presenta en la Figura 5

C O N l D l A S

1 O r r m

Figura 5- Conidioacuteforos y coniaias de Fenicilliun

Al inicio este h q o presenta un micelio blanco pterionnente aprecen farmas especializadas de reproduccion asexual fialidee y conidicepuras I m conidiofaros se presentan en farmas piramidalee y en estos sistemas las fialidee Be localizan en g r u ~ w de dos a cuatro Las conidia3 Bon de color verde olivo son de superficie lisas subglobulares con un diametm apmximado de 2 a 3 m

La egtructura de la fcwma de reproduccion se presenta en la figura 6

Las colonias de Thnnianum en FDA se caracterizan pol tener un color verde con circulos concentricos Hay que mencionar que las colanias pmducen un olor a coco (coconut) muy caracteristico

CONlDl

Figura 6 - Conidioforos y conidias de Thanianum

516- Conclusiones v 4

_ _

el curse) de este capitulo se describieron los sietemas de reproduccioacuten de las cinco cepas de hongos filamentosos estudiados Todos estos hongos se repaoducen de manera a s e x u a l Se que l a s 5 cepas presentan estructuras muy diferentes a s i co~po diversos colores en l o s estadios de crecimiento vegetativo y ccmidiogdnesie ademds presentan conidimporas glohlares de muy diversos tamafios

c

093039 t

2 2

- La composicioacuten de l o s diferentes meampicsde cultvoutQizados pera llevar a cabo este estudio fueron medio N 2 de l a s tablas I 11111 y IV y se establecioacute prabay las diferentes fuentes de carbno (Harina de Yuca Harina de Pigo M e l a z a y Sacarosa) en matraces a una relaci6n CN de 14 para de esta manera poder observar el efecto que cada una de ell- ejerce solre la conidicgbesis de l o s hongos filamentosos estudiadas L m resultados se reman en l a s tablas V VI VII VI11 y XI y se exp-esan en base al Indice de Bporulacidn (Ie - N de esporas g de sustrato carbonado) para 7 dias de incubacion a temperatura ambiente (15-22C)

~ - -4

La Harim de Yuca es un producto amilaceo que ha demostrado ser un sustrato de gran eficiencia para la produccion de conidiosparas de hongos filamentosos ademds de ser un producto tropical de facil acceso su principal componente es el almidoacuten que corresponde al 80 en materia seca se encuentran en esta Harina pteiacutenas grasas y vitaminas del tipo B y C adamp de fibras y cenizas (Grace 1977)

la Harina de Pigo es otro sustrato amilaceo que se considerd importante utilizar debido a su alta disponibilidad en su canposicioacuten estan presentes pteiacutenas grw calcio f oacute s f m h i m tiamina riboflavina y niacina esto lo hace un sustrato interesante

La M e l a z a es el subproducto final de la fakicacioacuten de azucar es un liquido o b s c u r o denso y viscoso que se separa de la masa cocida de baja-calidad y del cual no se pede cristalizar ampamcar por amptodos mencionales y econoacutemicos en su composicioacuten estdn presentes 1 0 s amcares y otras sustancias entre l a s cuales se pueden citar l o s corapuestos nitrogenados aacutecidos aminoacidos albiminas vitaminas ceras esteroles lipid- sales minerales y cenizas etc (ICIDCA1986) Como se puede ver es un producto muy complejo por lo que puede ser un sustrato muy atractivo para su utilizaci6n como fuente de carbono en ipedios de cultivo pura la espomlaci6n de hongos filamentosos (Brinela 1987)

la s a c m a es un producto de facil adquisicioacuten y de pmduccioacuten idustrial importante por lo que se considem un sustrato atractivo para la produccioacuten de amidiosporas de hongos filamentosos La sacarosa se encuentra fonnada por una molecula de fructosa y una de glucosa l o s medios de cultivo que contienen sacarosa pcdriamos decir que son medios simples en comparacioacuten con la complejidad de la melaza y l a s harinas

521- A n i g ~

Fh la tabla V se muestran l o s Ie obtenidos para Anigerutilizardo l a s 4 fuentes de carbono antes mencionadas El mayor Ie se alcanzoacute en el medio de cultivo con k i n a de Yuca seguido de la M e l a z a la k i n a de Pigo y por Gltimo la Sacarosa se ha demostrado que durante el proceso de esterilizacioacuten la Harina de Yuca sufre un tratamiento teacutermico que hace que las moleacuteculas de almidh pasen cie una forma cristalina a un estado amdrfo (gelatinizacion) y que Ani_mr es un productm de amilasas (Raimbault 19801 lo que sugiere que la gelatinizacioacuten podriacutea facilitar el ataque enzimdtico y con esto i iberar cantidades importantes de glucosa que favoreced el crecilriiento del hongo lo que normalmente estaacute reiacionado con una produccioacuten importante de conidias

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I

I

I c- 7 DIAS

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 509xl0^9 I I I I

I I 1 I

Harina de Trigo 14 367X1^9 I I I

I I I I

Melaza 14 424x10-9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 16Ox10^8 I I I I

522- d t ~ 1 7 9 ~ ~

Eh la tabla VI se muestran l o s Ie obtenidos para A termus -utiliZando__las 4 fuentes de carbono antes mencionadas El Ie mas alto se encmtroacute en el medio de cultivo con M e l a z a seguido de la Yprina de Yuca y Trigo y por uacuteltimo la Sacarosa d t m u s es utilizado en lo s procesos de aprovechamiento de eubproductos de la industria cantildeera en cuba (meollo y bagazo) (Blanco bpez Villarl968) Esta cepa estaacute adaptada a l o s procesos de la industria cuntildeera de c u b a por lo que se esperariacutea que espurulara mejor en Melaza tal como ocurrioacute

TXBLA VI- Indices de espwulacibn para dtwreus utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa como fuente de carbono para tiempos de incubacidn de 7 dias y relacioacuten CN de 14

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I I I I I I 7 DIAS I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 60x10n9 I I I

Harina de pigo 14 403xlO-9

I I I

1 I I I

I I I I

M e l a z a 14 612xlOA9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 S40~107 1 I I

211

523- Bbassi= 1

Las resulta- 5e rem en la t ~ ~ h ~ f - - - ~ ~ - - ~ ~ e se -obtwo en el medio con Harina de Trigo m i d o de la H a r i n a de Yuca Melnza y Sacarosa Se puede obeervar que 1 0 s Ie amp altos se logran con los sustratos amiluceos que tal vez puedan ser mamp facilmente utilizados por el microoqanimno debido a l - v e s o de gelatinizacioacuten que Wren

524- Penicillium sp

Los resultados se muestran en la tabla VIII Los mayores le se alcanzaron con las Harims de Yuca y Trigo con respecto a los atros dos sustratos Se observoacute una mayor produccioacuten de micelio en los sustratos amilaceos lo que podria justificar la produccibn maacutes alta de conidias

525- Thnmianum

LBS resultados se reportan en la tabla XI Estudios hechos par Raussos (1985) demostraron la capacidad de Thanianum en la produccidn de ami la s a s utilizando almidoacuten cam0 fuente de carbono pesto que la harim de yuca y la harina de trigo son sustratos amilacecs se esperariacutea una produccioacuten impcortante de esporras tal COQLO sucedioacute para la harina de yuca y no asi para la harina de trigo Con respecto a la s a c m a el Ie tan bajo que se obtuvo con relacidn a la melaza pede ser debido a todos los compuestos que se encuentran en las m e l a z a s

c TABLA VI1- Inlices de esparcllacibn para Bhssiana utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo M e i u z a y Sacarosa axno fuente de carbono para tiempos de incubacioacuten de 7 dias y relacion CN de 14

I I I

I I I Ie I

Summ CN I I

1 I I I

I I

1 I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 1 8 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

7 DIAS

Harina de Pigo 14 702~10~9 I I I I

I I I

Melaza 14 217~10~9 I I I I

I I I I

Sacarosa i 14 8 5 8 ~ 1 0 ~ 6 I I I I

r

I I

I Ie 1

I Summ CN I

I 1 i I

I I 7 DIAS

I I I I

I 1 I I

Harina de Yuca 14 142x10^10 I I I I

I I I I

Harina de Pigo 14 832xlO-9 1 1 I I

I I I I

M e l a z a 14 293~10~9

I I I

Sacarosa 14 103x10n9

I I I I

I I I I

m IX-Indices de espauulacian para Thamianum utilizando Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa corno fuente de carbono para tiapos de incubacich de 7 dim y relacioacuten CN de 14

I I I I

I -

1 I Ie I

I Summ CN I

I I 7 D I A S t I I I

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 11ox1On1O I I I I

I I I I

Harina de Trigo 14 12Ox10-9 I I I I

I I I I

M e l a z a 14 875~10~9 I I I I

I

Sacarosa I

I i I

14 11Ox10^8 I I I

526- Conclusiones

Varios autores han demostrado la importancia de la fuente de carbono sobre la conidiogenesis de hongos f ilamentosos (Vezina y co11965 Martinelli1976) en este estudio se pudo observar que cada cepa tiene caracteristicas fisiolcjgicas de esporulacidn propias con respecto al tipo de fuente de carbono que se le proporcione Para este caso en especial la cepa de Aniper esporuld mejor en Harina de Yuca A termus en M e l a z a B m i a m en Harinri de Trigo y T harzinnum en Harina de Yuca

------Esttuiaa - - h - - i s o s (lE5) han demostrado que la concentracidn de Nieeno prwente en el mampio de cup170 ejerce una influencia directa en el nuacutemero de conidiosporas producidas por Thurzjmm par 10 que era necesario seleccionar la relacioacuten CN oacuteptima para cada cepa y para cada sustrato

la composicioacuten de l o s medios de cultivo utilizados para llevar a cabo este estudio estb presentados en las tablas I 11 I11 y IV Se utilizaron 4 diferentes relaciones CN estas fueron de 101424 y 40 empleanda UM mezcla de 23 panes de Sulfato de Amonio y 13 parte de h a toanando- 128 g de carbono como base de caacutelculo y tiempos de incubacioacuten de 7 y 14 dias l o s experimentos se realizaron en matraces de 250 ml

Ln relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despueacutes de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Anigw son mostrados en la tabla X

h datos obtenidos para Aniger nos indican que cuardo se emplea Harina de Yuca en concentracich de 40 gl y la reiaci6n CN estaacute entre 10 y 40 no es un factor determinante en la conidiogeacutenesis ya que esporula de rnanera similar entre estos r a n g o s para l o s medio a base de Harina de Trigo la CN entre 40 y 24 es donde mejm esporulacidn se obtiene

r 5 3 2 - A s m i l ~ s t

h relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de espomlaci6n obtenidos aespuk de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Rtemxs son mostradrx en la tabla XI

Lns medios de cultivo con 14 dias de incubacidn presentan el mayor ntUnero de conidiospwas a una relaci6n CN de 14 con excepcih de l o s medios con Sacarosa que mostramn en todos l o s cc~sos un compm-tamiento muy pobre con respecto al n h de conidias producidas Los mejores Ie se log-amn con Harina de Yuca y M e l a z a con una relacidn CN de-14 para 14 dias de incubacidn

Lo relaci6n que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despuds de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para B b s s i a n a son mostrados en la tabla XII

b Ie logrados para B b n s s i m e son muy similares entre si es decir no cambian significativamente l o s Ie para l o s cultivos con 14 dias de inmbacidn son bastante altos siendo el medio de cultivo con una relaci6n CN de 14 y Melaza como fuente de carbono ei queposee el mejor Ie con un tiempo de incuhcidn de 14 dias BI esta cepa se ve su capacidad de adaptacioacuten con respecto a l a s anteriores para crecer en Sackrosa

~ r

27 534- Psnicilliue sp

kiaeiampi que exiate entre 1- necG~-edt-~vcv - y h rendimientos de esparulaciOacutentilde-6btenidos despds de 7 -_Fl4 dias de cultivo en matraces para FbnciIlium sp son mostrados en la tabla XILI

_

La relacidn CN entre 10 y40 no tiene una influencia directa en la conidioghnesis de esta cepa sin embargo se dbeewa una tendencia a la disminucioacuten del N de conidiospcwas producidas en los cultivos con 14 dias de incubacih Los mayores Ie se lcgrarcm con los medios de cultivo a bnse de Harina de Yuca y Harina de Trigo

La relaci6n que existe entre la composiciiquestn quiacutemica del medio de cultivo y l a s rendimientos de esporulaci6n obtenidos desples de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Thurzzanum son mostrados en la tabla XIV

Las resultados obtenidos 1x1s mestran unatendencia hacia la obtencioacuten del m y m Ie en rangos de CN de 10 a 14 y estudios hechos par Raussos (1985) sohre el efecto de la concentraci6n de Nitriquestgeno en la oanidiogdnesis de Thaniunum pnmporcionaron una CN optima de 14 utilizando Harina de Yuca corno fuente de curbno

Sin embxqo pura una CN de 3253 obtiene un Ie para 7 dias --de incubacidn de Q16x1On9 cmparando este resultado con el resultado obtenido en mi estudio encuentro que a una CN de 40 para 7 diQs de incubacibn tengo un Ie de 132xlO-9 esto es 13 veces mamp por lo que es dificil comparar estos datos en l o s resultados obtenidos se obsewa una tendencia para los cultivos con 14 dias de incubacidn de disminuir el Ie confarme aumenta la relacidn CN y para l a s cultivos con 7 dias se observn lo contrario Los Ie mus altos se logran con l o s medios de cultivo a base de Harinu de Yuca y Melaza

536- Conclusiones

Las cepas estudiadas eSp0IWlUn dependiendo del tipo de fuente de carbono la fuente de carbono y su naturaleza tiene m infiuencia directa en la conidiogeacutenesis de l o s hongos f ilamentosos que la concentracioacuten de nitrdgeno sin embargo es recamendable la adlcidn ae nitdgeno entre l o s rargos de CN de 10 a 4 0

Para disminuir l o s costos de pmduccioacuten de conidiosporas hay que optimizar los medics de cultivo nacer la seleccioacuten de una h e m fuente de carbono para cada cepa y trhjar en rangos de CN de 14 a 4 0

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
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                                      • I I I 1
                                      • I M
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                                        • MEDIO EUXFAm CN
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                                          • I Y
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Page 9: MATRICULA: 83323133.

3

21 F ISIWIA DE CRD2IMW

Lx horgos filamentaeos m microoapnnismos eucaribticos quimiarganotrdficog estrictamente aarbbios y se repmducen de manara natural por medio de conidicepmas

La clasificacih de los horgoe esth basaamp principalmente en las caracterlsticaa de las agpcrras e e x u a l e e y de l o e cuarpos fructZfaroe presentes durante l o s estadlos s e x u a l e s de w1 ciclo biolbgico Loe hangoe con un estado e e x u a l conocido em denaninan h v perfectos Sin embaryo rmuchcs h o w eo10 producen eapcrras s e x u a l e s y cue- fructlf imx bajo ciertas corwiiciones exprimentales m y precisas si ea que las pmducen

Asi pues todavila no 8e conocen l o s ciclos biolQicos cunpleto8 con l o s estadroe sexuales ccmpletoe de muchos hongog Para estos hongos ein estadbs sexuales conocidos les conoce como how imperfectas (Talbot 1978)

La vida de un hongo imperfecto 8e divide en CUEltro etapas fisiolbgiacutecas impctantes que son la latencia la germinacibn la marltiplicacitm vegetativa y la conidiogbnesis (Rcrussosl985) - P

La conidioapora de un hongo f i lamentoso e8 una parte altamente espetcializada de mproduccibn Bupewivencia y dierparsibn ncamalmente delimitadas de iexclas muchas partes de l o s hongos y caracterizada por un metabolismo minim bajo conteniao de agua y carece da movimiento IcitoplasmCttim Aparte de m obvio p a p e l ecolbgico en la naturaleza l a s conidiosporas son usah en el laboratorio colpa irdculo en la pmduccibn de biomass para egtcperimentos o pmcm industriales y mhs recientemente para real izar directamente transformaciones qulmicas especff icas (Vezina y Sing 1975)

La conidiospwa esta en latencia cuando no gemina ampampa latencia pede ser de dos tipos constitucional o exQena

Con respecto Q la latencia constitucional la conidiospara puede IX) genninar aunque se encuentre bajo condiciones ambientales ade- pem primero requiere un proceso de activacibn para vencer una propiedad inata en el estado latente el cual pede ser una bancera pura la penetracibn de nutrientes una dDstruccih metab3lica o una auto-irhibiciamp~

Por otra parte en la latencia exwena la conidiospra es inactiva porque hay cordiciones ambientalee aesfavaruhles qulmicas yo flsicas y Pplede rapidamente reanudar m d e m l lo en un medio ambiente favorable E T 1 este tipc de

4

latencia la ganninacitm es contmlmamp p o r la necesidad esencial fact de- ampg2--r io - 2

Charamp todas la6 barreras de latencia han sido removidas la amidiospara normalmente requiere de niveles de temperatura de humedad favorable8 y ademhe de ciertas subetancias en el medio ambiente para canenzar el proceeo de germinacibn DespUes del inicio de esta nueva fase de genninacidn aparece la reepiracibn aardbica que 88 un requerimiento m 1 para todas las espocras Alguna8 canidiasparaa pueden exigir ademhs de estos factores un requerimiento de CDZ la mayor3a de las esporas requiere de una fuente externa de carbohidratos para germins aigunas otras pceeen adecuadamente res~nms oryhicas pero tienen la necesidad solamente del agua (Smith 1978)

BJ 1- siguientes gheros de hongos filamentosos que ee estuiian en este trabajo c u m Aspargillus Beauveria Axicillim sp y Zl-ichoderrpa (hongos imperfectos) las conidiosporas repmeentan la fama de reproduccibn a s e x u a l La definicibn que Sussman (1965) ha dado de l a s conidiceporas es la siguiente Todo perPodo de vida lento o intarrupcih reversible de desarrollo del cuyaniemo la caracterhtica fundamental de la oonidiospaota es que hay un irdividuo en potencialidad esta potencialidad esta reportada en el tiempo de latencia

211 Las etapas fieiologicas de crecimiento

a) La geminacih de mnidiospmas

La genninacidn es la suma de l o s procesce y de los cambios que intervienen en la recuperacibn del desarrollo de la fanm en la latencia y en la transformacibn de una estructura diferente (Allen1965) EB decir tambian el -pocimer estad30 imvemible que es abservado cano una diferencia del organismo en latencia el juicio pede ser formado soh l o s criterios morfoltrgicos citol6gicos fisiolbgicce o bioqulmicos (Sussman 1975)

b) La multiplicacibn vegetativa

Esta etapa romprende en realidad varias partes ia mamps importante corresponde a la fase de multiplicacibn de tipo exponencia1 del micelio cuando estamp desarrollado en nume- ramificaciones y extremos a UM pmduccibn de biomasa IRoyssos 1985) c) La conidiwhesis

La conidicghesis consiste en UM sucesiEcl de eventos internos en la dlula micelial (proliferacib del retlculo endoplasmdtico de vacuolas y nkleos) que temira en la iontacibn de conidiosporas la produccibn y

I

x - 2 L - - A ~

d

liberncibn de estas (Imrpent 1972 Fewe eco111975 De hecho la conidiogbesis de hongos filmentosos es un proceso muy ample jo

22 FIS1OLLXIA E EsFcrRuLACION

La conidioghesis es una etapa fisioltgiccr muy importante para l o s horgos imperfectos eta etapa comesponde a la fonnacibn

y liberacih de conidiosporas

El coanplejo proceso de esparulacibn en la conidioghesis pede ser visto cano la integracibn de algunos eventos biolbgicos La habilidad para cambiar de una fonnn de desarrollo filamentoso vegetativo a UM fonne ae espora reproductiva y generalmente esfGrica es el resultado final de un metdbolismo que responde a cambios fisicoqufmicos especlficos del medio ambiente (pH CO O Z temperatura humedad o la aparicibn de al- metabolito secundario) l o s cuales ejercen cambios en los estTmulos internos que regulan la actividad celular

Es hitido que el desencadenamiento de la esporulacibn es inducido por un factor limitate que desaparece en el medio de cultivo durante el crecimiento del hoqo La naturaieza de este factor es muy variable Se supone que el agotamiento de la fuente de carbono-o de nitrbgeno es generalmente el factor limitante Sin embaqo no deben olvidarse ios demas factores fisicoqulmicos untes mencionados

Un desancollo n o r m a 1 de micelio y una tuena conidiog6nesis son l a s condiciones previas G m produccibn imporLante ae midiosporas (Rcysscs 1985 El nilmero ae conidiosporas producidas por un hongo filamentoso es principalmente funcibn de la cantidad de la fuente de carbono y de nitriquestgeno presente en el medio de cultivo

El efecto de induccibn-inhibicibn de la conidicgbesis de Aniger fua puesto en evidencia por Gnlbraith y S m i t h (1969) De la misma manera la irduccidn del riiLmo endbgeno de esporulacibn de Aniger es influenciaamp por la relacibr glucosapotusio y por l o s oligoelementos presentes en el nedicl de cultivo (Jerebzoff eta11976)

En los medios de cultivc las sales Icineraies a urle concentacibn elevada podrlan tener los efectos opuestas sobre el crecimiento y la conidioghesis de homos f i l m e n t o s o s (Girdruth 1977 Slayan y Tatm 1954 Lilly L9euro51 De a misna manera la aereacibn y la humedad poseer una influencia en la pduccibn cuantitativa de coniaiwpras ae P m p e f w t i (Maheva et col 1984)

T

___ ~ ~~ - ~- ~ ~ ~ -~

deben ser definidas para a especie h e 5 un medio amp4cultivo optimizado para la produccibn de conidiwporns de una especie puede no ser adecuado para alguna otra (Vezim y co11965)

23 PRclDuccION DE E S O R A S

Diferentes tecnicas sa conocidas para la produccibn masiva de esparas La mds antigua consiste en cultivar el mirrocqganismo sobre una superficie en UT ampio de cultivo con agar ya sea en cajas de Petri a nivel labratorio o en btellns Rolux para fines prticticcs Osta tecnica presenta graves problemas de recoleccibn y la manipuiacibn de u n h e m importante de frasccs ademas se debe llevar a cabo bajc asepsia canpleta

Se ha mostrado la posibilidad de producir esporas en cultivo llquido utilizardo fermentadores esterilizables y extrapolables a nivel industrial (Bmderic eta11982)

Se h a n hecho estudios para producir esporas utilizando sustratos nmilaceos en ferntadores de lecho fijo (Maheva y col 19841 y mediante el uso de charolas en l a s cuales se coloca el sustrato en capas y se pone en una estufa de incubacibn (Vezina 1975) y ~ s o b r e pan de cebamp para producir esporas de Penicillium laucun en la elaboracibn de quesos (Nougaret 19821 ~

p Ultimamente se ha desarrdllado un proceso de cultivo en

superficie sobe un medio amplido utilizando un fermentador de discos rotatorios el c u a l ha dado henos resultados pero no puede ser escalado a un nive mayor (RaimLault y Raussos 1985)

Se ha desarrollado tam5i8n otrc amptodo de pmduccibn de espus solre soporte amplido esto es con la utilizacibn de bagazo de camp (Roussos y coldboradores 1988 certificado de invencibn)

2 4 irsos DE LAS EspoRAs

Eb la produccibn industrial de productos derivados de las fementaciones con hongos filmentosos la inoculacibn de los sustratos requiere de una gran cantidad de conidiosporcs ya que constituyen el punto de inicio de estos procesos de fernentacidn

La importancia de l o s cinco hongos fitmentosos estudiados radica en lo siguiente

~ p ~ ~ ~ l ~ nigerhiunenta el contenido pmteicc de le yucs (hinhult 1980) ademris de poseer actividad pectinolltica

ASprgiIlus te-mm p e e actividad p - a e aprovechamiento de la cantildea de azucar (Brizuela 1987) ademamp elaboran dos substancias antihcteriens de toxicidad variabie (flakripinas citrirn] (Bottm etai965)

7 _

- - ~ ~ ~ - ~~ -- - - i -

B s a u w i a bassima es parbita de insectos por lo qua ayuda en lucha biol6gica adema de producir enzimas como quitiMeas y 1 ipaears

micjllirm sp egta 0CPa posee una alticapacidad ampa e la cafeina de la pllpa de cafe esto rice penuite eliminar uno de lo s principales toxicos en la pulpa y de esta manera disminuir la contaminacion que produce y emplearla para alimentacion animal

2)-ickdema hurzidoum es un pl0dUctor de celulasas y ayuda en lucha biol6gica ya que m la propiedad de em- un antagonista poderaeo con respecto a un cierto rimero de hongos fitoputiquestgeme

( R o w e o s 19851

- _I__I k -

--

l- probar el efecto del tipo de la fuente de carbono en la

empleados en l o s procesos de fermentacioacuten dlida I produccioacuten masiva de midiosporas de l o s p-incipales horqcs

2- Probar el efecto combinado del tipo de la fuente de carbm y la relacioacuten CN en la produccioacuten masiva ae amidiosporas

3- Llevar a cabo la produccioacuten rnasiv de conidiospwas en un fermentador de discos rotatorios de 2 i

9

IDS micmotyanismas estudiados en este t r a j o fueron P s P w g i I I u s n i p ORSIUH NlO A s p e r g i l I u s t m u s cepa del ICIDCA (Instituto cubano para la Investigacioacuten de l o s Derivados de la Cantildea de Azucur) B e a u w i d hssiann cepa d e l ICIDCA Fanicillium sp cepa de la uA y Zkichoderma harzianum CCM F470 (Czechoslovak Collection of Microorganisms) ampliamente descrita por Rcwsg~os (1985)

4 2 MEDIOS DE CULTIVO

4 2 l Medios de comervaciOacuten

las cepas de Aniger A tanclrsus Fenicillium sp y Tharzianum son resembradas en un medio de PDA (papa- dextrasa-agar) y la cepa de B a i u n u es resenbada en PDA con 05 de extracto de levadura cada 6 meses e incubadas durante 7 dias a 29C para despueacutes ser conservadas en refrigeracioacuten durante 6

- meses apracimadamente ~ ~

4 2 2 Medios de esparulacidn

Se probaran l a s siguientes fuentes de cwbmHarina de Yuca Harina de P i g o M e l a z a y Sacarosa con relacioacuten CN de 10 14 24 Y 4 0

a) FmlaciOacuten de los medios

i

t

Lxw medios de cultivo utilizados para la produccioacuten de conidiospwas de Aniger A terreus Bampiana Amicillium p y Thamianum se muestran en l a s tablas I 11 I11 y IV

43 CONDICIONB DE CULTIVO

4 3 1 Inoculacioacuten

El medio de cultivo se inocula en masa este modo de inoculacioacuten consiste en mantener a 40C el medio de cultivo para posteriannente agregar uryt suspensidn de conidiospm-as de concentracioacuten conocida (2 x lo7 esporaWgr de sustrato) El ampio inoculado se agita para obtener una disiribucioacuten hamogenea en el cam ae maeaces Nand0 se utiiiza el fermentaamp de discos se pone en funcionamiento el sistema rotatwio para que SS distribuya el medio de cultivo inocuiaao en l o s discos de forma hmcqenea

F

432 Crecimiento--yespwulacion - - - -

Los cultivos se incuban a temperatura de laboratorio de 18 a 23C durante 7 y 14 dias Al fermentada- de discos se le suministra un flujo de aire estdril con un gasto de 4 lhr durante el periacuteodo de incubncioacuten

44 MEXDO PARA LA F9OJXJEION DE CONIDICSRXA5

Se conocen divemos amptodos para la pmducci6n de conidiosporas nosotras utilizaremos mntraces Erlen Meyer de 250 m1 y Fermentazdares de Discos

441 Matraces Erlen Heyer de 250 ml

El medio de cultivo se reparte en matraces Erlen Meyer de 250 m1 a rampn de 20 m1 par matraz y se obtura con un tapamp de algodoacuten se esteriliza en autoclave a 121C durante 20 min

442 Fermentada- de discos

El esquema del fermentada- de discos rotutorios utilizado se muestra en fmma detallada en la figura 1 El fermentador conteniendo300 m1 de medio de cultivo se esteriliza en autoclave a 121C por 45 min

-

e

a) Descripcioacuten del fermentada-

El fermentador de discos que se presenta en la fig 1 esta fannado por una cuba de vidrio la c u a l tiene una entrada y una salida en la parte superiorde la cuke se coloca una platina que tiene dos entradas una para realizar la inoculacioacuten del medio de cultivo y otra para airear esta platina sostiene un eje en el centro satre el eje se colocan 11 pares de discos formados por 2 m a l l a s de acero inoxidable de 2 mm de espesor y tamantildeo de malla de 4 mm c m un diaacutemetro de 10 c m y separados cuda par por 10 mm con unas rondanas especiales de acero inoxidable en el extremo inferior del eje se coloca una abrazadera la c u a l ejece presioacuten s e e l o s discos y con esto se mantienen fijos el total de 22 discos nos proporciona una superficie uacutetii de 172787 cm2 en la parte superior del eje se localiza un T la omi nos pemitlra colocar un motor y con esto hacer girar los disc-

b) Fimcionamiento y uso

El funcionamiento del fementaaor ae discos es de la siguiente manera LKB vez que se ha agregado e medic de cultivo y se ha esterilizado se coloca a un rotor de marera harizontal lo que nos permitiraacute mantener a l o s discos inmerso= en el medio ae cultivo y de esta forma una vezque se va enfrianio se adhiera a ellos el medic de cultivo se i m l a cunni0 se sncuentra en un promedio de

11

I ~

tempertura de 30 y 35CYTbl medio aun se encuentra licfuido) y asi poder tener una distriMciOacuten hanogenea de l a s esparas en el medio de cultivo (inoculacioacuten en masa) Una vez que el medio de cultivo se ha impregnado a l o s diecog el farmentador puede ser colocado de manera vertical en un l u g = adecuado

__ - - - - -

45 COSECHA Y CxlENrA DE EspoRAs

a) Para l o s cultivos en matraces se agmgu a cada uno 100 m1 de agua destilada estkil adicionada de Tbreen 80 (01) y se hunogeniza mediante agitacih magrktica

b) Para l o s cultivos en fementadares de discos 58 introduce al fermentadar 300 m1 de agua desti lada estampil adicionada de Tween 80 (01) y se mantienen los discos en rotaci6n durante 10 min

El conteo de l a s mas 88 realiza mediante el uso de kas de Malassez con suspensiones convenientemente diluidas y aplicando la siguiente f b l a

A + B + CJ = X 10 = N

A + B + C J = cuenta total de esporas en 10 cuhdros de la celda - x N - mimero de espmas pranedio

1D = factor de dilucioacuten 3

t

1 -Cuva

2 - P l a r i n a

3-Eje

4 -Disc05

5 - E n t rad2 zuper i or de l a cuva

6 - Sal ida i n f e r i o r d e l a cuva

- - Tapon d e entrada y s a l ida

r - 12

-

Medio I I I 3 I 4 I

I I 1 I I I I I Harim de I I I I

Yuca 4 0 4 0 4 0 I 4

I I I

Cgl) 1 1 I 2

I

I I I I I I

I I I I I I

(NH4)2904 402 287 167 100 I I I I

I 1 I I I

Urea 091 065 038 022

cac12 1 1 1 1 1 I 1 I

I I I I I I

I I I I

1 I 1 I I I

I ~~~ ~ ~ ~

I I I I

K H 2 p o 9 2 I 2 I 2 I 2 I I I I t I

I I I - I I I

Ag8r 15 15 I 15 I 15 I I I I 1 I I

I I I I I Agua (ml) loo0 1000 1000 1000

I I I I I

1 I I I I

I CN 10 I 14 I 24 I 40 I

I I I I I

I I I 1 I I

1 pH 56 56 156 56

I I I I I 1

Medio I I I I

Harim de I I I I

Trigo 5714 5714 5714 5714

(gl) I 1 1 2 I 3 I 4 I I I I I

I I I I I I

I I I I I 1

I I I I I I

(NH4)ZSX 402 287 167 100 I I I I I I

I I I I I I

u r e a 091 065 038 (322 I I I I I 1

1 I I I I I ~~ ~~ ~~~

I cac12 1 I 1 I 1 I 1 I

I I

~ I - s 2 I 2 I 2 I 2 I

e I I I I I

J q a r 15 15 I 15 I 15 I

I I

I I I I I I

I 1 I I I I

I I I I I

I I I I I I

Agua (m11 loo0 1000 1000 1000 I I 1 I I I

I I I I I I

I pH 56 56 56 56 I I I I I I

1 I I I I I

I cm 10 I 14 I 24 I 40 I I I I I I I

r

t

14

c

C_ de l o s medios S a m a camo

r

de cultivo para fuente de carbono

Hedio I I I I

(gl) 1 2 3 I 4 I

I I I I I I I I

I I

I I I I I

SaculmBa 3040 3 0 4 0 3040 3040 I I

I I

~ N l i 4 ) 2 S X 402 287 167 100 I I I

I I

1 I 1 I 1 I

I

I 2 I 2 I 2 I I I I

95

I I

I I

I I

I I

I I I I

urea 091 065 038 022 I I I

I I I I I I

cac12 1 m 2

I I I

I I I I

I I I

I I

Agar I 15 15 I 15 I I

I I I I I

Agua (m11 1000 1000 1000 1000 I I I I I I

56 56 56

L -

I I I

I I I I I

I pH 56

cN 10 14 24 4 0

I I I I I I

I I

I I

I I

I I

I I

I

r

Hedio

I I I

I I I I

(gl) 1

I I

I 2 I 3 4 I

I I

I I

I I I I I

M e l a z a 5470 5470 5470 5470 I I I I I I I (W)2S34 402 287 167 1-00 I I I I I I

I I I

I Urea 091 065 038 022 I I I

cac12 I 1 1 1 1 1 1

I

I I I

I

I

I I I

I I I I I

I I 1 I I I

m 2 I I I I

Agar 15 15

I 2 I 2 I 2 I

I

I I

e

I I I I

I 15 I 15 I

I -

I I

I I 1 I I I

Agw (m11 loo0 1000 1000 1000 1 I t I I

I I I p H 56 56 56 56 I I I I

CN 10 1 I 14 I 24 4 0 I I I I I I

I I I I I I

511- AsparYillus n i p -

de 3 dias aparecen farmas especializadas de reploduccian asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este se desarrolla UM vesicula y sobre la vesicula se

conidicsporas Estas conidospwas presentan un color cafe obscuro y n e g r o son gldbulares ornamentadas con un diumetro aproximado de 35 a 5 m La colonia cambia al c o l o r negro del centro B los ext remos

El micelio de este horgo es septa30 y de color blanco despues

desarrollan lae f ialides de las cuales se farmaran l a s

LA estructura de la fama de repruduccion se p-esenta en la figura 2

ru LA 7 V E S I CULA

ESTI P E

ELULA P O D A L

Figura 2 - Conidioforas y conidias de Aniger

El micelio de este h q o e8 septado de color blanco depea de 3 dias aparecen fonoas especializades de repmduccion asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este crecen fialides y de l a s fialides se forman las conidiosparas y presenta exudados ambarinoe Eetas conidiceparas presentan un color amarillo l a s conidiceporas son lisas glokulares con un diametro aproximado de 15 - 25 m

Figura 3 la estructura de la f a r m a de reproduction presenta en la

FIA

Figura 3- Conidioforos y coniaias de X t e

Este hongo presenta un micelio atercipelado y coposo inicialmente blanco presenta un raacutenquis genicula denticulado o en zigzag posteriarmente se tans amarillento Posee conidias hialinas y gldlxllams can un diaacutemetro aproximado de 15 a 3ym La estructura se presenta en la Figura 4

RANQU I S

c

Figura 4 - ConidiOacutefaros y conidias de E h s s i e n o

m cepa se ha identificado corno Penicillium W f a r t i i presenta un micelio septado con produccioacuten de micelio vegetativo aerial d e y e e de un tiempo aparecen estructurns especializadas de repocoduccion a s e x u a l Se presenta un estipe m e n t a d o unas brancpeas meacutetulas f M i d e s y conidias Elstas conidiosporas presentan un colap- verduzco son globdares y lisas con un dibtro apmximado de 4 a 6p Lae conidias son producidas en cadenas cortas La estructura se presenta en la Figura 5

C O N l D l A S

1 O r r m

Figura 5- Conidioacuteforos y coniaias de Fenicilliun

Al inicio este h q o presenta un micelio blanco pterionnente aprecen farmas especializadas de reproduccion asexual fialidee y conidicepuras I m conidiofaros se presentan en farmas piramidalee y en estos sistemas las fialidee Be localizan en g r u ~ w de dos a cuatro Las conidia3 Bon de color verde olivo son de superficie lisas subglobulares con un diametm apmximado de 2 a 3 m

La egtructura de la fcwma de reproduccion se presenta en la figura 6

Las colonias de Thnnianum en FDA se caracterizan pol tener un color verde con circulos concentricos Hay que mencionar que las colanias pmducen un olor a coco (coconut) muy caracteristico

CONlDl

Figura 6 - Conidioforos y conidias de Thanianum

516- Conclusiones v 4

_ _

el curse) de este capitulo se describieron los sietemas de reproduccioacuten de las cinco cepas de hongos filamentosos estudiados Todos estos hongos se repaoducen de manera a s e x u a l Se que l a s 5 cepas presentan estructuras muy diferentes a s i co~po diversos colores en l o s estadios de crecimiento vegetativo y ccmidiogdnesie ademds presentan conidimporas glohlares de muy diversos tamafios

c

093039 t

2 2

- La composicioacuten de l o s diferentes meampicsde cultvoutQizados pera llevar a cabo este estudio fueron medio N 2 de l a s tablas I 11111 y IV y se establecioacute prabay las diferentes fuentes de carbno (Harina de Yuca Harina de Pigo M e l a z a y Sacarosa) en matraces a una relaci6n CN de 14 para de esta manera poder observar el efecto que cada una de ell- ejerce solre la conidicgbesis de l o s hongos filamentosos estudiadas L m resultados se reman en l a s tablas V VI VII VI11 y XI y se exp-esan en base al Indice de Bporulacidn (Ie - N de esporas g de sustrato carbonado) para 7 dias de incubacion a temperatura ambiente (15-22C)

~ - -4

La Harim de Yuca es un producto amilaceo que ha demostrado ser un sustrato de gran eficiencia para la produccion de conidiosparas de hongos filamentosos ademds de ser un producto tropical de facil acceso su principal componente es el almidoacuten que corresponde al 80 en materia seca se encuentran en esta Harina pteiacutenas grasas y vitaminas del tipo B y C adamp de fibras y cenizas (Grace 1977)

la Harina de Pigo es otro sustrato amilaceo que se considerd importante utilizar debido a su alta disponibilidad en su canposicioacuten estan presentes pteiacutenas grw calcio f oacute s f m h i m tiamina riboflavina y niacina esto lo hace un sustrato interesante

La M e l a z a es el subproducto final de la fakicacioacuten de azucar es un liquido o b s c u r o denso y viscoso que se separa de la masa cocida de baja-calidad y del cual no se pede cristalizar ampamcar por amptodos mencionales y econoacutemicos en su composicioacuten estdn presentes 1 0 s amcares y otras sustancias entre l a s cuales se pueden citar l o s corapuestos nitrogenados aacutecidos aminoacidos albiminas vitaminas ceras esteroles lipid- sales minerales y cenizas etc (ICIDCA1986) Como se puede ver es un producto muy complejo por lo que puede ser un sustrato muy atractivo para su utilizaci6n como fuente de carbono en ipedios de cultivo pura la espomlaci6n de hongos filamentosos (Brinela 1987)

la s a c m a es un producto de facil adquisicioacuten y de pmduccioacuten idustrial importante por lo que se considem un sustrato atractivo para la produccioacuten de amidiosporas de hongos filamentosos La sacarosa se encuentra fonnada por una molecula de fructosa y una de glucosa l o s medios de cultivo que contienen sacarosa pcdriamos decir que son medios simples en comparacioacuten con la complejidad de la melaza y l a s harinas

521- A n i g ~

Fh la tabla V se muestran l o s Ie obtenidos para Anigerutilizardo l a s 4 fuentes de carbono antes mencionadas El mayor Ie se alcanzoacute en el medio de cultivo con k i n a de Yuca seguido de la M e l a z a la k i n a de Pigo y por Gltimo la Sacarosa se ha demostrado que durante el proceso de esterilizacioacuten la Harina de Yuca sufre un tratamiento teacutermico que hace que las moleacuteculas de almidh pasen cie una forma cristalina a un estado amdrfo (gelatinizacion) y que Ani_mr es un productm de amilasas (Raimbault 19801 lo que sugiere que la gelatinizacioacuten podriacutea facilitar el ataque enzimdtico y con esto i iberar cantidades importantes de glucosa que favoreced el crecilriiento del hongo lo que normalmente estaacute reiacionado con una produccioacuten importante de conidias

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I

I

I c- 7 DIAS

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 509xl0^9 I I I I

I I 1 I

Harina de Trigo 14 367X1^9 I I I

I I I I

Melaza 14 424x10-9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 16Ox10^8 I I I I

522- d t ~ 1 7 9 ~ ~

Eh la tabla VI se muestran l o s Ie obtenidos para A termus -utiliZando__las 4 fuentes de carbono antes mencionadas El Ie mas alto se encmtroacute en el medio de cultivo con M e l a z a seguido de la Yprina de Yuca y Trigo y por uacuteltimo la Sacarosa d t m u s es utilizado en lo s procesos de aprovechamiento de eubproductos de la industria cantildeera en cuba (meollo y bagazo) (Blanco bpez Villarl968) Esta cepa estaacute adaptada a l o s procesos de la industria cuntildeera de c u b a por lo que se esperariacutea que espurulara mejor en Melaza tal como ocurrioacute

TXBLA VI- Indices de espwulacibn para dtwreus utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa como fuente de carbono para tiempos de incubacidn de 7 dias y relacioacuten CN de 14

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I I I I I I 7 DIAS I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 60x10n9 I I I

Harina de pigo 14 403xlO-9

I I I

1 I I I

I I I I

M e l a z a 14 612xlOA9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 S40~107 1 I I

211

523- Bbassi= 1

Las resulta- 5e rem en la t ~ ~ h ~ f - - - ~ ~ - - ~ ~ e se -obtwo en el medio con Harina de Trigo m i d o de la H a r i n a de Yuca Melnza y Sacarosa Se puede obeervar que 1 0 s Ie amp altos se logran con los sustratos amiluceos que tal vez puedan ser mamp facilmente utilizados por el microoqanimno debido a l - v e s o de gelatinizacioacuten que Wren

524- Penicillium sp

Los resultados se muestran en la tabla VIII Los mayores le se alcanzaron con las Harims de Yuca y Trigo con respecto a los atros dos sustratos Se observoacute una mayor produccioacuten de micelio en los sustratos amilaceos lo que podria justificar la produccibn maacutes alta de conidias

525- Thnmianum

LBS resultados se reportan en la tabla XI Estudios hechos par Raussos (1985) demostraron la capacidad de Thanianum en la produccidn de ami la s a s utilizando almidoacuten cam0 fuente de carbono pesto que la harim de yuca y la harina de trigo son sustratos amilacecs se esperariacutea una produccioacuten impcortante de esporras tal COQLO sucedioacute para la harina de yuca y no asi para la harina de trigo Con respecto a la s a c m a el Ie tan bajo que se obtuvo con relacidn a la melaza pede ser debido a todos los compuestos que se encuentran en las m e l a z a s

c TABLA VI1- Inlices de esparcllacibn para Bhssiana utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo M e i u z a y Sacarosa axno fuente de carbono para tiempos de incubacioacuten de 7 dias y relacion CN de 14

I I I

I I I Ie I

Summ CN I I

1 I I I

I I

1 I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 1 8 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

7 DIAS

Harina de Pigo 14 702~10~9 I I I I

I I I

Melaza 14 217~10~9 I I I I

I I I I

Sacarosa i 14 8 5 8 ~ 1 0 ~ 6 I I I I

r

I I

I Ie 1

I Summ CN I

I 1 i I

I I 7 DIAS

I I I I

I 1 I I

Harina de Yuca 14 142x10^10 I I I I

I I I I

Harina de Pigo 14 832xlO-9 1 1 I I

I I I I

M e l a z a 14 293~10~9

I I I

Sacarosa 14 103x10n9

I I I I

I I I I

m IX-Indices de espauulacian para Thamianum utilizando Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa corno fuente de carbono para tiapos de incubacich de 7 dim y relacioacuten CN de 14

I I I I

I -

1 I Ie I

I Summ CN I

I I 7 D I A S t I I I

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 11ox1On1O I I I I

I I I I

Harina de Trigo 14 12Ox10-9 I I I I

I I I I

M e l a z a 14 875~10~9 I I I I

I

Sacarosa I

I i I

14 11Ox10^8 I I I

526- Conclusiones

Varios autores han demostrado la importancia de la fuente de carbono sobre la conidiogenesis de hongos f ilamentosos (Vezina y co11965 Martinelli1976) en este estudio se pudo observar que cada cepa tiene caracteristicas fisiolcjgicas de esporulacidn propias con respecto al tipo de fuente de carbono que se le proporcione Para este caso en especial la cepa de Aniper esporuld mejor en Harina de Yuca A termus en M e l a z a B m i a m en Harinri de Trigo y T harzinnum en Harina de Yuca

------Esttuiaa - - h - - i s o s (lE5) han demostrado que la concentracidn de Nieeno prwente en el mampio de cup170 ejerce una influencia directa en el nuacutemero de conidiosporas producidas por Thurzjmm par 10 que era necesario seleccionar la relacioacuten CN oacuteptima para cada cepa y para cada sustrato

la composicioacuten de l o s medios de cultivo utilizados para llevar a cabo este estudio estb presentados en las tablas I 11 I11 y IV Se utilizaron 4 diferentes relaciones CN estas fueron de 101424 y 40 empleanda UM mezcla de 23 panes de Sulfato de Amonio y 13 parte de h a toanando- 128 g de carbono como base de caacutelculo y tiempos de incubacioacuten de 7 y 14 dias l o s experimentos se realizaron en matraces de 250 ml

Ln relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despueacutes de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Anigw son mostrados en la tabla X

h datos obtenidos para Aniger nos indican que cuardo se emplea Harina de Yuca en concentracich de 40 gl y la reiaci6n CN estaacute entre 10 y 40 no es un factor determinante en la conidiogeacutenesis ya que esporula de rnanera similar entre estos r a n g o s para l o s medio a base de Harina de Trigo la CN entre 40 y 24 es donde mejm esporulacidn se obtiene

r 5 3 2 - A s m i l ~ s t

h relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de espomlaci6n obtenidos aespuk de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Rtemxs son mostradrx en la tabla XI

Lns medios de cultivo con 14 dias de incubacidn presentan el mayor ntUnero de conidiospwas a una relaci6n CN de 14 con excepcih de l o s medios con Sacarosa que mostramn en todos l o s cc~sos un compm-tamiento muy pobre con respecto al n h de conidias producidas Los mejores Ie se log-amn con Harina de Yuca y M e l a z a con una relacidn CN de-14 para 14 dias de incubacidn

Lo relaci6n que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despuds de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para B b s s i a n a son mostrados en la tabla XII

b Ie logrados para B b n s s i m e son muy similares entre si es decir no cambian significativamente l o s Ie para l o s cultivos con 14 dias de inmbacidn son bastante altos siendo el medio de cultivo con una relaci6n CN de 14 y Melaza como fuente de carbono ei queposee el mejor Ie con un tiempo de incuhcidn de 14 dias BI esta cepa se ve su capacidad de adaptacioacuten con respecto a l a s anteriores para crecer en Sackrosa

~ r

27 534- Psnicilliue sp

kiaeiampi que exiate entre 1- necG~-edt-~vcv - y h rendimientos de esparulaciOacutentilde-6btenidos despds de 7 -_Fl4 dias de cultivo en matraces para FbnciIlium sp son mostrados en la tabla XILI

_

La relacidn CN entre 10 y40 no tiene una influencia directa en la conidioghnesis de esta cepa sin embargo se dbeewa una tendencia a la disminucioacuten del N de conidiospcwas producidas en los cultivos con 14 dias de incubacih Los mayores Ie se lcgrarcm con los medios de cultivo a bnse de Harina de Yuca y Harina de Trigo

La relaci6n que existe entre la composiciiquestn quiacutemica del medio de cultivo y l a s rendimientos de esporulaci6n obtenidos desples de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Thurzzanum son mostrados en la tabla XIV

Las resultados obtenidos 1x1s mestran unatendencia hacia la obtencioacuten del m y m Ie en rangos de CN de 10 a 14 y estudios hechos par Raussos (1985) sohre el efecto de la concentraci6n de Nitriquestgeno en la oanidiogdnesis de Thaniunum pnmporcionaron una CN optima de 14 utilizando Harina de Yuca corno fuente de curbno

Sin embxqo pura una CN de 3253 obtiene un Ie para 7 dias --de incubacidn de Q16x1On9 cmparando este resultado con el resultado obtenido en mi estudio encuentro que a una CN de 40 para 7 diQs de incubacibn tengo un Ie de 132xlO-9 esto es 13 veces mamp por lo que es dificil comparar estos datos en l o s resultados obtenidos se obsewa una tendencia para los cultivos con 14 dias de incubacidn de disminuir el Ie confarme aumenta la relacidn CN y para l a s cultivos con 7 dias se observn lo contrario Los Ie mus altos se logran con l o s medios de cultivo a base de Harinu de Yuca y Melaza

536- Conclusiones

Las cepas estudiadas eSp0IWlUn dependiendo del tipo de fuente de carbono la fuente de carbono y su naturaleza tiene m infiuencia directa en la conidiogeacutenesis de l o s hongos f ilamentosos que la concentracioacuten de nitrdgeno sin embargo es recamendable la adlcidn ae nitdgeno entre l o s rargos de CN de 10 a 4 0

Para disminuir l o s costos de pmduccioacuten de conidiosporas hay que optimizar los medics de cultivo nacer la seleccioacuten de una h e m fuente de carbono para cada cepa y trhjar en rangos de CN de 14 a 4 0

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
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                                      • I I I 1
                                      • I M
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                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
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                                        • I I
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                                        • 1 T
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                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
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4

latencia la ganninacitm es contmlmamp p o r la necesidad esencial fact de- ampg2--r io - 2

Charamp todas la6 barreras de latencia han sido removidas la amidiospara normalmente requiere de niveles de temperatura de humedad favorable8 y ademhe de ciertas subetancias en el medio ambiente para canenzar el proceeo de germinacibn DespUes del inicio de esta nueva fase de genninacidn aparece la reepiracibn aardbica que 88 un requerimiento m 1 para todas las espocras Alguna8 canidiasparaa pueden exigir ademhs de estos factores un requerimiento de CDZ la mayor3a de las esporas requiere de una fuente externa de carbohidratos para germins aigunas otras pceeen adecuadamente res~nms oryhicas pero tienen la necesidad solamente del agua (Smith 1978)

BJ 1- siguientes gheros de hongos filamentosos que ee estuiian en este trabajo c u m Aspargillus Beauveria Axicillim sp y Zl-ichoderrpa (hongos imperfectos) las conidiosporas repmeentan la fama de reproduccibn a s e x u a l La definicibn que Sussman (1965) ha dado de l a s conidiceporas es la siguiente Todo perPodo de vida lento o intarrupcih reversible de desarrollo del cuyaniemo la caracterhtica fundamental de la oonidiospaota es que hay un irdividuo en potencialidad esta potencialidad esta reportada en el tiempo de latencia

211 Las etapas fieiologicas de crecimiento

a) La geminacih de mnidiospmas

La genninacidn es la suma de l o s procesce y de los cambios que intervienen en la recuperacibn del desarrollo de la fanm en la latencia y en la transformacibn de una estructura diferente (Allen1965) EB decir tambian el -pocimer estad30 imvemible que es abservado cano una diferencia del organismo en latencia el juicio pede ser formado soh l o s criterios morfoltrgicos citol6gicos fisiolbgicce o bioqulmicos (Sussman 1975)

b) La multiplicacibn vegetativa

Esta etapa romprende en realidad varias partes ia mamps importante corresponde a la fase de multiplicacibn de tipo exponencia1 del micelio cuando estamp desarrollado en nume- ramificaciones y extremos a UM pmduccibn de biomasa IRoyssos 1985) c) La conidiwhesis

La conidicghesis consiste en UM sucesiEcl de eventos internos en la dlula micelial (proliferacib del retlculo endoplasmdtico de vacuolas y nkleos) que temira en la iontacibn de conidiosporas la produccibn y

I

x - 2 L - - A ~

d

liberncibn de estas (Imrpent 1972 Fewe eco111975 De hecho la conidiogbesis de hongos filmentosos es un proceso muy ample jo

22 FIS1OLLXIA E EsFcrRuLACION

La conidioghesis es una etapa fisioltgiccr muy importante para l o s horgos imperfectos eta etapa comesponde a la fonnacibn

y liberacih de conidiosporas

El coanplejo proceso de esparulacibn en la conidioghesis pede ser visto cano la integracibn de algunos eventos biolbgicos La habilidad para cambiar de una fonnn de desarrollo filamentoso vegetativo a UM fonne ae espora reproductiva y generalmente esfGrica es el resultado final de un metdbolismo que responde a cambios fisicoqufmicos especlficos del medio ambiente (pH CO O Z temperatura humedad o la aparicibn de al- metabolito secundario) l o s cuales ejercen cambios en los estTmulos internos que regulan la actividad celular

Es hitido que el desencadenamiento de la esporulacibn es inducido por un factor limitate que desaparece en el medio de cultivo durante el crecimiento del hoqo La naturaieza de este factor es muy variable Se supone que el agotamiento de la fuente de carbono-o de nitrbgeno es generalmente el factor limitante Sin embaqo no deben olvidarse ios demas factores fisicoqulmicos untes mencionados

Un desancollo n o r m a 1 de micelio y una tuena conidiog6nesis son l a s condiciones previas G m produccibn imporLante ae midiosporas (Rcysscs 1985 El nilmero ae conidiosporas producidas por un hongo filamentoso es principalmente funcibn de la cantidad de la fuente de carbono y de nitriquestgeno presente en el medio de cultivo

El efecto de induccibn-inhibicibn de la conidicgbesis de Aniger fua puesto en evidencia por Gnlbraith y S m i t h (1969) De la misma manera la irduccidn del riiLmo endbgeno de esporulacibn de Aniger es influenciaamp por la relacibr glucosapotusio y por l o s oligoelementos presentes en el nedicl de cultivo (Jerebzoff eta11976)

En los medios de cultivc las sales Icineraies a urle concentacibn elevada podrlan tener los efectos opuestas sobre el crecimiento y la conidioghesis de homos f i l m e n t o s o s (Girdruth 1977 Slayan y Tatm 1954 Lilly L9euro51 De a misna manera la aereacibn y la humedad poseer una influencia en la pduccibn cuantitativa de coniaiwpras ae P m p e f w t i (Maheva et col 1984)

T

___ ~ ~~ - ~- ~ ~ ~ -~

deben ser definidas para a especie h e 5 un medio amp4cultivo optimizado para la produccibn de conidiwporns de una especie puede no ser adecuado para alguna otra (Vezim y co11965)

23 PRclDuccION DE E S O R A S

Diferentes tecnicas sa conocidas para la produccibn masiva de esparas La mds antigua consiste en cultivar el mirrocqganismo sobre una superficie en UT ampio de cultivo con agar ya sea en cajas de Petri a nivel labratorio o en btellns Rolux para fines prticticcs Osta tecnica presenta graves problemas de recoleccibn y la manipuiacibn de u n h e m importante de frasccs ademas se debe llevar a cabo bajc asepsia canpleta

Se ha mostrado la posibilidad de producir esporas en cultivo llquido utilizardo fermentadores esterilizables y extrapolables a nivel industrial (Bmderic eta11982)

Se h a n hecho estudios para producir esporas utilizando sustratos nmilaceos en ferntadores de lecho fijo (Maheva y col 19841 y mediante el uso de charolas en l a s cuales se coloca el sustrato en capas y se pone en una estufa de incubacibn (Vezina 1975) y ~ s o b r e pan de cebamp para producir esporas de Penicillium laucun en la elaboracibn de quesos (Nougaret 19821 ~

p Ultimamente se ha desarrdllado un proceso de cultivo en

superficie sobe un medio amplido utilizando un fermentador de discos rotatorios el c u a l ha dado henos resultados pero no puede ser escalado a un nive mayor (RaimLault y Raussos 1985)

Se ha desarrollado tam5i8n otrc amptodo de pmduccibn de espus solre soporte amplido esto es con la utilizacibn de bagazo de camp (Roussos y coldboradores 1988 certificado de invencibn)

2 4 irsos DE LAS EspoRAs

Eb la produccibn industrial de productos derivados de las fementaciones con hongos filmentosos la inoculacibn de los sustratos requiere de una gran cantidad de conidiosporcs ya que constituyen el punto de inicio de estos procesos de fernentacidn

La importancia de l o s cinco hongos fitmentosos estudiados radica en lo siguiente

~ p ~ ~ ~ l ~ nigerhiunenta el contenido pmteicc de le yucs (hinhult 1980) ademris de poseer actividad pectinolltica

ASprgiIlus te-mm p e e actividad p - a e aprovechamiento de la cantildea de azucar (Brizuela 1987) ademamp elaboran dos substancias antihcteriens de toxicidad variabie (flakripinas citrirn] (Bottm etai965)

7 _

- - ~ ~ ~ - ~~ -- - - i -

B s a u w i a bassima es parbita de insectos por lo qua ayuda en lucha biol6gica adema de producir enzimas como quitiMeas y 1 ipaears

micjllirm sp egta 0CPa posee una alticapacidad ampa e la cafeina de la pllpa de cafe esto rice penuite eliminar uno de lo s principales toxicos en la pulpa y de esta manera disminuir la contaminacion que produce y emplearla para alimentacion animal

2)-ickdema hurzidoum es un pl0dUctor de celulasas y ayuda en lucha biol6gica ya que m la propiedad de em- un antagonista poderaeo con respecto a un cierto rimero de hongos fitoputiquestgeme

( R o w e o s 19851

- _I__I k -

--

l- probar el efecto del tipo de la fuente de carbono en la

empleados en l o s procesos de fermentacioacuten dlida I produccioacuten masiva de midiosporas de l o s p-incipales horqcs

2- Probar el efecto combinado del tipo de la fuente de carbm y la relacioacuten CN en la produccioacuten masiva ae amidiosporas

3- Llevar a cabo la produccioacuten rnasiv de conidiospwas en un fermentador de discos rotatorios de 2 i

9

IDS micmotyanismas estudiados en este t r a j o fueron P s P w g i I I u s n i p ORSIUH NlO A s p e r g i l I u s t m u s cepa del ICIDCA (Instituto cubano para la Investigacioacuten de l o s Derivados de la Cantildea de Azucur) B e a u w i d hssiann cepa d e l ICIDCA Fanicillium sp cepa de la uA y Zkichoderma harzianum CCM F470 (Czechoslovak Collection of Microorganisms) ampliamente descrita por Rcwsg~os (1985)

4 2 MEDIOS DE CULTIVO

4 2 l Medios de comervaciOacuten

las cepas de Aniger A tanclrsus Fenicillium sp y Tharzianum son resembradas en un medio de PDA (papa- dextrasa-agar) y la cepa de B a i u n u es resenbada en PDA con 05 de extracto de levadura cada 6 meses e incubadas durante 7 dias a 29C para despueacutes ser conservadas en refrigeracioacuten durante 6

- meses apracimadamente ~ ~

4 2 2 Medios de esparulacidn

Se probaran l a s siguientes fuentes de cwbmHarina de Yuca Harina de P i g o M e l a z a y Sacarosa con relacioacuten CN de 10 14 24 Y 4 0

a) FmlaciOacuten de los medios

i

t

Lxw medios de cultivo utilizados para la produccioacuten de conidiospwas de Aniger A terreus Bampiana Amicillium p y Thamianum se muestran en l a s tablas I 11 I11 y IV

43 CONDICIONB DE CULTIVO

4 3 1 Inoculacioacuten

El medio de cultivo se inocula en masa este modo de inoculacioacuten consiste en mantener a 40C el medio de cultivo para posteriannente agregar uryt suspensidn de conidiospm-as de concentracioacuten conocida (2 x lo7 esporaWgr de sustrato) El ampio inoculado se agita para obtener una disiribucioacuten hamogenea en el cam ae maeaces Nand0 se utiiiza el fermentaamp de discos se pone en funcionamiento el sistema rotatwio para que SS distribuya el medio de cultivo inocuiaao en l o s discos de forma hmcqenea

F

432 Crecimiento--yespwulacion - - - -

Los cultivos se incuban a temperatura de laboratorio de 18 a 23C durante 7 y 14 dias Al fermentada- de discos se le suministra un flujo de aire estdril con un gasto de 4 lhr durante el periacuteodo de incubncioacuten

44 MEXDO PARA LA F9OJXJEION DE CONIDICSRXA5

Se conocen divemos amptodos para la pmducci6n de conidiosporas nosotras utilizaremos mntraces Erlen Meyer de 250 m1 y Fermentazdares de Discos

441 Matraces Erlen Heyer de 250 ml

El medio de cultivo se reparte en matraces Erlen Meyer de 250 m1 a rampn de 20 m1 par matraz y se obtura con un tapamp de algodoacuten se esteriliza en autoclave a 121C durante 20 min

442 Fermentada- de discos

El esquema del fermentada- de discos rotutorios utilizado se muestra en fmma detallada en la figura 1 El fermentador conteniendo300 m1 de medio de cultivo se esteriliza en autoclave a 121C por 45 min

-

e

a) Descripcioacuten del fermentada-

El fermentador de discos que se presenta en la fig 1 esta fannado por una cuba de vidrio la c u a l tiene una entrada y una salida en la parte superiorde la cuke se coloca una platina que tiene dos entradas una para realizar la inoculacioacuten del medio de cultivo y otra para airear esta platina sostiene un eje en el centro satre el eje se colocan 11 pares de discos formados por 2 m a l l a s de acero inoxidable de 2 mm de espesor y tamantildeo de malla de 4 mm c m un diaacutemetro de 10 c m y separados cuda par por 10 mm con unas rondanas especiales de acero inoxidable en el extremo inferior del eje se coloca una abrazadera la c u a l ejece presioacuten s e e l o s discos y con esto se mantienen fijos el total de 22 discos nos proporciona una superficie uacutetii de 172787 cm2 en la parte superior del eje se localiza un T la omi nos pemitlra colocar un motor y con esto hacer girar los disc-

b) Fimcionamiento y uso

El funcionamiento del fementaaor ae discos es de la siguiente manera LKB vez que se ha agregado e medic de cultivo y se ha esterilizado se coloca a un rotor de marera harizontal lo que nos permitiraacute mantener a l o s discos inmerso= en el medio ae cultivo y de esta forma una vezque se va enfrianio se adhiera a ellos el medic de cultivo se i m l a cunni0 se sncuentra en un promedio de

11

I ~

tempertura de 30 y 35CYTbl medio aun se encuentra licfuido) y asi poder tener una distriMciOacuten hanogenea de l a s esparas en el medio de cultivo (inoculacioacuten en masa) Una vez que el medio de cultivo se ha impregnado a l o s diecog el farmentador puede ser colocado de manera vertical en un l u g = adecuado

__ - - - - -

45 COSECHA Y CxlENrA DE EspoRAs

a) Para l o s cultivos en matraces se agmgu a cada uno 100 m1 de agua destilada estkil adicionada de Tbreen 80 (01) y se hunogeniza mediante agitacih magrktica

b) Para l o s cultivos en fementadares de discos 58 introduce al fermentadar 300 m1 de agua desti lada estampil adicionada de Tween 80 (01) y se mantienen los discos en rotaci6n durante 10 min

El conteo de l a s mas 88 realiza mediante el uso de kas de Malassez con suspensiones convenientemente diluidas y aplicando la siguiente f b l a

A + B + CJ = X 10 = N

A + B + C J = cuenta total de esporas en 10 cuhdros de la celda - x N - mimero de espmas pranedio

1D = factor de dilucioacuten 3

t

1 -Cuva

2 - P l a r i n a

3-Eje

4 -Disc05

5 - E n t rad2 zuper i or de l a cuva

6 - Sal ida i n f e r i o r d e l a cuva

- - Tapon d e entrada y s a l ida

r - 12

-

Medio I I I 3 I 4 I

I I 1 I I I I I Harim de I I I I

Yuca 4 0 4 0 4 0 I 4

I I I

Cgl) 1 1 I 2

I

I I I I I I

I I I I I I

(NH4)2904 402 287 167 100 I I I I

I 1 I I I

Urea 091 065 038 022

cac12 1 1 1 1 1 I 1 I

I I I I I I

I I I I

1 I 1 I I I

I ~~~ ~ ~ ~

I I I I

K H 2 p o 9 2 I 2 I 2 I 2 I I I I t I

I I I - I I I

Ag8r 15 15 I 15 I 15 I I I I 1 I I

I I I I I Agua (ml) loo0 1000 1000 1000

I I I I I

1 I I I I

I CN 10 I 14 I 24 I 40 I

I I I I I

I I I 1 I I

1 pH 56 56 156 56

I I I I I 1

Medio I I I I

Harim de I I I I

Trigo 5714 5714 5714 5714

(gl) I 1 1 2 I 3 I 4 I I I I I

I I I I I I

I I I I I 1

I I I I I I

(NH4)ZSX 402 287 167 100 I I I I I I

I I I I I I

u r e a 091 065 038 (322 I I I I I 1

1 I I I I I ~~ ~~ ~~~

I cac12 1 I 1 I 1 I 1 I

I I

~ I - s 2 I 2 I 2 I 2 I

e I I I I I

J q a r 15 15 I 15 I 15 I

I I

I I I I I I

I 1 I I I I

I I I I I

I I I I I I

Agua (m11 loo0 1000 1000 1000 I I 1 I I I

I I I I I I

I pH 56 56 56 56 I I I I I I

1 I I I I I

I cm 10 I 14 I 24 I 40 I I I I I I I

r

t

14

c

C_ de l o s medios S a m a camo

r

de cultivo para fuente de carbono

Hedio I I I I

(gl) 1 2 3 I 4 I

I I I I I I I I

I I

I I I I I

SaculmBa 3040 3 0 4 0 3040 3040 I I

I I

~ N l i 4 ) 2 S X 402 287 167 100 I I I

I I

1 I 1 I 1 I

I

I 2 I 2 I 2 I I I I

95

I I

I I

I I

I I

I I I I

urea 091 065 038 022 I I I

I I I I I I

cac12 1 m 2

I I I

I I I I

I I I

I I

Agar I 15 15 I 15 I I

I I I I I

Agua (m11 1000 1000 1000 1000 I I I I I I

56 56 56

L -

I I I

I I I I I

I pH 56

cN 10 14 24 4 0

I I I I I I

I I

I I

I I

I I

I I

I

r

Hedio

I I I

I I I I

(gl) 1

I I

I 2 I 3 4 I

I I

I I

I I I I I

M e l a z a 5470 5470 5470 5470 I I I I I I I (W)2S34 402 287 167 1-00 I I I I I I

I I I

I Urea 091 065 038 022 I I I

cac12 I 1 1 1 1 1 1

I

I I I

I

I

I I I

I I I I I

I I 1 I I I

m 2 I I I I

Agar 15 15

I 2 I 2 I 2 I

I

I I

e

I I I I

I 15 I 15 I

I -

I I

I I 1 I I I

Agw (m11 loo0 1000 1000 1000 1 I t I I

I I I p H 56 56 56 56 I I I I

CN 10 1 I 14 I 24 4 0 I I I I I I

I I I I I I

511- AsparYillus n i p -

de 3 dias aparecen farmas especializadas de reploduccian asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este se desarrolla UM vesicula y sobre la vesicula se

conidicsporas Estas conidospwas presentan un color cafe obscuro y n e g r o son gldbulares ornamentadas con un diumetro aproximado de 35 a 5 m La colonia cambia al c o l o r negro del centro B los ext remos

El micelio de este horgo es septa30 y de color blanco despues

desarrollan lae f ialides de las cuales se farmaran l a s

LA estructura de la fama de repruduccion se p-esenta en la figura 2

ru LA 7 V E S I CULA

ESTI P E

ELULA P O D A L

Figura 2 - Conidioforas y conidias de Aniger

El micelio de este h q o e8 septado de color blanco depea de 3 dias aparecen fonoas especializades de repmduccion asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este crecen fialides y de l a s fialides se forman las conidiosparas y presenta exudados ambarinoe Eetas conidiceparas presentan un color amarillo l a s conidiceporas son lisas glokulares con un diametro aproximado de 15 - 25 m

Figura 3 la estructura de la f a r m a de reproduction presenta en la

FIA

Figura 3- Conidioforos y coniaias de X t e

Este hongo presenta un micelio atercipelado y coposo inicialmente blanco presenta un raacutenquis genicula denticulado o en zigzag posteriarmente se tans amarillento Posee conidias hialinas y gldlxllams can un diaacutemetro aproximado de 15 a 3ym La estructura se presenta en la Figura 4

RANQU I S

c

Figura 4 - ConidiOacutefaros y conidias de E h s s i e n o

m cepa se ha identificado corno Penicillium W f a r t i i presenta un micelio septado con produccioacuten de micelio vegetativo aerial d e y e e de un tiempo aparecen estructurns especializadas de repocoduccion a s e x u a l Se presenta un estipe m e n t a d o unas brancpeas meacutetulas f M i d e s y conidias Elstas conidiosporas presentan un colap- verduzco son globdares y lisas con un dibtro apmximado de 4 a 6p Lae conidias son producidas en cadenas cortas La estructura se presenta en la Figura 5

C O N l D l A S

1 O r r m

Figura 5- Conidioacuteforos y coniaias de Fenicilliun

Al inicio este h q o presenta un micelio blanco pterionnente aprecen farmas especializadas de reproduccion asexual fialidee y conidicepuras I m conidiofaros se presentan en farmas piramidalee y en estos sistemas las fialidee Be localizan en g r u ~ w de dos a cuatro Las conidia3 Bon de color verde olivo son de superficie lisas subglobulares con un diametm apmximado de 2 a 3 m

La egtructura de la fcwma de reproduccion se presenta en la figura 6

Las colonias de Thnnianum en FDA se caracterizan pol tener un color verde con circulos concentricos Hay que mencionar que las colanias pmducen un olor a coco (coconut) muy caracteristico

CONlDl

Figura 6 - Conidioforos y conidias de Thanianum

516- Conclusiones v 4

_ _

el curse) de este capitulo se describieron los sietemas de reproduccioacuten de las cinco cepas de hongos filamentosos estudiados Todos estos hongos se repaoducen de manera a s e x u a l Se que l a s 5 cepas presentan estructuras muy diferentes a s i co~po diversos colores en l o s estadios de crecimiento vegetativo y ccmidiogdnesie ademds presentan conidimporas glohlares de muy diversos tamafios

c

093039 t

2 2

- La composicioacuten de l o s diferentes meampicsde cultvoutQizados pera llevar a cabo este estudio fueron medio N 2 de l a s tablas I 11111 y IV y se establecioacute prabay las diferentes fuentes de carbno (Harina de Yuca Harina de Pigo M e l a z a y Sacarosa) en matraces a una relaci6n CN de 14 para de esta manera poder observar el efecto que cada una de ell- ejerce solre la conidicgbesis de l o s hongos filamentosos estudiadas L m resultados se reman en l a s tablas V VI VII VI11 y XI y se exp-esan en base al Indice de Bporulacidn (Ie - N de esporas g de sustrato carbonado) para 7 dias de incubacion a temperatura ambiente (15-22C)

~ - -4

La Harim de Yuca es un producto amilaceo que ha demostrado ser un sustrato de gran eficiencia para la produccion de conidiosparas de hongos filamentosos ademds de ser un producto tropical de facil acceso su principal componente es el almidoacuten que corresponde al 80 en materia seca se encuentran en esta Harina pteiacutenas grasas y vitaminas del tipo B y C adamp de fibras y cenizas (Grace 1977)

la Harina de Pigo es otro sustrato amilaceo que se considerd importante utilizar debido a su alta disponibilidad en su canposicioacuten estan presentes pteiacutenas grw calcio f oacute s f m h i m tiamina riboflavina y niacina esto lo hace un sustrato interesante

La M e l a z a es el subproducto final de la fakicacioacuten de azucar es un liquido o b s c u r o denso y viscoso que se separa de la masa cocida de baja-calidad y del cual no se pede cristalizar ampamcar por amptodos mencionales y econoacutemicos en su composicioacuten estdn presentes 1 0 s amcares y otras sustancias entre l a s cuales se pueden citar l o s corapuestos nitrogenados aacutecidos aminoacidos albiminas vitaminas ceras esteroles lipid- sales minerales y cenizas etc (ICIDCA1986) Como se puede ver es un producto muy complejo por lo que puede ser un sustrato muy atractivo para su utilizaci6n como fuente de carbono en ipedios de cultivo pura la espomlaci6n de hongos filamentosos (Brinela 1987)

la s a c m a es un producto de facil adquisicioacuten y de pmduccioacuten idustrial importante por lo que se considem un sustrato atractivo para la produccioacuten de amidiosporas de hongos filamentosos La sacarosa se encuentra fonnada por una molecula de fructosa y una de glucosa l o s medios de cultivo que contienen sacarosa pcdriamos decir que son medios simples en comparacioacuten con la complejidad de la melaza y l a s harinas

521- A n i g ~

Fh la tabla V se muestran l o s Ie obtenidos para Anigerutilizardo l a s 4 fuentes de carbono antes mencionadas El mayor Ie se alcanzoacute en el medio de cultivo con k i n a de Yuca seguido de la M e l a z a la k i n a de Pigo y por Gltimo la Sacarosa se ha demostrado que durante el proceso de esterilizacioacuten la Harina de Yuca sufre un tratamiento teacutermico que hace que las moleacuteculas de almidh pasen cie una forma cristalina a un estado amdrfo (gelatinizacion) y que Ani_mr es un productm de amilasas (Raimbault 19801 lo que sugiere que la gelatinizacioacuten podriacutea facilitar el ataque enzimdtico y con esto i iberar cantidades importantes de glucosa que favoreced el crecilriiento del hongo lo que normalmente estaacute reiacionado con una produccioacuten importante de conidias

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I

I

I c- 7 DIAS

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 509xl0^9 I I I I

I I 1 I

Harina de Trigo 14 367X1^9 I I I

I I I I

Melaza 14 424x10-9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 16Ox10^8 I I I I

522- d t ~ 1 7 9 ~ ~

Eh la tabla VI se muestran l o s Ie obtenidos para A termus -utiliZando__las 4 fuentes de carbono antes mencionadas El Ie mas alto se encmtroacute en el medio de cultivo con M e l a z a seguido de la Yprina de Yuca y Trigo y por uacuteltimo la Sacarosa d t m u s es utilizado en lo s procesos de aprovechamiento de eubproductos de la industria cantildeera en cuba (meollo y bagazo) (Blanco bpez Villarl968) Esta cepa estaacute adaptada a l o s procesos de la industria cuntildeera de c u b a por lo que se esperariacutea que espurulara mejor en Melaza tal como ocurrioacute

TXBLA VI- Indices de espwulacibn para dtwreus utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa como fuente de carbono para tiempos de incubacidn de 7 dias y relacioacuten CN de 14

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I I I I I I 7 DIAS I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 60x10n9 I I I

Harina de pigo 14 403xlO-9

I I I

1 I I I

I I I I

M e l a z a 14 612xlOA9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 S40~107 1 I I

211

523- Bbassi= 1

Las resulta- 5e rem en la t ~ ~ h ~ f - - - ~ ~ - - ~ ~ e se -obtwo en el medio con Harina de Trigo m i d o de la H a r i n a de Yuca Melnza y Sacarosa Se puede obeervar que 1 0 s Ie amp altos se logran con los sustratos amiluceos que tal vez puedan ser mamp facilmente utilizados por el microoqanimno debido a l - v e s o de gelatinizacioacuten que Wren

524- Penicillium sp

Los resultados se muestran en la tabla VIII Los mayores le se alcanzaron con las Harims de Yuca y Trigo con respecto a los atros dos sustratos Se observoacute una mayor produccioacuten de micelio en los sustratos amilaceos lo que podria justificar la produccibn maacutes alta de conidias

525- Thnmianum

LBS resultados se reportan en la tabla XI Estudios hechos par Raussos (1985) demostraron la capacidad de Thanianum en la produccidn de ami la s a s utilizando almidoacuten cam0 fuente de carbono pesto que la harim de yuca y la harina de trigo son sustratos amilacecs se esperariacutea una produccioacuten impcortante de esporras tal COQLO sucedioacute para la harina de yuca y no asi para la harina de trigo Con respecto a la s a c m a el Ie tan bajo que se obtuvo con relacidn a la melaza pede ser debido a todos los compuestos que se encuentran en las m e l a z a s

c TABLA VI1- Inlices de esparcllacibn para Bhssiana utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo M e i u z a y Sacarosa axno fuente de carbono para tiempos de incubacioacuten de 7 dias y relacion CN de 14

I I I

I I I Ie I

Summ CN I I

1 I I I

I I

1 I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 1 8 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

7 DIAS

Harina de Pigo 14 702~10~9 I I I I

I I I

Melaza 14 217~10~9 I I I I

I I I I

Sacarosa i 14 8 5 8 ~ 1 0 ~ 6 I I I I

r

I I

I Ie 1

I Summ CN I

I 1 i I

I I 7 DIAS

I I I I

I 1 I I

Harina de Yuca 14 142x10^10 I I I I

I I I I

Harina de Pigo 14 832xlO-9 1 1 I I

I I I I

M e l a z a 14 293~10~9

I I I

Sacarosa 14 103x10n9

I I I I

I I I I

m IX-Indices de espauulacian para Thamianum utilizando Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa corno fuente de carbono para tiapos de incubacich de 7 dim y relacioacuten CN de 14

I I I I

I -

1 I Ie I

I Summ CN I

I I 7 D I A S t I I I

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 11ox1On1O I I I I

I I I I

Harina de Trigo 14 12Ox10-9 I I I I

I I I I

M e l a z a 14 875~10~9 I I I I

I

Sacarosa I

I i I

14 11Ox10^8 I I I

526- Conclusiones

Varios autores han demostrado la importancia de la fuente de carbono sobre la conidiogenesis de hongos f ilamentosos (Vezina y co11965 Martinelli1976) en este estudio se pudo observar que cada cepa tiene caracteristicas fisiolcjgicas de esporulacidn propias con respecto al tipo de fuente de carbono que se le proporcione Para este caso en especial la cepa de Aniper esporuld mejor en Harina de Yuca A termus en M e l a z a B m i a m en Harinri de Trigo y T harzinnum en Harina de Yuca

------Esttuiaa - - h - - i s o s (lE5) han demostrado que la concentracidn de Nieeno prwente en el mampio de cup170 ejerce una influencia directa en el nuacutemero de conidiosporas producidas por Thurzjmm par 10 que era necesario seleccionar la relacioacuten CN oacuteptima para cada cepa y para cada sustrato

la composicioacuten de l o s medios de cultivo utilizados para llevar a cabo este estudio estb presentados en las tablas I 11 I11 y IV Se utilizaron 4 diferentes relaciones CN estas fueron de 101424 y 40 empleanda UM mezcla de 23 panes de Sulfato de Amonio y 13 parte de h a toanando- 128 g de carbono como base de caacutelculo y tiempos de incubacioacuten de 7 y 14 dias l o s experimentos se realizaron en matraces de 250 ml

Ln relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despueacutes de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Anigw son mostrados en la tabla X

h datos obtenidos para Aniger nos indican que cuardo se emplea Harina de Yuca en concentracich de 40 gl y la reiaci6n CN estaacute entre 10 y 40 no es un factor determinante en la conidiogeacutenesis ya que esporula de rnanera similar entre estos r a n g o s para l o s medio a base de Harina de Trigo la CN entre 40 y 24 es donde mejm esporulacidn se obtiene

r 5 3 2 - A s m i l ~ s t

h relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de espomlaci6n obtenidos aespuk de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Rtemxs son mostradrx en la tabla XI

Lns medios de cultivo con 14 dias de incubacidn presentan el mayor ntUnero de conidiospwas a una relaci6n CN de 14 con excepcih de l o s medios con Sacarosa que mostramn en todos l o s cc~sos un compm-tamiento muy pobre con respecto al n h de conidias producidas Los mejores Ie se log-amn con Harina de Yuca y M e l a z a con una relacidn CN de-14 para 14 dias de incubacidn

Lo relaci6n que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despuds de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para B b s s i a n a son mostrados en la tabla XII

b Ie logrados para B b n s s i m e son muy similares entre si es decir no cambian significativamente l o s Ie para l o s cultivos con 14 dias de inmbacidn son bastante altos siendo el medio de cultivo con una relaci6n CN de 14 y Melaza como fuente de carbono ei queposee el mejor Ie con un tiempo de incuhcidn de 14 dias BI esta cepa se ve su capacidad de adaptacioacuten con respecto a l a s anteriores para crecer en Sackrosa

~ r

27 534- Psnicilliue sp

kiaeiampi que exiate entre 1- necG~-edt-~vcv - y h rendimientos de esparulaciOacutentilde-6btenidos despds de 7 -_Fl4 dias de cultivo en matraces para FbnciIlium sp son mostrados en la tabla XILI

_

La relacidn CN entre 10 y40 no tiene una influencia directa en la conidioghnesis de esta cepa sin embargo se dbeewa una tendencia a la disminucioacuten del N de conidiospcwas producidas en los cultivos con 14 dias de incubacih Los mayores Ie se lcgrarcm con los medios de cultivo a bnse de Harina de Yuca y Harina de Trigo

La relaci6n que existe entre la composiciiquestn quiacutemica del medio de cultivo y l a s rendimientos de esporulaci6n obtenidos desples de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Thurzzanum son mostrados en la tabla XIV

Las resultados obtenidos 1x1s mestran unatendencia hacia la obtencioacuten del m y m Ie en rangos de CN de 10 a 14 y estudios hechos par Raussos (1985) sohre el efecto de la concentraci6n de Nitriquestgeno en la oanidiogdnesis de Thaniunum pnmporcionaron una CN optima de 14 utilizando Harina de Yuca corno fuente de curbno

Sin embxqo pura una CN de 3253 obtiene un Ie para 7 dias --de incubacidn de Q16x1On9 cmparando este resultado con el resultado obtenido en mi estudio encuentro que a una CN de 40 para 7 diQs de incubacibn tengo un Ie de 132xlO-9 esto es 13 veces mamp por lo que es dificil comparar estos datos en l o s resultados obtenidos se obsewa una tendencia para los cultivos con 14 dias de incubacidn de disminuir el Ie confarme aumenta la relacidn CN y para l a s cultivos con 7 dias se observn lo contrario Los Ie mus altos se logran con l o s medios de cultivo a base de Harinu de Yuca y Melaza

536- Conclusiones

Las cepas estudiadas eSp0IWlUn dependiendo del tipo de fuente de carbono la fuente de carbono y su naturaleza tiene m infiuencia directa en la conidiogeacutenesis de l o s hongos f ilamentosos que la concentracioacuten de nitrdgeno sin embargo es recamendable la adlcidn ae nitdgeno entre l o s rargos de CN de 10 a 4 0

Para disminuir l o s costos de pmduccioacuten de conidiosporas hay que optimizar los medics de cultivo nacer la seleccioacuten de una h e m fuente de carbono para cada cepa y trhjar en rangos de CN de 14 a 4 0

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
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                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
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                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
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                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
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                                          • I I S
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                                          • I I
                                          • M
Page 11: MATRICULA: 83323133.

x - 2 L - - A ~

d

liberncibn de estas (Imrpent 1972 Fewe eco111975 De hecho la conidiogbesis de hongos filmentosos es un proceso muy ample jo

22 FIS1OLLXIA E EsFcrRuLACION

La conidioghesis es una etapa fisioltgiccr muy importante para l o s horgos imperfectos eta etapa comesponde a la fonnacibn

y liberacih de conidiosporas

El coanplejo proceso de esparulacibn en la conidioghesis pede ser visto cano la integracibn de algunos eventos biolbgicos La habilidad para cambiar de una fonnn de desarrollo filamentoso vegetativo a UM fonne ae espora reproductiva y generalmente esfGrica es el resultado final de un metdbolismo que responde a cambios fisicoqufmicos especlficos del medio ambiente (pH CO O Z temperatura humedad o la aparicibn de al- metabolito secundario) l o s cuales ejercen cambios en los estTmulos internos que regulan la actividad celular

Es hitido que el desencadenamiento de la esporulacibn es inducido por un factor limitate que desaparece en el medio de cultivo durante el crecimiento del hoqo La naturaieza de este factor es muy variable Se supone que el agotamiento de la fuente de carbono-o de nitrbgeno es generalmente el factor limitante Sin embaqo no deben olvidarse ios demas factores fisicoqulmicos untes mencionados

Un desancollo n o r m a 1 de micelio y una tuena conidiog6nesis son l a s condiciones previas G m produccibn imporLante ae midiosporas (Rcysscs 1985 El nilmero ae conidiosporas producidas por un hongo filamentoso es principalmente funcibn de la cantidad de la fuente de carbono y de nitriquestgeno presente en el medio de cultivo

El efecto de induccibn-inhibicibn de la conidicgbesis de Aniger fua puesto en evidencia por Gnlbraith y S m i t h (1969) De la misma manera la irduccidn del riiLmo endbgeno de esporulacibn de Aniger es influenciaamp por la relacibr glucosapotusio y por l o s oligoelementos presentes en el nedicl de cultivo (Jerebzoff eta11976)

En los medios de cultivc las sales Icineraies a urle concentacibn elevada podrlan tener los efectos opuestas sobre el crecimiento y la conidioghesis de homos f i l m e n t o s o s (Girdruth 1977 Slayan y Tatm 1954 Lilly L9euro51 De a misna manera la aereacibn y la humedad poseer una influencia en la pduccibn cuantitativa de coniaiwpras ae P m p e f w t i (Maheva et col 1984)

T

___ ~ ~~ - ~- ~ ~ ~ -~

deben ser definidas para a especie h e 5 un medio amp4cultivo optimizado para la produccibn de conidiwporns de una especie puede no ser adecuado para alguna otra (Vezim y co11965)

23 PRclDuccION DE E S O R A S

Diferentes tecnicas sa conocidas para la produccibn masiva de esparas La mds antigua consiste en cultivar el mirrocqganismo sobre una superficie en UT ampio de cultivo con agar ya sea en cajas de Petri a nivel labratorio o en btellns Rolux para fines prticticcs Osta tecnica presenta graves problemas de recoleccibn y la manipuiacibn de u n h e m importante de frasccs ademas se debe llevar a cabo bajc asepsia canpleta

Se ha mostrado la posibilidad de producir esporas en cultivo llquido utilizardo fermentadores esterilizables y extrapolables a nivel industrial (Bmderic eta11982)

Se h a n hecho estudios para producir esporas utilizando sustratos nmilaceos en ferntadores de lecho fijo (Maheva y col 19841 y mediante el uso de charolas en l a s cuales se coloca el sustrato en capas y se pone en una estufa de incubacibn (Vezina 1975) y ~ s o b r e pan de cebamp para producir esporas de Penicillium laucun en la elaboracibn de quesos (Nougaret 19821 ~

p Ultimamente se ha desarrdllado un proceso de cultivo en

superficie sobe un medio amplido utilizando un fermentador de discos rotatorios el c u a l ha dado henos resultados pero no puede ser escalado a un nive mayor (RaimLault y Raussos 1985)

Se ha desarrollado tam5i8n otrc amptodo de pmduccibn de espus solre soporte amplido esto es con la utilizacibn de bagazo de camp (Roussos y coldboradores 1988 certificado de invencibn)

2 4 irsos DE LAS EspoRAs

Eb la produccibn industrial de productos derivados de las fementaciones con hongos filmentosos la inoculacibn de los sustratos requiere de una gran cantidad de conidiosporcs ya que constituyen el punto de inicio de estos procesos de fernentacidn

La importancia de l o s cinco hongos fitmentosos estudiados radica en lo siguiente

~ p ~ ~ ~ l ~ nigerhiunenta el contenido pmteicc de le yucs (hinhult 1980) ademris de poseer actividad pectinolltica

ASprgiIlus te-mm p e e actividad p - a e aprovechamiento de la cantildea de azucar (Brizuela 1987) ademamp elaboran dos substancias antihcteriens de toxicidad variabie (flakripinas citrirn] (Bottm etai965)

7 _

- - ~ ~ ~ - ~~ -- - - i -

B s a u w i a bassima es parbita de insectos por lo qua ayuda en lucha biol6gica adema de producir enzimas como quitiMeas y 1 ipaears

micjllirm sp egta 0CPa posee una alticapacidad ampa e la cafeina de la pllpa de cafe esto rice penuite eliminar uno de lo s principales toxicos en la pulpa y de esta manera disminuir la contaminacion que produce y emplearla para alimentacion animal

2)-ickdema hurzidoum es un pl0dUctor de celulasas y ayuda en lucha biol6gica ya que m la propiedad de em- un antagonista poderaeo con respecto a un cierto rimero de hongos fitoputiquestgeme

( R o w e o s 19851

- _I__I k -

--

l- probar el efecto del tipo de la fuente de carbono en la

empleados en l o s procesos de fermentacioacuten dlida I produccioacuten masiva de midiosporas de l o s p-incipales horqcs

2- Probar el efecto combinado del tipo de la fuente de carbm y la relacioacuten CN en la produccioacuten masiva ae amidiosporas

3- Llevar a cabo la produccioacuten rnasiv de conidiospwas en un fermentador de discos rotatorios de 2 i

9

IDS micmotyanismas estudiados en este t r a j o fueron P s P w g i I I u s n i p ORSIUH NlO A s p e r g i l I u s t m u s cepa del ICIDCA (Instituto cubano para la Investigacioacuten de l o s Derivados de la Cantildea de Azucur) B e a u w i d hssiann cepa d e l ICIDCA Fanicillium sp cepa de la uA y Zkichoderma harzianum CCM F470 (Czechoslovak Collection of Microorganisms) ampliamente descrita por Rcwsg~os (1985)

4 2 MEDIOS DE CULTIVO

4 2 l Medios de comervaciOacuten

las cepas de Aniger A tanclrsus Fenicillium sp y Tharzianum son resembradas en un medio de PDA (papa- dextrasa-agar) y la cepa de B a i u n u es resenbada en PDA con 05 de extracto de levadura cada 6 meses e incubadas durante 7 dias a 29C para despueacutes ser conservadas en refrigeracioacuten durante 6

- meses apracimadamente ~ ~

4 2 2 Medios de esparulacidn

Se probaran l a s siguientes fuentes de cwbmHarina de Yuca Harina de P i g o M e l a z a y Sacarosa con relacioacuten CN de 10 14 24 Y 4 0

a) FmlaciOacuten de los medios

i

t

Lxw medios de cultivo utilizados para la produccioacuten de conidiospwas de Aniger A terreus Bampiana Amicillium p y Thamianum se muestran en l a s tablas I 11 I11 y IV

43 CONDICIONB DE CULTIVO

4 3 1 Inoculacioacuten

El medio de cultivo se inocula en masa este modo de inoculacioacuten consiste en mantener a 40C el medio de cultivo para posteriannente agregar uryt suspensidn de conidiospm-as de concentracioacuten conocida (2 x lo7 esporaWgr de sustrato) El ampio inoculado se agita para obtener una disiribucioacuten hamogenea en el cam ae maeaces Nand0 se utiiiza el fermentaamp de discos se pone en funcionamiento el sistema rotatwio para que SS distribuya el medio de cultivo inocuiaao en l o s discos de forma hmcqenea

F

432 Crecimiento--yespwulacion - - - -

Los cultivos se incuban a temperatura de laboratorio de 18 a 23C durante 7 y 14 dias Al fermentada- de discos se le suministra un flujo de aire estdril con un gasto de 4 lhr durante el periacuteodo de incubncioacuten

44 MEXDO PARA LA F9OJXJEION DE CONIDICSRXA5

Se conocen divemos amptodos para la pmducci6n de conidiosporas nosotras utilizaremos mntraces Erlen Meyer de 250 m1 y Fermentazdares de Discos

441 Matraces Erlen Heyer de 250 ml

El medio de cultivo se reparte en matraces Erlen Meyer de 250 m1 a rampn de 20 m1 par matraz y se obtura con un tapamp de algodoacuten se esteriliza en autoclave a 121C durante 20 min

442 Fermentada- de discos

El esquema del fermentada- de discos rotutorios utilizado se muestra en fmma detallada en la figura 1 El fermentador conteniendo300 m1 de medio de cultivo se esteriliza en autoclave a 121C por 45 min

-

e

a) Descripcioacuten del fermentada-

El fermentador de discos que se presenta en la fig 1 esta fannado por una cuba de vidrio la c u a l tiene una entrada y una salida en la parte superiorde la cuke se coloca una platina que tiene dos entradas una para realizar la inoculacioacuten del medio de cultivo y otra para airear esta platina sostiene un eje en el centro satre el eje se colocan 11 pares de discos formados por 2 m a l l a s de acero inoxidable de 2 mm de espesor y tamantildeo de malla de 4 mm c m un diaacutemetro de 10 c m y separados cuda par por 10 mm con unas rondanas especiales de acero inoxidable en el extremo inferior del eje se coloca una abrazadera la c u a l ejece presioacuten s e e l o s discos y con esto se mantienen fijos el total de 22 discos nos proporciona una superficie uacutetii de 172787 cm2 en la parte superior del eje se localiza un T la omi nos pemitlra colocar un motor y con esto hacer girar los disc-

b) Fimcionamiento y uso

El funcionamiento del fementaaor ae discos es de la siguiente manera LKB vez que se ha agregado e medic de cultivo y se ha esterilizado se coloca a un rotor de marera harizontal lo que nos permitiraacute mantener a l o s discos inmerso= en el medio ae cultivo y de esta forma una vezque se va enfrianio se adhiera a ellos el medic de cultivo se i m l a cunni0 se sncuentra en un promedio de

11

I ~

tempertura de 30 y 35CYTbl medio aun se encuentra licfuido) y asi poder tener una distriMciOacuten hanogenea de l a s esparas en el medio de cultivo (inoculacioacuten en masa) Una vez que el medio de cultivo se ha impregnado a l o s diecog el farmentador puede ser colocado de manera vertical en un l u g = adecuado

__ - - - - -

45 COSECHA Y CxlENrA DE EspoRAs

a) Para l o s cultivos en matraces se agmgu a cada uno 100 m1 de agua destilada estkil adicionada de Tbreen 80 (01) y se hunogeniza mediante agitacih magrktica

b) Para l o s cultivos en fementadares de discos 58 introduce al fermentadar 300 m1 de agua desti lada estampil adicionada de Tween 80 (01) y se mantienen los discos en rotaci6n durante 10 min

El conteo de l a s mas 88 realiza mediante el uso de kas de Malassez con suspensiones convenientemente diluidas y aplicando la siguiente f b l a

A + B + CJ = X 10 = N

A + B + C J = cuenta total de esporas en 10 cuhdros de la celda - x N - mimero de espmas pranedio

1D = factor de dilucioacuten 3

t

1 -Cuva

2 - P l a r i n a

3-Eje

4 -Disc05

5 - E n t rad2 zuper i or de l a cuva

6 - Sal ida i n f e r i o r d e l a cuva

- - Tapon d e entrada y s a l ida

r - 12

-

Medio I I I 3 I 4 I

I I 1 I I I I I Harim de I I I I

Yuca 4 0 4 0 4 0 I 4

I I I

Cgl) 1 1 I 2

I

I I I I I I

I I I I I I

(NH4)2904 402 287 167 100 I I I I

I 1 I I I

Urea 091 065 038 022

cac12 1 1 1 1 1 I 1 I

I I I I I I

I I I I

1 I 1 I I I

I ~~~ ~ ~ ~

I I I I

K H 2 p o 9 2 I 2 I 2 I 2 I I I I t I

I I I - I I I

Ag8r 15 15 I 15 I 15 I I I I 1 I I

I I I I I Agua (ml) loo0 1000 1000 1000

I I I I I

1 I I I I

I CN 10 I 14 I 24 I 40 I

I I I I I

I I I 1 I I

1 pH 56 56 156 56

I I I I I 1

Medio I I I I

Harim de I I I I

Trigo 5714 5714 5714 5714

(gl) I 1 1 2 I 3 I 4 I I I I I

I I I I I I

I I I I I 1

I I I I I I

(NH4)ZSX 402 287 167 100 I I I I I I

I I I I I I

u r e a 091 065 038 (322 I I I I I 1

1 I I I I I ~~ ~~ ~~~

I cac12 1 I 1 I 1 I 1 I

I I

~ I - s 2 I 2 I 2 I 2 I

e I I I I I

J q a r 15 15 I 15 I 15 I

I I

I I I I I I

I 1 I I I I

I I I I I

I I I I I I

Agua (m11 loo0 1000 1000 1000 I I 1 I I I

I I I I I I

I pH 56 56 56 56 I I I I I I

1 I I I I I

I cm 10 I 14 I 24 I 40 I I I I I I I

r

t

14

c

C_ de l o s medios S a m a camo

r

de cultivo para fuente de carbono

Hedio I I I I

(gl) 1 2 3 I 4 I

I I I I I I I I

I I

I I I I I

SaculmBa 3040 3 0 4 0 3040 3040 I I

I I

~ N l i 4 ) 2 S X 402 287 167 100 I I I

I I

1 I 1 I 1 I

I

I 2 I 2 I 2 I I I I

95

I I

I I

I I

I I

I I I I

urea 091 065 038 022 I I I

I I I I I I

cac12 1 m 2

I I I

I I I I

I I I

I I

Agar I 15 15 I 15 I I

I I I I I

Agua (m11 1000 1000 1000 1000 I I I I I I

56 56 56

L -

I I I

I I I I I

I pH 56

cN 10 14 24 4 0

I I I I I I

I I

I I

I I

I I

I I

I

r

Hedio

I I I

I I I I

(gl) 1

I I

I 2 I 3 4 I

I I

I I

I I I I I

M e l a z a 5470 5470 5470 5470 I I I I I I I (W)2S34 402 287 167 1-00 I I I I I I

I I I

I Urea 091 065 038 022 I I I

cac12 I 1 1 1 1 1 1

I

I I I

I

I

I I I

I I I I I

I I 1 I I I

m 2 I I I I

Agar 15 15

I 2 I 2 I 2 I

I

I I

e

I I I I

I 15 I 15 I

I -

I I

I I 1 I I I

Agw (m11 loo0 1000 1000 1000 1 I t I I

I I I p H 56 56 56 56 I I I I

CN 10 1 I 14 I 24 4 0 I I I I I I

I I I I I I

511- AsparYillus n i p -

de 3 dias aparecen farmas especializadas de reploduccian asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este se desarrolla UM vesicula y sobre la vesicula se

conidicsporas Estas conidospwas presentan un color cafe obscuro y n e g r o son gldbulares ornamentadas con un diumetro aproximado de 35 a 5 m La colonia cambia al c o l o r negro del centro B los ext remos

El micelio de este horgo es septa30 y de color blanco despues

desarrollan lae f ialides de las cuales se farmaran l a s

LA estructura de la fama de repruduccion se p-esenta en la figura 2

ru LA 7 V E S I CULA

ESTI P E

ELULA P O D A L

Figura 2 - Conidioforas y conidias de Aniger

El micelio de este h q o e8 septado de color blanco depea de 3 dias aparecen fonoas especializades de repmduccion asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este crecen fialides y de l a s fialides se forman las conidiosparas y presenta exudados ambarinoe Eetas conidiceparas presentan un color amarillo l a s conidiceporas son lisas glokulares con un diametro aproximado de 15 - 25 m

Figura 3 la estructura de la f a r m a de reproduction presenta en la

FIA

Figura 3- Conidioforos y coniaias de X t e

Este hongo presenta un micelio atercipelado y coposo inicialmente blanco presenta un raacutenquis genicula denticulado o en zigzag posteriarmente se tans amarillento Posee conidias hialinas y gldlxllams can un diaacutemetro aproximado de 15 a 3ym La estructura se presenta en la Figura 4

RANQU I S

c

Figura 4 - ConidiOacutefaros y conidias de E h s s i e n o

m cepa se ha identificado corno Penicillium W f a r t i i presenta un micelio septado con produccioacuten de micelio vegetativo aerial d e y e e de un tiempo aparecen estructurns especializadas de repocoduccion a s e x u a l Se presenta un estipe m e n t a d o unas brancpeas meacutetulas f M i d e s y conidias Elstas conidiosporas presentan un colap- verduzco son globdares y lisas con un dibtro apmximado de 4 a 6p Lae conidias son producidas en cadenas cortas La estructura se presenta en la Figura 5

C O N l D l A S

1 O r r m

Figura 5- Conidioacuteforos y coniaias de Fenicilliun

Al inicio este h q o presenta un micelio blanco pterionnente aprecen farmas especializadas de reproduccion asexual fialidee y conidicepuras I m conidiofaros se presentan en farmas piramidalee y en estos sistemas las fialidee Be localizan en g r u ~ w de dos a cuatro Las conidia3 Bon de color verde olivo son de superficie lisas subglobulares con un diametm apmximado de 2 a 3 m

La egtructura de la fcwma de reproduccion se presenta en la figura 6

Las colonias de Thnnianum en FDA se caracterizan pol tener un color verde con circulos concentricos Hay que mencionar que las colanias pmducen un olor a coco (coconut) muy caracteristico

CONlDl

Figura 6 - Conidioforos y conidias de Thanianum

516- Conclusiones v 4

_ _

el curse) de este capitulo se describieron los sietemas de reproduccioacuten de las cinco cepas de hongos filamentosos estudiados Todos estos hongos se repaoducen de manera a s e x u a l Se que l a s 5 cepas presentan estructuras muy diferentes a s i co~po diversos colores en l o s estadios de crecimiento vegetativo y ccmidiogdnesie ademds presentan conidimporas glohlares de muy diversos tamafios

c

093039 t

2 2

- La composicioacuten de l o s diferentes meampicsde cultvoutQizados pera llevar a cabo este estudio fueron medio N 2 de l a s tablas I 11111 y IV y se establecioacute prabay las diferentes fuentes de carbno (Harina de Yuca Harina de Pigo M e l a z a y Sacarosa) en matraces a una relaci6n CN de 14 para de esta manera poder observar el efecto que cada una de ell- ejerce solre la conidicgbesis de l o s hongos filamentosos estudiadas L m resultados se reman en l a s tablas V VI VII VI11 y XI y se exp-esan en base al Indice de Bporulacidn (Ie - N de esporas g de sustrato carbonado) para 7 dias de incubacion a temperatura ambiente (15-22C)

~ - -4

La Harim de Yuca es un producto amilaceo que ha demostrado ser un sustrato de gran eficiencia para la produccion de conidiosparas de hongos filamentosos ademds de ser un producto tropical de facil acceso su principal componente es el almidoacuten que corresponde al 80 en materia seca se encuentran en esta Harina pteiacutenas grasas y vitaminas del tipo B y C adamp de fibras y cenizas (Grace 1977)

la Harina de Pigo es otro sustrato amilaceo que se considerd importante utilizar debido a su alta disponibilidad en su canposicioacuten estan presentes pteiacutenas grw calcio f oacute s f m h i m tiamina riboflavina y niacina esto lo hace un sustrato interesante

La M e l a z a es el subproducto final de la fakicacioacuten de azucar es un liquido o b s c u r o denso y viscoso que se separa de la masa cocida de baja-calidad y del cual no se pede cristalizar ampamcar por amptodos mencionales y econoacutemicos en su composicioacuten estdn presentes 1 0 s amcares y otras sustancias entre l a s cuales se pueden citar l o s corapuestos nitrogenados aacutecidos aminoacidos albiminas vitaminas ceras esteroles lipid- sales minerales y cenizas etc (ICIDCA1986) Como se puede ver es un producto muy complejo por lo que puede ser un sustrato muy atractivo para su utilizaci6n como fuente de carbono en ipedios de cultivo pura la espomlaci6n de hongos filamentosos (Brinela 1987)

la s a c m a es un producto de facil adquisicioacuten y de pmduccioacuten idustrial importante por lo que se considem un sustrato atractivo para la produccioacuten de amidiosporas de hongos filamentosos La sacarosa se encuentra fonnada por una molecula de fructosa y una de glucosa l o s medios de cultivo que contienen sacarosa pcdriamos decir que son medios simples en comparacioacuten con la complejidad de la melaza y l a s harinas

521- A n i g ~

Fh la tabla V se muestran l o s Ie obtenidos para Anigerutilizardo l a s 4 fuentes de carbono antes mencionadas El mayor Ie se alcanzoacute en el medio de cultivo con k i n a de Yuca seguido de la M e l a z a la k i n a de Pigo y por Gltimo la Sacarosa se ha demostrado que durante el proceso de esterilizacioacuten la Harina de Yuca sufre un tratamiento teacutermico que hace que las moleacuteculas de almidh pasen cie una forma cristalina a un estado amdrfo (gelatinizacion) y que Ani_mr es un productm de amilasas (Raimbault 19801 lo que sugiere que la gelatinizacioacuten podriacutea facilitar el ataque enzimdtico y con esto i iberar cantidades importantes de glucosa que favoreced el crecilriiento del hongo lo que normalmente estaacute reiacionado con una produccioacuten importante de conidias

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I

I

I c- 7 DIAS

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 509xl0^9 I I I I

I I 1 I

Harina de Trigo 14 367X1^9 I I I

I I I I

Melaza 14 424x10-9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 16Ox10^8 I I I I

522- d t ~ 1 7 9 ~ ~

Eh la tabla VI se muestran l o s Ie obtenidos para A termus -utiliZando__las 4 fuentes de carbono antes mencionadas El Ie mas alto se encmtroacute en el medio de cultivo con M e l a z a seguido de la Yprina de Yuca y Trigo y por uacuteltimo la Sacarosa d t m u s es utilizado en lo s procesos de aprovechamiento de eubproductos de la industria cantildeera en cuba (meollo y bagazo) (Blanco bpez Villarl968) Esta cepa estaacute adaptada a l o s procesos de la industria cuntildeera de c u b a por lo que se esperariacutea que espurulara mejor en Melaza tal como ocurrioacute

TXBLA VI- Indices de espwulacibn para dtwreus utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa como fuente de carbono para tiempos de incubacidn de 7 dias y relacioacuten CN de 14

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I I I I I I 7 DIAS I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 60x10n9 I I I

Harina de pigo 14 403xlO-9

I I I

1 I I I

I I I I

M e l a z a 14 612xlOA9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 S40~107 1 I I

211

523- Bbassi= 1

Las resulta- 5e rem en la t ~ ~ h ~ f - - - ~ ~ - - ~ ~ e se -obtwo en el medio con Harina de Trigo m i d o de la H a r i n a de Yuca Melnza y Sacarosa Se puede obeervar que 1 0 s Ie amp altos se logran con los sustratos amiluceos que tal vez puedan ser mamp facilmente utilizados por el microoqanimno debido a l - v e s o de gelatinizacioacuten que Wren

524- Penicillium sp

Los resultados se muestran en la tabla VIII Los mayores le se alcanzaron con las Harims de Yuca y Trigo con respecto a los atros dos sustratos Se observoacute una mayor produccioacuten de micelio en los sustratos amilaceos lo que podria justificar la produccibn maacutes alta de conidias

525- Thnmianum

LBS resultados se reportan en la tabla XI Estudios hechos par Raussos (1985) demostraron la capacidad de Thanianum en la produccidn de ami la s a s utilizando almidoacuten cam0 fuente de carbono pesto que la harim de yuca y la harina de trigo son sustratos amilacecs se esperariacutea una produccioacuten impcortante de esporras tal COQLO sucedioacute para la harina de yuca y no asi para la harina de trigo Con respecto a la s a c m a el Ie tan bajo que se obtuvo con relacidn a la melaza pede ser debido a todos los compuestos que se encuentran en las m e l a z a s

c TABLA VI1- Inlices de esparcllacibn para Bhssiana utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo M e i u z a y Sacarosa axno fuente de carbono para tiempos de incubacioacuten de 7 dias y relacion CN de 14

I I I

I I I Ie I

Summ CN I I

1 I I I

I I

1 I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 1 8 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

7 DIAS

Harina de Pigo 14 702~10~9 I I I I

I I I

Melaza 14 217~10~9 I I I I

I I I I

Sacarosa i 14 8 5 8 ~ 1 0 ~ 6 I I I I

r

I I

I Ie 1

I Summ CN I

I 1 i I

I I 7 DIAS

I I I I

I 1 I I

Harina de Yuca 14 142x10^10 I I I I

I I I I

Harina de Pigo 14 832xlO-9 1 1 I I

I I I I

M e l a z a 14 293~10~9

I I I

Sacarosa 14 103x10n9

I I I I

I I I I

m IX-Indices de espauulacian para Thamianum utilizando Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa corno fuente de carbono para tiapos de incubacich de 7 dim y relacioacuten CN de 14

I I I I

I -

1 I Ie I

I Summ CN I

I I 7 D I A S t I I I

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 11ox1On1O I I I I

I I I I

Harina de Trigo 14 12Ox10-9 I I I I

I I I I

M e l a z a 14 875~10~9 I I I I

I

Sacarosa I

I i I

14 11Ox10^8 I I I

526- Conclusiones

Varios autores han demostrado la importancia de la fuente de carbono sobre la conidiogenesis de hongos f ilamentosos (Vezina y co11965 Martinelli1976) en este estudio se pudo observar que cada cepa tiene caracteristicas fisiolcjgicas de esporulacidn propias con respecto al tipo de fuente de carbono que se le proporcione Para este caso en especial la cepa de Aniper esporuld mejor en Harina de Yuca A termus en M e l a z a B m i a m en Harinri de Trigo y T harzinnum en Harina de Yuca

------Esttuiaa - - h - - i s o s (lE5) han demostrado que la concentracidn de Nieeno prwente en el mampio de cup170 ejerce una influencia directa en el nuacutemero de conidiosporas producidas por Thurzjmm par 10 que era necesario seleccionar la relacioacuten CN oacuteptima para cada cepa y para cada sustrato

la composicioacuten de l o s medios de cultivo utilizados para llevar a cabo este estudio estb presentados en las tablas I 11 I11 y IV Se utilizaron 4 diferentes relaciones CN estas fueron de 101424 y 40 empleanda UM mezcla de 23 panes de Sulfato de Amonio y 13 parte de h a toanando- 128 g de carbono como base de caacutelculo y tiempos de incubacioacuten de 7 y 14 dias l o s experimentos se realizaron en matraces de 250 ml

Ln relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despueacutes de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Anigw son mostrados en la tabla X

h datos obtenidos para Aniger nos indican que cuardo se emplea Harina de Yuca en concentracich de 40 gl y la reiaci6n CN estaacute entre 10 y 40 no es un factor determinante en la conidiogeacutenesis ya que esporula de rnanera similar entre estos r a n g o s para l o s medio a base de Harina de Trigo la CN entre 40 y 24 es donde mejm esporulacidn se obtiene

r 5 3 2 - A s m i l ~ s t

h relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de espomlaci6n obtenidos aespuk de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Rtemxs son mostradrx en la tabla XI

Lns medios de cultivo con 14 dias de incubacidn presentan el mayor ntUnero de conidiospwas a una relaci6n CN de 14 con excepcih de l o s medios con Sacarosa que mostramn en todos l o s cc~sos un compm-tamiento muy pobre con respecto al n h de conidias producidas Los mejores Ie se log-amn con Harina de Yuca y M e l a z a con una relacidn CN de-14 para 14 dias de incubacidn

Lo relaci6n que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despuds de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para B b s s i a n a son mostrados en la tabla XII

b Ie logrados para B b n s s i m e son muy similares entre si es decir no cambian significativamente l o s Ie para l o s cultivos con 14 dias de inmbacidn son bastante altos siendo el medio de cultivo con una relaci6n CN de 14 y Melaza como fuente de carbono ei queposee el mejor Ie con un tiempo de incuhcidn de 14 dias BI esta cepa se ve su capacidad de adaptacioacuten con respecto a l a s anteriores para crecer en Sackrosa

~ r

27 534- Psnicilliue sp

kiaeiampi que exiate entre 1- necG~-edt-~vcv - y h rendimientos de esparulaciOacutentilde-6btenidos despds de 7 -_Fl4 dias de cultivo en matraces para FbnciIlium sp son mostrados en la tabla XILI

_

La relacidn CN entre 10 y40 no tiene una influencia directa en la conidioghnesis de esta cepa sin embargo se dbeewa una tendencia a la disminucioacuten del N de conidiospcwas producidas en los cultivos con 14 dias de incubacih Los mayores Ie se lcgrarcm con los medios de cultivo a bnse de Harina de Yuca y Harina de Trigo

La relaci6n que existe entre la composiciiquestn quiacutemica del medio de cultivo y l a s rendimientos de esporulaci6n obtenidos desples de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Thurzzanum son mostrados en la tabla XIV

Las resultados obtenidos 1x1s mestran unatendencia hacia la obtencioacuten del m y m Ie en rangos de CN de 10 a 14 y estudios hechos par Raussos (1985) sohre el efecto de la concentraci6n de Nitriquestgeno en la oanidiogdnesis de Thaniunum pnmporcionaron una CN optima de 14 utilizando Harina de Yuca corno fuente de curbno

Sin embxqo pura una CN de 3253 obtiene un Ie para 7 dias --de incubacidn de Q16x1On9 cmparando este resultado con el resultado obtenido en mi estudio encuentro que a una CN de 40 para 7 diQs de incubacibn tengo un Ie de 132xlO-9 esto es 13 veces mamp por lo que es dificil comparar estos datos en l o s resultados obtenidos se obsewa una tendencia para los cultivos con 14 dias de incubacidn de disminuir el Ie confarme aumenta la relacidn CN y para l a s cultivos con 7 dias se observn lo contrario Los Ie mus altos se logran con l o s medios de cultivo a base de Harinu de Yuca y Melaza

536- Conclusiones

Las cepas estudiadas eSp0IWlUn dependiendo del tipo de fuente de carbono la fuente de carbono y su naturaleza tiene m infiuencia directa en la conidiogeacutenesis de l o s hongos f ilamentosos que la concentracioacuten de nitrdgeno sin embargo es recamendable la adlcidn ae nitdgeno entre l o s rargos de CN de 10 a 4 0

Para disminuir l o s costos de pmduccioacuten de conidiosporas hay que optimizar los medics de cultivo nacer la seleccioacuten de una h e m fuente de carbono para cada cepa y trhjar en rangos de CN de 14 a 4 0

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
                                          • -- A
                                          • --
                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
                                          • M
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___ ~ ~~ - ~- ~ ~ ~ -~

deben ser definidas para a especie h e 5 un medio amp4cultivo optimizado para la produccibn de conidiwporns de una especie puede no ser adecuado para alguna otra (Vezim y co11965)

23 PRclDuccION DE E S O R A S

Diferentes tecnicas sa conocidas para la produccibn masiva de esparas La mds antigua consiste en cultivar el mirrocqganismo sobre una superficie en UT ampio de cultivo con agar ya sea en cajas de Petri a nivel labratorio o en btellns Rolux para fines prticticcs Osta tecnica presenta graves problemas de recoleccibn y la manipuiacibn de u n h e m importante de frasccs ademas se debe llevar a cabo bajc asepsia canpleta

Se ha mostrado la posibilidad de producir esporas en cultivo llquido utilizardo fermentadores esterilizables y extrapolables a nivel industrial (Bmderic eta11982)

Se h a n hecho estudios para producir esporas utilizando sustratos nmilaceos en ferntadores de lecho fijo (Maheva y col 19841 y mediante el uso de charolas en l a s cuales se coloca el sustrato en capas y se pone en una estufa de incubacibn (Vezina 1975) y ~ s o b r e pan de cebamp para producir esporas de Penicillium laucun en la elaboracibn de quesos (Nougaret 19821 ~

p Ultimamente se ha desarrdllado un proceso de cultivo en

superficie sobe un medio amplido utilizando un fermentador de discos rotatorios el c u a l ha dado henos resultados pero no puede ser escalado a un nive mayor (RaimLault y Raussos 1985)

Se ha desarrollado tam5i8n otrc amptodo de pmduccibn de espus solre soporte amplido esto es con la utilizacibn de bagazo de camp (Roussos y coldboradores 1988 certificado de invencibn)

2 4 irsos DE LAS EspoRAs

Eb la produccibn industrial de productos derivados de las fementaciones con hongos filmentosos la inoculacibn de los sustratos requiere de una gran cantidad de conidiosporcs ya que constituyen el punto de inicio de estos procesos de fernentacidn

La importancia de l o s cinco hongos fitmentosos estudiados radica en lo siguiente

~ p ~ ~ ~ l ~ nigerhiunenta el contenido pmteicc de le yucs (hinhult 1980) ademris de poseer actividad pectinolltica

ASprgiIlus te-mm p e e actividad p - a e aprovechamiento de la cantildea de azucar (Brizuela 1987) ademamp elaboran dos substancias antihcteriens de toxicidad variabie (flakripinas citrirn] (Bottm etai965)

7 _

- - ~ ~ ~ - ~~ -- - - i -

B s a u w i a bassima es parbita de insectos por lo qua ayuda en lucha biol6gica adema de producir enzimas como quitiMeas y 1 ipaears

micjllirm sp egta 0CPa posee una alticapacidad ampa e la cafeina de la pllpa de cafe esto rice penuite eliminar uno de lo s principales toxicos en la pulpa y de esta manera disminuir la contaminacion que produce y emplearla para alimentacion animal

2)-ickdema hurzidoum es un pl0dUctor de celulasas y ayuda en lucha biol6gica ya que m la propiedad de em- un antagonista poderaeo con respecto a un cierto rimero de hongos fitoputiquestgeme

( R o w e o s 19851

- _I__I k -

--

l- probar el efecto del tipo de la fuente de carbono en la

empleados en l o s procesos de fermentacioacuten dlida I produccioacuten masiva de midiosporas de l o s p-incipales horqcs

2- Probar el efecto combinado del tipo de la fuente de carbm y la relacioacuten CN en la produccioacuten masiva ae amidiosporas

3- Llevar a cabo la produccioacuten rnasiv de conidiospwas en un fermentador de discos rotatorios de 2 i

9

IDS micmotyanismas estudiados en este t r a j o fueron P s P w g i I I u s n i p ORSIUH NlO A s p e r g i l I u s t m u s cepa del ICIDCA (Instituto cubano para la Investigacioacuten de l o s Derivados de la Cantildea de Azucur) B e a u w i d hssiann cepa d e l ICIDCA Fanicillium sp cepa de la uA y Zkichoderma harzianum CCM F470 (Czechoslovak Collection of Microorganisms) ampliamente descrita por Rcwsg~os (1985)

4 2 MEDIOS DE CULTIVO

4 2 l Medios de comervaciOacuten

las cepas de Aniger A tanclrsus Fenicillium sp y Tharzianum son resembradas en un medio de PDA (papa- dextrasa-agar) y la cepa de B a i u n u es resenbada en PDA con 05 de extracto de levadura cada 6 meses e incubadas durante 7 dias a 29C para despueacutes ser conservadas en refrigeracioacuten durante 6

- meses apracimadamente ~ ~

4 2 2 Medios de esparulacidn

Se probaran l a s siguientes fuentes de cwbmHarina de Yuca Harina de P i g o M e l a z a y Sacarosa con relacioacuten CN de 10 14 24 Y 4 0

a) FmlaciOacuten de los medios

i

t

Lxw medios de cultivo utilizados para la produccioacuten de conidiospwas de Aniger A terreus Bampiana Amicillium p y Thamianum se muestran en l a s tablas I 11 I11 y IV

43 CONDICIONB DE CULTIVO

4 3 1 Inoculacioacuten

El medio de cultivo se inocula en masa este modo de inoculacioacuten consiste en mantener a 40C el medio de cultivo para posteriannente agregar uryt suspensidn de conidiospm-as de concentracioacuten conocida (2 x lo7 esporaWgr de sustrato) El ampio inoculado se agita para obtener una disiribucioacuten hamogenea en el cam ae maeaces Nand0 se utiiiza el fermentaamp de discos se pone en funcionamiento el sistema rotatwio para que SS distribuya el medio de cultivo inocuiaao en l o s discos de forma hmcqenea

F

432 Crecimiento--yespwulacion - - - -

Los cultivos se incuban a temperatura de laboratorio de 18 a 23C durante 7 y 14 dias Al fermentada- de discos se le suministra un flujo de aire estdril con un gasto de 4 lhr durante el periacuteodo de incubncioacuten

44 MEXDO PARA LA F9OJXJEION DE CONIDICSRXA5

Se conocen divemos amptodos para la pmducci6n de conidiosporas nosotras utilizaremos mntraces Erlen Meyer de 250 m1 y Fermentazdares de Discos

441 Matraces Erlen Heyer de 250 ml

El medio de cultivo se reparte en matraces Erlen Meyer de 250 m1 a rampn de 20 m1 par matraz y se obtura con un tapamp de algodoacuten se esteriliza en autoclave a 121C durante 20 min

442 Fermentada- de discos

El esquema del fermentada- de discos rotutorios utilizado se muestra en fmma detallada en la figura 1 El fermentador conteniendo300 m1 de medio de cultivo se esteriliza en autoclave a 121C por 45 min

-

e

a) Descripcioacuten del fermentada-

El fermentador de discos que se presenta en la fig 1 esta fannado por una cuba de vidrio la c u a l tiene una entrada y una salida en la parte superiorde la cuke se coloca una platina que tiene dos entradas una para realizar la inoculacioacuten del medio de cultivo y otra para airear esta platina sostiene un eje en el centro satre el eje se colocan 11 pares de discos formados por 2 m a l l a s de acero inoxidable de 2 mm de espesor y tamantildeo de malla de 4 mm c m un diaacutemetro de 10 c m y separados cuda par por 10 mm con unas rondanas especiales de acero inoxidable en el extremo inferior del eje se coloca una abrazadera la c u a l ejece presioacuten s e e l o s discos y con esto se mantienen fijos el total de 22 discos nos proporciona una superficie uacutetii de 172787 cm2 en la parte superior del eje se localiza un T la omi nos pemitlra colocar un motor y con esto hacer girar los disc-

b) Fimcionamiento y uso

El funcionamiento del fementaaor ae discos es de la siguiente manera LKB vez que se ha agregado e medic de cultivo y se ha esterilizado se coloca a un rotor de marera harizontal lo que nos permitiraacute mantener a l o s discos inmerso= en el medio ae cultivo y de esta forma una vezque se va enfrianio se adhiera a ellos el medic de cultivo se i m l a cunni0 se sncuentra en un promedio de

11

I ~

tempertura de 30 y 35CYTbl medio aun se encuentra licfuido) y asi poder tener una distriMciOacuten hanogenea de l a s esparas en el medio de cultivo (inoculacioacuten en masa) Una vez que el medio de cultivo se ha impregnado a l o s diecog el farmentador puede ser colocado de manera vertical en un l u g = adecuado

__ - - - - -

45 COSECHA Y CxlENrA DE EspoRAs

a) Para l o s cultivos en matraces se agmgu a cada uno 100 m1 de agua destilada estkil adicionada de Tbreen 80 (01) y se hunogeniza mediante agitacih magrktica

b) Para l o s cultivos en fementadares de discos 58 introduce al fermentadar 300 m1 de agua desti lada estampil adicionada de Tween 80 (01) y se mantienen los discos en rotaci6n durante 10 min

El conteo de l a s mas 88 realiza mediante el uso de kas de Malassez con suspensiones convenientemente diluidas y aplicando la siguiente f b l a

A + B + CJ = X 10 = N

A + B + C J = cuenta total de esporas en 10 cuhdros de la celda - x N - mimero de espmas pranedio

1D = factor de dilucioacuten 3

t

1 -Cuva

2 - P l a r i n a

3-Eje

4 -Disc05

5 - E n t rad2 zuper i or de l a cuva

6 - Sal ida i n f e r i o r d e l a cuva

- - Tapon d e entrada y s a l ida

r - 12

-

Medio I I I 3 I 4 I

I I 1 I I I I I Harim de I I I I

Yuca 4 0 4 0 4 0 I 4

I I I

Cgl) 1 1 I 2

I

I I I I I I

I I I I I I

(NH4)2904 402 287 167 100 I I I I

I 1 I I I

Urea 091 065 038 022

cac12 1 1 1 1 1 I 1 I

I I I I I I

I I I I

1 I 1 I I I

I ~~~ ~ ~ ~

I I I I

K H 2 p o 9 2 I 2 I 2 I 2 I I I I t I

I I I - I I I

Ag8r 15 15 I 15 I 15 I I I I 1 I I

I I I I I Agua (ml) loo0 1000 1000 1000

I I I I I

1 I I I I

I CN 10 I 14 I 24 I 40 I

I I I I I

I I I 1 I I

1 pH 56 56 156 56

I I I I I 1

Medio I I I I

Harim de I I I I

Trigo 5714 5714 5714 5714

(gl) I 1 1 2 I 3 I 4 I I I I I

I I I I I I

I I I I I 1

I I I I I I

(NH4)ZSX 402 287 167 100 I I I I I I

I I I I I I

u r e a 091 065 038 (322 I I I I I 1

1 I I I I I ~~ ~~ ~~~

I cac12 1 I 1 I 1 I 1 I

I I

~ I - s 2 I 2 I 2 I 2 I

e I I I I I

J q a r 15 15 I 15 I 15 I

I I

I I I I I I

I 1 I I I I

I I I I I

I I I I I I

Agua (m11 loo0 1000 1000 1000 I I 1 I I I

I I I I I I

I pH 56 56 56 56 I I I I I I

1 I I I I I

I cm 10 I 14 I 24 I 40 I I I I I I I

r

t

14

c

C_ de l o s medios S a m a camo

r

de cultivo para fuente de carbono

Hedio I I I I

(gl) 1 2 3 I 4 I

I I I I I I I I

I I

I I I I I

SaculmBa 3040 3 0 4 0 3040 3040 I I

I I

~ N l i 4 ) 2 S X 402 287 167 100 I I I

I I

1 I 1 I 1 I

I

I 2 I 2 I 2 I I I I

95

I I

I I

I I

I I

I I I I

urea 091 065 038 022 I I I

I I I I I I

cac12 1 m 2

I I I

I I I I

I I I

I I

Agar I 15 15 I 15 I I

I I I I I

Agua (m11 1000 1000 1000 1000 I I I I I I

56 56 56

L -

I I I

I I I I I

I pH 56

cN 10 14 24 4 0

I I I I I I

I I

I I

I I

I I

I I

I

r

Hedio

I I I

I I I I

(gl) 1

I I

I 2 I 3 4 I

I I

I I

I I I I I

M e l a z a 5470 5470 5470 5470 I I I I I I I (W)2S34 402 287 167 1-00 I I I I I I

I I I

I Urea 091 065 038 022 I I I

cac12 I 1 1 1 1 1 1

I

I I I

I

I

I I I

I I I I I

I I 1 I I I

m 2 I I I I

Agar 15 15

I 2 I 2 I 2 I

I

I I

e

I I I I

I 15 I 15 I

I -

I I

I I 1 I I I

Agw (m11 loo0 1000 1000 1000 1 I t I I

I I I p H 56 56 56 56 I I I I

CN 10 1 I 14 I 24 4 0 I I I I I I

I I I I I I

511- AsparYillus n i p -

de 3 dias aparecen farmas especializadas de reploduccian asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este se desarrolla UM vesicula y sobre la vesicula se

conidicsporas Estas conidospwas presentan un color cafe obscuro y n e g r o son gldbulares ornamentadas con un diumetro aproximado de 35 a 5 m La colonia cambia al c o l o r negro del centro B los ext remos

El micelio de este horgo es septa30 y de color blanco despues

desarrollan lae f ialides de las cuales se farmaran l a s

LA estructura de la fama de repruduccion se p-esenta en la figura 2

ru LA 7 V E S I CULA

ESTI P E

ELULA P O D A L

Figura 2 - Conidioforas y conidias de Aniger

El micelio de este h q o e8 septado de color blanco depea de 3 dias aparecen fonoas especializades de repmduccion asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este crecen fialides y de l a s fialides se forman las conidiosparas y presenta exudados ambarinoe Eetas conidiceparas presentan un color amarillo l a s conidiceporas son lisas glokulares con un diametro aproximado de 15 - 25 m

Figura 3 la estructura de la f a r m a de reproduction presenta en la

FIA

Figura 3- Conidioforos y coniaias de X t e

Este hongo presenta un micelio atercipelado y coposo inicialmente blanco presenta un raacutenquis genicula denticulado o en zigzag posteriarmente se tans amarillento Posee conidias hialinas y gldlxllams can un diaacutemetro aproximado de 15 a 3ym La estructura se presenta en la Figura 4

RANQU I S

c

Figura 4 - ConidiOacutefaros y conidias de E h s s i e n o

m cepa se ha identificado corno Penicillium W f a r t i i presenta un micelio septado con produccioacuten de micelio vegetativo aerial d e y e e de un tiempo aparecen estructurns especializadas de repocoduccion a s e x u a l Se presenta un estipe m e n t a d o unas brancpeas meacutetulas f M i d e s y conidias Elstas conidiosporas presentan un colap- verduzco son globdares y lisas con un dibtro apmximado de 4 a 6p Lae conidias son producidas en cadenas cortas La estructura se presenta en la Figura 5

C O N l D l A S

1 O r r m

Figura 5- Conidioacuteforos y coniaias de Fenicilliun

Al inicio este h q o presenta un micelio blanco pterionnente aprecen farmas especializadas de reproduccion asexual fialidee y conidicepuras I m conidiofaros se presentan en farmas piramidalee y en estos sistemas las fialidee Be localizan en g r u ~ w de dos a cuatro Las conidia3 Bon de color verde olivo son de superficie lisas subglobulares con un diametm apmximado de 2 a 3 m

La egtructura de la fcwma de reproduccion se presenta en la figura 6

Las colonias de Thnnianum en FDA se caracterizan pol tener un color verde con circulos concentricos Hay que mencionar que las colanias pmducen un olor a coco (coconut) muy caracteristico

CONlDl

Figura 6 - Conidioforos y conidias de Thanianum

516- Conclusiones v 4

_ _

el curse) de este capitulo se describieron los sietemas de reproduccioacuten de las cinco cepas de hongos filamentosos estudiados Todos estos hongos se repaoducen de manera a s e x u a l Se que l a s 5 cepas presentan estructuras muy diferentes a s i co~po diversos colores en l o s estadios de crecimiento vegetativo y ccmidiogdnesie ademds presentan conidimporas glohlares de muy diversos tamafios

c

093039 t

2 2

- La composicioacuten de l o s diferentes meampicsde cultvoutQizados pera llevar a cabo este estudio fueron medio N 2 de l a s tablas I 11111 y IV y se establecioacute prabay las diferentes fuentes de carbno (Harina de Yuca Harina de Pigo M e l a z a y Sacarosa) en matraces a una relaci6n CN de 14 para de esta manera poder observar el efecto que cada una de ell- ejerce solre la conidicgbesis de l o s hongos filamentosos estudiadas L m resultados se reman en l a s tablas V VI VII VI11 y XI y se exp-esan en base al Indice de Bporulacidn (Ie - N de esporas g de sustrato carbonado) para 7 dias de incubacion a temperatura ambiente (15-22C)

~ - -4

La Harim de Yuca es un producto amilaceo que ha demostrado ser un sustrato de gran eficiencia para la produccion de conidiosparas de hongos filamentosos ademds de ser un producto tropical de facil acceso su principal componente es el almidoacuten que corresponde al 80 en materia seca se encuentran en esta Harina pteiacutenas grasas y vitaminas del tipo B y C adamp de fibras y cenizas (Grace 1977)

la Harina de Pigo es otro sustrato amilaceo que se considerd importante utilizar debido a su alta disponibilidad en su canposicioacuten estan presentes pteiacutenas grw calcio f oacute s f m h i m tiamina riboflavina y niacina esto lo hace un sustrato interesante

La M e l a z a es el subproducto final de la fakicacioacuten de azucar es un liquido o b s c u r o denso y viscoso que se separa de la masa cocida de baja-calidad y del cual no se pede cristalizar ampamcar por amptodos mencionales y econoacutemicos en su composicioacuten estdn presentes 1 0 s amcares y otras sustancias entre l a s cuales se pueden citar l o s corapuestos nitrogenados aacutecidos aminoacidos albiminas vitaminas ceras esteroles lipid- sales minerales y cenizas etc (ICIDCA1986) Como se puede ver es un producto muy complejo por lo que puede ser un sustrato muy atractivo para su utilizaci6n como fuente de carbono en ipedios de cultivo pura la espomlaci6n de hongos filamentosos (Brinela 1987)

la s a c m a es un producto de facil adquisicioacuten y de pmduccioacuten idustrial importante por lo que se considem un sustrato atractivo para la produccioacuten de amidiosporas de hongos filamentosos La sacarosa se encuentra fonnada por una molecula de fructosa y una de glucosa l o s medios de cultivo que contienen sacarosa pcdriamos decir que son medios simples en comparacioacuten con la complejidad de la melaza y l a s harinas

521- A n i g ~

Fh la tabla V se muestran l o s Ie obtenidos para Anigerutilizardo l a s 4 fuentes de carbono antes mencionadas El mayor Ie se alcanzoacute en el medio de cultivo con k i n a de Yuca seguido de la M e l a z a la k i n a de Pigo y por Gltimo la Sacarosa se ha demostrado que durante el proceso de esterilizacioacuten la Harina de Yuca sufre un tratamiento teacutermico que hace que las moleacuteculas de almidh pasen cie una forma cristalina a un estado amdrfo (gelatinizacion) y que Ani_mr es un productm de amilasas (Raimbault 19801 lo que sugiere que la gelatinizacioacuten podriacutea facilitar el ataque enzimdtico y con esto i iberar cantidades importantes de glucosa que favoreced el crecilriiento del hongo lo que normalmente estaacute reiacionado con una produccioacuten importante de conidias

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I

I

I c- 7 DIAS

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 509xl0^9 I I I I

I I 1 I

Harina de Trigo 14 367X1^9 I I I

I I I I

Melaza 14 424x10-9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 16Ox10^8 I I I I

522- d t ~ 1 7 9 ~ ~

Eh la tabla VI se muestran l o s Ie obtenidos para A termus -utiliZando__las 4 fuentes de carbono antes mencionadas El Ie mas alto se encmtroacute en el medio de cultivo con M e l a z a seguido de la Yprina de Yuca y Trigo y por uacuteltimo la Sacarosa d t m u s es utilizado en lo s procesos de aprovechamiento de eubproductos de la industria cantildeera en cuba (meollo y bagazo) (Blanco bpez Villarl968) Esta cepa estaacute adaptada a l o s procesos de la industria cuntildeera de c u b a por lo que se esperariacutea que espurulara mejor en Melaza tal como ocurrioacute

TXBLA VI- Indices de espwulacibn para dtwreus utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa como fuente de carbono para tiempos de incubacidn de 7 dias y relacioacuten CN de 14

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I I I I I I 7 DIAS I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 60x10n9 I I I

Harina de pigo 14 403xlO-9

I I I

1 I I I

I I I I

M e l a z a 14 612xlOA9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 S40~107 1 I I

211

523- Bbassi= 1

Las resulta- 5e rem en la t ~ ~ h ~ f - - - ~ ~ - - ~ ~ e se -obtwo en el medio con Harina de Trigo m i d o de la H a r i n a de Yuca Melnza y Sacarosa Se puede obeervar que 1 0 s Ie amp altos se logran con los sustratos amiluceos que tal vez puedan ser mamp facilmente utilizados por el microoqanimno debido a l - v e s o de gelatinizacioacuten que Wren

524- Penicillium sp

Los resultados se muestran en la tabla VIII Los mayores le se alcanzaron con las Harims de Yuca y Trigo con respecto a los atros dos sustratos Se observoacute una mayor produccioacuten de micelio en los sustratos amilaceos lo que podria justificar la produccibn maacutes alta de conidias

525- Thnmianum

LBS resultados se reportan en la tabla XI Estudios hechos par Raussos (1985) demostraron la capacidad de Thanianum en la produccidn de ami la s a s utilizando almidoacuten cam0 fuente de carbono pesto que la harim de yuca y la harina de trigo son sustratos amilacecs se esperariacutea una produccioacuten impcortante de esporras tal COQLO sucedioacute para la harina de yuca y no asi para la harina de trigo Con respecto a la s a c m a el Ie tan bajo que se obtuvo con relacidn a la melaza pede ser debido a todos los compuestos que se encuentran en las m e l a z a s

c TABLA VI1- Inlices de esparcllacibn para Bhssiana utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo M e i u z a y Sacarosa axno fuente de carbono para tiempos de incubacioacuten de 7 dias y relacion CN de 14

I I I

I I I Ie I

Summ CN I I

1 I I I

I I

1 I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 1 8 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

7 DIAS

Harina de Pigo 14 702~10~9 I I I I

I I I

Melaza 14 217~10~9 I I I I

I I I I

Sacarosa i 14 8 5 8 ~ 1 0 ~ 6 I I I I

r

I I

I Ie 1

I Summ CN I

I 1 i I

I I 7 DIAS

I I I I

I 1 I I

Harina de Yuca 14 142x10^10 I I I I

I I I I

Harina de Pigo 14 832xlO-9 1 1 I I

I I I I

M e l a z a 14 293~10~9

I I I

Sacarosa 14 103x10n9

I I I I

I I I I

m IX-Indices de espauulacian para Thamianum utilizando Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa corno fuente de carbono para tiapos de incubacich de 7 dim y relacioacuten CN de 14

I I I I

I -

1 I Ie I

I Summ CN I

I I 7 D I A S t I I I

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 11ox1On1O I I I I

I I I I

Harina de Trigo 14 12Ox10-9 I I I I

I I I I

M e l a z a 14 875~10~9 I I I I

I

Sacarosa I

I i I

14 11Ox10^8 I I I

526- Conclusiones

Varios autores han demostrado la importancia de la fuente de carbono sobre la conidiogenesis de hongos f ilamentosos (Vezina y co11965 Martinelli1976) en este estudio se pudo observar que cada cepa tiene caracteristicas fisiolcjgicas de esporulacidn propias con respecto al tipo de fuente de carbono que se le proporcione Para este caso en especial la cepa de Aniper esporuld mejor en Harina de Yuca A termus en M e l a z a B m i a m en Harinri de Trigo y T harzinnum en Harina de Yuca

------Esttuiaa - - h - - i s o s (lE5) han demostrado que la concentracidn de Nieeno prwente en el mampio de cup170 ejerce una influencia directa en el nuacutemero de conidiosporas producidas por Thurzjmm par 10 que era necesario seleccionar la relacioacuten CN oacuteptima para cada cepa y para cada sustrato

la composicioacuten de l o s medios de cultivo utilizados para llevar a cabo este estudio estb presentados en las tablas I 11 I11 y IV Se utilizaron 4 diferentes relaciones CN estas fueron de 101424 y 40 empleanda UM mezcla de 23 panes de Sulfato de Amonio y 13 parte de h a toanando- 128 g de carbono como base de caacutelculo y tiempos de incubacioacuten de 7 y 14 dias l o s experimentos se realizaron en matraces de 250 ml

Ln relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despueacutes de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Anigw son mostrados en la tabla X

h datos obtenidos para Aniger nos indican que cuardo se emplea Harina de Yuca en concentracich de 40 gl y la reiaci6n CN estaacute entre 10 y 40 no es un factor determinante en la conidiogeacutenesis ya que esporula de rnanera similar entre estos r a n g o s para l o s medio a base de Harina de Trigo la CN entre 40 y 24 es donde mejm esporulacidn se obtiene

r 5 3 2 - A s m i l ~ s t

h relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de espomlaci6n obtenidos aespuk de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Rtemxs son mostradrx en la tabla XI

Lns medios de cultivo con 14 dias de incubacidn presentan el mayor ntUnero de conidiospwas a una relaci6n CN de 14 con excepcih de l o s medios con Sacarosa que mostramn en todos l o s cc~sos un compm-tamiento muy pobre con respecto al n h de conidias producidas Los mejores Ie se log-amn con Harina de Yuca y M e l a z a con una relacidn CN de-14 para 14 dias de incubacidn

Lo relaci6n que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despuds de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para B b s s i a n a son mostrados en la tabla XII

b Ie logrados para B b n s s i m e son muy similares entre si es decir no cambian significativamente l o s Ie para l o s cultivos con 14 dias de inmbacidn son bastante altos siendo el medio de cultivo con una relaci6n CN de 14 y Melaza como fuente de carbono ei queposee el mejor Ie con un tiempo de incuhcidn de 14 dias BI esta cepa se ve su capacidad de adaptacioacuten con respecto a l a s anteriores para crecer en Sackrosa

~ r

27 534- Psnicilliue sp

kiaeiampi que exiate entre 1- necG~-edt-~vcv - y h rendimientos de esparulaciOacutentilde-6btenidos despds de 7 -_Fl4 dias de cultivo en matraces para FbnciIlium sp son mostrados en la tabla XILI

_

La relacidn CN entre 10 y40 no tiene una influencia directa en la conidioghnesis de esta cepa sin embargo se dbeewa una tendencia a la disminucioacuten del N de conidiospcwas producidas en los cultivos con 14 dias de incubacih Los mayores Ie se lcgrarcm con los medios de cultivo a bnse de Harina de Yuca y Harina de Trigo

La relaci6n que existe entre la composiciiquestn quiacutemica del medio de cultivo y l a s rendimientos de esporulaci6n obtenidos desples de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Thurzzanum son mostrados en la tabla XIV

Las resultados obtenidos 1x1s mestran unatendencia hacia la obtencioacuten del m y m Ie en rangos de CN de 10 a 14 y estudios hechos par Raussos (1985) sohre el efecto de la concentraci6n de Nitriquestgeno en la oanidiogdnesis de Thaniunum pnmporcionaron una CN optima de 14 utilizando Harina de Yuca corno fuente de curbno

Sin embxqo pura una CN de 3253 obtiene un Ie para 7 dias --de incubacidn de Q16x1On9 cmparando este resultado con el resultado obtenido en mi estudio encuentro que a una CN de 40 para 7 diQs de incubacibn tengo un Ie de 132xlO-9 esto es 13 veces mamp por lo que es dificil comparar estos datos en l o s resultados obtenidos se obsewa una tendencia para los cultivos con 14 dias de incubacidn de disminuir el Ie confarme aumenta la relacidn CN y para l a s cultivos con 7 dias se observn lo contrario Los Ie mus altos se logran con l o s medios de cultivo a base de Harinu de Yuca y Melaza

536- Conclusiones

Las cepas estudiadas eSp0IWlUn dependiendo del tipo de fuente de carbono la fuente de carbono y su naturaleza tiene m infiuencia directa en la conidiogeacutenesis de l o s hongos f ilamentosos que la concentracioacuten de nitrdgeno sin embargo es recamendable la adlcidn ae nitdgeno entre l o s rargos de CN de 10 a 4 0

Para disminuir l o s costos de pmduccioacuten de conidiosporas hay que optimizar los medics de cultivo nacer la seleccioacuten de una h e m fuente de carbono para cada cepa y trhjar en rangos de CN de 14 a 4 0

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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I t I

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
                                          • -- A
                                          • --
                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
                                          • M
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7 _

- - ~ ~ ~ - ~~ -- - - i -

B s a u w i a bassima es parbita de insectos por lo qua ayuda en lucha biol6gica adema de producir enzimas como quitiMeas y 1 ipaears

micjllirm sp egta 0CPa posee una alticapacidad ampa e la cafeina de la pllpa de cafe esto rice penuite eliminar uno de lo s principales toxicos en la pulpa y de esta manera disminuir la contaminacion que produce y emplearla para alimentacion animal

2)-ickdema hurzidoum es un pl0dUctor de celulasas y ayuda en lucha biol6gica ya que m la propiedad de em- un antagonista poderaeo con respecto a un cierto rimero de hongos fitoputiquestgeme

( R o w e o s 19851

- _I__I k -

--

l- probar el efecto del tipo de la fuente de carbono en la

empleados en l o s procesos de fermentacioacuten dlida I produccioacuten masiva de midiosporas de l o s p-incipales horqcs

2- Probar el efecto combinado del tipo de la fuente de carbm y la relacioacuten CN en la produccioacuten masiva ae amidiosporas

3- Llevar a cabo la produccioacuten rnasiv de conidiospwas en un fermentador de discos rotatorios de 2 i

9

IDS micmotyanismas estudiados en este t r a j o fueron P s P w g i I I u s n i p ORSIUH NlO A s p e r g i l I u s t m u s cepa del ICIDCA (Instituto cubano para la Investigacioacuten de l o s Derivados de la Cantildea de Azucur) B e a u w i d hssiann cepa d e l ICIDCA Fanicillium sp cepa de la uA y Zkichoderma harzianum CCM F470 (Czechoslovak Collection of Microorganisms) ampliamente descrita por Rcwsg~os (1985)

4 2 MEDIOS DE CULTIVO

4 2 l Medios de comervaciOacuten

las cepas de Aniger A tanclrsus Fenicillium sp y Tharzianum son resembradas en un medio de PDA (papa- dextrasa-agar) y la cepa de B a i u n u es resenbada en PDA con 05 de extracto de levadura cada 6 meses e incubadas durante 7 dias a 29C para despueacutes ser conservadas en refrigeracioacuten durante 6

- meses apracimadamente ~ ~

4 2 2 Medios de esparulacidn

Se probaran l a s siguientes fuentes de cwbmHarina de Yuca Harina de P i g o M e l a z a y Sacarosa con relacioacuten CN de 10 14 24 Y 4 0

a) FmlaciOacuten de los medios

i

t

Lxw medios de cultivo utilizados para la produccioacuten de conidiospwas de Aniger A terreus Bampiana Amicillium p y Thamianum se muestran en l a s tablas I 11 I11 y IV

43 CONDICIONB DE CULTIVO

4 3 1 Inoculacioacuten

El medio de cultivo se inocula en masa este modo de inoculacioacuten consiste en mantener a 40C el medio de cultivo para posteriannente agregar uryt suspensidn de conidiospm-as de concentracioacuten conocida (2 x lo7 esporaWgr de sustrato) El ampio inoculado se agita para obtener una disiribucioacuten hamogenea en el cam ae maeaces Nand0 se utiiiza el fermentaamp de discos se pone en funcionamiento el sistema rotatwio para que SS distribuya el medio de cultivo inocuiaao en l o s discos de forma hmcqenea

F

432 Crecimiento--yespwulacion - - - -

Los cultivos se incuban a temperatura de laboratorio de 18 a 23C durante 7 y 14 dias Al fermentada- de discos se le suministra un flujo de aire estdril con un gasto de 4 lhr durante el periacuteodo de incubncioacuten

44 MEXDO PARA LA F9OJXJEION DE CONIDICSRXA5

Se conocen divemos amptodos para la pmducci6n de conidiosporas nosotras utilizaremos mntraces Erlen Meyer de 250 m1 y Fermentazdares de Discos

441 Matraces Erlen Heyer de 250 ml

El medio de cultivo se reparte en matraces Erlen Meyer de 250 m1 a rampn de 20 m1 par matraz y se obtura con un tapamp de algodoacuten se esteriliza en autoclave a 121C durante 20 min

442 Fermentada- de discos

El esquema del fermentada- de discos rotutorios utilizado se muestra en fmma detallada en la figura 1 El fermentador conteniendo300 m1 de medio de cultivo se esteriliza en autoclave a 121C por 45 min

-

e

a) Descripcioacuten del fermentada-

El fermentador de discos que se presenta en la fig 1 esta fannado por una cuba de vidrio la c u a l tiene una entrada y una salida en la parte superiorde la cuke se coloca una platina que tiene dos entradas una para realizar la inoculacioacuten del medio de cultivo y otra para airear esta platina sostiene un eje en el centro satre el eje se colocan 11 pares de discos formados por 2 m a l l a s de acero inoxidable de 2 mm de espesor y tamantildeo de malla de 4 mm c m un diaacutemetro de 10 c m y separados cuda par por 10 mm con unas rondanas especiales de acero inoxidable en el extremo inferior del eje se coloca una abrazadera la c u a l ejece presioacuten s e e l o s discos y con esto se mantienen fijos el total de 22 discos nos proporciona una superficie uacutetii de 172787 cm2 en la parte superior del eje se localiza un T la omi nos pemitlra colocar un motor y con esto hacer girar los disc-

b) Fimcionamiento y uso

El funcionamiento del fementaaor ae discos es de la siguiente manera LKB vez que se ha agregado e medic de cultivo y se ha esterilizado se coloca a un rotor de marera harizontal lo que nos permitiraacute mantener a l o s discos inmerso= en el medio ae cultivo y de esta forma una vezque se va enfrianio se adhiera a ellos el medic de cultivo se i m l a cunni0 se sncuentra en un promedio de

11

I ~

tempertura de 30 y 35CYTbl medio aun se encuentra licfuido) y asi poder tener una distriMciOacuten hanogenea de l a s esparas en el medio de cultivo (inoculacioacuten en masa) Una vez que el medio de cultivo se ha impregnado a l o s diecog el farmentador puede ser colocado de manera vertical en un l u g = adecuado

__ - - - - -

45 COSECHA Y CxlENrA DE EspoRAs

a) Para l o s cultivos en matraces se agmgu a cada uno 100 m1 de agua destilada estkil adicionada de Tbreen 80 (01) y se hunogeniza mediante agitacih magrktica

b) Para l o s cultivos en fementadares de discos 58 introduce al fermentadar 300 m1 de agua desti lada estampil adicionada de Tween 80 (01) y se mantienen los discos en rotaci6n durante 10 min

El conteo de l a s mas 88 realiza mediante el uso de kas de Malassez con suspensiones convenientemente diluidas y aplicando la siguiente f b l a

A + B + CJ = X 10 = N

A + B + C J = cuenta total de esporas en 10 cuhdros de la celda - x N - mimero de espmas pranedio

1D = factor de dilucioacuten 3

t

1 -Cuva

2 - P l a r i n a

3-Eje

4 -Disc05

5 - E n t rad2 zuper i or de l a cuva

6 - Sal ida i n f e r i o r d e l a cuva

- - Tapon d e entrada y s a l ida

r - 12

-

Medio I I I 3 I 4 I

I I 1 I I I I I Harim de I I I I

Yuca 4 0 4 0 4 0 I 4

I I I

Cgl) 1 1 I 2

I

I I I I I I

I I I I I I

(NH4)2904 402 287 167 100 I I I I

I 1 I I I

Urea 091 065 038 022

cac12 1 1 1 1 1 I 1 I

I I I I I I

I I I I

1 I 1 I I I

I ~~~ ~ ~ ~

I I I I

K H 2 p o 9 2 I 2 I 2 I 2 I I I I t I

I I I - I I I

Ag8r 15 15 I 15 I 15 I I I I 1 I I

I I I I I Agua (ml) loo0 1000 1000 1000

I I I I I

1 I I I I

I CN 10 I 14 I 24 I 40 I

I I I I I

I I I 1 I I

1 pH 56 56 156 56

I I I I I 1

Medio I I I I

Harim de I I I I

Trigo 5714 5714 5714 5714

(gl) I 1 1 2 I 3 I 4 I I I I I

I I I I I I

I I I I I 1

I I I I I I

(NH4)ZSX 402 287 167 100 I I I I I I

I I I I I I

u r e a 091 065 038 (322 I I I I I 1

1 I I I I I ~~ ~~ ~~~

I cac12 1 I 1 I 1 I 1 I

I I

~ I - s 2 I 2 I 2 I 2 I

e I I I I I

J q a r 15 15 I 15 I 15 I

I I

I I I I I I

I 1 I I I I

I I I I I

I I I I I I

Agua (m11 loo0 1000 1000 1000 I I 1 I I I

I I I I I I

I pH 56 56 56 56 I I I I I I

1 I I I I I

I cm 10 I 14 I 24 I 40 I I I I I I I

r

t

14

c

C_ de l o s medios S a m a camo

r

de cultivo para fuente de carbono

Hedio I I I I

(gl) 1 2 3 I 4 I

I I I I I I I I

I I

I I I I I

SaculmBa 3040 3 0 4 0 3040 3040 I I

I I

~ N l i 4 ) 2 S X 402 287 167 100 I I I

I I

1 I 1 I 1 I

I

I 2 I 2 I 2 I I I I

95

I I

I I

I I

I I

I I I I

urea 091 065 038 022 I I I

I I I I I I

cac12 1 m 2

I I I

I I I I

I I I

I I

Agar I 15 15 I 15 I I

I I I I I

Agua (m11 1000 1000 1000 1000 I I I I I I

56 56 56

L -

I I I

I I I I I

I pH 56

cN 10 14 24 4 0

I I I I I I

I I

I I

I I

I I

I I

I

r

Hedio

I I I

I I I I

(gl) 1

I I

I 2 I 3 4 I

I I

I I

I I I I I

M e l a z a 5470 5470 5470 5470 I I I I I I I (W)2S34 402 287 167 1-00 I I I I I I

I I I

I Urea 091 065 038 022 I I I

cac12 I 1 1 1 1 1 1

I

I I I

I

I

I I I

I I I I I

I I 1 I I I

m 2 I I I I

Agar 15 15

I 2 I 2 I 2 I

I

I I

e

I I I I

I 15 I 15 I

I -

I I

I I 1 I I I

Agw (m11 loo0 1000 1000 1000 1 I t I I

I I I p H 56 56 56 56 I I I I

CN 10 1 I 14 I 24 4 0 I I I I I I

I I I I I I

511- AsparYillus n i p -

de 3 dias aparecen farmas especializadas de reploduccian asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este se desarrolla UM vesicula y sobre la vesicula se

conidicsporas Estas conidospwas presentan un color cafe obscuro y n e g r o son gldbulares ornamentadas con un diumetro aproximado de 35 a 5 m La colonia cambia al c o l o r negro del centro B los ext remos

El micelio de este horgo es septa30 y de color blanco despues

desarrollan lae f ialides de las cuales se farmaran l a s

LA estructura de la fama de repruduccion se p-esenta en la figura 2

ru LA 7 V E S I CULA

ESTI P E

ELULA P O D A L

Figura 2 - Conidioforas y conidias de Aniger

El micelio de este h q o e8 septado de color blanco depea de 3 dias aparecen fonoas especializades de repmduccion asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este crecen fialides y de l a s fialides se forman las conidiosparas y presenta exudados ambarinoe Eetas conidiceparas presentan un color amarillo l a s conidiceporas son lisas glokulares con un diametro aproximado de 15 - 25 m

Figura 3 la estructura de la f a r m a de reproduction presenta en la

FIA

Figura 3- Conidioforos y coniaias de X t e

Este hongo presenta un micelio atercipelado y coposo inicialmente blanco presenta un raacutenquis genicula denticulado o en zigzag posteriarmente se tans amarillento Posee conidias hialinas y gldlxllams can un diaacutemetro aproximado de 15 a 3ym La estructura se presenta en la Figura 4

RANQU I S

c

Figura 4 - ConidiOacutefaros y conidias de E h s s i e n o

m cepa se ha identificado corno Penicillium W f a r t i i presenta un micelio septado con produccioacuten de micelio vegetativo aerial d e y e e de un tiempo aparecen estructurns especializadas de repocoduccion a s e x u a l Se presenta un estipe m e n t a d o unas brancpeas meacutetulas f M i d e s y conidias Elstas conidiosporas presentan un colap- verduzco son globdares y lisas con un dibtro apmximado de 4 a 6p Lae conidias son producidas en cadenas cortas La estructura se presenta en la Figura 5

C O N l D l A S

1 O r r m

Figura 5- Conidioacuteforos y coniaias de Fenicilliun

Al inicio este h q o presenta un micelio blanco pterionnente aprecen farmas especializadas de reproduccion asexual fialidee y conidicepuras I m conidiofaros se presentan en farmas piramidalee y en estos sistemas las fialidee Be localizan en g r u ~ w de dos a cuatro Las conidia3 Bon de color verde olivo son de superficie lisas subglobulares con un diametm apmximado de 2 a 3 m

La egtructura de la fcwma de reproduccion se presenta en la figura 6

Las colonias de Thnnianum en FDA se caracterizan pol tener un color verde con circulos concentricos Hay que mencionar que las colanias pmducen un olor a coco (coconut) muy caracteristico

CONlDl

Figura 6 - Conidioforos y conidias de Thanianum

516- Conclusiones v 4

_ _

el curse) de este capitulo se describieron los sietemas de reproduccioacuten de las cinco cepas de hongos filamentosos estudiados Todos estos hongos se repaoducen de manera a s e x u a l Se que l a s 5 cepas presentan estructuras muy diferentes a s i co~po diversos colores en l o s estadios de crecimiento vegetativo y ccmidiogdnesie ademds presentan conidimporas glohlares de muy diversos tamafios

c

093039 t

2 2

- La composicioacuten de l o s diferentes meampicsde cultvoutQizados pera llevar a cabo este estudio fueron medio N 2 de l a s tablas I 11111 y IV y se establecioacute prabay las diferentes fuentes de carbno (Harina de Yuca Harina de Pigo M e l a z a y Sacarosa) en matraces a una relaci6n CN de 14 para de esta manera poder observar el efecto que cada una de ell- ejerce solre la conidicgbesis de l o s hongos filamentosos estudiadas L m resultados se reman en l a s tablas V VI VII VI11 y XI y se exp-esan en base al Indice de Bporulacidn (Ie - N de esporas g de sustrato carbonado) para 7 dias de incubacion a temperatura ambiente (15-22C)

~ - -4

La Harim de Yuca es un producto amilaceo que ha demostrado ser un sustrato de gran eficiencia para la produccion de conidiosparas de hongos filamentosos ademds de ser un producto tropical de facil acceso su principal componente es el almidoacuten que corresponde al 80 en materia seca se encuentran en esta Harina pteiacutenas grasas y vitaminas del tipo B y C adamp de fibras y cenizas (Grace 1977)

la Harina de Pigo es otro sustrato amilaceo que se considerd importante utilizar debido a su alta disponibilidad en su canposicioacuten estan presentes pteiacutenas grw calcio f oacute s f m h i m tiamina riboflavina y niacina esto lo hace un sustrato interesante

La M e l a z a es el subproducto final de la fakicacioacuten de azucar es un liquido o b s c u r o denso y viscoso que se separa de la masa cocida de baja-calidad y del cual no se pede cristalizar ampamcar por amptodos mencionales y econoacutemicos en su composicioacuten estdn presentes 1 0 s amcares y otras sustancias entre l a s cuales se pueden citar l o s corapuestos nitrogenados aacutecidos aminoacidos albiminas vitaminas ceras esteroles lipid- sales minerales y cenizas etc (ICIDCA1986) Como se puede ver es un producto muy complejo por lo que puede ser un sustrato muy atractivo para su utilizaci6n como fuente de carbono en ipedios de cultivo pura la espomlaci6n de hongos filamentosos (Brinela 1987)

la s a c m a es un producto de facil adquisicioacuten y de pmduccioacuten idustrial importante por lo que se considem un sustrato atractivo para la produccioacuten de amidiosporas de hongos filamentosos La sacarosa se encuentra fonnada por una molecula de fructosa y una de glucosa l o s medios de cultivo que contienen sacarosa pcdriamos decir que son medios simples en comparacioacuten con la complejidad de la melaza y l a s harinas

521- A n i g ~

Fh la tabla V se muestran l o s Ie obtenidos para Anigerutilizardo l a s 4 fuentes de carbono antes mencionadas El mayor Ie se alcanzoacute en el medio de cultivo con k i n a de Yuca seguido de la M e l a z a la k i n a de Pigo y por Gltimo la Sacarosa se ha demostrado que durante el proceso de esterilizacioacuten la Harina de Yuca sufre un tratamiento teacutermico que hace que las moleacuteculas de almidh pasen cie una forma cristalina a un estado amdrfo (gelatinizacion) y que Ani_mr es un productm de amilasas (Raimbault 19801 lo que sugiere que la gelatinizacioacuten podriacutea facilitar el ataque enzimdtico y con esto i iberar cantidades importantes de glucosa que favoreced el crecilriiento del hongo lo que normalmente estaacute reiacionado con una produccioacuten importante de conidias

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I

I

I c- 7 DIAS

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 509xl0^9 I I I I

I I 1 I

Harina de Trigo 14 367X1^9 I I I

I I I I

Melaza 14 424x10-9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 16Ox10^8 I I I I

522- d t ~ 1 7 9 ~ ~

Eh la tabla VI se muestran l o s Ie obtenidos para A termus -utiliZando__las 4 fuentes de carbono antes mencionadas El Ie mas alto se encmtroacute en el medio de cultivo con M e l a z a seguido de la Yprina de Yuca y Trigo y por uacuteltimo la Sacarosa d t m u s es utilizado en lo s procesos de aprovechamiento de eubproductos de la industria cantildeera en cuba (meollo y bagazo) (Blanco bpez Villarl968) Esta cepa estaacute adaptada a l o s procesos de la industria cuntildeera de c u b a por lo que se esperariacutea que espurulara mejor en Melaza tal como ocurrioacute

TXBLA VI- Indices de espwulacibn para dtwreus utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa como fuente de carbono para tiempos de incubacidn de 7 dias y relacioacuten CN de 14

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I I I I I I 7 DIAS I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 60x10n9 I I I

Harina de pigo 14 403xlO-9

I I I

1 I I I

I I I I

M e l a z a 14 612xlOA9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 S40~107 1 I I

211

523- Bbassi= 1

Las resulta- 5e rem en la t ~ ~ h ~ f - - - ~ ~ - - ~ ~ e se -obtwo en el medio con Harina de Trigo m i d o de la H a r i n a de Yuca Melnza y Sacarosa Se puede obeervar que 1 0 s Ie amp altos se logran con los sustratos amiluceos que tal vez puedan ser mamp facilmente utilizados por el microoqanimno debido a l - v e s o de gelatinizacioacuten que Wren

524- Penicillium sp

Los resultados se muestran en la tabla VIII Los mayores le se alcanzaron con las Harims de Yuca y Trigo con respecto a los atros dos sustratos Se observoacute una mayor produccioacuten de micelio en los sustratos amilaceos lo que podria justificar la produccibn maacutes alta de conidias

525- Thnmianum

LBS resultados se reportan en la tabla XI Estudios hechos par Raussos (1985) demostraron la capacidad de Thanianum en la produccidn de ami la s a s utilizando almidoacuten cam0 fuente de carbono pesto que la harim de yuca y la harina de trigo son sustratos amilacecs se esperariacutea una produccioacuten impcortante de esporras tal COQLO sucedioacute para la harina de yuca y no asi para la harina de trigo Con respecto a la s a c m a el Ie tan bajo que se obtuvo con relacidn a la melaza pede ser debido a todos los compuestos que se encuentran en las m e l a z a s

c TABLA VI1- Inlices de esparcllacibn para Bhssiana utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo M e i u z a y Sacarosa axno fuente de carbono para tiempos de incubacioacuten de 7 dias y relacion CN de 14

I I I

I I I Ie I

Summ CN I I

1 I I I

I I

1 I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 1 8 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

7 DIAS

Harina de Pigo 14 702~10~9 I I I I

I I I

Melaza 14 217~10~9 I I I I

I I I I

Sacarosa i 14 8 5 8 ~ 1 0 ~ 6 I I I I

r

I I

I Ie 1

I Summ CN I

I 1 i I

I I 7 DIAS

I I I I

I 1 I I

Harina de Yuca 14 142x10^10 I I I I

I I I I

Harina de Pigo 14 832xlO-9 1 1 I I

I I I I

M e l a z a 14 293~10~9

I I I

Sacarosa 14 103x10n9

I I I I

I I I I

m IX-Indices de espauulacian para Thamianum utilizando Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa corno fuente de carbono para tiapos de incubacich de 7 dim y relacioacuten CN de 14

I I I I

I -

1 I Ie I

I Summ CN I

I I 7 D I A S t I I I

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 11ox1On1O I I I I

I I I I

Harina de Trigo 14 12Ox10-9 I I I I

I I I I

M e l a z a 14 875~10~9 I I I I

I

Sacarosa I

I i I

14 11Ox10^8 I I I

526- Conclusiones

Varios autores han demostrado la importancia de la fuente de carbono sobre la conidiogenesis de hongos f ilamentosos (Vezina y co11965 Martinelli1976) en este estudio se pudo observar que cada cepa tiene caracteristicas fisiolcjgicas de esporulacidn propias con respecto al tipo de fuente de carbono que se le proporcione Para este caso en especial la cepa de Aniper esporuld mejor en Harina de Yuca A termus en M e l a z a B m i a m en Harinri de Trigo y T harzinnum en Harina de Yuca

------Esttuiaa - - h - - i s o s (lE5) han demostrado que la concentracidn de Nieeno prwente en el mampio de cup170 ejerce una influencia directa en el nuacutemero de conidiosporas producidas por Thurzjmm par 10 que era necesario seleccionar la relacioacuten CN oacuteptima para cada cepa y para cada sustrato

la composicioacuten de l o s medios de cultivo utilizados para llevar a cabo este estudio estb presentados en las tablas I 11 I11 y IV Se utilizaron 4 diferentes relaciones CN estas fueron de 101424 y 40 empleanda UM mezcla de 23 panes de Sulfato de Amonio y 13 parte de h a toanando- 128 g de carbono como base de caacutelculo y tiempos de incubacioacuten de 7 y 14 dias l o s experimentos se realizaron en matraces de 250 ml

Ln relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despueacutes de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Anigw son mostrados en la tabla X

h datos obtenidos para Aniger nos indican que cuardo se emplea Harina de Yuca en concentracich de 40 gl y la reiaci6n CN estaacute entre 10 y 40 no es un factor determinante en la conidiogeacutenesis ya que esporula de rnanera similar entre estos r a n g o s para l o s medio a base de Harina de Trigo la CN entre 40 y 24 es donde mejm esporulacidn se obtiene

r 5 3 2 - A s m i l ~ s t

h relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de espomlaci6n obtenidos aespuk de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Rtemxs son mostradrx en la tabla XI

Lns medios de cultivo con 14 dias de incubacidn presentan el mayor ntUnero de conidiospwas a una relaci6n CN de 14 con excepcih de l o s medios con Sacarosa que mostramn en todos l o s cc~sos un compm-tamiento muy pobre con respecto al n h de conidias producidas Los mejores Ie se log-amn con Harina de Yuca y M e l a z a con una relacidn CN de-14 para 14 dias de incubacidn

Lo relaci6n que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despuds de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para B b s s i a n a son mostrados en la tabla XII

b Ie logrados para B b n s s i m e son muy similares entre si es decir no cambian significativamente l o s Ie para l o s cultivos con 14 dias de inmbacidn son bastante altos siendo el medio de cultivo con una relaci6n CN de 14 y Melaza como fuente de carbono ei queposee el mejor Ie con un tiempo de incuhcidn de 14 dias BI esta cepa se ve su capacidad de adaptacioacuten con respecto a l a s anteriores para crecer en Sackrosa

~ r

27 534- Psnicilliue sp

kiaeiampi que exiate entre 1- necG~-edt-~vcv - y h rendimientos de esparulaciOacutentilde-6btenidos despds de 7 -_Fl4 dias de cultivo en matraces para FbnciIlium sp son mostrados en la tabla XILI

_

La relacidn CN entre 10 y40 no tiene una influencia directa en la conidioghnesis de esta cepa sin embargo se dbeewa una tendencia a la disminucioacuten del N de conidiospcwas producidas en los cultivos con 14 dias de incubacih Los mayores Ie se lcgrarcm con los medios de cultivo a bnse de Harina de Yuca y Harina de Trigo

La relaci6n que existe entre la composiciiquestn quiacutemica del medio de cultivo y l a s rendimientos de esporulaci6n obtenidos desples de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Thurzzanum son mostrados en la tabla XIV

Las resultados obtenidos 1x1s mestran unatendencia hacia la obtencioacuten del m y m Ie en rangos de CN de 10 a 14 y estudios hechos par Raussos (1985) sohre el efecto de la concentraci6n de Nitriquestgeno en la oanidiogdnesis de Thaniunum pnmporcionaron una CN optima de 14 utilizando Harina de Yuca corno fuente de curbno

Sin embxqo pura una CN de 3253 obtiene un Ie para 7 dias --de incubacidn de Q16x1On9 cmparando este resultado con el resultado obtenido en mi estudio encuentro que a una CN de 40 para 7 diQs de incubacibn tengo un Ie de 132xlO-9 esto es 13 veces mamp por lo que es dificil comparar estos datos en l o s resultados obtenidos se obsewa una tendencia para los cultivos con 14 dias de incubacidn de disminuir el Ie confarme aumenta la relacidn CN y para l a s cultivos con 7 dias se observn lo contrario Los Ie mus altos se logran con l o s medios de cultivo a base de Harinu de Yuca y Melaza

536- Conclusiones

Las cepas estudiadas eSp0IWlUn dependiendo del tipo de fuente de carbono la fuente de carbono y su naturaleza tiene m infiuencia directa en la conidiogeacutenesis de l o s hongos f ilamentosos que la concentracioacuten de nitrdgeno sin embargo es recamendable la adlcidn ae nitdgeno entre l o s rargos de CN de 10 a 4 0

Para disminuir l o s costos de pmduccioacuten de conidiosporas hay que optimizar los medics de cultivo nacer la seleccioacuten de una h e m fuente de carbono para cada cepa y trhjar en rangos de CN de 14 a 4 0

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
                                          • -- A
                                          • --
                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
                                          • M
Page 14: MATRICULA: 83323133.

--

l- probar el efecto del tipo de la fuente de carbono en la

empleados en l o s procesos de fermentacioacuten dlida I produccioacuten masiva de midiosporas de l o s p-incipales horqcs

2- Probar el efecto combinado del tipo de la fuente de carbm y la relacioacuten CN en la produccioacuten masiva ae amidiosporas

3- Llevar a cabo la produccioacuten rnasiv de conidiospwas en un fermentador de discos rotatorios de 2 i

9

IDS micmotyanismas estudiados en este t r a j o fueron P s P w g i I I u s n i p ORSIUH NlO A s p e r g i l I u s t m u s cepa del ICIDCA (Instituto cubano para la Investigacioacuten de l o s Derivados de la Cantildea de Azucur) B e a u w i d hssiann cepa d e l ICIDCA Fanicillium sp cepa de la uA y Zkichoderma harzianum CCM F470 (Czechoslovak Collection of Microorganisms) ampliamente descrita por Rcwsg~os (1985)

4 2 MEDIOS DE CULTIVO

4 2 l Medios de comervaciOacuten

las cepas de Aniger A tanclrsus Fenicillium sp y Tharzianum son resembradas en un medio de PDA (papa- dextrasa-agar) y la cepa de B a i u n u es resenbada en PDA con 05 de extracto de levadura cada 6 meses e incubadas durante 7 dias a 29C para despueacutes ser conservadas en refrigeracioacuten durante 6

- meses apracimadamente ~ ~

4 2 2 Medios de esparulacidn

Se probaran l a s siguientes fuentes de cwbmHarina de Yuca Harina de P i g o M e l a z a y Sacarosa con relacioacuten CN de 10 14 24 Y 4 0

a) FmlaciOacuten de los medios

i

t

Lxw medios de cultivo utilizados para la produccioacuten de conidiospwas de Aniger A terreus Bampiana Amicillium p y Thamianum se muestran en l a s tablas I 11 I11 y IV

43 CONDICIONB DE CULTIVO

4 3 1 Inoculacioacuten

El medio de cultivo se inocula en masa este modo de inoculacioacuten consiste en mantener a 40C el medio de cultivo para posteriannente agregar uryt suspensidn de conidiospm-as de concentracioacuten conocida (2 x lo7 esporaWgr de sustrato) El ampio inoculado se agita para obtener una disiribucioacuten hamogenea en el cam ae maeaces Nand0 se utiiiza el fermentaamp de discos se pone en funcionamiento el sistema rotatwio para que SS distribuya el medio de cultivo inocuiaao en l o s discos de forma hmcqenea

F

432 Crecimiento--yespwulacion - - - -

Los cultivos se incuban a temperatura de laboratorio de 18 a 23C durante 7 y 14 dias Al fermentada- de discos se le suministra un flujo de aire estdril con un gasto de 4 lhr durante el periacuteodo de incubncioacuten

44 MEXDO PARA LA F9OJXJEION DE CONIDICSRXA5

Se conocen divemos amptodos para la pmducci6n de conidiosporas nosotras utilizaremos mntraces Erlen Meyer de 250 m1 y Fermentazdares de Discos

441 Matraces Erlen Heyer de 250 ml

El medio de cultivo se reparte en matraces Erlen Meyer de 250 m1 a rampn de 20 m1 par matraz y se obtura con un tapamp de algodoacuten se esteriliza en autoclave a 121C durante 20 min

442 Fermentada- de discos

El esquema del fermentada- de discos rotutorios utilizado se muestra en fmma detallada en la figura 1 El fermentador conteniendo300 m1 de medio de cultivo se esteriliza en autoclave a 121C por 45 min

-

e

a) Descripcioacuten del fermentada-

El fermentador de discos que se presenta en la fig 1 esta fannado por una cuba de vidrio la c u a l tiene una entrada y una salida en la parte superiorde la cuke se coloca una platina que tiene dos entradas una para realizar la inoculacioacuten del medio de cultivo y otra para airear esta platina sostiene un eje en el centro satre el eje se colocan 11 pares de discos formados por 2 m a l l a s de acero inoxidable de 2 mm de espesor y tamantildeo de malla de 4 mm c m un diaacutemetro de 10 c m y separados cuda par por 10 mm con unas rondanas especiales de acero inoxidable en el extremo inferior del eje se coloca una abrazadera la c u a l ejece presioacuten s e e l o s discos y con esto se mantienen fijos el total de 22 discos nos proporciona una superficie uacutetii de 172787 cm2 en la parte superior del eje se localiza un T la omi nos pemitlra colocar un motor y con esto hacer girar los disc-

b) Fimcionamiento y uso

El funcionamiento del fementaaor ae discos es de la siguiente manera LKB vez que se ha agregado e medic de cultivo y se ha esterilizado se coloca a un rotor de marera harizontal lo que nos permitiraacute mantener a l o s discos inmerso= en el medio ae cultivo y de esta forma una vezque se va enfrianio se adhiera a ellos el medic de cultivo se i m l a cunni0 se sncuentra en un promedio de

11

I ~

tempertura de 30 y 35CYTbl medio aun se encuentra licfuido) y asi poder tener una distriMciOacuten hanogenea de l a s esparas en el medio de cultivo (inoculacioacuten en masa) Una vez que el medio de cultivo se ha impregnado a l o s diecog el farmentador puede ser colocado de manera vertical en un l u g = adecuado

__ - - - - -

45 COSECHA Y CxlENrA DE EspoRAs

a) Para l o s cultivos en matraces se agmgu a cada uno 100 m1 de agua destilada estkil adicionada de Tbreen 80 (01) y se hunogeniza mediante agitacih magrktica

b) Para l o s cultivos en fementadares de discos 58 introduce al fermentadar 300 m1 de agua desti lada estampil adicionada de Tween 80 (01) y se mantienen los discos en rotaci6n durante 10 min

El conteo de l a s mas 88 realiza mediante el uso de kas de Malassez con suspensiones convenientemente diluidas y aplicando la siguiente f b l a

A + B + CJ = X 10 = N

A + B + C J = cuenta total de esporas en 10 cuhdros de la celda - x N - mimero de espmas pranedio

1D = factor de dilucioacuten 3

t

1 -Cuva

2 - P l a r i n a

3-Eje

4 -Disc05

5 - E n t rad2 zuper i or de l a cuva

6 - Sal ida i n f e r i o r d e l a cuva

- - Tapon d e entrada y s a l ida

r - 12

-

Medio I I I 3 I 4 I

I I 1 I I I I I Harim de I I I I

Yuca 4 0 4 0 4 0 I 4

I I I

Cgl) 1 1 I 2

I

I I I I I I

I I I I I I

(NH4)2904 402 287 167 100 I I I I

I 1 I I I

Urea 091 065 038 022

cac12 1 1 1 1 1 I 1 I

I I I I I I

I I I I

1 I 1 I I I

I ~~~ ~ ~ ~

I I I I

K H 2 p o 9 2 I 2 I 2 I 2 I I I I t I

I I I - I I I

Ag8r 15 15 I 15 I 15 I I I I 1 I I

I I I I I Agua (ml) loo0 1000 1000 1000

I I I I I

1 I I I I

I CN 10 I 14 I 24 I 40 I

I I I I I

I I I 1 I I

1 pH 56 56 156 56

I I I I I 1

Medio I I I I

Harim de I I I I

Trigo 5714 5714 5714 5714

(gl) I 1 1 2 I 3 I 4 I I I I I

I I I I I I

I I I I I 1

I I I I I I

(NH4)ZSX 402 287 167 100 I I I I I I

I I I I I I

u r e a 091 065 038 (322 I I I I I 1

1 I I I I I ~~ ~~ ~~~

I cac12 1 I 1 I 1 I 1 I

I I

~ I - s 2 I 2 I 2 I 2 I

e I I I I I

J q a r 15 15 I 15 I 15 I

I I

I I I I I I

I 1 I I I I

I I I I I

I I I I I I

Agua (m11 loo0 1000 1000 1000 I I 1 I I I

I I I I I I

I pH 56 56 56 56 I I I I I I

1 I I I I I

I cm 10 I 14 I 24 I 40 I I I I I I I

r

t

14

c

C_ de l o s medios S a m a camo

r

de cultivo para fuente de carbono

Hedio I I I I

(gl) 1 2 3 I 4 I

I I I I I I I I

I I

I I I I I

SaculmBa 3040 3 0 4 0 3040 3040 I I

I I

~ N l i 4 ) 2 S X 402 287 167 100 I I I

I I

1 I 1 I 1 I

I

I 2 I 2 I 2 I I I I

95

I I

I I

I I

I I

I I I I

urea 091 065 038 022 I I I

I I I I I I

cac12 1 m 2

I I I

I I I I

I I I

I I

Agar I 15 15 I 15 I I

I I I I I

Agua (m11 1000 1000 1000 1000 I I I I I I

56 56 56

L -

I I I

I I I I I

I pH 56

cN 10 14 24 4 0

I I I I I I

I I

I I

I I

I I

I I

I

r

Hedio

I I I

I I I I

(gl) 1

I I

I 2 I 3 4 I

I I

I I

I I I I I

M e l a z a 5470 5470 5470 5470 I I I I I I I (W)2S34 402 287 167 1-00 I I I I I I

I I I

I Urea 091 065 038 022 I I I

cac12 I 1 1 1 1 1 1

I

I I I

I

I

I I I

I I I I I

I I 1 I I I

m 2 I I I I

Agar 15 15

I 2 I 2 I 2 I

I

I I

e

I I I I

I 15 I 15 I

I -

I I

I I 1 I I I

Agw (m11 loo0 1000 1000 1000 1 I t I I

I I I p H 56 56 56 56 I I I I

CN 10 1 I 14 I 24 4 0 I I I I I I

I I I I I I

511- AsparYillus n i p -

de 3 dias aparecen farmas especializadas de reploduccian asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este se desarrolla UM vesicula y sobre la vesicula se

conidicsporas Estas conidospwas presentan un color cafe obscuro y n e g r o son gldbulares ornamentadas con un diumetro aproximado de 35 a 5 m La colonia cambia al c o l o r negro del centro B los ext remos

El micelio de este horgo es septa30 y de color blanco despues

desarrollan lae f ialides de las cuales se farmaran l a s

LA estructura de la fama de repruduccion se p-esenta en la figura 2

ru LA 7 V E S I CULA

ESTI P E

ELULA P O D A L

Figura 2 - Conidioforas y conidias de Aniger

El micelio de este h q o e8 septado de color blanco depea de 3 dias aparecen fonoas especializades de repmduccion asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este crecen fialides y de l a s fialides se forman las conidiosparas y presenta exudados ambarinoe Eetas conidiceparas presentan un color amarillo l a s conidiceporas son lisas glokulares con un diametro aproximado de 15 - 25 m

Figura 3 la estructura de la f a r m a de reproduction presenta en la

FIA

Figura 3- Conidioforos y coniaias de X t e

Este hongo presenta un micelio atercipelado y coposo inicialmente blanco presenta un raacutenquis genicula denticulado o en zigzag posteriarmente se tans amarillento Posee conidias hialinas y gldlxllams can un diaacutemetro aproximado de 15 a 3ym La estructura se presenta en la Figura 4

RANQU I S

c

Figura 4 - ConidiOacutefaros y conidias de E h s s i e n o

m cepa se ha identificado corno Penicillium W f a r t i i presenta un micelio septado con produccioacuten de micelio vegetativo aerial d e y e e de un tiempo aparecen estructurns especializadas de repocoduccion a s e x u a l Se presenta un estipe m e n t a d o unas brancpeas meacutetulas f M i d e s y conidias Elstas conidiosporas presentan un colap- verduzco son globdares y lisas con un dibtro apmximado de 4 a 6p Lae conidias son producidas en cadenas cortas La estructura se presenta en la Figura 5

C O N l D l A S

1 O r r m

Figura 5- Conidioacuteforos y coniaias de Fenicilliun

Al inicio este h q o presenta un micelio blanco pterionnente aprecen farmas especializadas de reproduccion asexual fialidee y conidicepuras I m conidiofaros se presentan en farmas piramidalee y en estos sistemas las fialidee Be localizan en g r u ~ w de dos a cuatro Las conidia3 Bon de color verde olivo son de superficie lisas subglobulares con un diametm apmximado de 2 a 3 m

La egtructura de la fcwma de reproduccion se presenta en la figura 6

Las colonias de Thnnianum en FDA se caracterizan pol tener un color verde con circulos concentricos Hay que mencionar que las colanias pmducen un olor a coco (coconut) muy caracteristico

CONlDl

Figura 6 - Conidioforos y conidias de Thanianum

516- Conclusiones v 4

_ _

el curse) de este capitulo se describieron los sietemas de reproduccioacuten de las cinco cepas de hongos filamentosos estudiados Todos estos hongos se repaoducen de manera a s e x u a l Se que l a s 5 cepas presentan estructuras muy diferentes a s i co~po diversos colores en l o s estadios de crecimiento vegetativo y ccmidiogdnesie ademds presentan conidimporas glohlares de muy diversos tamafios

c

093039 t

2 2

- La composicioacuten de l o s diferentes meampicsde cultvoutQizados pera llevar a cabo este estudio fueron medio N 2 de l a s tablas I 11111 y IV y se establecioacute prabay las diferentes fuentes de carbno (Harina de Yuca Harina de Pigo M e l a z a y Sacarosa) en matraces a una relaci6n CN de 14 para de esta manera poder observar el efecto que cada una de ell- ejerce solre la conidicgbesis de l o s hongos filamentosos estudiadas L m resultados se reman en l a s tablas V VI VII VI11 y XI y se exp-esan en base al Indice de Bporulacidn (Ie - N de esporas g de sustrato carbonado) para 7 dias de incubacion a temperatura ambiente (15-22C)

~ - -4

La Harim de Yuca es un producto amilaceo que ha demostrado ser un sustrato de gran eficiencia para la produccion de conidiosparas de hongos filamentosos ademds de ser un producto tropical de facil acceso su principal componente es el almidoacuten que corresponde al 80 en materia seca se encuentran en esta Harina pteiacutenas grasas y vitaminas del tipo B y C adamp de fibras y cenizas (Grace 1977)

la Harina de Pigo es otro sustrato amilaceo que se considerd importante utilizar debido a su alta disponibilidad en su canposicioacuten estan presentes pteiacutenas grw calcio f oacute s f m h i m tiamina riboflavina y niacina esto lo hace un sustrato interesante

La M e l a z a es el subproducto final de la fakicacioacuten de azucar es un liquido o b s c u r o denso y viscoso que se separa de la masa cocida de baja-calidad y del cual no se pede cristalizar ampamcar por amptodos mencionales y econoacutemicos en su composicioacuten estdn presentes 1 0 s amcares y otras sustancias entre l a s cuales se pueden citar l o s corapuestos nitrogenados aacutecidos aminoacidos albiminas vitaminas ceras esteroles lipid- sales minerales y cenizas etc (ICIDCA1986) Como se puede ver es un producto muy complejo por lo que puede ser un sustrato muy atractivo para su utilizaci6n como fuente de carbono en ipedios de cultivo pura la espomlaci6n de hongos filamentosos (Brinela 1987)

la s a c m a es un producto de facil adquisicioacuten y de pmduccioacuten idustrial importante por lo que se considem un sustrato atractivo para la produccioacuten de amidiosporas de hongos filamentosos La sacarosa se encuentra fonnada por una molecula de fructosa y una de glucosa l o s medios de cultivo que contienen sacarosa pcdriamos decir que son medios simples en comparacioacuten con la complejidad de la melaza y l a s harinas

521- A n i g ~

Fh la tabla V se muestran l o s Ie obtenidos para Anigerutilizardo l a s 4 fuentes de carbono antes mencionadas El mayor Ie se alcanzoacute en el medio de cultivo con k i n a de Yuca seguido de la M e l a z a la k i n a de Pigo y por Gltimo la Sacarosa se ha demostrado que durante el proceso de esterilizacioacuten la Harina de Yuca sufre un tratamiento teacutermico que hace que las moleacuteculas de almidh pasen cie una forma cristalina a un estado amdrfo (gelatinizacion) y que Ani_mr es un productm de amilasas (Raimbault 19801 lo que sugiere que la gelatinizacioacuten podriacutea facilitar el ataque enzimdtico y con esto i iberar cantidades importantes de glucosa que favoreced el crecilriiento del hongo lo que normalmente estaacute reiacionado con una produccioacuten importante de conidias

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I

I

I c- 7 DIAS

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 509xl0^9 I I I I

I I 1 I

Harina de Trigo 14 367X1^9 I I I

I I I I

Melaza 14 424x10-9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 16Ox10^8 I I I I

522- d t ~ 1 7 9 ~ ~

Eh la tabla VI se muestran l o s Ie obtenidos para A termus -utiliZando__las 4 fuentes de carbono antes mencionadas El Ie mas alto se encmtroacute en el medio de cultivo con M e l a z a seguido de la Yprina de Yuca y Trigo y por uacuteltimo la Sacarosa d t m u s es utilizado en lo s procesos de aprovechamiento de eubproductos de la industria cantildeera en cuba (meollo y bagazo) (Blanco bpez Villarl968) Esta cepa estaacute adaptada a l o s procesos de la industria cuntildeera de c u b a por lo que se esperariacutea que espurulara mejor en Melaza tal como ocurrioacute

TXBLA VI- Indices de espwulacibn para dtwreus utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa como fuente de carbono para tiempos de incubacidn de 7 dias y relacioacuten CN de 14

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I I I I I I 7 DIAS I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 60x10n9 I I I

Harina de pigo 14 403xlO-9

I I I

1 I I I

I I I I

M e l a z a 14 612xlOA9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 S40~107 1 I I

211

523- Bbassi= 1

Las resulta- 5e rem en la t ~ ~ h ~ f - - - ~ ~ - - ~ ~ e se -obtwo en el medio con Harina de Trigo m i d o de la H a r i n a de Yuca Melnza y Sacarosa Se puede obeervar que 1 0 s Ie amp altos se logran con los sustratos amiluceos que tal vez puedan ser mamp facilmente utilizados por el microoqanimno debido a l - v e s o de gelatinizacioacuten que Wren

524- Penicillium sp

Los resultados se muestran en la tabla VIII Los mayores le se alcanzaron con las Harims de Yuca y Trigo con respecto a los atros dos sustratos Se observoacute una mayor produccioacuten de micelio en los sustratos amilaceos lo que podria justificar la produccibn maacutes alta de conidias

525- Thnmianum

LBS resultados se reportan en la tabla XI Estudios hechos par Raussos (1985) demostraron la capacidad de Thanianum en la produccidn de ami la s a s utilizando almidoacuten cam0 fuente de carbono pesto que la harim de yuca y la harina de trigo son sustratos amilacecs se esperariacutea una produccioacuten impcortante de esporras tal COQLO sucedioacute para la harina de yuca y no asi para la harina de trigo Con respecto a la s a c m a el Ie tan bajo que se obtuvo con relacidn a la melaza pede ser debido a todos los compuestos que se encuentran en las m e l a z a s

c TABLA VI1- Inlices de esparcllacibn para Bhssiana utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo M e i u z a y Sacarosa axno fuente de carbono para tiempos de incubacioacuten de 7 dias y relacion CN de 14

I I I

I I I Ie I

Summ CN I I

1 I I I

I I

1 I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 1 8 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

7 DIAS

Harina de Pigo 14 702~10~9 I I I I

I I I

Melaza 14 217~10~9 I I I I

I I I I

Sacarosa i 14 8 5 8 ~ 1 0 ~ 6 I I I I

r

I I

I Ie 1

I Summ CN I

I 1 i I

I I 7 DIAS

I I I I

I 1 I I

Harina de Yuca 14 142x10^10 I I I I

I I I I

Harina de Pigo 14 832xlO-9 1 1 I I

I I I I

M e l a z a 14 293~10~9

I I I

Sacarosa 14 103x10n9

I I I I

I I I I

m IX-Indices de espauulacian para Thamianum utilizando Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa corno fuente de carbono para tiapos de incubacich de 7 dim y relacioacuten CN de 14

I I I I

I -

1 I Ie I

I Summ CN I

I I 7 D I A S t I I I

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 11ox1On1O I I I I

I I I I

Harina de Trigo 14 12Ox10-9 I I I I

I I I I

M e l a z a 14 875~10~9 I I I I

I

Sacarosa I

I i I

14 11Ox10^8 I I I

526- Conclusiones

Varios autores han demostrado la importancia de la fuente de carbono sobre la conidiogenesis de hongos f ilamentosos (Vezina y co11965 Martinelli1976) en este estudio se pudo observar que cada cepa tiene caracteristicas fisiolcjgicas de esporulacidn propias con respecto al tipo de fuente de carbono que se le proporcione Para este caso en especial la cepa de Aniper esporuld mejor en Harina de Yuca A termus en M e l a z a B m i a m en Harinri de Trigo y T harzinnum en Harina de Yuca

------Esttuiaa - - h - - i s o s (lE5) han demostrado que la concentracidn de Nieeno prwente en el mampio de cup170 ejerce una influencia directa en el nuacutemero de conidiosporas producidas por Thurzjmm par 10 que era necesario seleccionar la relacioacuten CN oacuteptima para cada cepa y para cada sustrato

la composicioacuten de l o s medios de cultivo utilizados para llevar a cabo este estudio estb presentados en las tablas I 11 I11 y IV Se utilizaron 4 diferentes relaciones CN estas fueron de 101424 y 40 empleanda UM mezcla de 23 panes de Sulfato de Amonio y 13 parte de h a toanando- 128 g de carbono como base de caacutelculo y tiempos de incubacioacuten de 7 y 14 dias l o s experimentos se realizaron en matraces de 250 ml

Ln relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despueacutes de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Anigw son mostrados en la tabla X

h datos obtenidos para Aniger nos indican que cuardo se emplea Harina de Yuca en concentracich de 40 gl y la reiaci6n CN estaacute entre 10 y 40 no es un factor determinante en la conidiogeacutenesis ya que esporula de rnanera similar entre estos r a n g o s para l o s medio a base de Harina de Trigo la CN entre 40 y 24 es donde mejm esporulacidn se obtiene

r 5 3 2 - A s m i l ~ s t

h relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de espomlaci6n obtenidos aespuk de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Rtemxs son mostradrx en la tabla XI

Lns medios de cultivo con 14 dias de incubacidn presentan el mayor ntUnero de conidiospwas a una relaci6n CN de 14 con excepcih de l o s medios con Sacarosa que mostramn en todos l o s cc~sos un compm-tamiento muy pobre con respecto al n h de conidias producidas Los mejores Ie se log-amn con Harina de Yuca y M e l a z a con una relacidn CN de-14 para 14 dias de incubacidn

Lo relaci6n que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despuds de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para B b s s i a n a son mostrados en la tabla XII

b Ie logrados para B b n s s i m e son muy similares entre si es decir no cambian significativamente l o s Ie para l o s cultivos con 14 dias de inmbacidn son bastante altos siendo el medio de cultivo con una relaci6n CN de 14 y Melaza como fuente de carbono ei queposee el mejor Ie con un tiempo de incuhcidn de 14 dias BI esta cepa se ve su capacidad de adaptacioacuten con respecto a l a s anteriores para crecer en Sackrosa

~ r

27 534- Psnicilliue sp

kiaeiampi que exiate entre 1- necG~-edt-~vcv - y h rendimientos de esparulaciOacutentilde-6btenidos despds de 7 -_Fl4 dias de cultivo en matraces para FbnciIlium sp son mostrados en la tabla XILI

_

La relacidn CN entre 10 y40 no tiene una influencia directa en la conidioghnesis de esta cepa sin embargo se dbeewa una tendencia a la disminucioacuten del N de conidiospcwas producidas en los cultivos con 14 dias de incubacih Los mayores Ie se lcgrarcm con los medios de cultivo a bnse de Harina de Yuca y Harina de Trigo

La relaci6n que existe entre la composiciiquestn quiacutemica del medio de cultivo y l a s rendimientos de esporulaci6n obtenidos desples de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Thurzzanum son mostrados en la tabla XIV

Las resultados obtenidos 1x1s mestran unatendencia hacia la obtencioacuten del m y m Ie en rangos de CN de 10 a 14 y estudios hechos par Raussos (1985) sohre el efecto de la concentraci6n de Nitriquestgeno en la oanidiogdnesis de Thaniunum pnmporcionaron una CN optima de 14 utilizando Harina de Yuca corno fuente de curbno

Sin embxqo pura una CN de 3253 obtiene un Ie para 7 dias --de incubacidn de Q16x1On9 cmparando este resultado con el resultado obtenido en mi estudio encuentro que a una CN de 40 para 7 diQs de incubacibn tengo un Ie de 132xlO-9 esto es 13 veces mamp por lo que es dificil comparar estos datos en l o s resultados obtenidos se obsewa una tendencia para los cultivos con 14 dias de incubacidn de disminuir el Ie confarme aumenta la relacidn CN y para l a s cultivos con 7 dias se observn lo contrario Los Ie mus altos se logran con l o s medios de cultivo a base de Harinu de Yuca y Melaza

536- Conclusiones

Las cepas estudiadas eSp0IWlUn dependiendo del tipo de fuente de carbono la fuente de carbono y su naturaleza tiene m infiuencia directa en la conidiogeacutenesis de l o s hongos f ilamentosos que la concentracioacuten de nitrdgeno sin embargo es recamendable la adlcidn ae nitdgeno entre l o s rargos de CN de 10 a 4 0

Para disminuir l o s costos de pmduccioacuten de conidiosporas hay que optimizar los medics de cultivo nacer la seleccioacuten de una h e m fuente de carbono para cada cepa y trhjar en rangos de CN de 14 a 4 0

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
                                          • -- A
                                          • --
                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
                                          • M
Page 15: MATRICULA: 83323133.

9

IDS micmotyanismas estudiados en este t r a j o fueron P s P w g i I I u s n i p ORSIUH NlO A s p e r g i l I u s t m u s cepa del ICIDCA (Instituto cubano para la Investigacioacuten de l o s Derivados de la Cantildea de Azucur) B e a u w i d hssiann cepa d e l ICIDCA Fanicillium sp cepa de la uA y Zkichoderma harzianum CCM F470 (Czechoslovak Collection of Microorganisms) ampliamente descrita por Rcwsg~os (1985)

4 2 MEDIOS DE CULTIVO

4 2 l Medios de comervaciOacuten

las cepas de Aniger A tanclrsus Fenicillium sp y Tharzianum son resembradas en un medio de PDA (papa- dextrasa-agar) y la cepa de B a i u n u es resenbada en PDA con 05 de extracto de levadura cada 6 meses e incubadas durante 7 dias a 29C para despueacutes ser conservadas en refrigeracioacuten durante 6

- meses apracimadamente ~ ~

4 2 2 Medios de esparulacidn

Se probaran l a s siguientes fuentes de cwbmHarina de Yuca Harina de P i g o M e l a z a y Sacarosa con relacioacuten CN de 10 14 24 Y 4 0

a) FmlaciOacuten de los medios

i

t

Lxw medios de cultivo utilizados para la produccioacuten de conidiospwas de Aniger A terreus Bampiana Amicillium p y Thamianum se muestran en l a s tablas I 11 I11 y IV

43 CONDICIONB DE CULTIVO

4 3 1 Inoculacioacuten

El medio de cultivo se inocula en masa este modo de inoculacioacuten consiste en mantener a 40C el medio de cultivo para posteriannente agregar uryt suspensidn de conidiospm-as de concentracioacuten conocida (2 x lo7 esporaWgr de sustrato) El ampio inoculado se agita para obtener una disiribucioacuten hamogenea en el cam ae maeaces Nand0 se utiiiza el fermentaamp de discos se pone en funcionamiento el sistema rotatwio para que SS distribuya el medio de cultivo inocuiaao en l o s discos de forma hmcqenea

F

432 Crecimiento--yespwulacion - - - -

Los cultivos se incuban a temperatura de laboratorio de 18 a 23C durante 7 y 14 dias Al fermentada- de discos se le suministra un flujo de aire estdril con un gasto de 4 lhr durante el periacuteodo de incubncioacuten

44 MEXDO PARA LA F9OJXJEION DE CONIDICSRXA5

Se conocen divemos amptodos para la pmducci6n de conidiosporas nosotras utilizaremos mntraces Erlen Meyer de 250 m1 y Fermentazdares de Discos

441 Matraces Erlen Heyer de 250 ml

El medio de cultivo se reparte en matraces Erlen Meyer de 250 m1 a rampn de 20 m1 par matraz y se obtura con un tapamp de algodoacuten se esteriliza en autoclave a 121C durante 20 min

442 Fermentada- de discos

El esquema del fermentada- de discos rotutorios utilizado se muestra en fmma detallada en la figura 1 El fermentador conteniendo300 m1 de medio de cultivo se esteriliza en autoclave a 121C por 45 min

-

e

a) Descripcioacuten del fermentada-

El fermentador de discos que se presenta en la fig 1 esta fannado por una cuba de vidrio la c u a l tiene una entrada y una salida en la parte superiorde la cuke se coloca una platina que tiene dos entradas una para realizar la inoculacioacuten del medio de cultivo y otra para airear esta platina sostiene un eje en el centro satre el eje se colocan 11 pares de discos formados por 2 m a l l a s de acero inoxidable de 2 mm de espesor y tamantildeo de malla de 4 mm c m un diaacutemetro de 10 c m y separados cuda par por 10 mm con unas rondanas especiales de acero inoxidable en el extremo inferior del eje se coloca una abrazadera la c u a l ejece presioacuten s e e l o s discos y con esto se mantienen fijos el total de 22 discos nos proporciona una superficie uacutetii de 172787 cm2 en la parte superior del eje se localiza un T la omi nos pemitlra colocar un motor y con esto hacer girar los disc-

b) Fimcionamiento y uso

El funcionamiento del fementaaor ae discos es de la siguiente manera LKB vez que se ha agregado e medic de cultivo y se ha esterilizado se coloca a un rotor de marera harizontal lo que nos permitiraacute mantener a l o s discos inmerso= en el medio ae cultivo y de esta forma una vezque se va enfrianio se adhiera a ellos el medic de cultivo se i m l a cunni0 se sncuentra en un promedio de

11

I ~

tempertura de 30 y 35CYTbl medio aun se encuentra licfuido) y asi poder tener una distriMciOacuten hanogenea de l a s esparas en el medio de cultivo (inoculacioacuten en masa) Una vez que el medio de cultivo se ha impregnado a l o s diecog el farmentador puede ser colocado de manera vertical en un l u g = adecuado

__ - - - - -

45 COSECHA Y CxlENrA DE EspoRAs

a) Para l o s cultivos en matraces se agmgu a cada uno 100 m1 de agua destilada estkil adicionada de Tbreen 80 (01) y se hunogeniza mediante agitacih magrktica

b) Para l o s cultivos en fementadares de discos 58 introduce al fermentadar 300 m1 de agua desti lada estampil adicionada de Tween 80 (01) y se mantienen los discos en rotaci6n durante 10 min

El conteo de l a s mas 88 realiza mediante el uso de kas de Malassez con suspensiones convenientemente diluidas y aplicando la siguiente f b l a

A + B + CJ = X 10 = N

A + B + C J = cuenta total de esporas en 10 cuhdros de la celda - x N - mimero de espmas pranedio

1D = factor de dilucioacuten 3

t

1 -Cuva

2 - P l a r i n a

3-Eje

4 -Disc05

5 - E n t rad2 zuper i or de l a cuva

6 - Sal ida i n f e r i o r d e l a cuva

- - Tapon d e entrada y s a l ida

r - 12

-

Medio I I I 3 I 4 I

I I 1 I I I I I Harim de I I I I

Yuca 4 0 4 0 4 0 I 4

I I I

Cgl) 1 1 I 2

I

I I I I I I

I I I I I I

(NH4)2904 402 287 167 100 I I I I

I 1 I I I

Urea 091 065 038 022

cac12 1 1 1 1 1 I 1 I

I I I I I I

I I I I

1 I 1 I I I

I ~~~ ~ ~ ~

I I I I

K H 2 p o 9 2 I 2 I 2 I 2 I I I I t I

I I I - I I I

Ag8r 15 15 I 15 I 15 I I I I 1 I I

I I I I I Agua (ml) loo0 1000 1000 1000

I I I I I

1 I I I I

I CN 10 I 14 I 24 I 40 I

I I I I I

I I I 1 I I

1 pH 56 56 156 56

I I I I I 1

Medio I I I I

Harim de I I I I

Trigo 5714 5714 5714 5714

(gl) I 1 1 2 I 3 I 4 I I I I I

I I I I I I

I I I I I 1

I I I I I I

(NH4)ZSX 402 287 167 100 I I I I I I

I I I I I I

u r e a 091 065 038 (322 I I I I I 1

1 I I I I I ~~ ~~ ~~~

I cac12 1 I 1 I 1 I 1 I

I I

~ I - s 2 I 2 I 2 I 2 I

e I I I I I

J q a r 15 15 I 15 I 15 I

I I

I I I I I I

I 1 I I I I

I I I I I

I I I I I I

Agua (m11 loo0 1000 1000 1000 I I 1 I I I

I I I I I I

I pH 56 56 56 56 I I I I I I

1 I I I I I

I cm 10 I 14 I 24 I 40 I I I I I I I

r

t

14

c

C_ de l o s medios S a m a camo

r

de cultivo para fuente de carbono

Hedio I I I I

(gl) 1 2 3 I 4 I

I I I I I I I I

I I

I I I I I

SaculmBa 3040 3 0 4 0 3040 3040 I I

I I

~ N l i 4 ) 2 S X 402 287 167 100 I I I

I I

1 I 1 I 1 I

I

I 2 I 2 I 2 I I I I

95

I I

I I

I I

I I

I I I I

urea 091 065 038 022 I I I

I I I I I I

cac12 1 m 2

I I I

I I I I

I I I

I I

Agar I 15 15 I 15 I I

I I I I I

Agua (m11 1000 1000 1000 1000 I I I I I I

56 56 56

L -

I I I

I I I I I

I pH 56

cN 10 14 24 4 0

I I I I I I

I I

I I

I I

I I

I I

I

r

Hedio

I I I

I I I I

(gl) 1

I I

I 2 I 3 4 I

I I

I I

I I I I I

M e l a z a 5470 5470 5470 5470 I I I I I I I (W)2S34 402 287 167 1-00 I I I I I I

I I I

I Urea 091 065 038 022 I I I

cac12 I 1 1 1 1 1 1

I

I I I

I

I

I I I

I I I I I

I I 1 I I I

m 2 I I I I

Agar 15 15

I 2 I 2 I 2 I

I

I I

e

I I I I

I 15 I 15 I

I -

I I

I I 1 I I I

Agw (m11 loo0 1000 1000 1000 1 I t I I

I I I p H 56 56 56 56 I I I I

CN 10 1 I 14 I 24 4 0 I I I I I I

I I I I I I

511- AsparYillus n i p -

de 3 dias aparecen farmas especializadas de reploduccian asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este se desarrolla UM vesicula y sobre la vesicula se

conidicsporas Estas conidospwas presentan un color cafe obscuro y n e g r o son gldbulares ornamentadas con un diumetro aproximado de 35 a 5 m La colonia cambia al c o l o r negro del centro B los ext remos

El micelio de este horgo es septa30 y de color blanco despues

desarrollan lae f ialides de las cuales se farmaran l a s

LA estructura de la fama de repruduccion se p-esenta en la figura 2

ru LA 7 V E S I CULA

ESTI P E

ELULA P O D A L

Figura 2 - Conidioforas y conidias de Aniger

El micelio de este h q o e8 septado de color blanco depea de 3 dias aparecen fonoas especializades de repmduccion asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este crecen fialides y de l a s fialides se forman las conidiosparas y presenta exudados ambarinoe Eetas conidiceparas presentan un color amarillo l a s conidiceporas son lisas glokulares con un diametro aproximado de 15 - 25 m

Figura 3 la estructura de la f a r m a de reproduction presenta en la

FIA

Figura 3- Conidioforos y coniaias de X t e

Este hongo presenta un micelio atercipelado y coposo inicialmente blanco presenta un raacutenquis genicula denticulado o en zigzag posteriarmente se tans amarillento Posee conidias hialinas y gldlxllams can un diaacutemetro aproximado de 15 a 3ym La estructura se presenta en la Figura 4

RANQU I S

c

Figura 4 - ConidiOacutefaros y conidias de E h s s i e n o

m cepa se ha identificado corno Penicillium W f a r t i i presenta un micelio septado con produccioacuten de micelio vegetativo aerial d e y e e de un tiempo aparecen estructurns especializadas de repocoduccion a s e x u a l Se presenta un estipe m e n t a d o unas brancpeas meacutetulas f M i d e s y conidias Elstas conidiosporas presentan un colap- verduzco son globdares y lisas con un dibtro apmximado de 4 a 6p Lae conidias son producidas en cadenas cortas La estructura se presenta en la Figura 5

C O N l D l A S

1 O r r m

Figura 5- Conidioacuteforos y coniaias de Fenicilliun

Al inicio este h q o presenta un micelio blanco pterionnente aprecen farmas especializadas de reproduccion asexual fialidee y conidicepuras I m conidiofaros se presentan en farmas piramidalee y en estos sistemas las fialidee Be localizan en g r u ~ w de dos a cuatro Las conidia3 Bon de color verde olivo son de superficie lisas subglobulares con un diametm apmximado de 2 a 3 m

La egtructura de la fcwma de reproduccion se presenta en la figura 6

Las colonias de Thnnianum en FDA se caracterizan pol tener un color verde con circulos concentricos Hay que mencionar que las colanias pmducen un olor a coco (coconut) muy caracteristico

CONlDl

Figura 6 - Conidioforos y conidias de Thanianum

516- Conclusiones v 4

_ _

el curse) de este capitulo se describieron los sietemas de reproduccioacuten de las cinco cepas de hongos filamentosos estudiados Todos estos hongos se repaoducen de manera a s e x u a l Se que l a s 5 cepas presentan estructuras muy diferentes a s i co~po diversos colores en l o s estadios de crecimiento vegetativo y ccmidiogdnesie ademds presentan conidimporas glohlares de muy diversos tamafios

c

093039 t

2 2

- La composicioacuten de l o s diferentes meampicsde cultvoutQizados pera llevar a cabo este estudio fueron medio N 2 de l a s tablas I 11111 y IV y se establecioacute prabay las diferentes fuentes de carbno (Harina de Yuca Harina de Pigo M e l a z a y Sacarosa) en matraces a una relaci6n CN de 14 para de esta manera poder observar el efecto que cada una de ell- ejerce solre la conidicgbesis de l o s hongos filamentosos estudiadas L m resultados se reman en l a s tablas V VI VII VI11 y XI y se exp-esan en base al Indice de Bporulacidn (Ie - N de esporas g de sustrato carbonado) para 7 dias de incubacion a temperatura ambiente (15-22C)

~ - -4

La Harim de Yuca es un producto amilaceo que ha demostrado ser un sustrato de gran eficiencia para la produccion de conidiosparas de hongos filamentosos ademds de ser un producto tropical de facil acceso su principal componente es el almidoacuten que corresponde al 80 en materia seca se encuentran en esta Harina pteiacutenas grasas y vitaminas del tipo B y C adamp de fibras y cenizas (Grace 1977)

la Harina de Pigo es otro sustrato amilaceo que se considerd importante utilizar debido a su alta disponibilidad en su canposicioacuten estan presentes pteiacutenas grw calcio f oacute s f m h i m tiamina riboflavina y niacina esto lo hace un sustrato interesante

La M e l a z a es el subproducto final de la fakicacioacuten de azucar es un liquido o b s c u r o denso y viscoso que se separa de la masa cocida de baja-calidad y del cual no se pede cristalizar ampamcar por amptodos mencionales y econoacutemicos en su composicioacuten estdn presentes 1 0 s amcares y otras sustancias entre l a s cuales se pueden citar l o s corapuestos nitrogenados aacutecidos aminoacidos albiminas vitaminas ceras esteroles lipid- sales minerales y cenizas etc (ICIDCA1986) Como se puede ver es un producto muy complejo por lo que puede ser un sustrato muy atractivo para su utilizaci6n como fuente de carbono en ipedios de cultivo pura la espomlaci6n de hongos filamentosos (Brinela 1987)

la s a c m a es un producto de facil adquisicioacuten y de pmduccioacuten idustrial importante por lo que se considem un sustrato atractivo para la produccioacuten de amidiosporas de hongos filamentosos La sacarosa se encuentra fonnada por una molecula de fructosa y una de glucosa l o s medios de cultivo que contienen sacarosa pcdriamos decir que son medios simples en comparacioacuten con la complejidad de la melaza y l a s harinas

521- A n i g ~

Fh la tabla V se muestran l o s Ie obtenidos para Anigerutilizardo l a s 4 fuentes de carbono antes mencionadas El mayor Ie se alcanzoacute en el medio de cultivo con k i n a de Yuca seguido de la M e l a z a la k i n a de Pigo y por Gltimo la Sacarosa se ha demostrado que durante el proceso de esterilizacioacuten la Harina de Yuca sufre un tratamiento teacutermico que hace que las moleacuteculas de almidh pasen cie una forma cristalina a un estado amdrfo (gelatinizacion) y que Ani_mr es un productm de amilasas (Raimbault 19801 lo que sugiere que la gelatinizacioacuten podriacutea facilitar el ataque enzimdtico y con esto i iberar cantidades importantes de glucosa que favoreced el crecilriiento del hongo lo que normalmente estaacute reiacionado con una produccioacuten importante de conidias

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I

I

I c- 7 DIAS

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 509xl0^9 I I I I

I I 1 I

Harina de Trigo 14 367X1^9 I I I

I I I I

Melaza 14 424x10-9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 16Ox10^8 I I I I

522- d t ~ 1 7 9 ~ ~

Eh la tabla VI se muestran l o s Ie obtenidos para A termus -utiliZando__las 4 fuentes de carbono antes mencionadas El Ie mas alto se encmtroacute en el medio de cultivo con M e l a z a seguido de la Yprina de Yuca y Trigo y por uacuteltimo la Sacarosa d t m u s es utilizado en lo s procesos de aprovechamiento de eubproductos de la industria cantildeera en cuba (meollo y bagazo) (Blanco bpez Villarl968) Esta cepa estaacute adaptada a l o s procesos de la industria cuntildeera de c u b a por lo que se esperariacutea que espurulara mejor en Melaza tal como ocurrioacute

TXBLA VI- Indices de espwulacibn para dtwreus utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa como fuente de carbono para tiempos de incubacidn de 7 dias y relacioacuten CN de 14

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I I I I I I 7 DIAS I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 60x10n9 I I I

Harina de pigo 14 403xlO-9

I I I

1 I I I

I I I I

M e l a z a 14 612xlOA9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 S40~107 1 I I

211

523- Bbassi= 1

Las resulta- 5e rem en la t ~ ~ h ~ f - - - ~ ~ - - ~ ~ e se -obtwo en el medio con Harina de Trigo m i d o de la H a r i n a de Yuca Melnza y Sacarosa Se puede obeervar que 1 0 s Ie amp altos se logran con los sustratos amiluceos que tal vez puedan ser mamp facilmente utilizados por el microoqanimno debido a l - v e s o de gelatinizacioacuten que Wren

524- Penicillium sp

Los resultados se muestran en la tabla VIII Los mayores le se alcanzaron con las Harims de Yuca y Trigo con respecto a los atros dos sustratos Se observoacute una mayor produccioacuten de micelio en los sustratos amilaceos lo que podria justificar la produccibn maacutes alta de conidias

525- Thnmianum

LBS resultados se reportan en la tabla XI Estudios hechos par Raussos (1985) demostraron la capacidad de Thanianum en la produccidn de ami la s a s utilizando almidoacuten cam0 fuente de carbono pesto que la harim de yuca y la harina de trigo son sustratos amilacecs se esperariacutea una produccioacuten impcortante de esporras tal COQLO sucedioacute para la harina de yuca y no asi para la harina de trigo Con respecto a la s a c m a el Ie tan bajo que se obtuvo con relacidn a la melaza pede ser debido a todos los compuestos que se encuentran en las m e l a z a s

c TABLA VI1- Inlices de esparcllacibn para Bhssiana utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo M e i u z a y Sacarosa axno fuente de carbono para tiempos de incubacioacuten de 7 dias y relacion CN de 14

I I I

I I I Ie I

Summ CN I I

1 I I I

I I

1 I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 1 8 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

7 DIAS

Harina de Pigo 14 702~10~9 I I I I

I I I

Melaza 14 217~10~9 I I I I

I I I I

Sacarosa i 14 8 5 8 ~ 1 0 ~ 6 I I I I

r

I I

I Ie 1

I Summ CN I

I 1 i I

I I 7 DIAS

I I I I

I 1 I I

Harina de Yuca 14 142x10^10 I I I I

I I I I

Harina de Pigo 14 832xlO-9 1 1 I I

I I I I

M e l a z a 14 293~10~9

I I I

Sacarosa 14 103x10n9

I I I I

I I I I

m IX-Indices de espauulacian para Thamianum utilizando Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa corno fuente de carbono para tiapos de incubacich de 7 dim y relacioacuten CN de 14

I I I I

I -

1 I Ie I

I Summ CN I

I I 7 D I A S t I I I

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 11ox1On1O I I I I

I I I I

Harina de Trigo 14 12Ox10-9 I I I I

I I I I

M e l a z a 14 875~10~9 I I I I

I

Sacarosa I

I i I

14 11Ox10^8 I I I

526- Conclusiones

Varios autores han demostrado la importancia de la fuente de carbono sobre la conidiogenesis de hongos f ilamentosos (Vezina y co11965 Martinelli1976) en este estudio se pudo observar que cada cepa tiene caracteristicas fisiolcjgicas de esporulacidn propias con respecto al tipo de fuente de carbono que se le proporcione Para este caso en especial la cepa de Aniper esporuld mejor en Harina de Yuca A termus en M e l a z a B m i a m en Harinri de Trigo y T harzinnum en Harina de Yuca

------Esttuiaa - - h - - i s o s (lE5) han demostrado que la concentracidn de Nieeno prwente en el mampio de cup170 ejerce una influencia directa en el nuacutemero de conidiosporas producidas por Thurzjmm par 10 que era necesario seleccionar la relacioacuten CN oacuteptima para cada cepa y para cada sustrato

la composicioacuten de l o s medios de cultivo utilizados para llevar a cabo este estudio estb presentados en las tablas I 11 I11 y IV Se utilizaron 4 diferentes relaciones CN estas fueron de 101424 y 40 empleanda UM mezcla de 23 panes de Sulfato de Amonio y 13 parte de h a toanando- 128 g de carbono como base de caacutelculo y tiempos de incubacioacuten de 7 y 14 dias l o s experimentos se realizaron en matraces de 250 ml

Ln relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despueacutes de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Anigw son mostrados en la tabla X

h datos obtenidos para Aniger nos indican que cuardo se emplea Harina de Yuca en concentracich de 40 gl y la reiaci6n CN estaacute entre 10 y 40 no es un factor determinante en la conidiogeacutenesis ya que esporula de rnanera similar entre estos r a n g o s para l o s medio a base de Harina de Trigo la CN entre 40 y 24 es donde mejm esporulacidn se obtiene

r 5 3 2 - A s m i l ~ s t

h relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de espomlaci6n obtenidos aespuk de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Rtemxs son mostradrx en la tabla XI

Lns medios de cultivo con 14 dias de incubacidn presentan el mayor ntUnero de conidiospwas a una relaci6n CN de 14 con excepcih de l o s medios con Sacarosa que mostramn en todos l o s cc~sos un compm-tamiento muy pobre con respecto al n h de conidias producidas Los mejores Ie se log-amn con Harina de Yuca y M e l a z a con una relacidn CN de-14 para 14 dias de incubacidn

Lo relaci6n que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despuds de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para B b s s i a n a son mostrados en la tabla XII

b Ie logrados para B b n s s i m e son muy similares entre si es decir no cambian significativamente l o s Ie para l o s cultivos con 14 dias de inmbacidn son bastante altos siendo el medio de cultivo con una relaci6n CN de 14 y Melaza como fuente de carbono ei queposee el mejor Ie con un tiempo de incuhcidn de 14 dias BI esta cepa se ve su capacidad de adaptacioacuten con respecto a l a s anteriores para crecer en Sackrosa

~ r

27 534- Psnicilliue sp

kiaeiampi que exiate entre 1- necG~-edt-~vcv - y h rendimientos de esparulaciOacutentilde-6btenidos despds de 7 -_Fl4 dias de cultivo en matraces para FbnciIlium sp son mostrados en la tabla XILI

_

La relacidn CN entre 10 y40 no tiene una influencia directa en la conidioghnesis de esta cepa sin embargo se dbeewa una tendencia a la disminucioacuten del N de conidiospcwas producidas en los cultivos con 14 dias de incubacih Los mayores Ie se lcgrarcm con los medios de cultivo a bnse de Harina de Yuca y Harina de Trigo

La relaci6n que existe entre la composiciiquestn quiacutemica del medio de cultivo y l a s rendimientos de esporulaci6n obtenidos desples de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Thurzzanum son mostrados en la tabla XIV

Las resultados obtenidos 1x1s mestran unatendencia hacia la obtencioacuten del m y m Ie en rangos de CN de 10 a 14 y estudios hechos par Raussos (1985) sohre el efecto de la concentraci6n de Nitriquestgeno en la oanidiogdnesis de Thaniunum pnmporcionaron una CN optima de 14 utilizando Harina de Yuca corno fuente de curbno

Sin embxqo pura una CN de 3253 obtiene un Ie para 7 dias --de incubacidn de Q16x1On9 cmparando este resultado con el resultado obtenido en mi estudio encuentro que a una CN de 40 para 7 diQs de incubacibn tengo un Ie de 132xlO-9 esto es 13 veces mamp por lo que es dificil comparar estos datos en l o s resultados obtenidos se obsewa una tendencia para los cultivos con 14 dias de incubacidn de disminuir el Ie confarme aumenta la relacidn CN y para l a s cultivos con 7 dias se observn lo contrario Los Ie mus altos se logran con l o s medios de cultivo a base de Harinu de Yuca y Melaza

536- Conclusiones

Las cepas estudiadas eSp0IWlUn dependiendo del tipo de fuente de carbono la fuente de carbono y su naturaleza tiene m infiuencia directa en la conidiogeacutenesis de l o s hongos f ilamentosos que la concentracioacuten de nitrdgeno sin embargo es recamendable la adlcidn ae nitdgeno entre l o s rargos de CN de 10 a 4 0

Para disminuir l o s costos de pmduccioacuten de conidiosporas hay que optimizar los medics de cultivo nacer la seleccioacuten de una h e m fuente de carbono para cada cepa y trhjar en rangos de CN de 14 a 4 0

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
                                          • -- A
                                          • --
                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
                                          • M
Page 16: MATRICULA: 83323133.

F

432 Crecimiento--yespwulacion - - - -

Los cultivos se incuban a temperatura de laboratorio de 18 a 23C durante 7 y 14 dias Al fermentada- de discos se le suministra un flujo de aire estdril con un gasto de 4 lhr durante el periacuteodo de incubncioacuten

44 MEXDO PARA LA F9OJXJEION DE CONIDICSRXA5

Se conocen divemos amptodos para la pmducci6n de conidiosporas nosotras utilizaremos mntraces Erlen Meyer de 250 m1 y Fermentazdares de Discos

441 Matraces Erlen Heyer de 250 ml

El medio de cultivo se reparte en matraces Erlen Meyer de 250 m1 a rampn de 20 m1 par matraz y se obtura con un tapamp de algodoacuten se esteriliza en autoclave a 121C durante 20 min

442 Fermentada- de discos

El esquema del fermentada- de discos rotutorios utilizado se muestra en fmma detallada en la figura 1 El fermentador conteniendo300 m1 de medio de cultivo se esteriliza en autoclave a 121C por 45 min

-

e

a) Descripcioacuten del fermentada-

El fermentador de discos que se presenta en la fig 1 esta fannado por una cuba de vidrio la c u a l tiene una entrada y una salida en la parte superiorde la cuke se coloca una platina que tiene dos entradas una para realizar la inoculacioacuten del medio de cultivo y otra para airear esta platina sostiene un eje en el centro satre el eje se colocan 11 pares de discos formados por 2 m a l l a s de acero inoxidable de 2 mm de espesor y tamantildeo de malla de 4 mm c m un diaacutemetro de 10 c m y separados cuda par por 10 mm con unas rondanas especiales de acero inoxidable en el extremo inferior del eje se coloca una abrazadera la c u a l ejece presioacuten s e e l o s discos y con esto se mantienen fijos el total de 22 discos nos proporciona una superficie uacutetii de 172787 cm2 en la parte superior del eje se localiza un T la omi nos pemitlra colocar un motor y con esto hacer girar los disc-

b) Fimcionamiento y uso

El funcionamiento del fementaaor ae discos es de la siguiente manera LKB vez que se ha agregado e medic de cultivo y se ha esterilizado se coloca a un rotor de marera harizontal lo que nos permitiraacute mantener a l o s discos inmerso= en el medio ae cultivo y de esta forma una vezque se va enfrianio se adhiera a ellos el medic de cultivo se i m l a cunni0 se sncuentra en un promedio de

11

I ~

tempertura de 30 y 35CYTbl medio aun se encuentra licfuido) y asi poder tener una distriMciOacuten hanogenea de l a s esparas en el medio de cultivo (inoculacioacuten en masa) Una vez que el medio de cultivo se ha impregnado a l o s diecog el farmentador puede ser colocado de manera vertical en un l u g = adecuado

__ - - - - -

45 COSECHA Y CxlENrA DE EspoRAs

a) Para l o s cultivos en matraces se agmgu a cada uno 100 m1 de agua destilada estkil adicionada de Tbreen 80 (01) y se hunogeniza mediante agitacih magrktica

b) Para l o s cultivos en fementadares de discos 58 introduce al fermentadar 300 m1 de agua desti lada estampil adicionada de Tween 80 (01) y se mantienen los discos en rotaci6n durante 10 min

El conteo de l a s mas 88 realiza mediante el uso de kas de Malassez con suspensiones convenientemente diluidas y aplicando la siguiente f b l a

A + B + CJ = X 10 = N

A + B + C J = cuenta total de esporas en 10 cuhdros de la celda - x N - mimero de espmas pranedio

1D = factor de dilucioacuten 3

t

1 -Cuva

2 - P l a r i n a

3-Eje

4 -Disc05

5 - E n t rad2 zuper i or de l a cuva

6 - Sal ida i n f e r i o r d e l a cuva

- - Tapon d e entrada y s a l ida

r - 12

-

Medio I I I 3 I 4 I

I I 1 I I I I I Harim de I I I I

Yuca 4 0 4 0 4 0 I 4

I I I

Cgl) 1 1 I 2

I

I I I I I I

I I I I I I

(NH4)2904 402 287 167 100 I I I I

I 1 I I I

Urea 091 065 038 022

cac12 1 1 1 1 1 I 1 I

I I I I I I

I I I I

1 I 1 I I I

I ~~~ ~ ~ ~

I I I I

K H 2 p o 9 2 I 2 I 2 I 2 I I I I t I

I I I - I I I

Ag8r 15 15 I 15 I 15 I I I I 1 I I

I I I I I Agua (ml) loo0 1000 1000 1000

I I I I I

1 I I I I

I CN 10 I 14 I 24 I 40 I

I I I I I

I I I 1 I I

1 pH 56 56 156 56

I I I I I 1

Medio I I I I

Harim de I I I I

Trigo 5714 5714 5714 5714

(gl) I 1 1 2 I 3 I 4 I I I I I

I I I I I I

I I I I I 1

I I I I I I

(NH4)ZSX 402 287 167 100 I I I I I I

I I I I I I

u r e a 091 065 038 (322 I I I I I 1

1 I I I I I ~~ ~~ ~~~

I cac12 1 I 1 I 1 I 1 I

I I

~ I - s 2 I 2 I 2 I 2 I

e I I I I I

J q a r 15 15 I 15 I 15 I

I I

I I I I I I

I 1 I I I I

I I I I I

I I I I I I

Agua (m11 loo0 1000 1000 1000 I I 1 I I I

I I I I I I

I pH 56 56 56 56 I I I I I I

1 I I I I I

I cm 10 I 14 I 24 I 40 I I I I I I I

r

t

14

c

C_ de l o s medios S a m a camo

r

de cultivo para fuente de carbono

Hedio I I I I

(gl) 1 2 3 I 4 I

I I I I I I I I

I I

I I I I I

SaculmBa 3040 3 0 4 0 3040 3040 I I

I I

~ N l i 4 ) 2 S X 402 287 167 100 I I I

I I

1 I 1 I 1 I

I

I 2 I 2 I 2 I I I I

95

I I

I I

I I

I I

I I I I

urea 091 065 038 022 I I I

I I I I I I

cac12 1 m 2

I I I

I I I I

I I I

I I

Agar I 15 15 I 15 I I

I I I I I

Agua (m11 1000 1000 1000 1000 I I I I I I

56 56 56

L -

I I I

I I I I I

I pH 56

cN 10 14 24 4 0

I I I I I I

I I

I I

I I

I I

I I

I

r

Hedio

I I I

I I I I

(gl) 1

I I

I 2 I 3 4 I

I I

I I

I I I I I

M e l a z a 5470 5470 5470 5470 I I I I I I I (W)2S34 402 287 167 1-00 I I I I I I

I I I

I Urea 091 065 038 022 I I I

cac12 I 1 1 1 1 1 1

I

I I I

I

I

I I I

I I I I I

I I 1 I I I

m 2 I I I I

Agar 15 15

I 2 I 2 I 2 I

I

I I

e

I I I I

I 15 I 15 I

I -

I I

I I 1 I I I

Agw (m11 loo0 1000 1000 1000 1 I t I I

I I I p H 56 56 56 56 I I I I

CN 10 1 I 14 I 24 4 0 I I I I I I

I I I I I I

511- AsparYillus n i p -

de 3 dias aparecen farmas especializadas de reploduccian asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este se desarrolla UM vesicula y sobre la vesicula se

conidicsporas Estas conidospwas presentan un color cafe obscuro y n e g r o son gldbulares ornamentadas con un diumetro aproximado de 35 a 5 m La colonia cambia al c o l o r negro del centro B los ext remos

El micelio de este horgo es septa30 y de color blanco despues

desarrollan lae f ialides de las cuales se farmaran l a s

LA estructura de la fama de repruduccion se p-esenta en la figura 2

ru LA 7 V E S I CULA

ESTI P E

ELULA P O D A L

Figura 2 - Conidioforas y conidias de Aniger

El micelio de este h q o e8 septado de color blanco depea de 3 dias aparecen fonoas especializades de repmduccion asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este crecen fialides y de l a s fialides se forman las conidiosparas y presenta exudados ambarinoe Eetas conidiceparas presentan un color amarillo l a s conidiceporas son lisas glokulares con un diametro aproximado de 15 - 25 m

Figura 3 la estructura de la f a r m a de reproduction presenta en la

FIA

Figura 3- Conidioforos y coniaias de X t e

Este hongo presenta un micelio atercipelado y coposo inicialmente blanco presenta un raacutenquis genicula denticulado o en zigzag posteriarmente se tans amarillento Posee conidias hialinas y gldlxllams can un diaacutemetro aproximado de 15 a 3ym La estructura se presenta en la Figura 4

RANQU I S

c

Figura 4 - ConidiOacutefaros y conidias de E h s s i e n o

m cepa se ha identificado corno Penicillium W f a r t i i presenta un micelio septado con produccioacuten de micelio vegetativo aerial d e y e e de un tiempo aparecen estructurns especializadas de repocoduccion a s e x u a l Se presenta un estipe m e n t a d o unas brancpeas meacutetulas f M i d e s y conidias Elstas conidiosporas presentan un colap- verduzco son globdares y lisas con un dibtro apmximado de 4 a 6p Lae conidias son producidas en cadenas cortas La estructura se presenta en la Figura 5

C O N l D l A S

1 O r r m

Figura 5- Conidioacuteforos y coniaias de Fenicilliun

Al inicio este h q o presenta un micelio blanco pterionnente aprecen farmas especializadas de reproduccion asexual fialidee y conidicepuras I m conidiofaros se presentan en farmas piramidalee y en estos sistemas las fialidee Be localizan en g r u ~ w de dos a cuatro Las conidia3 Bon de color verde olivo son de superficie lisas subglobulares con un diametm apmximado de 2 a 3 m

La egtructura de la fcwma de reproduccion se presenta en la figura 6

Las colonias de Thnnianum en FDA se caracterizan pol tener un color verde con circulos concentricos Hay que mencionar que las colanias pmducen un olor a coco (coconut) muy caracteristico

CONlDl

Figura 6 - Conidioforos y conidias de Thanianum

516- Conclusiones v 4

_ _

el curse) de este capitulo se describieron los sietemas de reproduccioacuten de las cinco cepas de hongos filamentosos estudiados Todos estos hongos se repaoducen de manera a s e x u a l Se que l a s 5 cepas presentan estructuras muy diferentes a s i co~po diversos colores en l o s estadios de crecimiento vegetativo y ccmidiogdnesie ademds presentan conidimporas glohlares de muy diversos tamafios

c

093039 t

2 2

- La composicioacuten de l o s diferentes meampicsde cultvoutQizados pera llevar a cabo este estudio fueron medio N 2 de l a s tablas I 11111 y IV y se establecioacute prabay las diferentes fuentes de carbno (Harina de Yuca Harina de Pigo M e l a z a y Sacarosa) en matraces a una relaci6n CN de 14 para de esta manera poder observar el efecto que cada una de ell- ejerce solre la conidicgbesis de l o s hongos filamentosos estudiadas L m resultados se reman en l a s tablas V VI VII VI11 y XI y se exp-esan en base al Indice de Bporulacidn (Ie - N de esporas g de sustrato carbonado) para 7 dias de incubacion a temperatura ambiente (15-22C)

~ - -4

La Harim de Yuca es un producto amilaceo que ha demostrado ser un sustrato de gran eficiencia para la produccion de conidiosparas de hongos filamentosos ademds de ser un producto tropical de facil acceso su principal componente es el almidoacuten que corresponde al 80 en materia seca se encuentran en esta Harina pteiacutenas grasas y vitaminas del tipo B y C adamp de fibras y cenizas (Grace 1977)

la Harina de Pigo es otro sustrato amilaceo que se considerd importante utilizar debido a su alta disponibilidad en su canposicioacuten estan presentes pteiacutenas grw calcio f oacute s f m h i m tiamina riboflavina y niacina esto lo hace un sustrato interesante

La M e l a z a es el subproducto final de la fakicacioacuten de azucar es un liquido o b s c u r o denso y viscoso que se separa de la masa cocida de baja-calidad y del cual no se pede cristalizar ampamcar por amptodos mencionales y econoacutemicos en su composicioacuten estdn presentes 1 0 s amcares y otras sustancias entre l a s cuales se pueden citar l o s corapuestos nitrogenados aacutecidos aminoacidos albiminas vitaminas ceras esteroles lipid- sales minerales y cenizas etc (ICIDCA1986) Como se puede ver es un producto muy complejo por lo que puede ser un sustrato muy atractivo para su utilizaci6n como fuente de carbono en ipedios de cultivo pura la espomlaci6n de hongos filamentosos (Brinela 1987)

la s a c m a es un producto de facil adquisicioacuten y de pmduccioacuten idustrial importante por lo que se considem un sustrato atractivo para la produccioacuten de amidiosporas de hongos filamentosos La sacarosa se encuentra fonnada por una molecula de fructosa y una de glucosa l o s medios de cultivo que contienen sacarosa pcdriamos decir que son medios simples en comparacioacuten con la complejidad de la melaza y l a s harinas

521- A n i g ~

Fh la tabla V se muestran l o s Ie obtenidos para Anigerutilizardo l a s 4 fuentes de carbono antes mencionadas El mayor Ie se alcanzoacute en el medio de cultivo con k i n a de Yuca seguido de la M e l a z a la k i n a de Pigo y por Gltimo la Sacarosa se ha demostrado que durante el proceso de esterilizacioacuten la Harina de Yuca sufre un tratamiento teacutermico que hace que las moleacuteculas de almidh pasen cie una forma cristalina a un estado amdrfo (gelatinizacion) y que Ani_mr es un productm de amilasas (Raimbault 19801 lo que sugiere que la gelatinizacioacuten podriacutea facilitar el ataque enzimdtico y con esto i iberar cantidades importantes de glucosa que favoreced el crecilriiento del hongo lo que normalmente estaacute reiacionado con una produccioacuten importante de conidias

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I

I

I c- 7 DIAS

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 509xl0^9 I I I I

I I 1 I

Harina de Trigo 14 367X1^9 I I I

I I I I

Melaza 14 424x10-9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 16Ox10^8 I I I I

522- d t ~ 1 7 9 ~ ~

Eh la tabla VI se muestran l o s Ie obtenidos para A termus -utiliZando__las 4 fuentes de carbono antes mencionadas El Ie mas alto se encmtroacute en el medio de cultivo con M e l a z a seguido de la Yprina de Yuca y Trigo y por uacuteltimo la Sacarosa d t m u s es utilizado en lo s procesos de aprovechamiento de eubproductos de la industria cantildeera en cuba (meollo y bagazo) (Blanco bpez Villarl968) Esta cepa estaacute adaptada a l o s procesos de la industria cuntildeera de c u b a por lo que se esperariacutea que espurulara mejor en Melaza tal como ocurrioacute

TXBLA VI- Indices de espwulacibn para dtwreus utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa como fuente de carbono para tiempos de incubacidn de 7 dias y relacioacuten CN de 14

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I I I I I I 7 DIAS I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 60x10n9 I I I

Harina de pigo 14 403xlO-9

I I I

1 I I I

I I I I

M e l a z a 14 612xlOA9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 S40~107 1 I I

211

523- Bbassi= 1

Las resulta- 5e rem en la t ~ ~ h ~ f - - - ~ ~ - - ~ ~ e se -obtwo en el medio con Harina de Trigo m i d o de la H a r i n a de Yuca Melnza y Sacarosa Se puede obeervar que 1 0 s Ie amp altos se logran con los sustratos amiluceos que tal vez puedan ser mamp facilmente utilizados por el microoqanimno debido a l - v e s o de gelatinizacioacuten que Wren

524- Penicillium sp

Los resultados se muestran en la tabla VIII Los mayores le se alcanzaron con las Harims de Yuca y Trigo con respecto a los atros dos sustratos Se observoacute una mayor produccioacuten de micelio en los sustratos amilaceos lo que podria justificar la produccibn maacutes alta de conidias

525- Thnmianum

LBS resultados se reportan en la tabla XI Estudios hechos par Raussos (1985) demostraron la capacidad de Thanianum en la produccidn de ami la s a s utilizando almidoacuten cam0 fuente de carbono pesto que la harim de yuca y la harina de trigo son sustratos amilacecs se esperariacutea una produccioacuten impcortante de esporras tal COQLO sucedioacute para la harina de yuca y no asi para la harina de trigo Con respecto a la s a c m a el Ie tan bajo que se obtuvo con relacidn a la melaza pede ser debido a todos los compuestos que se encuentran en las m e l a z a s

c TABLA VI1- Inlices de esparcllacibn para Bhssiana utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo M e i u z a y Sacarosa axno fuente de carbono para tiempos de incubacioacuten de 7 dias y relacion CN de 14

I I I

I I I Ie I

Summ CN I I

1 I I I

I I

1 I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 1 8 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

7 DIAS

Harina de Pigo 14 702~10~9 I I I I

I I I

Melaza 14 217~10~9 I I I I

I I I I

Sacarosa i 14 8 5 8 ~ 1 0 ~ 6 I I I I

r

I I

I Ie 1

I Summ CN I

I 1 i I

I I 7 DIAS

I I I I

I 1 I I

Harina de Yuca 14 142x10^10 I I I I

I I I I

Harina de Pigo 14 832xlO-9 1 1 I I

I I I I

M e l a z a 14 293~10~9

I I I

Sacarosa 14 103x10n9

I I I I

I I I I

m IX-Indices de espauulacian para Thamianum utilizando Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa corno fuente de carbono para tiapos de incubacich de 7 dim y relacioacuten CN de 14

I I I I

I -

1 I Ie I

I Summ CN I

I I 7 D I A S t I I I

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 11ox1On1O I I I I

I I I I

Harina de Trigo 14 12Ox10-9 I I I I

I I I I

M e l a z a 14 875~10~9 I I I I

I

Sacarosa I

I i I

14 11Ox10^8 I I I

526- Conclusiones

Varios autores han demostrado la importancia de la fuente de carbono sobre la conidiogenesis de hongos f ilamentosos (Vezina y co11965 Martinelli1976) en este estudio se pudo observar que cada cepa tiene caracteristicas fisiolcjgicas de esporulacidn propias con respecto al tipo de fuente de carbono que se le proporcione Para este caso en especial la cepa de Aniper esporuld mejor en Harina de Yuca A termus en M e l a z a B m i a m en Harinri de Trigo y T harzinnum en Harina de Yuca

------Esttuiaa - - h - - i s o s (lE5) han demostrado que la concentracidn de Nieeno prwente en el mampio de cup170 ejerce una influencia directa en el nuacutemero de conidiosporas producidas por Thurzjmm par 10 que era necesario seleccionar la relacioacuten CN oacuteptima para cada cepa y para cada sustrato

la composicioacuten de l o s medios de cultivo utilizados para llevar a cabo este estudio estb presentados en las tablas I 11 I11 y IV Se utilizaron 4 diferentes relaciones CN estas fueron de 101424 y 40 empleanda UM mezcla de 23 panes de Sulfato de Amonio y 13 parte de h a toanando- 128 g de carbono como base de caacutelculo y tiempos de incubacioacuten de 7 y 14 dias l o s experimentos se realizaron en matraces de 250 ml

Ln relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despueacutes de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Anigw son mostrados en la tabla X

h datos obtenidos para Aniger nos indican que cuardo se emplea Harina de Yuca en concentracich de 40 gl y la reiaci6n CN estaacute entre 10 y 40 no es un factor determinante en la conidiogeacutenesis ya que esporula de rnanera similar entre estos r a n g o s para l o s medio a base de Harina de Trigo la CN entre 40 y 24 es donde mejm esporulacidn se obtiene

r 5 3 2 - A s m i l ~ s t

h relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de espomlaci6n obtenidos aespuk de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Rtemxs son mostradrx en la tabla XI

Lns medios de cultivo con 14 dias de incubacidn presentan el mayor ntUnero de conidiospwas a una relaci6n CN de 14 con excepcih de l o s medios con Sacarosa que mostramn en todos l o s cc~sos un compm-tamiento muy pobre con respecto al n h de conidias producidas Los mejores Ie se log-amn con Harina de Yuca y M e l a z a con una relacidn CN de-14 para 14 dias de incubacidn

Lo relaci6n que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despuds de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para B b s s i a n a son mostrados en la tabla XII

b Ie logrados para B b n s s i m e son muy similares entre si es decir no cambian significativamente l o s Ie para l o s cultivos con 14 dias de inmbacidn son bastante altos siendo el medio de cultivo con una relaci6n CN de 14 y Melaza como fuente de carbono ei queposee el mejor Ie con un tiempo de incuhcidn de 14 dias BI esta cepa se ve su capacidad de adaptacioacuten con respecto a l a s anteriores para crecer en Sackrosa

~ r

27 534- Psnicilliue sp

kiaeiampi que exiate entre 1- necG~-edt-~vcv - y h rendimientos de esparulaciOacutentilde-6btenidos despds de 7 -_Fl4 dias de cultivo en matraces para FbnciIlium sp son mostrados en la tabla XILI

_

La relacidn CN entre 10 y40 no tiene una influencia directa en la conidioghnesis de esta cepa sin embargo se dbeewa una tendencia a la disminucioacuten del N de conidiospcwas producidas en los cultivos con 14 dias de incubacih Los mayores Ie se lcgrarcm con los medios de cultivo a bnse de Harina de Yuca y Harina de Trigo

La relaci6n que existe entre la composiciiquestn quiacutemica del medio de cultivo y l a s rendimientos de esporulaci6n obtenidos desples de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Thurzzanum son mostrados en la tabla XIV

Las resultados obtenidos 1x1s mestran unatendencia hacia la obtencioacuten del m y m Ie en rangos de CN de 10 a 14 y estudios hechos par Raussos (1985) sohre el efecto de la concentraci6n de Nitriquestgeno en la oanidiogdnesis de Thaniunum pnmporcionaron una CN optima de 14 utilizando Harina de Yuca corno fuente de curbno

Sin embxqo pura una CN de 3253 obtiene un Ie para 7 dias --de incubacidn de Q16x1On9 cmparando este resultado con el resultado obtenido en mi estudio encuentro que a una CN de 40 para 7 diQs de incubacibn tengo un Ie de 132xlO-9 esto es 13 veces mamp por lo que es dificil comparar estos datos en l o s resultados obtenidos se obsewa una tendencia para los cultivos con 14 dias de incubacidn de disminuir el Ie confarme aumenta la relacidn CN y para l a s cultivos con 7 dias se observn lo contrario Los Ie mus altos se logran con l o s medios de cultivo a base de Harinu de Yuca y Melaza

536- Conclusiones

Las cepas estudiadas eSp0IWlUn dependiendo del tipo de fuente de carbono la fuente de carbono y su naturaleza tiene m infiuencia directa en la conidiogeacutenesis de l o s hongos f ilamentosos que la concentracioacuten de nitrdgeno sin embargo es recamendable la adlcidn ae nitdgeno entre l o s rargos de CN de 10 a 4 0

Para disminuir l o s costos de pmduccioacuten de conidiosporas hay que optimizar los medics de cultivo nacer la seleccioacuten de una h e m fuente de carbono para cada cepa y trhjar en rangos de CN de 14 a 4 0

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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I t I

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
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                                          • I I
                                          • M
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11

I ~

tempertura de 30 y 35CYTbl medio aun se encuentra licfuido) y asi poder tener una distriMciOacuten hanogenea de l a s esparas en el medio de cultivo (inoculacioacuten en masa) Una vez que el medio de cultivo se ha impregnado a l o s diecog el farmentador puede ser colocado de manera vertical en un l u g = adecuado

__ - - - - -

45 COSECHA Y CxlENrA DE EspoRAs

a) Para l o s cultivos en matraces se agmgu a cada uno 100 m1 de agua destilada estkil adicionada de Tbreen 80 (01) y se hunogeniza mediante agitacih magrktica

b) Para l o s cultivos en fementadares de discos 58 introduce al fermentadar 300 m1 de agua desti lada estampil adicionada de Tween 80 (01) y se mantienen los discos en rotaci6n durante 10 min

El conteo de l a s mas 88 realiza mediante el uso de kas de Malassez con suspensiones convenientemente diluidas y aplicando la siguiente f b l a

A + B + CJ = X 10 = N

A + B + C J = cuenta total de esporas en 10 cuhdros de la celda - x N - mimero de espmas pranedio

1D = factor de dilucioacuten 3

t

1 -Cuva

2 - P l a r i n a

3-Eje

4 -Disc05

5 - E n t rad2 zuper i or de l a cuva

6 - Sal ida i n f e r i o r d e l a cuva

- - Tapon d e entrada y s a l ida

r - 12

-

Medio I I I 3 I 4 I

I I 1 I I I I I Harim de I I I I

Yuca 4 0 4 0 4 0 I 4

I I I

Cgl) 1 1 I 2

I

I I I I I I

I I I I I I

(NH4)2904 402 287 167 100 I I I I

I 1 I I I

Urea 091 065 038 022

cac12 1 1 1 1 1 I 1 I

I I I I I I

I I I I

1 I 1 I I I

I ~~~ ~ ~ ~

I I I I

K H 2 p o 9 2 I 2 I 2 I 2 I I I I t I

I I I - I I I

Ag8r 15 15 I 15 I 15 I I I I 1 I I

I I I I I Agua (ml) loo0 1000 1000 1000

I I I I I

1 I I I I

I CN 10 I 14 I 24 I 40 I

I I I I I

I I I 1 I I

1 pH 56 56 156 56

I I I I I 1

Medio I I I I

Harim de I I I I

Trigo 5714 5714 5714 5714

(gl) I 1 1 2 I 3 I 4 I I I I I

I I I I I I

I I I I I 1

I I I I I I

(NH4)ZSX 402 287 167 100 I I I I I I

I I I I I I

u r e a 091 065 038 (322 I I I I I 1

1 I I I I I ~~ ~~ ~~~

I cac12 1 I 1 I 1 I 1 I

I I

~ I - s 2 I 2 I 2 I 2 I

e I I I I I

J q a r 15 15 I 15 I 15 I

I I

I I I I I I

I 1 I I I I

I I I I I

I I I I I I

Agua (m11 loo0 1000 1000 1000 I I 1 I I I

I I I I I I

I pH 56 56 56 56 I I I I I I

1 I I I I I

I cm 10 I 14 I 24 I 40 I I I I I I I

r

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14

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C_ de l o s medios S a m a camo

r

de cultivo para fuente de carbono

Hedio I I I I

(gl) 1 2 3 I 4 I

I I I I I I I I

I I

I I I I I

SaculmBa 3040 3 0 4 0 3040 3040 I I

I I

~ N l i 4 ) 2 S X 402 287 167 100 I I I

I I

1 I 1 I 1 I

I

I 2 I 2 I 2 I I I I

95

I I

I I

I I

I I

I I I I

urea 091 065 038 022 I I I

I I I I I I

cac12 1 m 2

I I I

I I I I

I I I

I I

Agar I 15 15 I 15 I I

I I I I I

Agua (m11 1000 1000 1000 1000 I I I I I I

56 56 56

L -

I I I

I I I I I

I pH 56

cN 10 14 24 4 0

I I I I I I

I I

I I

I I

I I

I I

I

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Hedio

I I I

I I I I

(gl) 1

I I

I 2 I 3 4 I

I I

I I

I I I I I

M e l a z a 5470 5470 5470 5470 I I I I I I I (W)2S34 402 287 167 1-00 I I I I I I

I I I

I Urea 091 065 038 022 I I I

cac12 I 1 1 1 1 1 1

I

I I I

I

I

I I I

I I I I I

I I 1 I I I

m 2 I I I I

Agar 15 15

I 2 I 2 I 2 I

I

I I

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I I I I

I 15 I 15 I

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I I

I I 1 I I I

Agw (m11 loo0 1000 1000 1000 1 I t I I

I I I p H 56 56 56 56 I I I I

CN 10 1 I 14 I 24 4 0 I I I I I I

I I I I I I

511- AsparYillus n i p -

de 3 dias aparecen farmas especializadas de reploduccian asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este se desarrolla UM vesicula y sobre la vesicula se

conidicsporas Estas conidospwas presentan un color cafe obscuro y n e g r o son gldbulares ornamentadas con un diumetro aproximado de 35 a 5 m La colonia cambia al c o l o r negro del centro B los ext remos

El micelio de este horgo es septa30 y de color blanco despues

desarrollan lae f ialides de las cuales se farmaran l a s

LA estructura de la fama de repruduccion se p-esenta en la figura 2

ru LA 7 V E S I CULA

ESTI P E

ELULA P O D A L

Figura 2 - Conidioforas y conidias de Aniger

El micelio de este h q o e8 septado de color blanco depea de 3 dias aparecen fonoas especializades de repmduccion asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este crecen fialides y de l a s fialides se forman las conidiosparas y presenta exudados ambarinoe Eetas conidiceparas presentan un color amarillo l a s conidiceporas son lisas glokulares con un diametro aproximado de 15 - 25 m

Figura 3 la estructura de la f a r m a de reproduction presenta en la

FIA

Figura 3- Conidioforos y coniaias de X t e

Este hongo presenta un micelio atercipelado y coposo inicialmente blanco presenta un raacutenquis genicula denticulado o en zigzag posteriarmente se tans amarillento Posee conidias hialinas y gldlxllams can un diaacutemetro aproximado de 15 a 3ym La estructura se presenta en la Figura 4

RANQU I S

c

Figura 4 - ConidiOacutefaros y conidias de E h s s i e n o

m cepa se ha identificado corno Penicillium W f a r t i i presenta un micelio septado con produccioacuten de micelio vegetativo aerial d e y e e de un tiempo aparecen estructurns especializadas de repocoduccion a s e x u a l Se presenta un estipe m e n t a d o unas brancpeas meacutetulas f M i d e s y conidias Elstas conidiosporas presentan un colap- verduzco son globdares y lisas con un dibtro apmximado de 4 a 6p Lae conidias son producidas en cadenas cortas La estructura se presenta en la Figura 5

C O N l D l A S

1 O r r m

Figura 5- Conidioacuteforos y coniaias de Fenicilliun

Al inicio este h q o presenta un micelio blanco pterionnente aprecen farmas especializadas de reproduccion asexual fialidee y conidicepuras I m conidiofaros se presentan en farmas piramidalee y en estos sistemas las fialidee Be localizan en g r u ~ w de dos a cuatro Las conidia3 Bon de color verde olivo son de superficie lisas subglobulares con un diametm apmximado de 2 a 3 m

La egtructura de la fcwma de reproduccion se presenta en la figura 6

Las colonias de Thnnianum en FDA se caracterizan pol tener un color verde con circulos concentricos Hay que mencionar que las colanias pmducen un olor a coco (coconut) muy caracteristico

CONlDl

Figura 6 - Conidioforos y conidias de Thanianum

516- Conclusiones v 4

_ _

el curse) de este capitulo se describieron los sietemas de reproduccioacuten de las cinco cepas de hongos filamentosos estudiados Todos estos hongos se repaoducen de manera a s e x u a l Se que l a s 5 cepas presentan estructuras muy diferentes a s i co~po diversos colores en l o s estadios de crecimiento vegetativo y ccmidiogdnesie ademds presentan conidimporas glohlares de muy diversos tamafios

c

093039 t

2 2

- La composicioacuten de l o s diferentes meampicsde cultvoutQizados pera llevar a cabo este estudio fueron medio N 2 de l a s tablas I 11111 y IV y se establecioacute prabay las diferentes fuentes de carbno (Harina de Yuca Harina de Pigo M e l a z a y Sacarosa) en matraces a una relaci6n CN de 14 para de esta manera poder observar el efecto que cada una de ell- ejerce solre la conidicgbesis de l o s hongos filamentosos estudiadas L m resultados se reman en l a s tablas V VI VII VI11 y XI y se exp-esan en base al Indice de Bporulacidn (Ie - N de esporas g de sustrato carbonado) para 7 dias de incubacion a temperatura ambiente (15-22C)

~ - -4

La Harim de Yuca es un producto amilaceo que ha demostrado ser un sustrato de gran eficiencia para la produccion de conidiosparas de hongos filamentosos ademds de ser un producto tropical de facil acceso su principal componente es el almidoacuten que corresponde al 80 en materia seca se encuentran en esta Harina pteiacutenas grasas y vitaminas del tipo B y C adamp de fibras y cenizas (Grace 1977)

la Harina de Pigo es otro sustrato amilaceo que se considerd importante utilizar debido a su alta disponibilidad en su canposicioacuten estan presentes pteiacutenas grw calcio f oacute s f m h i m tiamina riboflavina y niacina esto lo hace un sustrato interesante

La M e l a z a es el subproducto final de la fakicacioacuten de azucar es un liquido o b s c u r o denso y viscoso que se separa de la masa cocida de baja-calidad y del cual no se pede cristalizar ampamcar por amptodos mencionales y econoacutemicos en su composicioacuten estdn presentes 1 0 s amcares y otras sustancias entre l a s cuales se pueden citar l o s corapuestos nitrogenados aacutecidos aminoacidos albiminas vitaminas ceras esteroles lipid- sales minerales y cenizas etc (ICIDCA1986) Como se puede ver es un producto muy complejo por lo que puede ser un sustrato muy atractivo para su utilizaci6n como fuente de carbono en ipedios de cultivo pura la espomlaci6n de hongos filamentosos (Brinela 1987)

la s a c m a es un producto de facil adquisicioacuten y de pmduccioacuten idustrial importante por lo que se considem un sustrato atractivo para la produccioacuten de amidiosporas de hongos filamentosos La sacarosa se encuentra fonnada por una molecula de fructosa y una de glucosa l o s medios de cultivo que contienen sacarosa pcdriamos decir que son medios simples en comparacioacuten con la complejidad de la melaza y l a s harinas

521- A n i g ~

Fh la tabla V se muestran l o s Ie obtenidos para Anigerutilizardo l a s 4 fuentes de carbono antes mencionadas El mayor Ie se alcanzoacute en el medio de cultivo con k i n a de Yuca seguido de la M e l a z a la k i n a de Pigo y por Gltimo la Sacarosa se ha demostrado que durante el proceso de esterilizacioacuten la Harina de Yuca sufre un tratamiento teacutermico que hace que las moleacuteculas de almidh pasen cie una forma cristalina a un estado amdrfo (gelatinizacion) y que Ani_mr es un productm de amilasas (Raimbault 19801 lo que sugiere que la gelatinizacioacuten podriacutea facilitar el ataque enzimdtico y con esto i iberar cantidades importantes de glucosa que favoreced el crecilriiento del hongo lo que normalmente estaacute reiacionado con una produccioacuten importante de conidias

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I

I

I c- 7 DIAS

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 509xl0^9 I I I I

I I 1 I

Harina de Trigo 14 367X1^9 I I I

I I I I

Melaza 14 424x10-9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 16Ox10^8 I I I I

522- d t ~ 1 7 9 ~ ~

Eh la tabla VI se muestran l o s Ie obtenidos para A termus -utiliZando__las 4 fuentes de carbono antes mencionadas El Ie mas alto se encmtroacute en el medio de cultivo con M e l a z a seguido de la Yprina de Yuca y Trigo y por uacuteltimo la Sacarosa d t m u s es utilizado en lo s procesos de aprovechamiento de eubproductos de la industria cantildeera en cuba (meollo y bagazo) (Blanco bpez Villarl968) Esta cepa estaacute adaptada a l o s procesos de la industria cuntildeera de c u b a por lo que se esperariacutea que espurulara mejor en Melaza tal como ocurrioacute

TXBLA VI- Indices de espwulacibn para dtwreus utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa como fuente de carbono para tiempos de incubacidn de 7 dias y relacioacuten CN de 14

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I I I I I I 7 DIAS I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 60x10n9 I I I

Harina de pigo 14 403xlO-9

I I I

1 I I I

I I I I

M e l a z a 14 612xlOA9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 S40~107 1 I I

211

523- Bbassi= 1

Las resulta- 5e rem en la t ~ ~ h ~ f - - - ~ ~ - - ~ ~ e se -obtwo en el medio con Harina de Trigo m i d o de la H a r i n a de Yuca Melnza y Sacarosa Se puede obeervar que 1 0 s Ie amp altos se logran con los sustratos amiluceos que tal vez puedan ser mamp facilmente utilizados por el microoqanimno debido a l - v e s o de gelatinizacioacuten que Wren

524- Penicillium sp

Los resultados se muestran en la tabla VIII Los mayores le se alcanzaron con las Harims de Yuca y Trigo con respecto a los atros dos sustratos Se observoacute una mayor produccioacuten de micelio en los sustratos amilaceos lo que podria justificar la produccibn maacutes alta de conidias

525- Thnmianum

LBS resultados se reportan en la tabla XI Estudios hechos par Raussos (1985) demostraron la capacidad de Thanianum en la produccidn de ami la s a s utilizando almidoacuten cam0 fuente de carbono pesto que la harim de yuca y la harina de trigo son sustratos amilacecs se esperariacutea una produccioacuten impcortante de esporras tal COQLO sucedioacute para la harina de yuca y no asi para la harina de trigo Con respecto a la s a c m a el Ie tan bajo que se obtuvo con relacidn a la melaza pede ser debido a todos los compuestos que se encuentran en las m e l a z a s

c TABLA VI1- Inlices de esparcllacibn para Bhssiana utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo M e i u z a y Sacarosa axno fuente de carbono para tiempos de incubacioacuten de 7 dias y relacion CN de 14

I I I

I I I Ie I

Summ CN I I

1 I I I

I I

1 I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 1 8 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

7 DIAS

Harina de Pigo 14 702~10~9 I I I I

I I I

Melaza 14 217~10~9 I I I I

I I I I

Sacarosa i 14 8 5 8 ~ 1 0 ~ 6 I I I I

r

I I

I Ie 1

I Summ CN I

I 1 i I

I I 7 DIAS

I I I I

I 1 I I

Harina de Yuca 14 142x10^10 I I I I

I I I I

Harina de Pigo 14 832xlO-9 1 1 I I

I I I I

M e l a z a 14 293~10~9

I I I

Sacarosa 14 103x10n9

I I I I

I I I I

m IX-Indices de espauulacian para Thamianum utilizando Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa corno fuente de carbono para tiapos de incubacich de 7 dim y relacioacuten CN de 14

I I I I

I -

1 I Ie I

I Summ CN I

I I 7 D I A S t I I I

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 11ox1On1O I I I I

I I I I

Harina de Trigo 14 12Ox10-9 I I I I

I I I I

M e l a z a 14 875~10~9 I I I I

I

Sacarosa I

I i I

14 11Ox10^8 I I I

526- Conclusiones

Varios autores han demostrado la importancia de la fuente de carbono sobre la conidiogenesis de hongos f ilamentosos (Vezina y co11965 Martinelli1976) en este estudio se pudo observar que cada cepa tiene caracteristicas fisiolcjgicas de esporulacidn propias con respecto al tipo de fuente de carbono que se le proporcione Para este caso en especial la cepa de Aniper esporuld mejor en Harina de Yuca A termus en M e l a z a B m i a m en Harinri de Trigo y T harzinnum en Harina de Yuca

------Esttuiaa - - h - - i s o s (lE5) han demostrado que la concentracidn de Nieeno prwente en el mampio de cup170 ejerce una influencia directa en el nuacutemero de conidiosporas producidas por Thurzjmm par 10 que era necesario seleccionar la relacioacuten CN oacuteptima para cada cepa y para cada sustrato

la composicioacuten de l o s medios de cultivo utilizados para llevar a cabo este estudio estb presentados en las tablas I 11 I11 y IV Se utilizaron 4 diferentes relaciones CN estas fueron de 101424 y 40 empleanda UM mezcla de 23 panes de Sulfato de Amonio y 13 parte de h a toanando- 128 g de carbono como base de caacutelculo y tiempos de incubacioacuten de 7 y 14 dias l o s experimentos se realizaron en matraces de 250 ml

Ln relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despueacutes de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Anigw son mostrados en la tabla X

h datos obtenidos para Aniger nos indican que cuardo se emplea Harina de Yuca en concentracich de 40 gl y la reiaci6n CN estaacute entre 10 y 40 no es un factor determinante en la conidiogeacutenesis ya que esporula de rnanera similar entre estos r a n g o s para l o s medio a base de Harina de Trigo la CN entre 40 y 24 es donde mejm esporulacidn se obtiene

r 5 3 2 - A s m i l ~ s t

h relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de espomlaci6n obtenidos aespuk de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Rtemxs son mostradrx en la tabla XI

Lns medios de cultivo con 14 dias de incubacidn presentan el mayor ntUnero de conidiospwas a una relaci6n CN de 14 con excepcih de l o s medios con Sacarosa que mostramn en todos l o s cc~sos un compm-tamiento muy pobre con respecto al n h de conidias producidas Los mejores Ie se log-amn con Harina de Yuca y M e l a z a con una relacidn CN de-14 para 14 dias de incubacidn

Lo relaci6n que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despuds de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para B b s s i a n a son mostrados en la tabla XII

b Ie logrados para B b n s s i m e son muy similares entre si es decir no cambian significativamente l o s Ie para l o s cultivos con 14 dias de inmbacidn son bastante altos siendo el medio de cultivo con una relaci6n CN de 14 y Melaza como fuente de carbono ei queposee el mejor Ie con un tiempo de incuhcidn de 14 dias BI esta cepa se ve su capacidad de adaptacioacuten con respecto a l a s anteriores para crecer en Sackrosa

~ r

27 534- Psnicilliue sp

kiaeiampi que exiate entre 1- necG~-edt-~vcv - y h rendimientos de esparulaciOacutentilde-6btenidos despds de 7 -_Fl4 dias de cultivo en matraces para FbnciIlium sp son mostrados en la tabla XILI

_

La relacidn CN entre 10 y40 no tiene una influencia directa en la conidioghnesis de esta cepa sin embargo se dbeewa una tendencia a la disminucioacuten del N de conidiospcwas producidas en los cultivos con 14 dias de incubacih Los mayores Ie se lcgrarcm con los medios de cultivo a bnse de Harina de Yuca y Harina de Trigo

La relaci6n que existe entre la composiciiquestn quiacutemica del medio de cultivo y l a s rendimientos de esporulaci6n obtenidos desples de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Thurzzanum son mostrados en la tabla XIV

Las resultados obtenidos 1x1s mestran unatendencia hacia la obtencioacuten del m y m Ie en rangos de CN de 10 a 14 y estudios hechos par Raussos (1985) sohre el efecto de la concentraci6n de Nitriquestgeno en la oanidiogdnesis de Thaniunum pnmporcionaron una CN optima de 14 utilizando Harina de Yuca corno fuente de curbno

Sin embxqo pura una CN de 3253 obtiene un Ie para 7 dias --de incubacidn de Q16x1On9 cmparando este resultado con el resultado obtenido en mi estudio encuentro que a una CN de 40 para 7 diQs de incubacibn tengo un Ie de 132xlO-9 esto es 13 veces mamp por lo que es dificil comparar estos datos en l o s resultados obtenidos se obsewa una tendencia para los cultivos con 14 dias de incubacidn de disminuir el Ie confarme aumenta la relacidn CN y para l a s cultivos con 7 dias se observn lo contrario Los Ie mus altos se logran con l o s medios de cultivo a base de Harinu de Yuca y Melaza

536- Conclusiones

Las cepas estudiadas eSp0IWlUn dependiendo del tipo de fuente de carbono la fuente de carbono y su naturaleza tiene m infiuencia directa en la conidiogeacutenesis de l o s hongos f ilamentosos que la concentracioacuten de nitrdgeno sin embargo es recamendable la adlcidn ae nitdgeno entre l o s rargos de CN de 10 a 4 0

Para disminuir l o s costos de pmduccioacuten de conidiosporas hay que optimizar los medics de cultivo nacer la seleccioacuten de una h e m fuente de carbono para cada cepa y trhjar en rangos de CN de 14 a 4 0

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
                                          • -- A
                                          • --
                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
                                          • M
Page 18: MATRICULA: 83323133.

r - 12

-

Medio I I I 3 I 4 I

I I 1 I I I I I Harim de I I I I

Yuca 4 0 4 0 4 0 I 4

I I I

Cgl) 1 1 I 2

I

I I I I I I

I I I I I I

(NH4)2904 402 287 167 100 I I I I

I 1 I I I

Urea 091 065 038 022

cac12 1 1 1 1 1 I 1 I

I I I I I I

I I I I

1 I 1 I I I

I ~~~ ~ ~ ~

I I I I

K H 2 p o 9 2 I 2 I 2 I 2 I I I I t I

I I I - I I I

Ag8r 15 15 I 15 I 15 I I I I 1 I I

I I I I I Agua (ml) loo0 1000 1000 1000

I I I I I

1 I I I I

I CN 10 I 14 I 24 I 40 I

I I I I I

I I I 1 I I

1 pH 56 56 156 56

I I I I I 1

Medio I I I I

Harim de I I I I

Trigo 5714 5714 5714 5714

(gl) I 1 1 2 I 3 I 4 I I I I I

I I I I I I

I I I I I 1

I I I I I I

(NH4)ZSX 402 287 167 100 I I I I I I

I I I I I I

u r e a 091 065 038 (322 I I I I I 1

1 I I I I I ~~ ~~ ~~~

I cac12 1 I 1 I 1 I 1 I

I I

~ I - s 2 I 2 I 2 I 2 I

e I I I I I

J q a r 15 15 I 15 I 15 I

I I

I I I I I I

I 1 I I I I

I I I I I

I I I I I I

Agua (m11 loo0 1000 1000 1000 I I 1 I I I

I I I I I I

I pH 56 56 56 56 I I I I I I

1 I I I I I

I cm 10 I 14 I 24 I 40 I I I I I I I

r

t

14

c

C_ de l o s medios S a m a camo

r

de cultivo para fuente de carbono

Hedio I I I I

(gl) 1 2 3 I 4 I

I I I I I I I I

I I

I I I I I

SaculmBa 3040 3 0 4 0 3040 3040 I I

I I

~ N l i 4 ) 2 S X 402 287 167 100 I I I

I I

1 I 1 I 1 I

I

I 2 I 2 I 2 I I I I

95

I I

I I

I I

I I

I I I I

urea 091 065 038 022 I I I

I I I I I I

cac12 1 m 2

I I I

I I I I

I I I

I I

Agar I 15 15 I 15 I I

I I I I I

Agua (m11 1000 1000 1000 1000 I I I I I I

56 56 56

L -

I I I

I I I I I

I pH 56

cN 10 14 24 4 0

I I I I I I

I I

I I

I I

I I

I I

I

r

Hedio

I I I

I I I I

(gl) 1

I I

I 2 I 3 4 I

I I

I I

I I I I I

M e l a z a 5470 5470 5470 5470 I I I I I I I (W)2S34 402 287 167 1-00 I I I I I I

I I I

I Urea 091 065 038 022 I I I

cac12 I 1 1 1 1 1 1

I

I I I

I

I

I I I

I I I I I

I I 1 I I I

m 2 I I I I

Agar 15 15

I 2 I 2 I 2 I

I

I I

e

I I I I

I 15 I 15 I

I -

I I

I I 1 I I I

Agw (m11 loo0 1000 1000 1000 1 I t I I

I I I p H 56 56 56 56 I I I I

CN 10 1 I 14 I 24 4 0 I I I I I I

I I I I I I

511- AsparYillus n i p -

de 3 dias aparecen farmas especializadas de reploduccian asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este se desarrolla UM vesicula y sobre la vesicula se

conidicsporas Estas conidospwas presentan un color cafe obscuro y n e g r o son gldbulares ornamentadas con un diumetro aproximado de 35 a 5 m La colonia cambia al c o l o r negro del centro B los ext remos

El micelio de este horgo es septa30 y de color blanco despues

desarrollan lae f ialides de las cuales se farmaran l a s

LA estructura de la fama de repruduccion se p-esenta en la figura 2

ru LA 7 V E S I CULA

ESTI P E

ELULA P O D A L

Figura 2 - Conidioforas y conidias de Aniger

El micelio de este h q o e8 septado de color blanco depea de 3 dias aparecen fonoas especializades de repmduccion asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este crecen fialides y de l a s fialides se forman las conidiosparas y presenta exudados ambarinoe Eetas conidiceparas presentan un color amarillo l a s conidiceporas son lisas glokulares con un diametro aproximado de 15 - 25 m

Figura 3 la estructura de la f a r m a de reproduction presenta en la

FIA

Figura 3- Conidioforos y coniaias de X t e

Este hongo presenta un micelio atercipelado y coposo inicialmente blanco presenta un raacutenquis genicula denticulado o en zigzag posteriarmente se tans amarillento Posee conidias hialinas y gldlxllams can un diaacutemetro aproximado de 15 a 3ym La estructura se presenta en la Figura 4

RANQU I S

c

Figura 4 - ConidiOacutefaros y conidias de E h s s i e n o

m cepa se ha identificado corno Penicillium W f a r t i i presenta un micelio septado con produccioacuten de micelio vegetativo aerial d e y e e de un tiempo aparecen estructurns especializadas de repocoduccion a s e x u a l Se presenta un estipe m e n t a d o unas brancpeas meacutetulas f M i d e s y conidias Elstas conidiosporas presentan un colap- verduzco son globdares y lisas con un dibtro apmximado de 4 a 6p Lae conidias son producidas en cadenas cortas La estructura se presenta en la Figura 5

C O N l D l A S

1 O r r m

Figura 5- Conidioacuteforos y coniaias de Fenicilliun

Al inicio este h q o presenta un micelio blanco pterionnente aprecen farmas especializadas de reproduccion asexual fialidee y conidicepuras I m conidiofaros se presentan en farmas piramidalee y en estos sistemas las fialidee Be localizan en g r u ~ w de dos a cuatro Las conidia3 Bon de color verde olivo son de superficie lisas subglobulares con un diametm apmximado de 2 a 3 m

La egtructura de la fcwma de reproduccion se presenta en la figura 6

Las colonias de Thnnianum en FDA se caracterizan pol tener un color verde con circulos concentricos Hay que mencionar que las colanias pmducen un olor a coco (coconut) muy caracteristico

CONlDl

Figura 6 - Conidioforos y conidias de Thanianum

516- Conclusiones v 4

_ _

el curse) de este capitulo se describieron los sietemas de reproduccioacuten de las cinco cepas de hongos filamentosos estudiados Todos estos hongos se repaoducen de manera a s e x u a l Se que l a s 5 cepas presentan estructuras muy diferentes a s i co~po diversos colores en l o s estadios de crecimiento vegetativo y ccmidiogdnesie ademds presentan conidimporas glohlares de muy diversos tamafios

c

093039 t

2 2

- La composicioacuten de l o s diferentes meampicsde cultvoutQizados pera llevar a cabo este estudio fueron medio N 2 de l a s tablas I 11111 y IV y se establecioacute prabay las diferentes fuentes de carbno (Harina de Yuca Harina de Pigo M e l a z a y Sacarosa) en matraces a una relaci6n CN de 14 para de esta manera poder observar el efecto que cada una de ell- ejerce solre la conidicgbesis de l o s hongos filamentosos estudiadas L m resultados se reman en l a s tablas V VI VII VI11 y XI y se exp-esan en base al Indice de Bporulacidn (Ie - N de esporas g de sustrato carbonado) para 7 dias de incubacion a temperatura ambiente (15-22C)

~ - -4

La Harim de Yuca es un producto amilaceo que ha demostrado ser un sustrato de gran eficiencia para la produccion de conidiosparas de hongos filamentosos ademds de ser un producto tropical de facil acceso su principal componente es el almidoacuten que corresponde al 80 en materia seca se encuentran en esta Harina pteiacutenas grasas y vitaminas del tipo B y C adamp de fibras y cenizas (Grace 1977)

la Harina de Pigo es otro sustrato amilaceo que se considerd importante utilizar debido a su alta disponibilidad en su canposicioacuten estan presentes pteiacutenas grw calcio f oacute s f m h i m tiamina riboflavina y niacina esto lo hace un sustrato interesante

La M e l a z a es el subproducto final de la fakicacioacuten de azucar es un liquido o b s c u r o denso y viscoso que se separa de la masa cocida de baja-calidad y del cual no se pede cristalizar ampamcar por amptodos mencionales y econoacutemicos en su composicioacuten estdn presentes 1 0 s amcares y otras sustancias entre l a s cuales se pueden citar l o s corapuestos nitrogenados aacutecidos aminoacidos albiminas vitaminas ceras esteroles lipid- sales minerales y cenizas etc (ICIDCA1986) Como se puede ver es un producto muy complejo por lo que puede ser un sustrato muy atractivo para su utilizaci6n como fuente de carbono en ipedios de cultivo pura la espomlaci6n de hongos filamentosos (Brinela 1987)

la s a c m a es un producto de facil adquisicioacuten y de pmduccioacuten idustrial importante por lo que se considem un sustrato atractivo para la produccioacuten de amidiosporas de hongos filamentosos La sacarosa se encuentra fonnada por una molecula de fructosa y una de glucosa l o s medios de cultivo que contienen sacarosa pcdriamos decir que son medios simples en comparacioacuten con la complejidad de la melaza y l a s harinas

521- A n i g ~

Fh la tabla V se muestran l o s Ie obtenidos para Anigerutilizardo l a s 4 fuentes de carbono antes mencionadas El mayor Ie se alcanzoacute en el medio de cultivo con k i n a de Yuca seguido de la M e l a z a la k i n a de Pigo y por Gltimo la Sacarosa se ha demostrado que durante el proceso de esterilizacioacuten la Harina de Yuca sufre un tratamiento teacutermico que hace que las moleacuteculas de almidh pasen cie una forma cristalina a un estado amdrfo (gelatinizacion) y que Ani_mr es un productm de amilasas (Raimbault 19801 lo que sugiere que la gelatinizacioacuten podriacutea facilitar el ataque enzimdtico y con esto i iberar cantidades importantes de glucosa que favoreced el crecilriiento del hongo lo que normalmente estaacute reiacionado con una produccioacuten importante de conidias

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I

I

I c- 7 DIAS

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 509xl0^9 I I I I

I I 1 I

Harina de Trigo 14 367X1^9 I I I

I I I I

Melaza 14 424x10-9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 16Ox10^8 I I I I

522- d t ~ 1 7 9 ~ ~

Eh la tabla VI se muestran l o s Ie obtenidos para A termus -utiliZando__las 4 fuentes de carbono antes mencionadas El Ie mas alto se encmtroacute en el medio de cultivo con M e l a z a seguido de la Yprina de Yuca y Trigo y por uacuteltimo la Sacarosa d t m u s es utilizado en lo s procesos de aprovechamiento de eubproductos de la industria cantildeera en cuba (meollo y bagazo) (Blanco bpez Villarl968) Esta cepa estaacute adaptada a l o s procesos de la industria cuntildeera de c u b a por lo que se esperariacutea que espurulara mejor en Melaza tal como ocurrioacute

TXBLA VI- Indices de espwulacibn para dtwreus utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa como fuente de carbono para tiempos de incubacidn de 7 dias y relacioacuten CN de 14

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I I I I I I 7 DIAS I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 60x10n9 I I I

Harina de pigo 14 403xlO-9

I I I

1 I I I

I I I I

M e l a z a 14 612xlOA9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 S40~107 1 I I

211

523- Bbassi= 1

Las resulta- 5e rem en la t ~ ~ h ~ f - - - ~ ~ - - ~ ~ e se -obtwo en el medio con Harina de Trigo m i d o de la H a r i n a de Yuca Melnza y Sacarosa Se puede obeervar que 1 0 s Ie amp altos se logran con los sustratos amiluceos que tal vez puedan ser mamp facilmente utilizados por el microoqanimno debido a l - v e s o de gelatinizacioacuten que Wren

524- Penicillium sp

Los resultados se muestran en la tabla VIII Los mayores le se alcanzaron con las Harims de Yuca y Trigo con respecto a los atros dos sustratos Se observoacute una mayor produccioacuten de micelio en los sustratos amilaceos lo que podria justificar la produccibn maacutes alta de conidias

525- Thnmianum

LBS resultados se reportan en la tabla XI Estudios hechos par Raussos (1985) demostraron la capacidad de Thanianum en la produccidn de ami la s a s utilizando almidoacuten cam0 fuente de carbono pesto que la harim de yuca y la harina de trigo son sustratos amilacecs se esperariacutea una produccioacuten impcortante de esporras tal COQLO sucedioacute para la harina de yuca y no asi para la harina de trigo Con respecto a la s a c m a el Ie tan bajo que se obtuvo con relacidn a la melaza pede ser debido a todos los compuestos que se encuentran en las m e l a z a s

c TABLA VI1- Inlices de esparcllacibn para Bhssiana utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo M e i u z a y Sacarosa axno fuente de carbono para tiempos de incubacioacuten de 7 dias y relacion CN de 14

I I I

I I I Ie I

Summ CN I I

1 I I I

I I

1 I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 1 8 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

7 DIAS

Harina de Pigo 14 702~10~9 I I I I

I I I

Melaza 14 217~10~9 I I I I

I I I I

Sacarosa i 14 8 5 8 ~ 1 0 ~ 6 I I I I

r

I I

I Ie 1

I Summ CN I

I 1 i I

I I 7 DIAS

I I I I

I 1 I I

Harina de Yuca 14 142x10^10 I I I I

I I I I

Harina de Pigo 14 832xlO-9 1 1 I I

I I I I

M e l a z a 14 293~10~9

I I I

Sacarosa 14 103x10n9

I I I I

I I I I

m IX-Indices de espauulacian para Thamianum utilizando Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa corno fuente de carbono para tiapos de incubacich de 7 dim y relacioacuten CN de 14

I I I I

I -

1 I Ie I

I Summ CN I

I I 7 D I A S t I I I

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 11ox1On1O I I I I

I I I I

Harina de Trigo 14 12Ox10-9 I I I I

I I I I

M e l a z a 14 875~10~9 I I I I

I

Sacarosa I

I i I

14 11Ox10^8 I I I

526- Conclusiones

Varios autores han demostrado la importancia de la fuente de carbono sobre la conidiogenesis de hongos f ilamentosos (Vezina y co11965 Martinelli1976) en este estudio se pudo observar que cada cepa tiene caracteristicas fisiolcjgicas de esporulacidn propias con respecto al tipo de fuente de carbono que se le proporcione Para este caso en especial la cepa de Aniper esporuld mejor en Harina de Yuca A termus en M e l a z a B m i a m en Harinri de Trigo y T harzinnum en Harina de Yuca

------Esttuiaa - - h - - i s o s (lE5) han demostrado que la concentracidn de Nieeno prwente en el mampio de cup170 ejerce una influencia directa en el nuacutemero de conidiosporas producidas por Thurzjmm par 10 que era necesario seleccionar la relacioacuten CN oacuteptima para cada cepa y para cada sustrato

la composicioacuten de l o s medios de cultivo utilizados para llevar a cabo este estudio estb presentados en las tablas I 11 I11 y IV Se utilizaron 4 diferentes relaciones CN estas fueron de 101424 y 40 empleanda UM mezcla de 23 panes de Sulfato de Amonio y 13 parte de h a toanando- 128 g de carbono como base de caacutelculo y tiempos de incubacioacuten de 7 y 14 dias l o s experimentos se realizaron en matraces de 250 ml

Ln relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despueacutes de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Anigw son mostrados en la tabla X

h datos obtenidos para Aniger nos indican que cuardo se emplea Harina de Yuca en concentracich de 40 gl y la reiaci6n CN estaacute entre 10 y 40 no es un factor determinante en la conidiogeacutenesis ya que esporula de rnanera similar entre estos r a n g o s para l o s medio a base de Harina de Trigo la CN entre 40 y 24 es donde mejm esporulacidn se obtiene

r 5 3 2 - A s m i l ~ s t

h relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de espomlaci6n obtenidos aespuk de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Rtemxs son mostradrx en la tabla XI

Lns medios de cultivo con 14 dias de incubacidn presentan el mayor ntUnero de conidiospwas a una relaci6n CN de 14 con excepcih de l o s medios con Sacarosa que mostramn en todos l o s cc~sos un compm-tamiento muy pobre con respecto al n h de conidias producidas Los mejores Ie se log-amn con Harina de Yuca y M e l a z a con una relacidn CN de-14 para 14 dias de incubacidn

Lo relaci6n que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despuds de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para B b s s i a n a son mostrados en la tabla XII

b Ie logrados para B b n s s i m e son muy similares entre si es decir no cambian significativamente l o s Ie para l o s cultivos con 14 dias de inmbacidn son bastante altos siendo el medio de cultivo con una relaci6n CN de 14 y Melaza como fuente de carbono ei queposee el mejor Ie con un tiempo de incuhcidn de 14 dias BI esta cepa se ve su capacidad de adaptacioacuten con respecto a l a s anteriores para crecer en Sackrosa

~ r

27 534- Psnicilliue sp

kiaeiampi que exiate entre 1- necG~-edt-~vcv - y h rendimientos de esparulaciOacutentilde-6btenidos despds de 7 -_Fl4 dias de cultivo en matraces para FbnciIlium sp son mostrados en la tabla XILI

_

La relacidn CN entre 10 y40 no tiene una influencia directa en la conidioghnesis de esta cepa sin embargo se dbeewa una tendencia a la disminucioacuten del N de conidiospcwas producidas en los cultivos con 14 dias de incubacih Los mayores Ie se lcgrarcm con los medios de cultivo a bnse de Harina de Yuca y Harina de Trigo

La relaci6n que existe entre la composiciiquestn quiacutemica del medio de cultivo y l a s rendimientos de esporulaci6n obtenidos desples de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Thurzzanum son mostrados en la tabla XIV

Las resultados obtenidos 1x1s mestran unatendencia hacia la obtencioacuten del m y m Ie en rangos de CN de 10 a 14 y estudios hechos par Raussos (1985) sohre el efecto de la concentraci6n de Nitriquestgeno en la oanidiogdnesis de Thaniunum pnmporcionaron una CN optima de 14 utilizando Harina de Yuca corno fuente de curbno

Sin embxqo pura una CN de 3253 obtiene un Ie para 7 dias --de incubacidn de Q16x1On9 cmparando este resultado con el resultado obtenido en mi estudio encuentro que a una CN de 40 para 7 diQs de incubacibn tengo un Ie de 132xlO-9 esto es 13 veces mamp por lo que es dificil comparar estos datos en l o s resultados obtenidos se obsewa una tendencia para los cultivos con 14 dias de incubacidn de disminuir el Ie confarme aumenta la relacidn CN y para l a s cultivos con 7 dias se observn lo contrario Los Ie mus altos se logran con l o s medios de cultivo a base de Harinu de Yuca y Melaza

536- Conclusiones

Las cepas estudiadas eSp0IWlUn dependiendo del tipo de fuente de carbono la fuente de carbono y su naturaleza tiene m infiuencia directa en la conidiogeacutenesis de l o s hongos f ilamentosos que la concentracioacuten de nitrdgeno sin embargo es recamendable la adlcidn ae nitdgeno entre l o s rargos de CN de 10 a 4 0

Para disminuir l o s costos de pmduccioacuten de conidiosporas hay que optimizar los medics de cultivo nacer la seleccioacuten de una h e m fuente de carbono para cada cepa y trhjar en rangos de CN de 14 a 4 0

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
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                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
                                          • -- A
                                          • --
                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
                                          • M
Page 19: MATRICULA: 83323133.

Medio I I I I

Harim de I I I I

Trigo 5714 5714 5714 5714

(gl) I 1 1 2 I 3 I 4 I I I I I

I I I I I I

I I I I I 1

I I I I I I

(NH4)ZSX 402 287 167 100 I I I I I I

I I I I I I

u r e a 091 065 038 (322 I I I I I 1

1 I I I I I ~~ ~~ ~~~

I cac12 1 I 1 I 1 I 1 I

I I

~ I - s 2 I 2 I 2 I 2 I

e I I I I I

J q a r 15 15 I 15 I 15 I

I I

I I I I I I

I 1 I I I I

I I I I I

I I I I I I

Agua (m11 loo0 1000 1000 1000 I I 1 I I I

I I I I I I

I pH 56 56 56 56 I I I I I I

1 I I I I I

I cm 10 I 14 I 24 I 40 I I I I I I I

r

t

14

c

C_ de l o s medios S a m a camo

r

de cultivo para fuente de carbono

Hedio I I I I

(gl) 1 2 3 I 4 I

I I I I I I I I

I I

I I I I I

SaculmBa 3040 3 0 4 0 3040 3040 I I

I I

~ N l i 4 ) 2 S X 402 287 167 100 I I I

I I

1 I 1 I 1 I

I

I 2 I 2 I 2 I I I I

95

I I

I I

I I

I I

I I I I

urea 091 065 038 022 I I I

I I I I I I

cac12 1 m 2

I I I

I I I I

I I I

I I

Agar I 15 15 I 15 I I

I I I I I

Agua (m11 1000 1000 1000 1000 I I I I I I

56 56 56

L -

I I I

I I I I I

I pH 56

cN 10 14 24 4 0

I I I I I I

I I

I I

I I

I I

I I

I

r

Hedio

I I I

I I I I

(gl) 1

I I

I 2 I 3 4 I

I I

I I

I I I I I

M e l a z a 5470 5470 5470 5470 I I I I I I I (W)2S34 402 287 167 1-00 I I I I I I

I I I

I Urea 091 065 038 022 I I I

cac12 I 1 1 1 1 1 1

I

I I I

I

I

I I I

I I I I I

I I 1 I I I

m 2 I I I I

Agar 15 15

I 2 I 2 I 2 I

I

I I

e

I I I I

I 15 I 15 I

I -

I I

I I 1 I I I

Agw (m11 loo0 1000 1000 1000 1 I t I I

I I I p H 56 56 56 56 I I I I

CN 10 1 I 14 I 24 4 0 I I I I I I

I I I I I I

511- AsparYillus n i p -

de 3 dias aparecen farmas especializadas de reploduccian asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este se desarrolla UM vesicula y sobre la vesicula se

conidicsporas Estas conidospwas presentan un color cafe obscuro y n e g r o son gldbulares ornamentadas con un diumetro aproximado de 35 a 5 m La colonia cambia al c o l o r negro del centro B los ext remos

El micelio de este horgo es septa30 y de color blanco despues

desarrollan lae f ialides de las cuales se farmaran l a s

LA estructura de la fama de repruduccion se p-esenta en la figura 2

ru LA 7 V E S I CULA

ESTI P E

ELULA P O D A L

Figura 2 - Conidioforas y conidias de Aniger

El micelio de este h q o e8 septado de color blanco depea de 3 dias aparecen fonoas especializades de repmduccion asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este crecen fialides y de l a s fialides se forman las conidiosparas y presenta exudados ambarinoe Eetas conidiceparas presentan un color amarillo l a s conidiceporas son lisas glokulares con un diametro aproximado de 15 - 25 m

Figura 3 la estructura de la f a r m a de reproduction presenta en la

FIA

Figura 3- Conidioforos y coniaias de X t e

Este hongo presenta un micelio atercipelado y coposo inicialmente blanco presenta un raacutenquis genicula denticulado o en zigzag posteriarmente se tans amarillento Posee conidias hialinas y gldlxllams can un diaacutemetro aproximado de 15 a 3ym La estructura se presenta en la Figura 4

RANQU I S

c

Figura 4 - ConidiOacutefaros y conidias de E h s s i e n o

m cepa se ha identificado corno Penicillium W f a r t i i presenta un micelio septado con produccioacuten de micelio vegetativo aerial d e y e e de un tiempo aparecen estructurns especializadas de repocoduccion a s e x u a l Se presenta un estipe m e n t a d o unas brancpeas meacutetulas f M i d e s y conidias Elstas conidiosporas presentan un colap- verduzco son globdares y lisas con un dibtro apmximado de 4 a 6p Lae conidias son producidas en cadenas cortas La estructura se presenta en la Figura 5

C O N l D l A S

1 O r r m

Figura 5- Conidioacuteforos y coniaias de Fenicilliun

Al inicio este h q o presenta un micelio blanco pterionnente aprecen farmas especializadas de reproduccion asexual fialidee y conidicepuras I m conidiofaros se presentan en farmas piramidalee y en estos sistemas las fialidee Be localizan en g r u ~ w de dos a cuatro Las conidia3 Bon de color verde olivo son de superficie lisas subglobulares con un diametm apmximado de 2 a 3 m

La egtructura de la fcwma de reproduccion se presenta en la figura 6

Las colonias de Thnnianum en FDA se caracterizan pol tener un color verde con circulos concentricos Hay que mencionar que las colanias pmducen un olor a coco (coconut) muy caracteristico

CONlDl

Figura 6 - Conidioforos y conidias de Thanianum

516- Conclusiones v 4

_ _

el curse) de este capitulo se describieron los sietemas de reproduccioacuten de las cinco cepas de hongos filamentosos estudiados Todos estos hongos se repaoducen de manera a s e x u a l Se que l a s 5 cepas presentan estructuras muy diferentes a s i co~po diversos colores en l o s estadios de crecimiento vegetativo y ccmidiogdnesie ademds presentan conidimporas glohlares de muy diversos tamafios

c

093039 t

2 2

- La composicioacuten de l o s diferentes meampicsde cultvoutQizados pera llevar a cabo este estudio fueron medio N 2 de l a s tablas I 11111 y IV y se establecioacute prabay las diferentes fuentes de carbno (Harina de Yuca Harina de Pigo M e l a z a y Sacarosa) en matraces a una relaci6n CN de 14 para de esta manera poder observar el efecto que cada una de ell- ejerce solre la conidicgbesis de l o s hongos filamentosos estudiadas L m resultados se reman en l a s tablas V VI VII VI11 y XI y se exp-esan en base al Indice de Bporulacidn (Ie - N de esporas g de sustrato carbonado) para 7 dias de incubacion a temperatura ambiente (15-22C)

~ - -4

La Harim de Yuca es un producto amilaceo que ha demostrado ser un sustrato de gran eficiencia para la produccion de conidiosparas de hongos filamentosos ademds de ser un producto tropical de facil acceso su principal componente es el almidoacuten que corresponde al 80 en materia seca se encuentran en esta Harina pteiacutenas grasas y vitaminas del tipo B y C adamp de fibras y cenizas (Grace 1977)

la Harina de Pigo es otro sustrato amilaceo que se considerd importante utilizar debido a su alta disponibilidad en su canposicioacuten estan presentes pteiacutenas grw calcio f oacute s f m h i m tiamina riboflavina y niacina esto lo hace un sustrato interesante

La M e l a z a es el subproducto final de la fakicacioacuten de azucar es un liquido o b s c u r o denso y viscoso que se separa de la masa cocida de baja-calidad y del cual no se pede cristalizar ampamcar por amptodos mencionales y econoacutemicos en su composicioacuten estdn presentes 1 0 s amcares y otras sustancias entre l a s cuales se pueden citar l o s corapuestos nitrogenados aacutecidos aminoacidos albiminas vitaminas ceras esteroles lipid- sales minerales y cenizas etc (ICIDCA1986) Como se puede ver es un producto muy complejo por lo que puede ser un sustrato muy atractivo para su utilizaci6n como fuente de carbono en ipedios de cultivo pura la espomlaci6n de hongos filamentosos (Brinela 1987)

la s a c m a es un producto de facil adquisicioacuten y de pmduccioacuten idustrial importante por lo que se considem un sustrato atractivo para la produccioacuten de amidiosporas de hongos filamentosos La sacarosa se encuentra fonnada por una molecula de fructosa y una de glucosa l o s medios de cultivo que contienen sacarosa pcdriamos decir que son medios simples en comparacioacuten con la complejidad de la melaza y l a s harinas

521- A n i g ~

Fh la tabla V se muestran l o s Ie obtenidos para Anigerutilizardo l a s 4 fuentes de carbono antes mencionadas El mayor Ie se alcanzoacute en el medio de cultivo con k i n a de Yuca seguido de la M e l a z a la k i n a de Pigo y por Gltimo la Sacarosa se ha demostrado que durante el proceso de esterilizacioacuten la Harina de Yuca sufre un tratamiento teacutermico que hace que las moleacuteculas de almidh pasen cie una forma cristalina a un estado amdrfo (gelatinizacion) y que Ani_mr es un productm de amilasas (Raimbault 19801 lo que sugiere que la gelatinizacioacuten podriacutea facilitar el ataque enzimdtico y con esto i iberar cantidades importantes de glucosa que favoreced el crecilriiento del hongo lo que normalmente estaacute reiacionado con una produccioacuten importante de conidias

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I

I

I c- 7 DIAS

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 509xl0^9 I I I I

I I 1 I

Harina de Trigo 14 367X1^9 I I I

I I I I

Melaza 14 424x10-9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 16Ox10^8 I I I I

522- d t ~ 1 7 9 ~ ~

Eh la tabla VI se muestran l o s Ie obtenidos para A termus -utiliZando__las 4 fuentes de carbono antes mencionadas El Ie mas alto se encmtroacute en el medio de cultivo con M e l a z a seguido de la Yprina de Yuca y Trigo y por uacuteltimo la Sacarosa d t m u s es utilizado en lo s procesos de aprovechamiento de eubproductos de la industria cantildeera en cuba (meollo y bagazo) (Blanco bpez Villarl968) Esta cepa estaacute adaptada a l o s procesos de la industria cuntildeera de c u b a por lo que se esperariacutea que espurulara mejor en Melaza tal como ocurrioacute

TXBLA VI- Indices de espwulacibn para dtwreus utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa como fuente de carbono para tiempos de incubacidn de 7 dias y relacioacuten CN de 14

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I I I I I I 7 DIAS I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 60x10n9 I I I

Harina de pigo 14 403xlO-9

I I I

1 I I I

I I I I

M e l a z a 14 612xlOA9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 S40~107 1 I I

211

523- Bbassi= 1

Las resulta- 5e rem en la t ~ ~ h ~ f - - - ~ ~ - - ~ ~ e se -obtwo en el medio con Harina de Trigo m i d o de la H a r i n a de Yuca Melnza y Sacarosa Se puede obeervar que 1 0 s Ie amp altos se logran con los sustratos amiluceos que tal vez puedan ser mamp facilmente utilizados por el microoqanimno debido a l - v e s o de gelatinizacioacuten que Wren

524- Penicillium sp

Los resultados se muestran en la tabla VIII Los mayores le se alcanzaron con las Harims de Yuca y Trigo con respecto a los atros dos sustratos Se observoacute una mayor produccioacuten de micelio en los sustratos amilaceos lo que podria justificar la produccibn maacutes alta de conidias

525- Thnmianum

LBS resultados se reportan en la tabla XI Estudios hechos par Raussos (1985) demostraron la capacidad de Thanianum en la produccidn de ami la s a s utilizando almidoacuten cam0 fuente de carbono pesto que la harim de yuca y la harina de trigo son sustratos amilacecs se esperariacutea una produccioacuten impcortante de esporras tal COQLO sucedioacute para la harina de yuca y no asi para la harina de trigo Con respecto a la s a c m a el Ie tan bajo que se obtuvo con relacidn a la melaza pede ser debido a todos los compuestos que se encuentran en las m e l a z a s

c TABLA VI1- Inlices de esparcllacibn para Bhssiana utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo M e i u z a y Sacarosa axno fuente de carbono para tiempos de incubacioacuten de 7 dias y relacion CN de 14

I I I

I I I Ie I

Summ CN I I

1 I I I

I I

1 I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 1 8 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

7 DIAS

Harina de Pigo 14 702~10~9 I I I I

I I I

Melaza 14 217~10~9 I I I I

I I I I

Sacarosa i 14 8 5 8 ~ 1 0 ~ 6 I I I I

r

I I

I Ie 1

I Summ CN I

I 1 i I

I I 7 DIAS

I I I I

I 1 I I

Harina de Yuca 14 142x10^10 I I I I

I I I I

Harina de Pigo 14 832xlO-9 1 1 I I

I I I I

M e l a z a 14 293~10~9

I I I

Sacarosa 14 103x10n9

I I I I

I I I I

m IX-Indices de espauulacian para Thamianum utilizando Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa corno fuente de carbono para tiapos de incubacich de 7 dim y relacioacuten CN de 14

I I I I

I -

1 I Ie I

I Summ CN I

I I 7 D I A S t I I I

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 11ox1On1O I I I I

I I I I

Harina de Trigo 14 12Ox10-9 I I I I

I I I I

M e l a z a 14 875~10~9 I I I I

I

Sacarosa I

I i I

14 11Ox10^8 I I I

526- Conclusiones

Varios autores han demostrado la importancia de la fuente de carbono sobre la conidiogenesis de hongos f ilamentosos (Vezina y co11965 Martinelli1976) en este estudio se pudo observar que cada cepa tiene caracteristicas fisiolcjgicas de esporulacidn propias con respecto al tipo de fuente de carbono que se le proporcione Para este caso en especial la cepa de Aniper esporuld mejor en Harina de Yuca A termus en M e l a z a B m i a m en Harinri de Trigo y T harzinnum en Harina de Yuca

------Esttuiaa - - h - - i s o s (lE5) han demostrado que la concentracidn de Nieeno prwente en el mampio de cup170 ejerce una influencia directa en el nuacutemero de conidiosporas producidas por Thurzjmm par 10 que era necesario seleccionar la relacioacuten CN oacuteptima para cada cepa y para cada sustrato

la composicioacuten de l o s medios de cultivo utilizados para llevar a cabo este estudio estb presentados en las tablas I 11 I11 y IV Se utilizaron 4 diferentes relaciones CN estas fueron de 101424 y 40 empleanda UM mezcla de 23 panes de Sulfato de Amonio y 13 parte de h a toanando- 128 g de carbono como base de caacutelculo y tiempos de incubacioacuten de 7 y 14 dias l o s experimentos se realizaron en matraces de 250 ml

Ln relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despueacutes de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Anigw son mostrados en la tabla X

h datos obtenidos para Aniger nos indican que cuardo se emplea Harina de Yuca en concentracich de 40 gl y la reiaci6n CN estaacute entre 10 y 40 no es un factor determinante en la conidiogeacutenesis ya que esporula de rnanera similar entre estos r a n g o s para l o s medio a base de Harina de Trigo la CN entre 40 y 24 es donde mejm esporulacidn se obtiene

r 5 3 2 - A s m i l ~ s t

h relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de espomlaci6n obtenidos aespuk de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Rtemxs son mostradrx en la tabla XI

Lns medios de cultivo con 14 dias de incubacidn presentan el mayor ntUnero de conidiospwas a una relaci6n CN de 14 con excepcih de l o s medios con Sacarosa que mostramn en todos l o s cc~sos un compm-tamiento muy pobre con respecto al n h de conidias producidas Los mejores Ie se log-amn con Harina de Yuca y M e l a z a con una relacidn CN de-14 para 14 dias de incubacidn

Lo relaci6n que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despuds de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para B b s s i a n a son mostrados en la tabla XII

b Ie logrados para B b n s s i m e son muy similares entre si es decir no cambian significativamente l o s Ie para l o s cultivos con 14 dias de inmbacidn son bastante altos siendo el medio de cultivo con una relaci6n CN de 14 y Melaza como fuente de carbono ei queposee el mejor Ie con un tiempo de incuhcidn de 14 dias BI esta cepa se ve su capacidad de adaptacioacuten con respecto a l a s anteriores para crecer en Sackrosa

~ r

27 534- Psnicilliue sp

kiaeiampi que exiate entre 1- necG~-edt-~vcv - y h rendimientos de esparulaciOacutentilde-6btenidos despds de 7 -_Fl4 dias de cultivo en matraces para FbnciIlium sp son mostrados en la tabla XILI

_

La relacidn CN entre 10 y40 no tiene una influencia directa en la conidioghnesis de esta cepa sin embargo se dbeewa una tendencia a la disminucioacuten del N de conidiospcwas producidas en los cultivos con 14 dias de incubacih Los mayores Ie se lcgrarcm con los medios de cultivo a bnse de Harina de Yuca y Harina de Trigo

La relaci6n que existe entre la composiciiquestn quiacutemica del medio de cultivo y l a s rendimientos de esporulaci6n obtenidos desples de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Thurzzanum son mostrados en la tabla XIV

Las resultados obtenidos 1x1s mestran unatendencia hacia la obtencioacuten del m y m Ie en rangos de CN de 10 a 14 y estudios hechos par Raussos (1985) sohre el efecto de la concentraci6n de Nitriquestgeno en la oanidiogdnesis de Thaniunum pnmporcionaron una CN optima de 14 utilizando Harina de Yuca corno fuente de curbno

Sin embxqo pura una CN de 3253 obtiene un Ie para 7 dias --de incubacidn de Q16x1On9 cmparando este resultado con el resultado obtenido en mi estudio encuentro que a una CN de 40 para 7 diQs de incubacibn tengo un Ie de 132xlO-9 esto es 13 veces mamp por lo que es dificil comparar estos datos en l o s resultados obtenidos se obsewa una tendencia para los cultivos con 14 dias de incubacidn de disminuir el Ie confarme aumenta la relacidn CN y para l a s cultivos con 7 dias se observn lo contrario Los Ie mus altos se logran con l o s medios de cultivo a base de Harinu de Yuca y Melaza

536- Conclusiones

Las cepas estudiadas eSp0IWlUn dependiendo del tipo de fuente de carbono la fuente de carbono y su naturaleza tiene m infiuencia directa en la conidiogeacutenesis de l o s hongos f ilamentosos que la concentracioacuten de nitrdgeno sin embargo es recamendable la adlcidn ae nitdgeno entre l o s rargos de CN de 10 a 4 0

Para disminuir l o s costos de pmduccioacuten de conidiosporas hay que optimizar los medics de cultivo nacer la seleccioacuten de una h e m fuente de carbono para cada cepa y trhjar en rangos de CN de 14 a 4 0

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
                                          • -- A
                                          • --
                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
                                          • M
Page 20: MATRICULA: 83323133.

14

c

C_ de l o s medios S a m a camo

r

de cultivo para fuente de carbono

Hedio I I I I

(gl) 1 2 3 I 4 I

I I I I I I I I

I I

I I I I I

SaculmBa 3040 3 0 4 0 3040 3040 I I

I I

~ N l i 4 ) 2 S X 402 287 167 100 I I I

I I

1 I 1 I 1 I

I

I 2 I 2 I 2 I I I I

95

I I

I I

I I

I I

I I I I

urea 091 065 038 022 I I I

I I I I I I

cac12 1 m 2

I I I

I I I I

I I I

I I

Agar I 15 15 I 15 I I

I I I I I

Agua (m11 1000 1000 1000 1000 I I I I I I

56 56 56

L -

I I I

I I I I I

I pH 56

cN 10 14 24 4 0

I I I I I I

I I

I I

I I

I I

I I

I

r

Hedio

I I I

I I I I

(gl) 1

I I

I 2 I 3 4 I

I I

I I

I I I I I

M e l a z a 5470 5470 5470 5470 I I I I I I I (W)2S34 402 287 167 1-00 I I I I I I

I I I

I Urea 091 065 038 022 I I I

cac12 I 1 1 1 1 1 1

I

I I I

I

I

I I I

I I I I I

I I 1 I I I

m 2 I I I I

Agar 15 15

I 2 I 2 I 2 I

I

I I

e

I I I I

I 15 I 15 I

I -

I I

I I 1 I I I

Agw (m11 loo0 1000 1000 1000 1 I t I I

I I I p H 56 56 56 56 I I I I

CN 10 1 I 14 I 24 4 0 I I I I I I

I I I I I I

511- AsparYillus n i p -

de 3 dias aparecen farmas especializadas de reploduccian asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este se desarrolla UM vesicula y sobre la vesicula se

conidicsporas Estas conidospwas presentan un color cafe obscuro y n e g r o son gldbulares ornamentadas con un diumetro aproximado de 35 a 5 m La colonia cambia al c o l o r negro del centro B los ext remos

El micelio de este horgo es septa30 y de color blanco despues

desarrollan lae f ialides de las cuales se farmaran l a s

LA estructura de la fama de repruduccion se p-esenta en la figura 2

ru LA 7 V E S I CULA

ESTI P E

ELULA P O D A L

Figura 2 - Conidioforas y conidias de Aniger

El micelio de este h q o e8 septado de color blanco depea de 3 dias aparecen fonoas especializades de repmduccion asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este crecen fialides y de l a s fialides se forman las conidiosparas y presenta exudados ambarinoe Eetas conidiceparas presentan un color amarillo l a s conidiceporas son lisas glokulares con un diametro aproximado de 15 - 25 m

Figura 3 la estructura de la f a r m a de reproduction presenta en la

FIA

Figura 3- Conidioforos y coniaias de X t e

Este hongo presenta un micelio atercipelado y coposo inicialmente blanco presenta un raacutenquis genicula denticulado o en zigzag posteriarmente se tans amarillento Posee conidias hialinas y gldlxllams can un diaacutemetro aproximado de 15 a 3ym La estructura se presenta en la Figura 4

RANQU I S

c

Figura 4 - ConidiOacutefaros y conidias de E h s s i e n o

m cepa se ha identificado corno Penicillium W f a r t i i presenta un micelio septado con produccioacuten de micelio vegetativo aerial d e y e e de un tiempo aparecen estructurns especializadas de repocoduccion a s e x u a l Se presenta un estipe m e n t a d o unas brancpeas meacutetulas f M i d e s y conidias Elstas conidiosporas presentan un colap- verduzco son globdares y lisas con un dibtro apmximado de 4 a 6p Lae conidias son producidas en cadenas cortas La estructura se presenta en la Figura 5

C O N l D l A S

1 O r r m

Figura 5- Conidioacuteforos y coniaias de Fenicilliun

Al inicio este h q o presenta un micelio blanco pterionnente aprecen farmas especializadas de reproduccion asexual fialidee y conidicepuras I m conidiofaros se presentan en farmas piramidalee y en estos sistemas las fialidee Be localizan en g r u ~ w de dos a cuatro Las conidia3 Bon de color verde olivo son de superficie lisas subglobulares con un diametm apmximado de 2 a 3 m

La egtructura de la fcwma de reproduccion se presenta en la figura 6

Las colonias de Thnnianum en FDA se caracterizan pol tener un color verde con circulos concentricos Hay que mencionar que las colanias pmducen un olor a coco (coconut) muy caracteristico

CONlDl

Figura 6 - Conidioforos y conidias de Thanianum

516- Conclusiones v 4

_ _

el curse) de este capitulo se describieron los sietemas de reproduccioacuten de las cinco cepas de hongos filamentosos estudiados Todos estos hongos se repaoducen de manera a s e x u a l Se que l a s 5 cepas presentan estructuras muy diferentes a s i co~po diversos colores en l o s estadios de crecimiento vegetativo y ccmidiogdnesie ademds presentan conidimporas glohlares de muy diversos tamafios

c

093039 t

2 2

- La composicioacuten de l o s diferentes meampicsde cultvoutQizados pera llevar a cabo este estudio fueron medio N 2 de l a s tablas I 11111 y IV y se establecioacute prabay las diferentes fuentes de carbno (Harina de Yuca Harina de Pigo M e l a z a y Sacarosa) en matraces a una relaci6n CN de 14 para de esta manera poder observar el efecto que cada una de ell- ejerce solre la conidicgbesis de l o s hongos filamentosos estudiadas L m resultados se reman en l a s tablas V VI VII VI11 y XI y se exp-esan en base al Indice de Bporulacidn (Ie - N de esporas g de sustrato carbonado) para 7 dias de incubacion a temperatura ambiente (15-22C)

~ - -4

La Harim de Yuca es un producto amilaceo que ha demostrado ser un sustrato de gran eficiencia para la produccion de conidiosparas de hongos filamentosos ademds de ser un producto tropical de facil acceso su principal componente es el almidoacuten que corresponde al 80 en materia seca se encuentran en esta Harina pteiacutenas grasas y vitaminas del tipo B y C adamp de fibras y cenizas (Grace 1977)

la Harina de Pigo es otro sustrato amilaceo que se considerd importante utilizar debido a su alta disponibilidad en su canposicioacuten estan presentes pteiacutenas grw calcio f oacute s f m h i m tiamina riboflavina y niacina esto lo hace un sustrato interesante

La M e l a z a es el subproducto final de la fakicacioacuten de azucar es un liquido o b s c u r o denso y viscoso que se separa de la masa cocida de baja-calidad y del cual no se pede cristalizar ampamcar por amptodos mencionales y econoacutemicos en su composicioacuten estdn presentes 1 0 s amcares y otras sustancias entre l a s cuales se pueden citar l o s corapuestos nitrogenados aacutecidos aminoacidos albiminas vitaminas ceras esteroles lipid- sales minerales y cenizas etc (ICIDCA1986) Como se puede ver es un producto muy complejo por lo que puede ser un sustrato muy atractivo para su utilizaci6n como fuente de carbono en ipedios de cultivo pura la espomlaci6n de hongos filamentosos (Brinela 1987)

la s a c m a es un producto de facil adquisicioacuten y de pmduccioacuten idustrial importante por lo que se considem un sustrato atractivo para la produccioacuten de amidiosporas de hongos filamentosos La sacarosa se encuentra fonnada por una molecula de fructosa y una de glucosa l o s medios de cultivo que contienen sacarosa pcdriamos decir que son medios simples en comparacioacuten con la complejidad de la melaza y l a s harinas

521- A n i g ~

Fh la tabla V se muestran l o s Ie obtenidos para Anigerutilizardo l a s 4 fuentes de carbono antes mencionadas El mayor Ie se alcanzoacute en el medio de cultivo con k i n a de Yuca seguido de la M e l a z a la k i n a de Pigo y por Gltimo la Sacarosa se ha demostrado que durante el proceso de esterilizacioacuten la Harina de Yuca sufre un tratamiento teacutermico que hace que las moleacuteculas de almidh pasen cie una forma cristalina a un estado amdrfo (gelatinizacion) y que Ani_mr es un productm de amilasas (Raimbault 19801 lo que sugiere que la gelatinizacioacuten podriacutea facilitar el ataque enzimdtico y con esto i iberar cantidades importantes de glucosa que favoreced el crecilriiento del hongo lo que normalmente estaacute reiacionado con una produccioacuten importante de conidias

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I

I

I c- 7 DIAS

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 509xl0^9 I I I I

I I 1 I

Harina de Trigo 14 367X1^9 I I I

I I I I

Melaza 14 424x10-9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 16Ox10^8 I I I I

522- d t ~ 1 7 9 ~ ~

Eh la tabla VI se muestran l o s Ie obtenidos para A termus -utiliZando__las 4 fuentes de carbono antes mencionadas El Ie mas alto se encmtroacute en el medio de cultivo con M e l a z a seguido de la Yprina de Yuca y Trigo y por uacuteltimo la Sacarosa d t m u s es utilizado en lo s procesos de aprovechamiento de eubproductos de la industria cantildeera en cuba (meollo y bagazo) (Blanco bpez Villarl968) Esta cepa estaacute adaptada a l o s procesos de la industria cuntildeera de c u b a por lo que se esperariacutea que espurulara mejor en Melaza tal como ocurrioacute

TXBLA VI- Indices de espwulacibn para dtwreus utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa como fuente de carbono para tiempos de incubacidn de 7 dias y relacioacuten CN de 14

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I I I I I I 7 DIAS I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 60x10n9 I I I

Harina de pigo 14 403xlO-9

I I I

1 I I I

I I I I

M e l a z a 14 612xlOA9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 S40~107 1 I I

211

523- Bbassi= 1

Las resulta- 5e rem en la t ~ ~ h ~ f - - - ~ ~ - - ~ ~ e se -obtwo en el medio con Harina de Trigo m i d o de la H a r i n a de Yuca Melnza y Sacarosa Se puede obeervar que 1 0 s Ie amp altos se logran con los sustratos amiluceos que tal vez puedan ser mamp facilmente utilizados por el microoqanimno debido a l - v e s o de gelatinizacioacuten que Wren

524- Penicillium sp

Los resultados se muestran en la tabla VIII Los mayores le se alcanzaron con las Harims de Yuca y Trigo con respecto a los atros dos sustratos Se observoacute una mayor produccioacuten de micelio en los sustratos amilaceos lo que podria justificar la produccibn maacutes alta de conidias

525- Thnmianum

LBS resultados se reportan en la tabla XI Estudios hechos par Raussos (1985) demostraron la capacidad de Thanianum en la produccidn de ami la s a s utilizando almidoacuten cam0 fuente de carbono pesto que la harim de yuca y la harina de trigo son sustratos amilacecs se esperariacutea una produccioacuten impcortante de esporras tal COQLO sucedioacute para la harina de yuca y no asi para la harina de trigo Con respecto a la s a c m a el Ie tan bajo que se obtuvo con relacidn a la melaza pede ser debido a todos los compuestos que se encuentran en las m e l a z a s

c TABLA VI1- Inlices de esparcllacibn para Bhssiana utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo M e i u z a y Sacarosa axno fuente de carbono para tiempos de incubacioacuten de 7 dias y relacion CN de 14

I I I

I I I Ie I

Summ CN I I

1 I I I

I I

1 I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 1 8 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

7 DIAS

Harina de Pigo 14 702~10~9 I I I I

I I I

Melaza 14 217~10~9 I I I I

I I I I

Sacarosa i 14 8 5 8 ~ 1 0 ~ 6 I I I I

r

I I

I Ie 1

I Summ CN I

I 1 i I

I I 7 DIAS

I I I I

I 1 I I

Harina de Yuca 14 142x10^10 I I I I

I I I I

Harina de Pigo 14 832xlO-9 1 1 I I

I I I I

M e l a z a 14 293~10~9

I I I

Sacarosa 14 103x10n9

I I I I

I I I I

m IX-Indices de espauulacian para Thamianum utilizando Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa corno fuente de carbono para tiapos de incubacich de 7 dim y relacioacuten CN de 14

I I I I

I -

1 I Ie I

I Summ CN I

I I 7 D I A S t I I I

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 11ox1On1O I I I I

I I I I

Harina de Trigo 14 12Ox10-9 I I I I

I I I I

M e l a z a 14 875~10~9 I I I I

I

Sacarosa I

I i I

14 11Ox10^8 I I I

526- Conclusiones

Varios autores han demostrado la importancia de la fuente de carbono sobre la conidiogenesis de hongos f ilamentosos (Vezina y co11965 Martinelli1976) en este estudio se pudo observar que cada cepa tiene caracteristicas fisiolcjgicas de esporulacidn propias con respecto al tipo de fuente de carbono que se le proporcione Para este caso en especial la cepa de Aniper esporuld mejor en Harina de Yuca A termus en M e l a z a B m i a m en Harinri de Trigo y T harzinnum en Harina de Yuca

------Esttuiaa - - h - - i s o s (lE5) han demostrado que la concentracidn de Nieeno prwente en el mampio de cup170 ejerce una influencia directa en el nuacutemero de conidiosporas producidas por Thurzjmm par 10 que era necesario seleccionar la relacioacuten CN oacuteptima para cada cepa y para cada sustrato

la composicioacuten de l o s medios de cultivo utilizados para llevar a cabo este estudio estb presentados en las tablas I 11 I11 y IV Se utilizaron 4 diferentes relaciones CN estas fueron de 101424 y 40 empleanda UM mezcla de 23 panes de Sulfato de Amonio y 13 parte de h a toanando- 128 g de carbono como base de caacutelculo y tiempos de incubacioacuten de 7 y 14 dias l o s experimentos se realizaron en matraces de 250 ml

Ln relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despueacutes de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Anigw son mostrados en la tabla X

h datos obtenidos para Aniger nos indican que cuardo se emplea Harina de Yuca en concentracich de 40 gl y la reiaci6n CN estaacute entre 10 y 40 no es un factor determinante en la conidiogeacutenesis ya que esporula de rnanera similar entre estos r a n g o s para l o s medio a base de Harina de Trigo la CN entre 40 y 24 es donde mejm esporulacidn se obtiene

r 5 3 2 - A s m i l ~ s t

h relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de espomlaci6n obtenidos aespuk de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Rtemxs son mostradrx en la tabla XI

Lns medios de cultivo con 14 dias de incubacidn presentan el mayor ntUnero de conidiospwas a una relaci6n CN de 14 con excepcih de l o s medios con Sacarosa que mostramn en todos l o s cc~sos un compm-tamiento muy pobre con respecto al n h de conidias producidas Los mejores Ie se log-amn con Harina de Yuca y M e l a z a con una relacidn CN de-14 para 14 dias de incubacidn

Lo relaci6n que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despuds de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para B b s s i a n a son mostrados en la tabla XII

b Ie logrados para B b n s s i m e son muy similares entre si es decir no cambian significativamente l o s Ie para l o s cultivos con 14 dias de inmbacidn son bastante altos siendo el medio de cultivo con una relaci6n CN de 14 y Melaza como fuente de carbono ei queposee el mejor Ie con un tiempo de incuhcidn de 14 dias BI esta cepa se ve su capacidad de adaptacioacuten con respecto a l a s anteriores para crecer en Sackrosa

~ r

27 534- Psnicilliue sp

kiaeiampi que exiate entre 1- necG~-edt-~vcv - y h rendimientos de esparulaciOacutentilde-6btenidos despds de 7 -_Fl4 dias de cultivo en matraces para FbnciIlium sp son mostrados en la tabla XILI

_

La relacidn CN entre 10 y40 no tiene una influencia directa en la conidioghnesis de esta cepa sin embargo se dbeewa una tendencia a la disminucioacuten del N de conidiospcwas producidas en los cultivos con 14 dias de incubacih Los mayores Ie se lcgrarcm con los medios de cultivo a bnse de Harina de Yuca y Harina de Trigo

La relaci6n que existe entre la composiciiquestn quiacutemica del medio de cultivo y l a s rendimientos de esporulaci6n obtenidos desples de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Thurzzanum son mostrados en la tabla XIV

Las resultados obtenidos 1x1s mestran unatendencia hacia la obtencioacuten del m y m Ie en rangos de CN de 10 a 14 y estudios hechos par Raussos (1985) sohre el efecto de la concentraci6n de Nitriquestgeno en la oanidiogdnesis de Thaniunum pnmporcionaron una CN optima de 14 utilizando Harina de Yuca corno fuente de curbno

Sin embxqo pura una CN de 3253 obtiene un Ie para 7 dias --de incubacidn de Q16x1On9 cmparando este resultado con el resultado obtenido en mi estudio encuentro que a una CN de 40 para 7 diQs de incubacibn tengo un Ie de 132xlO-9 esto es 13 veces mamp por lo que es dificil comparar estos datos en l o s resultados obtenidos se obsewa una tendencia para los cultivos con 14 dias de incubacidn de disminuir el Ie confarme aumenta la relacidn CN y para l a s cultivos con 7 dias se observn lo contrario Los Ie mus altos se logran con l o s medios de cultivo a base de Harinu de Yuca y Melaza

536- Conclusiones

Las cepas estudiadas eSp0IWlUn dependiendo del tipo de fuente de carbono la fuente de carbono y su naturaleza tiene m infiuencia directa en la conidiogeacutenesis de l o s hongos f ilamentosos que la concentracioacuten de nitrdgeno sin embargo es recamendable la adlcidn ae nitdgeno entre l o s rargos de CN de 10 a 4 0

Para disminuir l o s costos de pmduccioacuten de conidiosporas hay que optimizar los medics de cultivo nacer la seleccioacuten de una h e m fuente de carbono para cada cepa y trhjar en rangos de CN de 14 a 4 0

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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I t I

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
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                                          • --
                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
                                          • M
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Hedio

I I I

I I I I

(gl) 1

I I

I 2 I 3 4 I

I I

I I

I I I I I

M e l a z a 5470 5470 5470 5470 I I I I I I I (W)2S34 402 287 167 1-00 I I I I I I

I I I

I Urea 091 065 038 022 I I I

cac12 I 1 1 1 1 1 1

I

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I I I I I

I I 1 I I I

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I 2 I 2 I 2 I

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I 15 I 15 I

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I I 1 I I I

Agw (m11 loo0 1000 1000 1000 1 I t I I

I I I p H 56 56 56 56 I I I I

CN 10 1 I 14 I 24 4 0 I I I I I I

I I I I I I

511- AsparYillus n i p -

de 3 dias aparecen farmas especializadas de reploduccian asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este se desarrolla UM vesicula y sobre la vesicula se

conidicsporas Estas conidospwas presentan un color cafe obscuro y n e g r o son gldbulares ornamentadas con un diumetro aproximado de 35 a 5 m La colonia cambia al c o l o r negro del centro B los ext remos

El micelio de este horgo es septa30 y de color blanco despues

desarrollan lae f ialides de las cuales se farmaran l a s

LA estructura de la fama de repruduccion se p-esenta en la figura 2

ru LA 7 V E S I CULA

ESTI P E

ELULA P O D A L

Figura 2 - Conidioforas y conidias de Aniger

El micelio de este h q o e8 septado de color blanco depea de 3 dias aparecen fonoas especializades de repmduccion asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este crecen fialides y de l a s fialides se forman las conidiosparas y presenta exudados ambarinoe Eetas conidiceparas presentan un color amarillo l a s conidiceporas son lisas glokulares con un diametro aproximado de 15 - 25 m

Figura 3 la estructura de la f a r m a de reproduction presenta en la

FIA

Figura 3- Conidioforos y coniaias de X t e

Este hongo presenta un micelio atercipelado y coposo inicialmente blanco presenta un raacutenquis genicula denticulado o en zigzag posteriarmente se tans amarillento Posee conidias hialinas y gldlxllams can un diaacutemetro aproximado de 15 a 3ym La estructura se presenta en la Figura 4

RANQU I S

c

Figura 4 - ConidiOacutefaros y conidias de E h s s i e n o

m cepa se ha identificado corno Penicillium W f a r t i i presenta un micelio septado con produccioacuten de micelio vegetativo aerial d e y e e de un tiempo aparecen estructurns especializadas de repocoduccion a s e x u a l Se presenta un estipe m e n t a d o unas brancpeas meacutetulas f M i d e s y conidias Elstas conidiosporas presentan un colap- verduzco son globdares y lisas con un dibtro apmximado de 4 a 6p Lae conidias son producidas en cadenas cortas La estructura se presenta en la Figura 5

C O N l D l A S

1 O r r m

Figura 5- Conidioacuteforos y coniaias de Fenicilliun

Al inicio este h q o presenta un micelio blanco pterionnente aprecen farmas especializadas de reproduccion asexual fialidee y conidicepuras I m conidiofaros se presentan en farmas piramidalee y en estos sistemas las fialidee Be localizan en g r u ~ w de dos a cuatro Las conidia3 Bon de color verde olivo son de superficie lisas subglobulares con un diametm apmximado de 2 a 3 m

La egtructura de la fcwma de reproduccion se presenta en la figura 6

Las colonias de Thnnianum en FDA se caracterizan pol tener un color verde con circulos concentricos Hay que mencionar que las colanias pmducen un olor a coco (coconut) muy caracteristico

CONlDl

Figura 6 - Conidioforos y conidias de Thanianum

516- Conclusiones v 4

_ _

el curse) de este capitulo se describieron los sietemas de reproduccioacuten de las cinco cepas de hongos filamentosos estudiados Todos estos hongos se repaoducen de manera a s e x u a l Se que l a s 5 cepas presentan estructuras muy diferentes a s i co~po diversos colores en l o s estadios de crecimiento vegetativo y ccmidiogdnesie ademds presentan conidimporas glohlares de muy diversos tamafios

c

093039 t

2 2

- La composicioacuten de l o s diferentes meampicsde cultvoutQizados pera llevar a cabo este estudio fueron medio N 2 de l a s tablas I 11111 y IV y se establecioacute prabay las diferentes fuentes de carbno (Harina de Yuca Harina de Pigo M e l a z a y Sacarosa) en matraces a una relaci6n CN de 14 para de esta manera poder observar el efecto que cada una de ell- ejerce solre la conidicgbesis de l o s hongos filamentosos estudiadas L m resultados se reman en l a s tablas V VI VII VI11 y XI y se exp-esan en base al Indice de Bporulacidn (Ie - N de esporas g de sustrato carbonado) para 7 dias de incubacion a temperatura ambiente (15-22C)

~ - -4

La Harim de Yuca es un producto amilaceo que ha demostrado ser un sustrato de gran eficiencia para la produccion de conidiosparas de hongos filamentosos ademds de ser un producto tropical de facil acceso su principal componente es el almidoacuten que corresponde al 80 en materia seca se encuentran en esta Harina pteiacutenas grasas y vitaminas del tipo B y C adamp de fibras y cenizas (Grace 1977)

la Harina de Pigo es otro sustrato amilaceo que se considerd importante utilizar debido a su alta disponibilidad en su canposicioacuten estan presentes pteiacutenas grw calcio f oacute s f m h i m tiamina riboflavina y niacina esto lo hace un sustrato interesante

La M e l a z a es el subproducto final de la fakicacioacuten de azucar es un liquido o b s c u r o denso y viscoso que se separa de la masa cocida de baja-calidad y del cual no se pede cristalizar ampamcar por amptodos mencionales y econoacutemicos en su composicioacuten estdn presentes 1 0 s amcares y otras sustancias entre l a s cuales se pueden citar l o s corapuestos nitrogenados aacutecidos aminoacidos albiminas vitaminas ceras esteroles lipid- sales minerales y cenizas etc (ICIDCA1986) Como se puede ver es un producto muy complejo por lo que puede ser un sustrato muy atractivo para su utilizaci6n como fuente de carbono en ipedios de cultivo pura la espomlaci6n de hongos filamentosos (Brinela 1987)

la s a c m a es un producto de facil adquisicioacuten y de pmduccioacuten idustrial importante por lo que se considem un sustrato atractivo para la produccioacuten de amidiosporas de hongos filamentosos La sacarosa se encuentra fonnada por una molecula de fructosa y una de glucosa l o s medios de cultivo que contienen sacarosa pcdriamos decir que son medios simples en comparacioacuten con la complejidad de la melaza y l a s harinas

521- A n i g ~

Fh la tabla V se muestran l o s Ie obtenidos para Anigerutilizardo l a s 4 fuentes de carbono antes mencionadas El mayor Ie se alcanzoacute en el medio de cultivo con k i n a de Yuca seguido de la M e l a z a la k i n a de Pigo y por Gltimo la Sacarosa se ha demostrado que durante el proceso de esterilizacioacuten la Harina de Yuca sufre un tratamiento teacutermico que hace que las moleacuteculas de almidh pasen cie una forma cristalina a un estado amdrfo (gelatinizacion) y que Ani_mr es un productm de amilasas (Raimbault 19801 lo que sugiere que la gelatinizacioacuten podriacutea facilitar el ataque enzimdtico y con esto i iberar cantidades importantes de glucosa que favoreced el crecilriiento del hongo lo que normalmente estaacute reiacionado con una produccioacuten importante de conidias

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I

I

I c- 7 DIAS

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 509xl0^9 I I I I

I I 1 I

Harina de Trigo 14 367X1^9 I I I

I I I I

Melaza 14 424x10-9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 16Ox10^8 I I I I

522- d t ~ 1 7 9 ~ ~

Eh la tabla VI se muestran l o s Ie obtenidos para A termus -utiliZando__las 4 fuentes de carbono antes mencionadas El Ie mas alto se encmtroacute en el medio de cultivo con M e l a z a seguido de la Yprina de Yuca y Trigo y por uacuteltimo la Sacarosa d t m u s es utilizado en lo s procesos de aprovechamiento de eubproductos de la industria cantildeera en cuba (meollo y bagazo) (Blanco bpez Villarl968) Esta cepa estaacute adaptada a l o s procesos de la industria cuntildeera de c u b a por lo que se esperariacutea que espurulara mejor en Melaza tal como ocurrioacute

TXBLA VI- Indices de espwulacibn para dtwreus utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa como fuente de carbono para tiempos de incubacidn de 7 dias y relacioacuten CN de 14

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I I I I I I 7 DIAS I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 60x10n9 I I I

Harina de pigo 14 403xlO-9

I I I

1 I I I

I I I I

M e l a z a 14 612xlOA9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 S40~107 1 I I

211

523- Bbassi= 1

Las resulta- 5e rem en la t ~ ~ h ~ f - - - ~ ~ - - ~ ~ e se -obtwo en el medio con Harina de Trigo m i d o de la H a r i n a de Yuca Melnza y Sacarosa Se puede obeervar que 1 0 s Ie amp altos se logran con los sustratos amiluceos que tal vez puedan ser mamp facilmente utilizados por el microoqanimno debido a l - v e s o de gelatinizacioacuten que Wren

524- Penicillium sp

Los resultados se muestran en la tabla VIII Los mayores le se alcanzaron con las Harims de Yuca y Trigo con respecto a los atros dos sustratos Se observoacute una mayor produccioacuten de micelio en los sustratos amilaceos lo que podria justificar la produccibn maacutes alta de conidias

525- Thnmianum

LBS resultados se reportan en la tabla XI Estudios hechos par Raussos (1985) demostraron la capacidad de Thanianum en la produccidn de ami la s a s utilizando almidoacuten cam0 fuente de carbono pesto que la harim de yuca y la harina de trigo son sustratos amilacecs se esperariacutea una produccioacuten impcortante de esporras tal COQLO sucedioacute para la harina de yuca y no asi para la harina de trigo Con respecto a la s a c m a el Ie tan bajo que se obtuvo con relacidn a la melaza pede ser debido a todos los compuestos que se encuentran en las m e l a z a s

c TABLA VI1- Inlices de esparcllacibn para Bhssiana utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo M e i u z a y Sacarosa axno fuente de carbono para tiempos de incubacioacuten de 7 dias y relacion CN de 14

I I I

I I I Ie I

Summ CN I I

1 I I I

I I

1 I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 1 8 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

7 DIAS

Harina de Pigo 14 702~10~9 I I I I

I I I

Melaza 14 217~10~9 I I I I

I I I I

Sacarosa i 14 8 5 8 ~ 1 0 ~ 6 I I I I

r

I I

I Ie 1

I Summ CN I

I 1 i I

I I 7 DIAS

I I I I

I 1 I I

Harina de Yuca 14 142x10^10 I I I I

I I I I

Harina de Pigo 14 832xlO-9 1 1 I I

I I I I

M e l a z a 14 293~10~9

I I I

Sacarosa 14 103x10n9

I I I I

I I I I

m IX-Indices de espauulacian para Thamianum utilizando Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa corno fuente de carbono para tiapos de incubacich de 7 dim y relacioacuten CN de 14

I I I I

I -

1 I Ie I

I Summ CN I

I I 7 D I A S t I I I

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 11ox1On1O I I I I

I I I I

Harina de Trigo 14 12Ox10-9 I I I I

I I I I

M e l a z a 14 875~10~9 I I I I

I

Sacarosa I

I i I

14 11Ox10^8 I I I

526- Conclusiones

Varios autores han demostrado la importancia de la fuente de carbono sobre la conidiogenesis de hongos f ilamentosos (Vezina y co11965 Martinelli1976) en este estudio se pudo observar que cada cepa tiene caracteristicas fisiolcjgicas de esporulacidn propias con respecto al tipo de fuente de carbono que se le proporcione Para este caso en especial la cepa de Aniper esporuld mejor en Harina de Yuca A termus en M e l a z a B m i a m en Harinri de Trigo y T harzinnum en Harina de Yuca

------Esttuiaa - - h - - i s o s (lE5) han demostrado que la concentracidn de Nieeno prwente en el mampio de cup170 ejerce una influencia directa en el nuacutemero de conidiosporas producidas por Thurzjmm par 10 que era necesario seleccionar la relacioacuten CN oacuteptima para cada cepa y para cada sustrato

la composicioacuten de l o s medios de cultivo utilizados para llevar a cabo este estudio estb presentados en las tablas I 11 I11 y IV Se utilizaron 4 diferentes relaciones CN estas fueron de 101424 y 40 empleanda UM mezcla de 23 panes de Sulfato de Amonio y 13 parte de h a toanando- 128 g de carbono como base de caacutelculo y tiempos de incubacioacuten de 7 y 14 dias l o s experimentos se realizaron en matraces de 250 ml

Ln relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despueacutes de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Anigw son mostrados en la tabla X

h datos obtenidos para Aniger nos indican que cuardo se emplea Harina de Yuca en concentracich de 40 gl y la reiaci6n CN estaacute entre 10 y 40 no es un factor determinante en la conidiogeacutenesis ya que esporula de rnanera similar entre estos r a n g o s para l o s medio a base de Harina de Trigo la CN entre 40 y 24 es donde mejm esporulacidn se obtiene

r 5 3 2 - A s m i l ~ s t

h relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de espomlaci6n obtenidos aespuk de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Rtemxs son mostradrx en la tabla XI

Lns medios de cultivo con 14 dias de incubacidn presentan el mayor ntUnero de conidiospwas a una relaci6n CN de 14 con excepcih de l o s medios con Sacarosa que mostramn en todos l o s cc~sos un compm-tamiento muy pobre con respecto al n h de conidias producidas Los mejores Ie se log-amn con Harina de Yuca y M e l a z a con una relacidn CN de-14 para 14 dias de incubacidn

Lo relaci6n que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despuds de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para B b s s i a n a son mostrados en la tabla XII

b Ie logrados para B b n s s i m e son muy similares entre si es decir no cambian significativamente l o s Ie para l o s cultivos con 14 dias de inmbacidn son bastante altos siendo el medio de cultivo con una relaci6n CN de 14 y Melaza como fuente de carbono ei queposee el mejor Ie con un tiempo de incuhcidn de 14 dias BI esta cepa se ve su capacidad de adaptacioacuten con respecto a l a s anteriores para crecer en Sackrosa

~ r

27 534- Psnicilliue sp

kiaeiampi que exiate entre 1- necG~-edt-~vcv - y h rendimientos de esparulaciOacutentilde-6btenidos despds de 7 -_Fl4 dias de cultivo en matraces para FbnciIlium sp son mostrados en la tabla XILI

_

La relacidn CN entre 10 y40 no tiene una influencia directa en la conidioghnesis de esta cepa sin embargo se dbeewa una tendencia a la disminucioacuten del N de conidiospcwas producidas en los cultivos con 14 dias de incubacih Los mayores Ie se lcgrarcm con los medios de cultivo a bnse de Harina de Yuca y Harina de Trigo

La relaci6n que existe entre la composiciiquestn quiacutemica del medio de cultivo y l a s rendimientos de esporulaci6n obtenidos desples de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Thurzzanum son mostrados en la tabla XIV

Las resultados obtenidos 1x1s mestran unatendencia hacia la obtencioacuten del m y m Ie en rangos de CN de 10 a 14 y estudios hechos par Raussos (1985) sohre el efecto de la concentraci6n de Nitriquestgeno en la oanidiogdnesis de Thaniunum pnmporcionaron una CN optima de 14 utilizando Harina de Yuca corno fuente de curbno

Sin embxqo pura una CN de 3253 obtiene un Ie para 7 dias --de incubacidn de Q16x1On9 cmparando este resultado con el resultado obtenido en mi estudio encuentro que a una CN de 40 para 7 diQs de incubacibn tengo un Ie de 132xlO-9 esto es 13 veces mamp por lo que es dificil comparar estos datos en l o s resultados obtenidos se obsewa una tendencia para los cultivos con 14 dias de incubacidn de disminuir el Ie confarme aumenta la relacidn CN y para l a s cultivos con 7 dias se observn lo contrario Los Ie mus altos se logran con l o s medios de cultivo a base de Harinu de Yuca y Melaza

536- Conclusiones

Las cepas estudiadas eSp0IWlUn dependiendo del tipo de fuente de carbono la fuente de carbono y su naturaleza tiene m infiuencia directa en la conidiogeacutenesis de l o s hongos f ilamentosos que la concentracioacuten de nitrdgeno sin embargo es recamendable la adlcidn ae nitdgeno entre l o s rargos de CN de 10 a 4 0

Para disminuir l o s costos de pmduccioacuten de conidiosporas hay que optimizar los medics de cultivo nacer la seleccioacuten de una h e m fuente de carbono para cada cepa y trhjar en rangos de CN de 14 a 4 0

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
                                          • -- A
                                          • --
                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
                                          • M
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511- AsparYillus n i p -

de 3 dias aparecen farmas especializadas de reploduccian asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este se desarrolla UM vesicula y sobre la vesicula se

conidicsporas Estas conidospwas presentan un color cafe obscuro y n e g r o son gldbulares ornamentadas con un diumetro aproximado de 35 a 5 m La colonia cambia al c o l o r negro del centro B los ext remos

El micelio de este horgo es septa30 y de color blanco despues

desarrollan lae f ialides de las cuales se farmaran l a s

LA estructura de la fama de repruduccion se p-esenta en la figura 2

ru LA 7 V E S I CULA

ESTI P E

ELULA P O D A L

Figura 2 - Conidioforas y conidias de Aniger

El micelio de este h q o e8 septado de color blanco depea de 3 dias aparecen fonoas especializades de repmduccion asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este crecen fialides y de l a s fialides se forman las conidiosparas y presenta exudados ambarinoe Eetas conidiceparas presentan un color amarillo l a s conidiceporas son lisas glokulares con un diametro aproximado de 15 - 25 m

Figura 3 la estructura de la f a r m a de reproduction presenta en la

FIA

Figura 3- Conidioforos y coniaias de X t e

Este hongo presenta un micelio atercipelado y coposo inicialmente blanco presenta un raacutenquis genicula denticulado o en zigzag posteriarmente se tans amarillento Posee conidias hialinas y gldlxllams can un diaacutemetro aproximado de 15 a 3ym La estructura se presenta en la Figura 4

RANQU I S

c

Figura 4 - ConidiOacutefaros y conidias de E h s s i e n o

m cepa se ha identificado corno Penicillium W f a r t i i presenta un micelio septado con produccioacuten de micelio vegetativo aerial d e y e e de un tiempo aparecen estructurns especializadas de repocoduccion a s e x u a l Se presenta un estipe m e n t a d o unas brancpeas meacutetulas f M i d e s y conidias Elstas conidiosporas presentan un colap- verduzco son globdares y lisas con un dibtro apmximado de 4 a 6p Lae conidias son producidas en cadenas cortas La estructura se presenta en la Figura 5

C O N l D l A S

1 O r r m

Figura 5- Conidioacuteforos y coniaias de Fenicilliun

Al inicio este h q o presenta un micelio blanco pterionnente aprecen farmas especializadas de reproduccion asexual fialidee y conidicepuras I m conidiofaros se presentan en farmas piramidalee y en estos sistemas las fialidee Be localizan en g r u ~ w de dos a cuatro Las conidia3 Bon de color verde olivo son de superficie lisas subglobulares con un diametm apmximado de 2 a 3 m

La egtructura de la fcwma de reproduccion se presenta en la figura 6

Las colonias de Thnnianum en FDA se caracterizan pol tener un color verde con circulos concentricos Hay que mencionar que las colanias pmducen un olor a coco (coconut) muy caracteristico

CONlDl

Figura 6 - Conidioforos y conidias de Thanianum

516- Conclusiones v 4

_ _

el curse) de este capitulo se describieron los sietemas de reproduccioacuten de las cinco cepas de hongos filamentosos estudiados Todos estos hongos se repaoducen de manera a s e x u a l Se que l a s 5 cepas presentan estructuras muy diferentes a s i co~po diversos colores en l o s estadios de crecimiento vegetativo y ccmidiogdnesie ademds presentan conidimporas glohlares de muy diversos tamafios

c

093039 t

2 2

- La composicioacuten de l o s diferentes meampicsde cultvoutQizados pera llevar a cabo este estudio fueron medio N 2 de l a s tablas I 11111 y IV y se establecioacute prabay las diferentes fuentes de carbno (Harina de Yuca Harina de Pigo M e l a z a y Sacarosa) en matraces a una relaci6n CN de 14 para de esta manera poder observar el efecto que cada una de ell- ejerce solre la conidicgbesis de l o s hongos filamentosos estudiadas L m resultados se reman en l a s tablas V VI VII VI11 y XI y se exp-esan en base al Indice de Bporulacidn (Ie - N de esporas g de sustrato carbonado) para 7 dias de incubacion a temperatura ambiente (15-22C)

~ - -4

La Harim de Yuca es un producto amilaceo que ha demostrado ser un sustrato de gran eficiencia para la produccion de conidiosparas de hongos filamentosos ademds de ser un producto tropical de facil acceso su principal componente es el almidoacuten que corresponde al 80 en materia seca se encuentran en esta Harina pteiacutenas grasas y vitaminas del tipo B y C adamp de fibras y cenizas (Grace 1977)

la Harina de Pigo es otro sustrato amilaceo que se considerd importante utilizar debido a su alta disponibilidad en su canposicioacuten estan presentes pteiacutenas grw calcio f oacute s f m h i m tiamina riboflavina y niacina esto lo hace un sustrato interesante

La M e l a z a es el subproducto final de la fakicacioacuten de azucar es un liquido o b s c u r o denso y viscoso que se separa de la masa cocida de baja-calidad y del cual no se pede cristalizar ampamcar por amptodos mencionales y econoacutemicos en su composicioacuten estdn presentes 1 0 s amcares y otras sustancias entre l a s cuales se pueden citar l o s corapuestos nitrogenados aacutecidos aminoacidos albiminas vitaminas ceras esteroles lipid- sales minerales y cenizas etc (ICIDCA1986) Como se puede ver es un producto muy complejo por lo que puede ser un sustrato muy atractivo para su utilizaci6n como fuente de carbono en ipedios de cultivo pura la espomlaci6n de hongos filamentosos (Brinela 1987)

la s a c m a es un producto de facil adquisicioacuten y de pmduccioacuten idustrial importante por lo que se considem un sustrato atractivo para la produccioacuten de amidiosporas de hongos filamentosos La sacarosa se encuentra fonnada por una molecula de fructosa y una de glucosa l o s medios de cultivo que contienen sacarosa pcdriamos decir que son medios simples en comparacioacuten con la complejidad de la melaza y l a s harinas

521- A n i g ~

Fh la tabla V se muestran l o s Ie obtenidos para Anigerutilizardo l a s 4 fuentes de carbono antes mencionadas El mayor Ie se alcanzoacute en el medio de cultivo con k i n a de Yuca seguido de la M e l a z a la k i n a de Pigo y por Gltimo la Sacarosa se ha demostrado que durante el proceso de esterilizacioacuten la Harina de Yuca sufre un tratamiento teacutermico que hace que las moleacuteculas de almidh pasen cie una forma cristalina a un estado amdrfo (gelatinizacion) y que Ani_mr es un productm de amilasas (Raimbault 19801 lo que sugiere que la gelatinizacioacuten podriacutea facilitar el ataque enzimdtico y con esto i iberar cantidades importantes de glucosa que favoreced el crecilriiento del hongo lo que normalmente estaacute reiacionado con una produccioacuten importante de conidias

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I

I

I c- 7 DIAS

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 509xl0^9 I I I I

I I 1 I

Harina de Trigo 14 367X1^9 I I I

I I I I

Melaza 14 424x10-9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 16Ox10^8 I I I I

522- d t ~ 1 7 9 ~ ~

Eh la tabla VI se muestran l o s Ie obtenidos para A termus -utiliZando__las 4 fuentes de carbono antes mencionadas El Ie mas alto se encmtroacute en el medio de cultivo con M e l a z a seguido de la Yprina de Yuca y Trigo y por uacuteltimo la Sacarosa d t m u s es utilizado en lo s procesos de aprovechamiento de eubproductos de la industria cantildeera en cuba (meollo y bagazo) (Blanco bpez Villarl968) Esta cepa estaacute adaptada a l o s procesos de la industria cuntildeera de c u b a por lo que se esperariacutea que espurulara mejor en Melaza tal como ocurrioacute

TXBLA VI- Indices de espwulacibn para dtwreus utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa como fuente de carbono para tiempos de incubacidn de 7 dias y relacioacuten CN de 14

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I I I I I I 7 DIAS I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 60x10n9 I I I

Harina de pigo 14 403xlO-9

I I I

1 I I I

I I I I

M e l a z a 14 612xlOA9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 S40~107 1 I I

211

523- Bbassi= 1

Las resulta- 5e rem en la t ~ ~ h ~ f - - - ~ ~ - - ~ ~ e se -obtwo en el medio con Harina de Trigo m i d o de la H a r i n a de Yuca Melnza y Sacarosa Se puede obeervar que 1 0 s Ie amp altos se logran con los sustratos amiluceos que tal vez puedan ser mamp facilmente utilizados por el microoqanimno debido a l - v e s o de gelatinizacioacuten que Wren

524- Penicillium sp

Los resultados se muestran en la tabla VIII Los mayores le se alcanzaron con las Harims de Yuca y Trigo con respecto a los atros dos sustratos Se observoacute una mayor produccioacuten de micelio en los sustratos amilaceos lo que podria justificar la produccibn maacutes alta de conidias

525- Thnmianum

LBS resultados se reportan en la tabla XI Estudios hechos par Raussos (1985) demostraron la capacidad de Thanianum en la produccidn de ami la s a s utilizando almidoacuten cam0 fuente de carbono pesto que la harim de yuca y la harina de trigo son sustratos amilacecs se esperariacutea una produccioacuten impcortante de esporras tal COQLO sucedioacute para la harina de yuca y no asi para la harina de trigo Con respecto a la s a c m a el Ie tan bajo que se obtuvo con relacidn a la melaza pede ser debido a todos los compuestos que se encuentran en las m e l a z a s

c TABLA VI1- Inlices de esparcllacibn para Bhssiana utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo M e i u z a y Sacarosa axno fuente de carbono para tiempos de incubacioacuten de 7 dias y relacion CN de 14

I I I

I I I Ie I

Summ CN I I

1 I I I

I I

1 I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 1 8 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

7 DIAS

Harina de Pigo 14 702~10~9 I I I I

I I I

Melaza 14 217~10~9 I I I I

I I I I

Sacarosa i 14 8 5 8 ~ 1 0 ~ 6 I I I I

r

I I

I Ie 1

I Summ CN I

I 1 i I

I I 7 DIAS

I I I I

I 1 I I

Harina de Yuca 14 142x10^10 I I I I

I I I I

Harina de Pigo 14 832xlO-9 1 1 I I

I I I I

M e l a z a 14 293~10~9

I I I

Sacarosa 14 103x10n9

I I I I

I I I I

m IX-Indices de espauulacian para Thamianum utilizando Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa corno fuente de carbono para tiapos de incubacich de 7 dim y relacioacuten CN de 14

I I I I

I -

1 I Ie I

I Summ CN I

I I 7 D I A S t I I I

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 11ox1On1O I I I I

I I I I

Harina de Trigo 14 12Ox10-9 I I I I

I I I I

M e l a z a 14 875~10~9 I I I I

I

Sacarosa I

I i I

14 11Ox10^8 I I I

526- Conclusiones

Varios autores han demostrado la importancia de la fuente de carbono sobre la conidiogenesis de hongos f ilamentosos (Vezina y co11965 Martinelli1976) en este estudio se pudo observar que cada cepa tiene caracteristicas fisiolcjgicas de esporulacidn propias con respecto al tipo de fuente de carbono que se le proporcione Para este caso en especial la cepa de Aniper esporuld mejor en Harina de Yuca A termus en M e l a z a B m i a m en Harinri de Trigo y T harzinnum en Harina de Yuca

------Esttuiaa - - h - - i s o s (lE5) han demostrado que la concentracidn de Nieeno prwente en el mampio de cup170 ejerce una influencia directa en el nuacutemero de conidiosporas producidas por Thurzjmm par 10 que era necesario seleccionar la relacioacuten CN oacuteptima para cada cepa y para cada sustrato

la composicioacuten de l o s medios de cultivo utilizados para llevar a cabo este estudio estb presentados en las tablas I 11 I11 y IV Se utilizaron 4 diferentes relaciones CN estas fueron de 101424 y 40 empleanda UM mezcla de 23 panes de Sulfato de Amonio y 13 parte de h a toanando- 128 g de carbono como base de caacutelculo y tiempos de incubacioacuten de 7 y 14 dias l o s experimentos se realizaron en matraces de 250 ml

Ln relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despueacutes de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Anigw son mostrados en la tabla X

h datos obtenidos para Aniger nos indican que cuardo se emplea Harina de Yuca en concentracich de 40 gl y la reiaci6n CN estaacute entre 10 y 40 no es un factor determinante en la conidiogeacutenesis ya que esporula de rnanera similar entre estos r a n g o s para l o s medio a base de Harina de Trigo la CN entre 40 y 24 es donde mejm esporulacidn se obtiene

r 5 3 2 - A s m i l ~ s t

h relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de espomlaci6n obtenidos aespuk de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Rtemxs son mostradrx en la tabla XI

Lns medios de cultivo con 14 dias de incubacidn presentan el mayor ntUnero de conidiospwas a una relaci6n CN de 14 con excepcih de l o s medios con Sacarosa que mostramn en todos l o s cc~sos un compm-tamiento muy pobre con respecto al n h de conidias producidas Los mejores Ie se log-amn con Harina de Yuca y M e l a z a con una relacidn CN de-14 para 14 dias de incubacidn

Lo relaci6n que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despuds de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para B b s s i a n a son mostrados en la tabla XII

b Ie logrados para B b n s s i m e son muy similares entre si es decir no cambian significativamente l o s Ie para l o s cultivos con 14 dias de inmbacidn son bastante altos siendo el medio de cultivo con una relaci6n CN de 14 y Melaza como fuente de carbono ei queposee el mejor Ie con un tiempo de incuhcidn de 14 dias BI esta cepa se ve su capacidad de adaptacioacuten con respecto a l a s anteriores para crecer en Sackrosa

~ r

27 534- Psnicilliue sp

kiaeiampi que exiate entre 1- necG~-edt-~vcv - y h rendimientos de esparulaciOacutentilde-6btenidos despds de 7 -_Fl4 dias de cultivo en matraces para FbnciIlium sp son mostrados en la tabla XILI

_

La relacidn CN entre 10 y40 no tiene una influencia directa en la conidioghnesis de esta cepa sin embargo se dbeewa una tendencia a la disminucioacuten del N de conidiospcwas producidas en los cultivos con 14 dias de incubacih Los mayores Ie se lcgrarcm con los medios de cultivo a bnse de Harina de Yuca y Harina de Trigo

La relaci6n que existe entre la composiciiquestn quiacutemica del medio de cultivo y l a s rendimientos de esporulaci6n obtenidos desples de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Thurzzanum son mostrados en la tabla XIV

Las resultados obtenidos 1x1s mestran unatendencia hacia la obtencioacuten del m y m Ie en rangos de CN de 10 a 14 y estudios hechos par Raussos (1985) sohre el efecto de la concentraci6n de Nitriquestgeno en la oanidiogdnesis de Thaniunum pnmporcionaron una CN optima de 14 utilizando Harina de Yuca corno fuente de curbno

Sin embxqo pura una CN de 3253 obtiene un Ie para 7 dias --de incubacidn de Q16x1On9 cmparando este resultado con el resultado obtenido en mi estudio encuentro que a una CN de 40 para 7 diQs de incubacibn tengo un Ie de 132xlO-9 esto es 13 veces mamp por lo que es dificil comparar estos datos en l o s resultados obtenidos se obsewa una tendencia para los cultivos con 14 dias de incubacidn de disminuir el Ie confarme aumenta la relacidn CN y para l a s cultivos con 7 dias se observn lo contrario Los Ie mus altos se logran con l o s medios de cultivo a base de Harinu de Yuca y Melaza

536- Conclusiones

Las cepas estudiadas eSp0IWlUn dependiendo del tipo de fuente de carbono la fuente de carbono y su naturaleza tiene m infiuencia directa en la conidiogeacutenesis de l o s hongos f ilamentosos que la concentracioacuten de nitrdgeno sin embargo es recamendable la adlcidn ae nitdgeno entre l o s rargos de CN de 10 a 4 0

Para disminuir l o s costos de pmduccioacuten de conidiosporas hay que optimizar los medics de cultivo nacer la seleccioacuten de una h e m fuente de carbono para cada cepa y trhjar en rangos de CN de 14 a 4 0

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
                                          • -- A
                                          • --
                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
                                          • M
Page 23: MATRICULA: 83323133.

El micelio de este h q o e8 septado de color blanco depea de 3 dias aparecen fonoas especializades de repmduccion asexual (celula poda1 o celula pie) de la cual crece un estipe de c o l o r hialino de este crecen fialides y de l a s fialides se forman las conidiosparas y presenta exudados ambarinoe Eetas conidiceparas presentan un color amarillo l a s conidiceporas son lisas glokulares con un diametro aproximado de 15 - 25 m

Figura 3 la estructura de la f a r m a de reproduction presenta en la

FIA

Figura 3- Conidioforos y coniaias de X t e

Este hongo presenta un micelio atercipelado y coposo inicialmente blanco presenta un raacutenquis genicula denticulado o en zigzag posteriarmente se tans amarillento Posee conidias hialinas y gldlxllams can un diaacutemetro aproximado de 15 a 3ym La estructura se presenta en la Figura 4

RANQU I S

c

Figura 4 - ConidiOacutefaros y conidias de E h s s i e n o

m cepa se ha identificado corno Penicillium W f a r t i i presenta un micelio septado con produccioacuten de micelio vegetativo aerial d e y e e de un tiempo aparecen estructurns especializadas de repocoduccion a s e x u a l Se presenta un estipe m e n t a d o unas brancpeas meacutetulas f M i d e s y conidias Elstas conidiosporas presentan un colap- verduzco son globdares y lisas con un dibtro apmximado de 4 a 6p Lae conidias son producidas en cadenas cortas La estructura se presenta en la Figura 5

C O N l D l A S

1 O r r m

Figura 5- Conidioacuteforos y coniaias de Fenicilliun

Al inicio este h q o presenta un micelio blanco pterionnente aprecen farmas especializadas de reproduccion asexual fialidee y conidicepuras I m conidiofaros se presentan en farmas piramidalee y en estos sistemas las fialidee Be localizan en g r u ~ w de dos a cuatro Las conidia3 Bon de color verde olivo son de superficie lisas subglobulares con un diametm apmximado de 2 a 3 m

La egtructura de la fcwma de reproduccion se presenta en la figura 6

Las colonias de Thnnianum en FDA se caracterizan pol tener un color verde con circulos concentricos Hay que mencionar que las colanias pmducen un olor a coco (coconut) muy caracteristico

CONlDl

Figura 6 - Conidioforos y conidias de Thanianum

516- Conclusiones v 4

_ _

el curse) de este capitulo se describieron los sietemas de reproduccioacuten de las cinco cepas de hongos filamentosos estudiados Todos estos hongos se repaoducen de manera a s e x u a l Se que l a s 5 cepas presentan estructuras muy diferentes a s i co~po diversos colores en l o s estadios de crecimiento vegetativo y ccmidiogdnesie ademds presentan conidimporas glohlares de muy diversos tamafios

c

093039 t

2 2

- La composicioacuten de l o s diferentes meampicsde cultvoutQizados pera llevar a cabo este estudio fueron medio N 2 de l a s tablas I 11111 y IV y se establecioacute prabay las diferentes fuentes de carbno (Harina de Yuca Harina de Pigo M e l a z a y Sacarosa) en matraces a una relaci6n CN de 14 para de esta manera poder observar el efecto que cada una de ell- ejerce solre la conidicgbesis de l o s hongos filamentosos estudiadas L m resultados se reman en l a s tablas V VI VII VI11 y XI y se exp-esan en base al Indice de Bporulacidn (Ie - N de esporas g de sustrato carbonado) para 7 dias de incubacion a temperatura ambiente (15-22C)

~ - -4

La Harim de Yuca es un producto amilaceo que ha demostrado ser un sustrato de gran eficiencia para la produccion de conidiosparas de hongos filamentosos ademds de ser un producto tropical de facil acceso su principal componente es el almidoacuten que corresponde al 80 en materia seca se encuentran en esta Harina pteiacutenas grasas y vitaminas del tipo B y C adamp de fibras y cenizas (Grace 1977)

la Harina de Pigo es otro sustrato amilaceo que se considerd importante utilizar debido a su alta disponibilidad en su canposicioacuten estan presentes pteiacutenas grw calcio f oacute s f m h i m tiamina riboflavina y niacina esto lo hace un sustrato interesante

La M e l a z a es el subproducto final de la fakicacioacuten de azucar es un liquido o b s c u r o denso y viscoso que se separa de la masa cocida de baja-calidad y del cual no se pede cristalizar ampamcar por amptodos mencionales y econoacutemicos en su composicioacuten estdn presentes 1 0 s amcares y otras sustancias entre l a s cuales se pueden citar l o s corapuestos nitrogenados aacutecidos aminoacidos albiminas vitaminas ceras esteroles lipid- sales minerales y cenizas etc (ICIDCA1986) Como se puede ver es un producto muy complejo por lo que puede ser un sustrato muy atractivo para su utilizaci6n como fuente de carbono en ipedios de cultivo pura la espomlaci6n de hongos filamentosos (Brinela 1987)

la s a c m a es un producto de facil adquisicioacuten y de pmduccioacuten idustrial importante por lo que se considem un sustrato atractivo para la produccioacuten de amidiosporas de hongos filamentosos La sacarosa se encuentra fonnada por una molecula de fructosa y una de glucosa l o s medios de cultivo que contienen sacarosa pcdriamos decir que son medios simples en comparacioacuten con la complejidad de la melaza y l a s harinas

521- A n i g ~

Fh la tabla V se muestran l o s Ie obtenidos para Anigerutilizardo l a s 4 fuentes de carbono antes mencionadas El mayor Ie se alcanzoacute en el medio de cultivo con k i n a de Yuca seguido de la M e l a z a la k i n a de Pigo y por Gltimo la Sacarosa se ha demostrado que durante el proceso de esterilizacioacuten la Harina de Yuca sufre un tratamiento teacutermico que hace que las moleacuteculas de almidh pasen cie una forma cristalina a un estado amdrfo (gelatinizacion) y que Ani_mr es un productm de amilasas (Raimbault 19801 lo que sugiere que la gelatinizacioacuten podriacutea facilitar el ataque enzimdtico y con esto i iberar cantidades importantes de glucosa que favoreced el crecilriiento del hongo lo que normalmente estaacute reiacionado con una produccioacuten importante de conidias

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I

I

I c- 7 DIAS

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 509xl0^9 I I I I

I I 1 I

Harina de Trigo 14 367X1^9 I I I

I I I I

Melaza 14 424x10-9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 16Ox10^8 I I I I

522- d t ~ 1 7 9 ~ ~

Eh la tabla VI se muestran l o s Ie obtenidos para A termus -utiliZando__las 4 fuentes de carbono antes mencionadas El Ie mas alto se encmtroacute en el medio de cultivo con M e l a z a seguido de la Yprina de Yuca y Trigo y por uacuteltimo la Sacarosa d t m u s es utilizado en lo s procesos de aprovechamiento de eubproductos de la industria cantildeera en cuba (meollo y bagazo) (Blanco bpez Villarl968) Esta cepa estaacute adaptada a l o s procesos de la industria cuntildeera de c u b a por lo que se esperariacutea que espurulara mejor en Melaza tal como ocurrioacute

TXBLA VI- Indices de espwulacibn para dtwreus utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa como fuente de carbono para tiempos de incubacidn de 7 dias y relacioacuten CN de 14

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I I I I I I 7 DIAS I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 60x10n9 I I I

Harina de pigo 14 403xlO-9

I I I

1 I I I

I I I I

M e l a z a 14 612xlOA9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 S40~107 1 I I

211

523- Bbassi= 1

Las resulta- 5e rem en la t ~ ~ h ~ f - - - ~ ~ - - ~ ~ e se -obtwo en el medio con Harina de Trigo m i d o de la H a r i n a de Yuca Melnza y Sacarosa Se puede obeervar que 1 0 s Ie amp altos se logran con los sustratos amiluceos que tal vez puedan ser mamp facilmente utilizados por el microoqanimno debido a l - v e s o de gelatinizacioacuten que Wren

524- Penicillium sp

Los resultados se muestran en la tabla VIII Los mayores le se alcanzaron con las Harims de Yuca y Trigo con respecto a los atros dos sustratos Se observoacute una mayor produccioacuten de micelio en los sustratos amilaceos lo que podria justificar la produccibn maacutes alta de conidias

525- Thnmianum

LBS resultados se reportan en la tabla XI Estudios hechos par Raussos (1985) demostraron la capacidad de Thanianum en la produccidn de ami la s a s utilizando almidoacuten cam0 fuente de carbono pesto que la harim de yuca y la harina de trigo son sustratos amilacecs se esperariacutea una produccioacuten impcortante de esporras tal COQLO sucedioacute para la harina de yuca y no asi para la harina de trigo Con respecto a la s a c m a el Ie tan bajo que se obtuvo con relacidn a la melaza pede ser debido a todos los compuestos que se encuentran en las m e l a z a s

c TABLA VI1- Inlices de esparcllacibn para Bhssiana utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo M e i u z a y Sacarosa axno fuente de carbono para tiempos de incubacioacuten de 7 dias y relacion CN de 14

I I I

I I I Ie I

Summ CN I I

1 I I I

I I

1 I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 1 8 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

7 DIAS

Harina de Pigo 14 702~10~9 I I I I

I I I

Melaza 14 217~10~9 I I I I

I I I I

Sacarosa i 14 8 5 8 ~ 1 0 ~ 6 I I I I

r

I I

I Ie 1

I Summ CN I

I 1 i I

I I 7 DIAS

I I I I

I 1 I I

Harina de Yuca 14 142x10^10 I I I I

I I I I

Harina de Pigo 14 832xlO-9 1 1 I I

I I I I

M e l a z a 14 293~10~9

I I I

Sacarosa 14 103x10n9

I I I I

I I I I

m IX-Indices de espauulacian para Thamianum utilizando Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa corno fuente de carbono para tiapos de incubacich de 7 dim y relacioacuten CN de 14

I I I I

I -

1 I Ie I

I Summ CN I

I I 7 D I A S t I I I

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 11ox1On1O I I I I

I I I I

Harina de Trigo 14 12Ox10-9 I I I I

I I I I

M e l a z a 14 875~10~9 I I I I

I

Sacarosa I

I i I

14 11Ox10^8 I I I

526- Conclusiones

Varios autores han demostrado la importancia de la fuente de carbono sobre la conidiogenesis de hongos f ilamentosos (Vezina y co11965 Martinelli1976) en este estudio se pudo observar que cada cepa tiene caracteristicas fisiolcjgicas de esporulacidn propias con respecto al tipo de fuente de carbono que se le proporcione Para este caso en especial la cepa de Aniper esporuld mejor en Harina de Yuca A termus en M e l a z a B m i a m en Harinri de Trigo y T harzinnum en Harina de Yuca

------Esttuiaa - - h - - i s o s (lE5) han demostrado que la concentracidn de Nieeno prwente en el mampio de cup170 ejerce una influencia directa en el nuacutemero de conidiosporas producidas por Thurzjmm par 10 que era necesario seleccionar la relacioacuten CN oacuteptima para cada cepa y para cada sustrato

la composicioacuten de l o s medios de cultivo utilizados para llevar a cabo este estudio estb presentados en las tablas I 11 I11 y IV Se utilizaron 4 diferentes relaciones CN estas fueron de 101424 y 40 empleanda UM mezcla de 23 panes de Sulfato de Amonio y 13 parte de h a toanando- 128 g de carbono como base de caacutelculo y tiempos de incubacioacuten de 7 y 14 dias l o s experimentos se realizaron en matraces de 250 ml

Ln relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despueacutes de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Anigw son mostrados en la tabla X

h datos obtenidos para Aniger nos indican que cuardo se emplea Harina de Yuca en concentracich de 40 gl y la reiaci6n CN estaacute entre 10 y 40 no es un factor determinante en la conidiogeacutenesis ya que esporula de rnanera similar entre estos r a n g o s para l o s medio a base de Harina de Trigo la CN entre 40 y 24 es donde mejm esporulacidn se obtiene

r 5 3 2 - A s m i l ~ s t

h relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de espomlaci6n obtenidos aespuk de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Rtemxs son mostradrx en la tabla XI

Lns medios de cultivo con 14 dias de incubacidn presentan el mayor ntUnero de conidiospwas a una relaci6n CN de 14 con excepcih de l o s medios con Sacarosa que mostramn en todos l o s cc~sos un compm-tamiento muy pobre con respecto al n h de conidias producidas Los mejores Ie se log-amn con Harina de Yuca y M e l a z a con una relacidn CN de-14 para 14 dias de incubacidn

Lo relaci6n que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despuds de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para B b s s i a n a son mostrados en la tabla XII

b Ie logrados para B b n s s i m e son muy similares entre si es decir no cambian significativamente l o s Ie para l o s cultivos con 14 dias de inmbacidn son bastante altos siendo el medio de cultivo con una relaci6n CN de 14 y Melaza como fuente de carbono ei queposee el mejor Ie con un tiempo de incuhcidn de 14 dias BI esta cepa se ve su capacidad de adaptacioacuten con respecto a l a s anteriores para crecer en Sackrosa

~ r

27 534- Psnicilliue sp

kiaeiampi que exiate entre 1- necG~-edt-~vcv - y h rendimientos de esparulaciOacutentilde-6btenidos despds de 7 -_Fl4 dias de cultivo en matraces para FbnciIlium sp son mostrados en la tabla XILI

_

La relacidn CN entre 10 y40 no tiene una influencia directa en la conidioghnesis de esta cepa sin embargo se dbeewa una tendencia a la disminucioacuten del N de conidiospcwas producidas en los cultivos con 14 dias de incubacih Los mayores Ie se lcgrarcm con los medios de cultivo a bnse de Harina de Yuca y Harina de Trigo

La relaci6n que existe entre la composiciiquestn quiacutemica del medio de cultivo y l a s rendimientos de esporulaci6n obtenidos desples de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Thurzzanum son mostrados en la tabla XIV

Las resultados obtenidos 1x1s mestran unatendencia hacia la obtencioacuten del m y m Ie en rangos de CN de 10 a 14 y estudios hechos par Raussos (1985) sohre el efecto de la concentraci6n de Nitriquestgeno en la oanidiogdnesis de Thaniunum pnmporcionaron una CN optima de 14 utilizando Harina de Yuca corno fuente de curbno

Sin embxqo pura una CN de 3253 obtiene un Ie para 7 dias --de incubacidn de Q16x1On9 cmparando este resultado con el resultado obtenido en mi estudio encuentro que a una CN de 40 para 7 diQs de incubacibn tengo un Ie de 132xlO-9 esto es 13 veces mamp por lo que es dificil comparar estos datos en l o s resultados obtenidos se obsewa una tendencia para los cultivos con 14 dias de incubacidn de disminuir el Ie confarme aumenta la relacidn CN y para l a s cultivos con 7 dias se observn lo contrario Los Ie mus altos se logran con l o s medios de cultivo a base de Harinu de Yuca y Melaza

536- Conclusiones

Las cepas estudiadas eSp0IWlUn dependiendo del tipo de fuente de carbono la fuente de carbono y su naturaleza tiene m infiuencia directa en la conidiogeacutenesis de l o s hongos f ilamentosos que la concentracioacuten de nitrdgeno sin embargo es recamendable la adlcidn ae nitdgeno entre l o s rargos de CN de 10 a 4 0

Para disminuir l o s costos de pmduccioacuten de conidiosporas hay que optimizar los medics de cultivo nacer la seleccioacuten de una h e m fuente de carbono para cada cepa y trhjar en rangos de CN de 14 a 4 0

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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-

- - -

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I t I

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
                                          • -- A
                                          • --
                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
                                          • M
Page 24: MATRICULA: 83323133.

Este hongo presenta un micelio atercipelado y coposo inicialmente blanco presenta un raacutenquis genicula denticulado o en zigzag posteriarmente se tans amarillento Posee conidias hialinas y gldlxllams can un diaacutemetro aproximado de 15 a 3ym La estructura se presenta en la Figura 4

RANQU I S

c

Figura 4 - ConidiOacutefaros y conidias de E h s s i e n o

m cepa se ha identificado corno Penicillium W f a r t i i presenta un micelio septado con produccioacuten de micelio vegetativo aerial d e y e e de un tiempo aparecen estructurns especializadas de repocoduccion a s e x u a l Se presenta un estipe m e n t a d o unas brancpeas meacutetulas f M i d e s y conidias Elstas conidiosporas presentan un colap- verduzco son globdares y lisas con un dibtro apmximado de 4 a 6p Lae conidias son producidas en cadenas cortas La estructura se presenta en la Figura 5

C O N l D l A S

1 O r r m

Figura 5- Conidioacuteforos y coniaias de Fenicilliun

Al inicio este h q o presenta un micelio blanco pterionnente aprecen farmas especializadas de reproduccion asexual fialidee y conidicepuras I m conidiofaros se presentan en farmas piramidalee y en estos sistemas las fialidee Be localizan en g r u ~ w de dos a cuatro Las conidia3 Bon de color verde olivo son de superficie lisas subglobulares con un diametm apmximado de 2 a 3 m

La egtructura de la fcwma de reproduccion se presenta en la figura 6

Las colonias de Thnnianum en FDA se caracterizan pol tener un color verde con circulos concentricos Hay que mencionar que las colanias pmducen un olor a coco (coconut) muy caracteristico

CONlDl

Figura 6 - Conidioforos y conidias de Thanianum

516- Conclusiones v 4

_ _

el curse) de este capitulo se describieron los sietemas de reproduccioacuten de las cinco cepas de hongos filamentosos estudiados Todos estos hongos se repaoducen de manera a s e x u a l Se que l a s 5 cepas presentan estructuras muy diferentes a s i co~po diversos colores en l o s estadios de crecimiento vegetativo y ccmidiogdnesie ademds presentan conidimporas glohlares de muy diversos tamafios

c

093039 t

2 2

- La composicioacuten de l o s diferentes meampicsde cultvoutQizados pera llevar a cabo este estudio fueron medio N 2 de l a s tablas I 11111 y IV y se establecioacute prabay las diferentes fuentes de carbno (Harina de Yuca Harina de Pigo M e l a z a y Sacarosa) en matraces a una relaci6n CN de 14 para de esta manera poder observar el efecto que cada una de ell- ejerce solre la conidicgbesis de l o s hongos filamentosos estudiadas L m resultados se reman en l a s tablas V VI VII VI11 y XI y se exp-esan en base al Indice de Bporulacidn (Ie - N de esporas g de sustrato carbonado) para 7 dias de incubacion a temperatura ambiente (15-22C)

~ - -4

La Harim de Yuca es un producto amilaceo que ha demostrado ser un sustrato de gran eficiencia para la produccion de conidiosparas de hongos filamentosos ademds de ser un producto tropical de facil acceso su principal componente es el almidoacuten que corresponde al 80 en materia seca se encuentran en esta Harina pteiacutenas grasas y vitaminas del tipo B y C adamp de fibras y cenizas (Grace 1977)

la Harina de Pigo es otro sustrato amilaceo que se considerd importante utilizar debido a su alta disponibilidad en su canposicioacuten estan presentes pteiacutenas grw calcio f oacute s f m h i m tiamina riboflavina y niacina esto lo hace un sustrato interesante

La M e l a z a es el subproducto final de la fakicacioacuten de azucar es un liquido o b s c u r o denso y viscoso que se separa de la masa cocida de baja-calidad y del cual no se pede cristalizar ampamcar por amptodos mencionales y econoacutemicos en su composicioacuten estdn presentes 1 0 s amcares y otras sustancias entre l a s cuales se pueden citar l o s corapuestos nitrogenados aacutecidos aminoacidos albiminas vitaminas ceras esteroles lipid- sales minerales y cenizas etc (ICIDCA1986) Como se puede ver es un producto muy complejo por lo que puede ser un sustrato muy atractivo para su utilizaci6n como fuente de carbono en ipedios de cultivo pura la espomlaci6n de hongos filamentosos (Brinela 1987)

la s a c m a es un producto de facil adquisicioacuten y de pmduccioacuten idustrial importante por lo que se considem un sustrato atractivo para la produccioacuten de amidiosporas de hongos filamentosos La sacarosa se encuentra fonnada por una molecula de fructosa y una de glucosa l o s medios de cultivo que contienen sacarosa pcdriamos decir que son medios simples en comparacioacuten con la complejidad de la melaza y l a s harinas

521- A n i g ~

Fh la tabla V se muestran l o s Ie obtenidos para Anigerutilizardo l a s 4 fuentes de carbono antes mencionadas El mayor Ie se alcanzoacute en el medio de cultivo con k i n a de Yuca seguido de la M e l a z a la k i n a de Pigo y por Gltimo la Sacarosa se ha demostrado que durante el proceso de esterilizacioacuten la Harina de Yuca sufre un tratamiento teacutermico que hace que las moleacuteculas de almidh pasen cie una forma cristalina a un estado amdrfo (gelatinizacion) y que Ani_mr es un productm de amilasas (Raimbault 19801 lo que sugiere que la gelatinizacioacuten podriacutea facilitar el ataque enzimdtico y con esto i iberar cantidades importantes de glucosa que favoreced el crecilriiento del hongo lo que normalmente estaacute reiacionado con una produccioacuten importante de conidias

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I

I

I c- 7 DIAS

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 509xl0^9 I I I I

I I 1 I

Harina de Trigo 14 367X1^9 I I I

I I I I

Melaza 14 424x10-9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 16Ox10^8 I I I I

522- d t ~ 1 7 9 ~ ~

Eh la tabla VI se muestran l o s Ie obtenidos para A termus -utiliZando__las 4 fuentes de carbono antes mencionadas El Ie mas alto se encmtroacute en el medio de cultivo con M e l a z a seguido de la Yprina de Yuca y Trigo y por uacuteltimo la Sacarosa d t m u s es utilizado en lo s procesos de aprovechamiento de eubproductos de la industria cantildeera en cuba (meollo y bagazo) (Blanco bpez Villarl968) Esta cepa estaacute adaptada a l o s procesos de la industria cuntildeera de c u b a por lo que se esperariacutea que espurulara mejor en Melaza tal como ocurrioacute

TXBLA VI- Indices de espwulacibn para dtwreus utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa como fuente de carbono para tiempos de incubacidn de 7 dias y relacioacuten CN de 14

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I I I I I I 7 DIAS I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 60x10n9 I I I

Harina de pigo 14 403xlO-9

I I I

1 I I I

I I I I

M e l a z a 14 612xlOA9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 S40~107 1 I I

211

523- Bbassi= 1

Las resulta- 5e rem en la t ~ ~ h ~ f - - - ~ ~ - - ~ ~ e se -obtwo en el medio con Harina de Trigo m i d o de la H a r i n a de Yuca Melnza y Sacarosa Se puede obeervar que 1 0 s Ie amp altos se logran con los sustratos amiluceos que tal vez puedan ser mamp facilmente utilizados por el microoqanimno debido a l - v e s o de gelatinizacioacuten que Wren

524- Penicillium sp

Los resultados se muestran en la tabla VIII Los mayores le se alcanzaron con las Harims de Yuca y Trigo con respecto a los atros dos sustratos Se observoacute una mayor produccioacuten de micelio en los sustratos amilaceos lo que podria justificar la produccibn maacutes alta de conidias

525- Thnmianum

LBS resultados se reportan en la tabla XI Estudios hechos par Raussos (1985) demostraron la capacidad de Thanianum en la produccidn de ami la s a s utilizando almidoacuten cam0 fuente de carbono pesto que la harim de yuca y la harina de trigo son sustratos amilacecs se esperariacutea una produccioacuten impcortante de esporras tal COQLO sucedioacute para la harina de yuca y no asi para la harina de trigo Con respecto a la s a c m a el Ie tan bajo que se obtuvo con relacidn a la melaza pede ser debido a todos los compuestos que se encuentran en las m e l a z a s

c TABLA VI1- Inlices de esparcllacibn para Bhssiana utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo M e i u z a y Sacarosa axno fuente de carbono para tiempos de incubacioacuten de 7 dias y relacion CN de 14

I I I

I I I Ie I

Summ CN I I

1 I I I

I I

1 I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 1 8 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

7 DIAS

Harina de Pigo 14 702~10~9 I I I I

I I I

Melaza 14 217~10~9 I I I I

I I I I

Sacarosa i 14 8 5 8 ~ 1 0 ~ 6 I I I I

r

I I

I Ie 1

I Summ CN I

I 1 i I

I I 7 DIAS

I I I I

I 1 I I

Harina de Yuca 14 142x10^10 I I I I

I I I I

Harina de Pigo 14 832xlO-9 1 1 I I

I I I I

M e l a z a 14 293~10~9

I I I

Sacarosa 14 103x10n9

I I I I

I I I I

m IX-Indices de espauulacian para Thamianum utilizando Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa corno fuente de carbono para tiapos de incubacich de 7 dim y relacioacuten CN de 14

I I I I

I -

1 I Ie I

I Summ CN I

I I 7 D I A S t I I I

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 11ox1On1O I I I I

I I I I

Harina de Trigo 14 12Ox10-9 I I I I

I I I I

M e l a z a 14 875~10~9 I I I I

I

Sacarosa I

I i I

14 11Ox10^8 I I I

526- Conclusiones

Varios autores han demostrado la importancia de la fuente de carbono sobre la conidiogenesis de hongos f ilamentosos (Vezina y co11965 Martinelli1976) en este estudio se pudo observar que cada cepa tiene caracteristicas fisiolcjgicas de esporulacidn propias con respecto al tipo de fuente de carbono que se le proporcione Para este caso en especial la cepa de Aniper esporuld mejor en Harina de Yuca A termus en M e l a z a B m i a m en Harinri de Trigo y T harzinnum en Harina de Yuca

------Esttuiaa - - h - - i s o s (lE5) han demostrado que la concentracidn de Nieeno prwente en el mampio de cup170 ejerce una influencia directa en el nuacutemero de conidiosporas producidas por Thurzjmm par 10 que era necesario seleccionar la relacioacuten CN oacuteptima para cada cepa y para cada sustrato

la composicioacuten de l o s medios de cultivo utilizados para llevar a cabo este estudio estb presentados en las tablas I 11 I11 y IV Se utilizaron 4 diferentes relaciones CN estas fueron de 101424 y 40 empleanda UM mezcla de 23 panes de Sulfato de Amonio y 13 parte de h a toanando- 128 g de carbono como base de caacutelculo y tiempos de incubacioacuten de 7 y 14 dias l o s experimentos se realizaron en matraces de 250 ml

Ln relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despueacutes de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Anigw son mostrados en la tabla X

h datos obtenidos para Aniger nos indican que cuardo se emplea Harina de Yuca en concentracich de 40 gl y la reiaci6n CN estaacute entre 10 y 40 no es un factor determinante en la conidiogeacutenesis ya que esporula de rnanera similar entre estos r a n g o s para l o s medio a base de Harina de Trigo la CN entre 40 y 24 es donde mejm esporulacidn se obtiene

r 5 3 2 - A s m i l ~ s t

h relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de espomlaci6n obtenidos aespuk de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Rtemxs son mostradrx en la tabla XI

Lns medios de cultivo con 14 dias de incubacidn presentan el mayor ntUnero de conidiospwas a una relaci6n CN de 14 con excepcih de l o s medios con Sacarosa que mostramn en todos l o s cc~sos un compm-tamiento muy pobre con respecto al n h de conidias producidas Los mejores Ie se log-amn con Harina de Yuca y M e l a z a con una relacidn CN de-14 para 14 dias de incubacidn

Lo relaci6n que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despuds de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para B b s s i a n a son mostrados en la tabla XII

b Ie logrados para B b n s s i m e son muy similares entre si es decir no cambian significativamente l o s Ie para l o s cultivos con 14 dias de inmbacidn son bastante altos siendo el medio de cultivo con una relaci6n CN de 14 y Melaza como fuente de carbono ei queposee el mejor Ie con un tiempo de incuhcidn de 14 dias BI esta cepa se ve su capacidad de adaptacioacuten con respecto a l a s anteriores para crecer en Sackrosa

~ r

27 534- Psnicilliue sp

kiaeiampi que exiate entre 1- necG~-edt-~vcv - y h rendimientos de esparulaciOacutentilde-6btenidos despds de 7 -_Fl4 dias de cultivo en matraces para FbnciIlium sp son mostrados en la tabla XILI

_

La relacidn CN entre 10 y40 no tiene una influencia directa en la conidioghnesis de esta cepa sin embargo se dbeewa una tendencia a la disminucioacuten del N de conidiospcwas producidas en los cultivos con 14 dias de incubacih Los mayores Ie se lcgrarcm con los medios de cultivo a bnse de Harina de Yuca y Harina de Trigo

La relaci6n que existe entre la composiciiquestn quiacutemica del medio de cultivo y l a s rendimientos de esporulaci6n obtenidos desples de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Thurzzanum son mostrados en la tabla XIV

Las resultados obtenidos 1x1s mestran unatendencia hacia la obtencioacuten del m y m Ie en rangos de CN de 10 a 14 y estudios hechos par Raussos (1985) sohre el efecto de la concentraci6n de Nitriquestgeno en la oanidiogdnesis de Thaniunum pnmporcionaron una CN optima de 14 utilizando Harina de Yuca corno fuente de curbno

Sin embxqo pura una CN de 3253 obtiene un Ie para 7 dias --de incubacidn de Q16x1On9 cmparando este resultado con el resultado obtenido en mi estudio encuentro que a una CN de 40 para 7 diQs de incubacibn tengo un Ie de 132xlO-9 esto es 13 veces mamp por lo que es dificil comparar estos datos en l o s resultados obtenidos se obsewa una tendencia para los cultivos con 14 dias de incubacidn de disminuir el Ie confarme aumenta la relacidn CN y para l a s cultivos con 7 dias se observn lo contrario Los Ie mus altos se logran con l o s medios de cultivo a base de Harinu de Yuca y Melaza

536- Conclusiones

Las cepas estudiadas eSp0IWlUn dependiendo del tipo de fuente de carbono la fuente de carbono y su naturaleza tiene m infiuencia directa en la conidiogeacutenesis de l o s hongos f ilamentosos que la concentracioacuten de nitrdgeno sin embargo es recamendable la adlcidn ae nitdgeno entre l o s rargos de CN de 10 a 4 0

Para disminuir l o s costos de pmduccioacuten de conidiosporas hay que optimizar los medics de cultivo nacer la seleccioacuten de una h e m fuente de carbono para cada cepa y trhjar en rangos de CN de 14 a 4 0

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
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                                      • I T
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                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
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m cepa se ha identificado corno Penicillium W f a r t i i presenta un micelio septado con produccioacuten de micelio vegetativo aerial d e y e e de un tiempo aparecen estructurns especializadas de repocoduccion a s e x u a l Se presenta un estipe m e n t a d o unas brancpeas meacutetulas f M i d e s y conidias Elstas conidiosporas presentan un colap- verduzco son globdares y lisas con un dibtro apmximado de 4 a 6p Lae conidias son producidas en cadenas cortas La estructura se presenta en la Figura 5

C O N l D l A S

1 O r r m

Figura 5- Conidioacuteforos y coniaias de Fenicilliun

Al inicio este h q o presenta un micelio blanco pterionnente aprecen farmas especializadas de reproduccion asexual fialidee y conidicepuras I m conidiofaros se presentan en farmas piramidalee y en estos sistemas las fialidee Be localizan en g r u ~ w de dos a cuatro Las conidia3 Bon de color verde olivo son de superficie lisas subglobulares con un diametm apmximado de 2 a 3 m

La egtructura de la fcwma de reproduccion se presenta en la figura 6

Las colonias de Thnnianum en FDA se caracterizan pol tener un color verde con circulos concentricos Hay que mencionar que las colanias pmducen un olor a coco (coconut) muy caracteristico

CONlDl

Figura 6 - Conidioforos y conidias de Thanianum

516- Conclusiones v 4

_ _

el curse) de este capitulo se describieron los sietemas de reproduccioacuten de las cinco cepas de hongos filamentosos estudiados Todos estos hongos se repaoducen de manera a s e x u a l Se que l a s 5 cepas presentan estructuras muy diferentes a s i co~po diversos colores en l o s estadios de crecimiento vegetativo y ccmidiogdnesie ademds presentan conidimporas glohlares de muy diversos tamafios

c

093039 t

2 2

- La composicioacuten de l o s diferentes meampicsde cultvoutQizados pera llevar a cabo este estudio fueron medio N 2 de l a s tablas I 11111 y IV y se establecioacute prabay las diferentes fuentes de carbno (Harina de Yuca Harina de Pigo M e l a z a y Sacarosa) en matraces a una relaci6n CN de 14 para de esta manera poder observar el efecto que cada una de ell- ejerce solre la conidicgbesis de l o s hongos filamentosos estudiadas L m resultados se reman en l a s tablas V VI VII VI11 y XI y se exp-esan en base al Indice de Bporulacidn (Ie - N de esporas g de sustrato carbonado) para 7 dias de incubacion a temperatura ambiente (15-22C)

~ - -4

La Harim de Yuca es un producto amilaceo que ha demostrado ser un sustrato de gran eficiencia para la produccion de conidiosparas de hongos filamentosos ademds de ser un producto tropical de facil acceso su principal componente es el almidoacuten que corresponde al 80 en materia seca se encuentran en esta Harina pteiacutenas grasas y vitaminas del tipo B y C adamp de fibras y cenizas (Grace 1977)

la Harina de Pigo es otro sustrato amilaceo que se considerd importante utilizar debido a su alta disponibilidad en su canposicioacuten estan presentes pteiacutenas grw calcio f oacute s f m h i m tiamina riboflavina y niacina esto lo hace un sustrato interesante

La M e l a z a es el subproducto final de la fakicacioacuten de azucar es un liquido o b s c u r o denso y viscoso que se separa de la masa cocida de baja-calidad y del cual no se pede cristalizar ampamcar por amptodos mencionales y econoacutemicos en su composicioacuten estdn presentes 1 0 s amcares y otras sustancias entre l a s cuales se pueden citar l o s corapuestos nitrogenados aacutecidos aminoacidos albiminas vitaminas ceras esteroles lipid- sales minerales y cenizas etc (ICIDCA1986) Como se puede ver es un producto muy complejo por lo que puede ser un sustrato muy atractivo para su utilizaci6n como fuente de carbono en ipedios de cultivo pura la espomlaci6n de hongos filamentosos (Brinela 1987)

la s a c m a es un producto de facil adquisicioacuten y de pmduccioacuten idustrial importante por lo que se considem un sustrato atractivo para la produccioacuten de amidiosporas de hongos filamentosos La sacarosa se encuentra fonnada por una molecula de fructosa y una de glucosa l o s medios de cultivo que contienen sacarosa pcdriamos decir que son medios simples en comparacioacuten con la complejidad de la melaza y l a s harinas

521- A n i g ~

Fh la tabla V se muestran l o s Ie obtenidos para Anigerutilizardo l a s 4 fuentes de carbono antes mencionadas El mayor Ie se alcanzoacute en el medio de cultivo con k i n a de Yuca seguido de la M e l a z a la k i n a de Pigo y por Gltimo la Sacarosa se ha demostrado que durante el proceso de esterilizacioacuten la Harina de Yuca sufre un tratamiento teacutermico que hace que las moleacuteculas de almidh pasen cie una forma cristalina a un estado amdrfo (gelatinizacion) y que Ani_mr es un productm de amilasas (Raimbault 19801 lo que sugiere que la gelatinizacioacuten podriacutea facilitar el ataque enzimdtico y con esto i iberar cantidades importantes de glucosa que favoreced el crecilriiento del hongo lo que normalmente estaacute reiacionado con una produccioacuten importante de conidias

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I

I

I c- 7 DIAS

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 509xl0^9 I I I I

I I 1 I

Harina de Trigo 14 367X1^9 I I I

I I I I

Melaza 14 424x10-9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 16Ox10^8 I I I I

522- d t ~ 1 7 9 ~ ~

Eh la tabla VI se muestran l o s Ie obtenidos para A termus -utiliZando__las 4 fuentes de carbono antes mencionadas El Ie mas alto se encmtroacute en el medio de cultivo con M e l a z a seguido de la Yprina de Yuca y Trigo y por uacuteltimo la Sacarosa d t m u s es utilizado en lo s procesos de aprovechamiento de eubproductos de la industria cantildeera en cuba (meollo y bagazo) (Blanco bpez Villarl968) Esta cepa estaacute adaptada a l o s procesos de la industria cuntildeera de c u b a por lo que se esperariacutea que espurulara mejor en Melaza tal como ocurrioacute

TXBLA VI- Indices de espwulacibn para dtwreus utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa como fuente de carbono para tiempos de incubacidn de 7 dias y relacioacuten CN de 14

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I I I I I I 7 DIAS I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 60x10n9 I I I

Harina de pigo 14 403xlO-9

I I I

1 I I I

I I I I

M e l a z a 14 612xlOA9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 S40~107 1 I I

211

523- Bbassi= 1

Las resulta- 5e rem en la t ~ ~ h ~ f - - - ~ ~ - - ~ ~ e se -obtwo en el medio con Harina de Trigo m i d o de la H a r i n a de Yuca Melnza y Sacarosa Se puede obeervar que 1 0 s Ie amp altos se logran con los sustratos amiluceos que tal vez puedan ser mamp facilmente utilizados por el microoqanimno debido a l - v e s o de gelatinizacioacuten que Wren

524- Penicillium sp

Los resultados se muestran en la tabla VIII Los mayores le se alcanzaron con las Harims de Yuca y Trigo con respecto a los atros dos sustratos Se observoacute una mayor produccioacuten de micelio en los sustratos amilaceos lo que podria justificar la produccibn maacutes alta de conidias

525- Thnmianum

LBS resultados se reportan en la tabla XI Estudios hechos par Raussos (1985) demostraron la capacidad de Thanianum en la produccidn de ami la s a s utilizando almidoacuten cam0 fuente de carbono pesto que la harim de yuca y la harina de trigo son sustratos amilacecs se esperariacutea una produccioacuten impcortante de esporras tal COQLO sucedioacute para la harina de yuca y no asi para la harina de trigo Con respecto a la s a c m a el Ie tan bajo que se obtuvo con relacidn a la melaza pede ser debido a todos los compuestos que se encuentran en las m e l a z a s

c TABLA VI1- Inlices de esparcllacibn para Bhssiana utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo M e i u z a y Sacarosa axno fuente de carbono para tiempos de incubacioacuten de 7 dias y relacion CN de 14

I I I

I I I Ie I

Summ CN I I

1 I I I

I I

1 I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 1 8 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

7 DIAS

Harina de Pigo 14 702~10~9 I I I I

I I I

Melaza 14 217~10~9 I I I I

I I I I

Sacarosa i 14 8 5 8 ~ 1 0 ~ 6 I I I I

r

I I

I Ie 1

I Summ CN I

I 1 i I

I I 7 DIAS

I I I I

I 1 I I

Harina de Yuca 14 142x10^10 I I I I

I I I I

Harina de Pigo 14 832xlO-9 1 1 I I

I I I I

M e l a z a 14 293~10~9

I I I

Sacarosa 14 103x10n9

I I I I

I I I I

m IX-Indices de espauulacian para Thamianum utilizando Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa corno fuente de carbono para tiapos de incubacich de 7 dim y relacioacuten CN de 14

I I I I

I -

1 I Ie I

I Summ CN I

I I 7 D I A S t I I I

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 11ox1On1O I I I I

I I I I

Harina de Trigo 14 12Ox10-9 I I I I

I I I I

M e l a z a 14 875~10~9 I I I I

I

Sacarosa I

I i I

14 11Ox10^8 I I I

526- Conclusiones

Varios autores han demostrado la importancia de la fuente de carbono sobre la conidiogenesis de hongos f ilamentosos (Vezina y co11965 Martinelli1976) en este estudio se pudo observar que cada cepa tiene caracteristicas fisiolcjgicas de esporulacidn propias con respecto al tipo de fuente de carbono que se le proporcione Para este caso en especial la cepa de Aniper esporuld mejor en Harina de Yuca A termus en M e l a z a B m i a m en Harinri de Trigo y T harzinnum en Harina de Yuca

------Esttuiaa - - h - - i s o s (lE5) han demostrado que la concentracidn de Nieeno prwente en el mampio de cup170 ejerce una influencia directa en el nuacutemero de conidiosporas producidas por Thurzjmm par 10 que era necesario seleccionar la relacioacuten CN oacuteptima para cada cepa y para cada sustrato

la composicioacuten de l o s medios de cultivo utilizados para llevar a cabo este estudio estb presentados en las tablas I 11 I11 y IV Se utilizaron 4 diferentes relaciones CN estas fueron de 101424 y 40 empleanda UM mezcla de 23 panes de Sulfato de Amonio y 13 parte de h a toanando- 128 g de carbono como base de caacutelculo y tiempos de incubacioacuten de 7 y 14 dias l o s experimentos se realizaron en matraces de 250 ml

Ln relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despueacutes de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Anigw son mostrados en la tabla X

h datos obtenidos para Aniger nos indican que cuardo se emplea Harina de Yuca en concentracich de 40 gl y la reiaci6n CN estaacute entre 10 y 40 no es un factor determinante en la conidiogeacutenesis ya que esporula de rnanera similar entre estos r a n g o s para l o s medio a base de Harina de Trigo la CN entre 40 y 24 es donde mejm esporulacidn se obtiene

r 5 3 2 - A s m i l ~ s t

h relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de espomlaci6n obtenidos aespuk de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Rtemxs son mostradrx en la tabla XI

Lns medios de cultivo con 14 dias de incubacidn presentan el mayor ntUnero de conidiospwas a una relaci6n CN de 14 con excepcih de l o s medios con Sacarosa que mostramn en todos l o s cc~sos un compm-tamiento muy pobre con respecto al n h de conidias producidas Los mejores Ie se log-amn con Harina de Yuca y M e l a z a con una relacidn CN de-14 para 14 dias de incubacidn

Lo relaci6n que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despuds de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para B b s s i a n a son mostrados en la tabla XII

b Ie logrados para B b n s s i m e son muy similares entre si es decir no cambian significativamente l o s Ie para l o s cultivos con 14 dias de inmbacidn son bastante altos siendo el medio de cultivo con una relaci6n CN de 14 y Melaza como fuente de carbono ei queposee el mejor Ie con un tiempo de incuhcidn de 14 dias BI esta cepa se ve su capacidad de adaptacioacuten con respecto a l a s anteriores para crecer en Sackrosa

~ r

27 534- Psnicilliue sp

kiaeiampi que exiate entre 1- necG~-edt-~vcv - y h rendimientos de esparulaciOacutentilde-6btenidos despds de 7 -_Fl4 dias de cultivo en matraces para FbnciIlium sp son mostrados en la tabla XILI

_

La relacidn CN entre 10 y40 no tiene una influencia directa en la conidioghnesis de esta cepa sin embargo se dbeewa una tendencia a la disminucioacuten del N de conidiospcwas producidas en los cultivos con 14 dias de incubacih Los mayores Ie se lcgrarcm con los medios de cultivo a bnse de Harina de Yuca y Harina de Trigo

La relaci6n que existe entre la composiciiquestn quiacutemica del medio de cultivo y l a s rendimientos de esporulaci6n obtenidos desples de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Thurzzanum son mostrados en la tabla XIV

Las resultados obtenidos 1x1s mestran unatendencia hacia la obtencioacuten del m y m Ie en rangos de CN de 10 a 14 y estudios hechos par Raussos (1985) sohre el efecto de la concentraci6n de Nitriquestgeno en la oanidiogdnesis de Thaniunum pnmporcionaron una CN optima de 14 utilizando Harina de Yuca corno fuente de curbno

Sin embxqo pura una CN de 3253 obtiene un Ie para 7 dias --de incubacidn de Q16x1On9 cmparando este resultado con el resultado obtenido en mi estudio encuentro que a una CN de 40 para 7 diQs de incubacibn tengo un Ie de 132xlO-9 esto es 13 veces mamp por lo que es dificil comparar estos datos en l o s resultados obtenidos se obsewa una tendencia para los cultivos con 14 dias de incubacidn de disminuir el Ie confarme aumenta la relacidn CN y para l a s cultivos con 7 dias se observn lo contrario Los Ie mus altos se logran con l o s medios de cultivo a base de Harinu de Yuca y Melaza

536- Conclusiones

Las cepas estudiadas eSp0IWlUn dependiendo del tipo de fuente de carbono la fuente de carbono y su naturaleza tiene m infiuencia directa en la conidiogeacutenesis de l o s hongos f ilamentosos que la concentracioacuten de nitrdgeno sin embargo es recamendable la adlcidn ae nitdgeno entre l o s rargos de CN de 10 a 4 0

Para disminuir l o s costos de pmduccioacuten de conidiosporas hay que optimizar los medics de cultivo nacer la seleccioacuten de una h e m fuente de carbono para cada cepa y trhjar en rangos de CN de 14 a 4 0

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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I t I

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
                                          • -- A
                                          • --
                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
                                          • M
Page 26: MATRICULA: 83323133.

Al inicio este h q o presenta un micelio blanco pterionnente aprecen farmas especializadas de reproduccion asexual fialidee y conidicepuras I m conidiofaros se presentan en farmas piramidalee y en estos sistemas las fialidee Be localizan en g r u ~ w de dos a cuatro Las conidia3 Bon de color verde olivo son de superficie lisas subglobulares con un diametm apmximado de 2 a 3 m

La egtructura de la fcwma de reproduccion se presenta en la figura 6

Las colonias de Thnnianum en FDA se caracterizan pol tener un color verde con circulos concentricos Hay que mencionar que las colanias pmducen un olor a coco (coconut) muy caracteristico

CONlDl

Figura 6 - Conidioforos y conidias de Thanianum

516- Conclusiones v 4

_ _

el curse) de este capitulo se describieron los sietemas de reproduccioacuten de las cinco cepas de hongos filamentosos estudiados Todos estos hongos se repaoducen de manera a s e x u a l Se que l a s 5 cepas presentan estructuras muy diferentes a s i co~po diversos colores en l o s estadios de crecimiento vegetativo y ccmidiogdnesie ademds presentan conidimporas glohlares de muy diversos tamafios

c

093039 t

2 2

- La composicioacuten de l o s diferentes meampicsde cultvoutQizados pera llevar a cabo este estudio fueron medio N 2 de l a s tablas I 11111 y IV y se establecioacute prabay las diferentes fuentes de carbno (Harina de Yuca Harina de Pigo M e l a z a y Sacarosa) en matraces a una relaci6n CN de 14 para de esta manera poder observar el efecto que cada una de ell- ejerce solre la conidicgbesis de l o s hongos filamentosos estudiadas L m resultados se reman en l a s tablas V VI VII VI11 y XI y se exp-esan en base al Indice de Bporulacidn (Ie - N de esporas g de sustrato carbonado) para 7 dias de incubacion a temperatura ambiente (15-22C)

~ - -4

La Harim de Yuca es un producto amilaceo que ha demostrado ser un sustrato de gran eficiencia para la produccion de conidiosparas de hongos filamentosos ademds de ser un producto tropical de facil acceso su principal componente es el almidoacuten que corresponde al 80 en materia seca se encuentran en esta Harina pteiacutenas grasas y vitaminas del tipo B y C adamp de fibras y cenizas (Grace 1977)

la Harina de Pigo es otro sustrato amilaceo que se considerd importante utilizar debido a su alta disponibilidad en su canposicioacuten estan presentes pteiacutenas grw calcio f oacute s f m h i m tiamina riboflavina y niacina esto lo hace un sustrato interesante

La M e l a z a es el subproducto final de la fakicacioacuten de azucar es un liquido o b s c u r o denso y viscoso que se separa de la masa cocida de baja-calidad y del cual no se pede cristalizar ampamcar por amptodos mencionales y econoacutemicos en su composicioacuten estdn presentes 1 0 s amcares y otras sustancias entre l a s cuales se pueden citar l o s corapuestos nitrogenados aacutecidos aminoacidos albiminas vitaminas ceras esteroles lipid- sales minerales y cenizas etc (ICIDCA1986) Como se puede ver es un producto muy complejo por lo que puede ser un sustrato muy atractivo para su utilizaci6n como fuente de carbono en ipedios de cultivo pura la espomlaci6n de hongos filamentosos (Brinela 1987)

la s a c m a es un producto de facil adquisicioacuten y de pmduccioacuten idustrial importante por lo que se considem un sustrato atractivo para la produccioacuten de amidiosporas de hongos filamentosos La sacarosa se encuentra fonnada por una molecula de fructosa y una de glucosa l o s medios de cultivo que contienen sacarosa pcdriamos decir que son medios simples en comparacioacuten con la complejidad de la melaza y l a s harinas

521- A n i g ~

Fh la tabla V se muestran l o s Ie obtenidos para Anigerutilizardo l a s 4 fuentes de carbono antes mencionadas El mayor Ie se alcanzoacute en el medio de cultivo con k i n a de Yuca seguido de la M e l a z a la k i n a de Pigo y por Gltimo la Sacarosa se ha demostrado que durante el proceso de esterilizacioacuten la Harina de Yuca sufre un tratamiento teacutermico que hace que las moleacuteculas de almidh pasen cie una forma cristalina a un estado amdrfo (gelatinizacion) y que Ani_mr es un productm de amilasas (Raimbault 19801 lo que sugiere que la gelatinizacioacuten podriacutea facilitar el ataque enzimdtico y con esto i iberar cantidades importantes de glucosa que favoreced el crecilriiento del hongo lo que normalmente estaacute reiacionado con una produccioacuten importante de conidias

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I

I

I c- 7 DIAS

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 509xl0^9 I I I I

I I 1 I

Harina de Trigo 14 367X1^9 I I I

I I I I

Melaza 14 424x10-9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 16Ox10^8 I I I I

522- d t ~ 1 7 9 ~ ~

Eh la tabla VI se muestran l o s Ie obtenidos para A termus -utiliZando__las 4 fuentes de carbono antes mencionadas El Ie mas alto se encmtroacute en el medio de cultivo con M e l a z a seguido de la Yprina de Yuca y Trigo y por uacuteltimo la Sacarosa d t m u s es utilizado en lo s procesos de aprovechamiento de eubproductos de la industria cantildeera en cuba (meollo y bagazo) (Blanco bpez Villarl968) Esta cepa estaacute adaptada a l o s procesos de la industria cuntildeera de c u b a por lo que se esperariacutea que espurulara mejor en Melaza tal como ocurrioacute

TXBLA VI- Indices de espwulacibn para dtwreus utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa como fuente de carbono para tiempos de incubacidn de 7 dias y relacioacuten CN de 14

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I I I I I I 7 DIAS I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 60x10n9 I I I

Harina de pigo 14 403xlO-9

I I I

1 I I I

I I I I

M e l a z a 14 612xlOA9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 S40~107 1 I I

211

523- Bbassi= 1

Las resulta- 5e rem en la t ~ ~ h ~ f - - - ~ ~ - - ~ ~ e se -obtwo en el medio con Harina de Trigo m i d o de la H a r i n a de Yuca Melnza y Sacarosa Se puede obeervar que 1 0 s Ie amp altos se logran con los sustratos amiluceos que tal vez puedan ser mamp facilmente utilizados por el microoqanimno debido a l - v e s o de gelatinizacioacuten que Wren

524- Penicillium sp

Los resultados se muestran en la tabla VIII Los mayores le se alcanzaron con las Harims de Yuca y Trigo con respecto a los atros dos sustratos Se observoacute una mayor produccioacuten de micelio en los sustratos amilaceos lo que podria justificar la produccibn maacutes alta de conidias

525- Thnmianum

LBS resultados se reportan en la tabla XI Estudios hechos par Raussos (1985) demostraron la capacidad de Thanianum en la produccidn de ami la s a s utilizando almidoacuten cam0 fuente de carbono pesto que la harim de yuca y la harina de trigo son sustratos amilacecs se esperariacutea una produccioacuten impcortante de esporras tal COQLO sucedioacute para la harina de yuca y no asi para la harina de trigo Con respecto a la s a c m a el Ie tan bajo que se obtuvo con relacidn a la melaza pede ser debido a todos los compuestos que se encuentran en las m e l a z a s

c TABLA VI1- Inlices de esparcllacibn para Bhssiana utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo M e i u z a y Sacarosa axno fuente de carbono para tiempos de incubacioacuten de 7 dias y relacion CN de 14

I I I

I I I Ie I

Summ CN I I

1 I I I

I I

1 I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 1 8 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

7 DIAS

Harina de Pigo 14 702~10~9 I I I I

I I I

Melaza 14 217~10~9 I I I I

I I I I

Sacarosa i 14 8 5 8 ~ 1 0 ~ 6 I I I I

r

I I

I Ie 1

I Summ CN I

I 1 i I

I I 7 DIAS

I I I I

I 1 I I

Harina de Yuca 14 142x10^10 I I I I

I I I I

Harina de Pigo 14 832xlO-9 1 1 I I

I I I I

M e l a z a 14 293~10~9

I I I

Sacarosa 14 103x10n9

I I I I

I I I I

m IX-Indices de espauulacian para Thamianum utilizando Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa corno fuente de carbono para tiapos de incubacich de 7 dim y relacioacuten CN de 14

I I I I

I -

1 I Ie I

I Summ CN I

I I 7 D I A S t I I I

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 11ox1On1O I I I I

I I I I

Harina de Trigo 14 12Ox10-9 I I I I

I I I I

M e l a z a 14 875~10~9 I I I I

I

Sacarosa I

I i I

14 11Ox10^8 I I I

526- Conclusiones

Varios autores han demostrado la importancia de la fuente de carbono sobre la conidiogenesis de hongos f ilamentosos (Vezina y co11965 Martinelli1976) en este estudio se pudo observar que cada cepa tiene caracteristicas fisiolcjgicas de esporulacidn propias con respecto al tipo de fuente de carbono que se le proporcione Para este caso en especial la cepa de Aniper esporuld mejor en Harina de Yuca A termus en M e l a z a B m i a m en Harinri de Trigo y T harzinnum en Harina de Yuca

------Esttuiaa - - h - - i s o s (lE5) han demostrado que la concentracidn de Nieeno prwente en el mampio de cup170 ejerce una influencia directa en el nuacutemero de conidiosporas producidas por Thurzjmm par 10 que era necesario seleccionar la relacioacuten CN oacuteptima para cada cepa y para cada sustrato

la composicioacuten de l o s medios de cultivo utilizados para llevar a cabo este estudio estb presentados en las tablas I 11 I11 y IV Se utilizaron 4 diferentes relaciones CN estas fueron de 101424 y 40 empleanda UM mezcla de 23 panes de Sulfato de Amonio y 13 parte de h a toanando- 128 g de carbono como base de caacutelculo y tiempos de incubacioacuten de 7 y 14 dias l o s experimentos se realizaron en matraces de 250 ml

Ln relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despueacutes de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Anigw son mostrados en la tabla X

h datos obtenidos para Aniger nos indican que cuardo se emplea Harina de Yuca en concentracich de 40 gl y la reiaci6n CN estaacute entre 10 y 40 no es un factor determinante en la conidiogeacutenesis ya que esporula de rnanera similar entre estos r a n g o s para l o s medio a base de Harina de Trigo la CN entre 40 y 24 es donde mejm esporulacidn se obtiene

r 5 3 2 - A s m i l ~ s t

h relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de espomlaci6n obtenidos aespuk de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Rtemxs son mostradrx en la tabla XI

Lns medios de cultivo con 14 dias de incubacidn presentan el mayor ntUnero de conidiospwas a una relaci6n CN de 14 con excepcih de l o s medios con Sacarosa que mostramn en todos l o s cc~sos un compm-tamiento muy pobre con respecto al n h de conidias producidas Los mejores Ie se log-amn con Harina de Yuca y M e l a z a con una relacidn CN de-14 para 14 dias de incubacidn

Lo relaci6n que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despuds de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para B b s s i a n a son mostrados en la tabla XII

b Ie logrados para B b n s s i m e son muy similares entre si es decir no cambian significativamente l o s Ie para l o s cultivos con 14 dias de inmbacidn son bastante altos siendo el medio de cultivo con una relaci6n CN de 14 y Melaza como fuente de carbono ei queposee el mejor Ie con un tiempo de incuhcidn de 14 dias BI esta cepa se ve su capacidad de adaptacioacuten con respecto a l a s anteriores para crecer en Sackrosa

~ r

27 534- Psnicilliue sp

kiaeiampi que exiate entre 1- necG~-edt-~vcv - y h rendimientos de esparulaciOacutentilde-6btenidos despds de 7 -_Fl4 dias de cultivo en matraces para FbnciIlium sp son mostrados en la tabla XILI

_

La relacidn CN entre 10 y40 no tiene una influencia directa en la conidioghnesis de esta cepa sin embargo se dbeewa una tendencia a la disminucioacuten del N de conidiospcwas producidas en los cultivos con 14 dias de incubacih Los mayores Ie se lcgrarcm con los medios de cultivo a bnse de Harina de Yuca y Harina de Trigo

La relaci6n que existe entre la composiciiquestn quiacutemica del medio de cultivo y l a s rendimientos de esporulaci6n obtenidos desples de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Thurzzanum son mostrados en la tabla XIV

Las resultados obtenidos 1x1s mestran unatendencia hacia la obtencioacuten del m y m Ie en rangos de CN de 10 a 14 y estudios hechos par Raussos (1985) sohre el efecto de la concentraci6n de Nitriquestgeno en la oanidiogdnesis de Thaniunum pnmporcionaron una CN optima de 14 utilizando Harina de Yuca corno fuente de curbno

Sin embxqo pura una CN de 3253 obtiene un Ie para 7 dias --de incubacidn de Q16x1On9 cmparando este resultado con el resultado obtenido en mi estudio encuentro que a una CN de 40 para 7 diQs de incubacibn tengo un Ie de 132xlO-9 esto es 13 veces mamp por lo que es dificil comparar estos datos en l o s resultados obtenidos se obsewa una tendencia para los cultivos con 14 dias de incubacidn de disminuir el Ie confarme aumenta la relacidn CN y para l a s cultivos con 7 dias se observn lo contrario Los Ie mus altos se logran con l o s medios de cultivo a base de Harinu de Yuca y Melaza

536- Conclusiones

Las cepas estudiadas eSp0IWlUn dependiendo del tipo de fuente de carbono la fuente de carbono y su naturaleza tiene m infiuencia directa en la conidiogeacutenesis de l o s hongos f ilamentosos que la concentracioacuten de nitrdgeno sin embargo es recamendable la adlcidn ae nitdgeno entre l o s rargos de CN de 10 a 4 0

Para disminuir l o s costos de pmduccioacuten de conidiosporas hay que optimizar los medics de cultivo nacer la seleccioacuten de una h e m fuente de carbono para cada cepa y trhjar en rangos de CN de 14 a 4 0

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
                                          • -- A
                                          • --
                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
                                          • M
Page 27: MATRICULA: 83323133.

516- Conclusiones v 4

_ _

el curse) de este capitulo se describieron los sietemas de reproduccioacuten de las cinco cepas de hongos filamentosos estudiados Todos estos hongos se repaoducen de manera a s e x u a l Se que l a s 5 cepas presentan estructuras muy diferentes a s i co~po diversos colores en l o s estadios de crecimiento vegetativo y ccmidiogdnesie ademds presentan conidimporas glohlares de muy diversos tamafios

c

093039 t

2 2

- La composicioacuten de l o s diferentes meampicsde cultvoutQizados pera llevar a cabo este estudio fueron medio N 2 de l a s tablas I 11111 y IV y se establecioacute prabay las diferentes fuentes de carbno (Harina de Yuca Harina de Pigo M e l a z a y Sacarosa) en matraces a una relaci6n CN de 14 para de esta manera poder observar el efecto que cada una de ell- ejerce solre la conidicgbesis de l o s hongos filamentosos estudiadas L m resultados se reman en l a s tablas V VI VII VI11 y XI y se exp-esan en base al Indice de Bporulacidn (Ie - N de esporas g de sustrato carbonado) para 7 dias de incubacion a temperatura ambiente (15-22C)

~ - -4

La Harim de Yuca es un producto amilaceo que ha demostrado ser un sustrato de gran eficiencia para la produccion de conidiosparas de hongos filamentosos ademds de ser un producto tropical de facil acceso su principal componente es el almidoacuten que corresponde al 80 en materia seca se encuentran en esta Harina pteiacutenas grasas y vitaminas del tipo B y C adamp de fibras y cenizas (Grace 1977)

la Harina de Pigo es otro sustrato amilaceo que se considerd importante utilizar debido a su alta disponibilidad en su canposicioacuten estan presentes pteiacutenas grw calcio f oacute s f m h i m tiamina riboflavina y niacina esto lo hace un sustrato interesante

La M e l a z a es el subproducto final de la fakicacioacuten de azucar es un liquido o b s c u r o denso y viscoso que se separa de la masa cocida de baja-calidad y del cual no se pede cristalizar ampamcar por amptodos mencionales y econoacutemicos en su composicioacuten estdn presentes 1 0 s amcares y otras sustancias entre l a s cuales se pueden citar l o s corapuestos nitrogenados aacutecidos aminoacidos albiminas vitaminas ceras esteroles lipid- sales minerales y cenizas etc (ICIDCA1986) Como se puede ver es un producto muy complejo por lo que puede ser un sustrato muy atractivo para su utilizaci6n como fuente de carbono en ipedios de cultivo pura la espomlaci6n de hongos filamentosos (Brinela 1987)

la s a c m a es un producto de facil adquisicioacuten y de pmduccioacuten idustrial importante por lo que se considem un sustrato atractivo para la produccioacuten de amidiosporas de hongos filamentosos La sacarosa se encuentra fonnada por una molecula de fructosa y una de glucosa l o s medios de cultivo que contienen sacarosa pcdriamos decir que son medios simples en comparacioacuten con la complejidad de la melaza y l a s harinas

521- A n i g ~

Fh la tabla V se muestran l o s Ie obtenidos para Anigerutilizardo l a s 4 fuentes de carbono antes mencionadas El mayor Ie se alcanzoacute en el medio de cultivo con k i n a de Yuca seguido de la M e l a z a la k i n a de Pigo y por Gltimo la Sacarosa se ha demostrado que durante el proceso de esterilizacioacuten la Harina de Yuca sufre un tratamiento teacutermico que hace que las moleacuteculas de almidh pasen cie una forma cristalina a un estado amdrfo (gelatinizacion) y que Ani_mr es un productm de amilasas (Raimbault 19801 lo que sugiere que la gelatinizacioacuten podriacutea facilitar el ataque enzimdtico y con esto i iberar cantidades importantes de glucosa que favoreced el crecilriiento del hongo lo que normalmente estaacute reiacionado con una produccioacuten importante de conidias

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I

I

I c- 7 DIAS

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 509xl0^9 I I I I

I I 1 I

Harina de Trigo 14 367X1^9 I I I

I I I I

Melaza 14 424x10-9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 16Ox10^8 I I I I

522- d t ~ 1 7 9 ~ ~

Eh la tabla VI se muestran l o s Ie obtenidos para A termus -utiliZando__las 4 fuentes de carbono antes mencionadas El Ie mas alto se encmtroacute en el medio de cultivo con M e l a z a seguido de la Yprina de Yuca y Trigo y por uacuteltimo la Sacarosa d t m u s es utilizado en lo s procesos de aprovechamiento de eubproductos de la industria cantildeera en cuba (meollo y bagazo) (Blanco bpez Villarl968) Esta cepa estaacute adaptada a l o s procesos de la industria cuntildeera de c u b a por lo que se esperariacutea que espurulara mejor en Melaza tal como ocurrioacute

TXBLA VI- Indices de espwulacibn para dtwreus utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa como fuente de carbono para tiempos de incubacidn de 7 dias y relacioacuten CN de 14

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I I I I I I 7 DIAS I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 60x10n9 I I I

Harina de pigo 14 403xlO-9

I I I

1 I I I

I I I I

M e l a z a 14 612xlOA9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 S40~107 1 I I

211

523- Bbassi= 1

Las resulta- 5e rem en la t ~ ~ h ~ f - - - ~ ~ - - ~ ~ e se -obtwo en el medio con Harina de Trigo m i d o de la H a r i n a de Yuca Melnza y Sacarosa Se puede obeervar que 1 0 s Ie amp altos se logran con los sustratos amiluceos que tal vez puedan ser mamp facilmente utilizados por el microoqanimno debido a l - v e s o de gelatinizacioacuten que Wren

524- Penicillium sp

Los resultados se muestran en la tabla VIII Los mayores le se alcanzaron con las Harims de Yuca y Trigo con respecto a los atros dos sustratos Se observoacute una mayor produccioacuten de micelio en los sustratos amilaceos lo que podria justificar la produccibn maacutes alta de conidias

525- Thnmianum

LBS resultados se reportan en la tabla XI Estudios hechos par Raussos (1985) demostraron la capacidad de Thanianum en la produccidn de ami la s a s utilizando almidoacuten cam0 fuente de carbono pesto que la harim de yuca y la harina de trigo son sustratos amilacecs se esperariacutea una produccioacuten impcortante de esporras tal COQLO sucedioacute para la harina de yuca y no asi para la harina de trigo Con respecto a la s a c m a el Ie tan bajo que se obtuvo con relacidn a la melaza pede ser debido a todos los compuestos que se encuentran en las m e l a z a s

c TABLA VI1- Inlices de esparcllacibn para Bhssiana utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo M e i u z a y Sacarosa axno fuente de carbono para tiempos de incubacioacuten de 7 dias y relacion CN de 14

I I I

I I I Ie I

Summ CN I I

1 I I I

I I

1 I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 1 8 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

7 DIAS

Harina de Pigo 14 702~10~9 I I I I

I I I

Melaza 14 217~10~9 I I I I

I I I I

Sacarosa i 14 8 5 8 ~ 1 0 ~ 6 I I I I

r

I I

I Ie 1

I Summ CN I

I 1 i I

I I 7 DIAS

I I I I

I 1 I I

Harina de Yuca 14 142x10^10 I I I I

I I I I

Harina de Pigo 14 832xlO-9 1 1 I I

I I I I

M e l a z a 14 293~10~9

I I I

Sacarosa 14 103x10n9

I I I I

I I I I

m IX-Indices de espauulacian para Thamianum utilizando Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa corno fuente de carbono para tiapos de incubacich de 7 dim y relacioacuten CN de 14

I I I I

I -

1 I Ie I

I Summ CN I

I I 7 D I A S t I I I

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 11ox1On1O I I I I

I I I I

Harina de Trigo 14 12Ox10-9 I I I I

I I I I

M e l a z a 14 875~10~9 I I I I

I

Sacarosa I

I i I

14 11Ox10^8 I I I

526- Conclusiones

Varios autores han demostrado la importancia de la fuente de carbono sobre la conidiogenesis de hongos f ilamentosos (Vezina y co11965 Martinelli1976) en este estudio se pudo observar que cada cepa tiene caracteristicas fisiolcjgicas de esporulacidn propias con respecto al tipo de fuente de carbono que se le proporcione Para este caso en especial la cepa de Aniper esporuld mejor en Harina de Yuca A termus en M e l a z a B m i a m en Harinri de Trigo y T harzinnum en Harina de Yuca

------Esttuiaa - - h - - i s o s (lE5) han demostrado que la concentracidn de Nieeno prwente en el mampio de cup170 ejerce una influencia directa en el nuacutemero de conidiosporas producidas por Thurzjmm par 10 que era necesario seleccionar la relacioacuten CN oacuteptima para cada cepa y para cada sustrato

la composicioacuten de l o s medios de cultivo utilizados para llevar a cabo este estudio estb presentados en las tablas I 11 I11 y IV Se utilizaron 4 diferentes relaciones CN estas fueron de 101424 y 40 empleanda UM mezcla de 23 panes de Sulfato de Amonio y 13 parte de h a toanando- 128 g de carbono como base de caacutelculo y tiempos de incubacioacuten de 7 y 14 dias l o s experimentos se realizaron en matraces de 250 ml

Ln relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despueacutes de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Anigw son mostrados en la tabla X

h datos obtenidos para Aniger nos indican que cuardo se emplea Harina de Yuca en concentracich de 40 gl y la reiaci6n CN estaacute entre 10 y 40 no es un factor determinante en la conidiogeacutenesis ya que esporula de rnanera similar entre estos r a n g o s para l o s medio a base de Harina de Trigo la CN entre 40 y 24 es donde mejm esporulacidn se obtiene

r 5 3 2 - A s m i l ~ s t

h relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de espomlaci6n obtenidos aespuk de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Rtemxs son mostradrx en la tabla XI

Lns medios de cultivo con 14 dias de incubacidn presentan el mayor ntUnero de conidiospwas a una relaci6n CN de 14 con excepcih de l o s medios con Sacarosa que mostramn en todos l o s cc~sos un compm-tamiento muy pobre con respecto al n h de conidias producidas Los mejores Ie se log-amn con Harina de Yuca y M e l a z a con una relacidn CN de-14 para 14 dias de incubacidn

Lo relaci6n que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despuds de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para B b s s i a n a son mostrados en la tabla XII

b Ie logrados para B b n s s i m e son muy similares entre si es decir no cambian significativamente l o s Ie para l o s cultivos con 14 dias de inmbacidn son bastante altos siendo el medio de cultivo con una relaci6n CN de 14 y Melaza como fuente de carbono ei queposee el mejor Ie con un tiempo de incuhcidn de 14 dias BI esta cepa se ve su capacidad de adaptacioacuten con respecto a l a s anteriores para crecer en Sackrosa

~ r

27 534- Psnicilliue sp

kiaeiampi que exiate entre 1- necG~-edt-~vcv - y h rendimientos de esparulaciOacutentilde-6btenidos despds de 7 -_Fl4 dias de cultivo en matraces para FbnciIlium sp son mostrados en la tabla XILI

_

La relacidn CN entre 10 y40 no tiene una influencia directa en la conidioghnesis de esta cepa sin embargo se dbeewa una tendencia a la disminucioacuten del N de conidiospcwas producidas en los cultivos con 14 dias de incubacih Los mayores Ie se lcgrarcm con los medios de cultivo a bnse de Harina de Yuca y Harina de Trigo

La relaci6n que existe entre la composiciiquestn quiacutemica del medio de cultivo y l a s rendimientos de esporulaci6n obtenidos desples de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Thurzzanum son mostrados en la tabla XIV

Las resultados obtenidos 1x1s mestran unatendencia hacia la obtencioacuten del m y m Ie en rangos de CN de 10 a 14 y estudios hechos par Raussos (1985) sohre el efecto de la concentraci6n de Nitriquestgeno en la oanidiogdnesis de Thaniunum pnmporcionaron una CN optima de 14 utilizando Harina de Yuca corno fuente de curbno

Sin embxqo pura una CN de 3253 obtiene un Ie para 7 dias --de incubacidn de Q16x1On9 cmparando este resultado con el resultado obtenido en mi estudio encuentro que a una CN de 40 para 7 diQs de incubacibn tengo un Ie de 132xlO-9 esto es 13 veces mamp por lo que es dificil comparar estos datos en l o s resultados obtenidos se obsewa una tendencia para los cultivos con 14 dias de incubacidn de disminuir el Ie confarme aumenta la relacidn CN y para l a s cultivos con 7 dias se observn lo contrario Los Ie mus altos se logran con l o s medios de cultivo a base de Harinu de Yuca y Melaza

536- Conclusiones

Las cepas estudiadas eSp0IWlUn dependiendo del tipo de fuente de carbono la fuente de carbono y su naturaleza tiene m infiuencia directa en la conidiogeacutenesis de l o s hongos f ilamentosos que la concentracioacuten de nitrdgeno sin embargo es recamendable la adlcidn ae nitdgeno entre l o s rargos de CN de 10 a 4 0

Para disminuir l o s costos de pmduccioacuten de conidiosporas hay que optimizar los medics de cultivo nacer la seleccioacuten de una h e m fuente de carbono para cada cepa y trhjar en rangos de CN de 14 a 4 0

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
                                          • -- A
                                          • --
                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
                                          • M
Page 28: MATRICULA: 83323133.

2 2

- La composicioacuten de l o s diferentes meampicsde cultvoutQizados pera llevar a cabo este estudio fueron medio N 2 de l a s tablas I 11111 y IV y se establecioacute prabay las diferentes fuentes de carbno (Harina de Yuca Harina de Pigo M e l a z a y Sacarosa) en matraces a una relaci6n CN de 14 para de esta manera poder observar el efecto que cada una de ell- ejerce solre la conidicgbesis de l o s hongos filamentosos estudiadas L m resultados se reman en l a s tablas V VI VII VI11 y XI y se exp-esan en base al Indice de Bporulacidn (Ie - N de esporas g de sustrato carbonado) para 7 dias de incubacion a temperatura ambiente (15-22C)

~ - -4

La Harim de Yuca es un producto amilaceo que ha demostrado ser un sustrato de gran eficiencia para la produccion de conidiosparas de hongos filamentosos ademds de ser un producto tropical de facil acceso su principal componente es el almidoacuten que corresponde al 80 en materia seca se encuentran en esta Harina pteiacutenas grasas y vitaminas del tipo B y C adamp de fibras y cenizas (Grace 1977)

la Harina de Pigo es otro sustrato amilaceo que se considerd importante utilizar debido a su alta disponibilidad en su canposicioacuten estan presentes pteiacutenas grw calcio f oacute s f m h i m tiamina riboflavina y niacina esto lo hace un sustrato interesante

La M e l a z a es el subproducto final de la fakicacioacuten de azucar es un liquido o b s c u r o denso y viscoso que se separa de la masa cocida de baja-calidad y del cual no se pede cristalizar ampamcar por amptodos mencionales y econoacutemicos en su composicioacuten estdn presentes 1 0 s amcares y otras sustancias entre l a s cuales se pueden citar l o s corapuestos nitrogenados aacutecidos aminoacidos albiminas vitaminas ceras esteroles lipid- sales minerales y cenizas etc (ICIDCA1986) Como se puede ver es un producto muy complejo por lo que puede ser un sustrato muy atractivo para su utilizaci6n como fuente de carbono en ipedios de cultivo pura la espomlaci6n de hongos filamentosos (Brinela 1987)

la s a c m a es un producto de facil adquisicioacuten y de pmduccioacuten idustrial importante por lo que se considem un sustrato atractivo para la produccioacuten de amidiosporas de hongos filamentosos La sacarosa se encuentra fonnada por una molecula de fructosa y una de glucosa l o s medios de cultivo que contienen sacarosa pcdriamos decir que son medios simples en comparacioacuten con la complejidad de la melaza y l a s harinas

521- A n i g ~

Fh la tabla V se muestran l o s Ie obtenidos para Anigerutilizardo l a s 4 fuentes de carbono antes mencionadas El mayor Ie se alcanzoacute en el medio de cultivo con k i n a de Yuca seguido de la M e l a z a la k i n a de Pigo y por Gltimo la Sacarosa se ha demostrado que durante el proceso de esterilizacioacuten la Harina de Yuca sufre un tratamiento teacutermico que hace que las moleacuteculas de almidh pasen cie una forma cristalina a un estado amdrfo (gelatinizacion) y que Ani_mr es un productm de amilasas (Raimbault 19801 lo que sugiere que la gelatinizacioacuten podriacutea facilitar el ataque enzimdtico y con esto i iberar cantidades importantes de glucosa que favoreced el crecilriiento del hongo lo que normalmente estaacute reiacionado con una produccioacuten importante de conidias

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I

I

I c- 7 DIAS

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 509xl0^9 I I I I

I I 1 I

Harina de Trigo 14 367X1^9 I I I

I I I I

Melaza 14 424x10-9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 16Ox10^8 I I I I

522- d t ~ 1 7 9 ~ ~

Eh la tabla VI se muestran l o s Ie obtenidos para A termus -utiliZando__las 4 fuentes de carbono antes mencionadas El Ie mas alto se encmtroacute en el medio de cultivo con M e l a z a seguido de la Yprina de Yuca y Trigo y por uacuteltimo la Sacarosa d t m u s es utilizado en lo s procesos de aprovechamiento de eubproductos de la industria cantildeera en cuba (meollo y bagazo) (Blanco bpez Villarl968) Esta cepa estaacute adaptada a l o s procesos de la industria cuntildeera de c u b a por lo que se esperariacutea que espurulara mejor en Melaza tal como ocurrioacute

TXBLA VI- Indices de espwulacibn para dtwreus utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa como fuente de carbono para tiempos de incubacidn de 7 dias y relacioacuten CN de 14

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I I I I I I 7 DIAS I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 60x10n9 I I I

Harina de pigo 14 403xlO-9

I I I

1 I I I

I I I I

M e l a z a 14 612xlOA9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 S40~107 1 I I

211

523- Bbassi= 1

Las resulta- 5e rem en la t ~ ~ h ~ f - - - ~ ~ - - ~ ~ e se -obtwo en el medio con Harina de Trigo m i d o de la H a r i n a de Yuca Melnza y Sacarosa Se puede obeervar que 1 0 s Ie amp altos se logran con los sustratos amiluceos que tal vez puedan ser mamp facilmente utilizados por el microoqanimno debido a l - v e s o de gelatinizacioacuten que Wren

524- Penicillium sp

Los resultados se muestran en la tabla VIII Los mayores le se alcanzaron con las Harims de Yuca y Trigo con respecto a los atros dos sustratos Se observoacute una mayor produccioacuten de micelio en los sustratos amilaceos lo que podria justificar la produccibn maacutes alta de conidias

525- Thnmianum

LBS resultados se reportan en la tabla XI Estudios hechos par Raussos (1985) demostraron la capacidad de Thanianum en la produccidn de ami la s a s utilizando almidoacuten cam0 fuente de carbono pesto que la harim de yuca y la harina de trigo son sustratos amilacecs se esperariacutea una produccioacuten impcortante de esporras tal COQLO sucedioacute para la harina de yuca y no asi para la harina de trigo Con respecto a la s a c m a el Ie tan bajo que se obtuvo con relacidn a la melaza pede ser debido a todos los compuestos que se encuentran en las m e l a z a s

c TABLA VI1- Inlices de esparcllacibn para Bhssiana utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo M e i u z a y Sacarosa axno fuente de carbono para tiempos de incubacioacuten de 7 dias y relacion CN de 14

I I I

I I I Ie I

Summ CN I I

1 I I I

I I

1 I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 1 8 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

7 DIAS

Harina de Pigo 14 702~10~9 I I I I

I I I

Melaza 14 217~10~9 I I I I

I I I I

Sacarosa i 14 8 5 8 ~ 1 0 ~ 6 I I I I

r

I I

I Ie 1

I Summ CN I

I 1 i I

I I 7 DIAS

I I I I

I 1 I I

Harina de Yuca 14 142x10^10 I I I I

I I I I

Harina de Pigo 14 832xlO-9 1 1 I I

I I I I

M e l a z a 14 293~10~9

I I I

Sacarosa 14 103x10n9

I I I I

I I I I

m IX-Indices de espauulacian para Thamianum utilizando Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa corno fuente de carbono para tiapos de incubacich de 7 dim y relacioacuten CN de 14

I I I I

I -

1 I Ie I

I Summ CN I

I I 7 D I A S t I I I

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 11ox1On1O I I I I

I I I I

Harina de Trigo 14 12Ox10-9 I I I I

I I I I

M e l a z a 14 875~10~9 I I I I

I

Sacarosa I

I i I

14 11Ox10^8 I I I

526- Conclusiones

Varios autores han demostrado la importancia de la fuente de carbono sobre la conidiogenesis de hongos f ilamentosos (Vezina y co11965 Martinelli1976) en este estudio se pudo observar que cada cepa tiene caracteristicas fisiolcjgicas de esporulacidn propias con respecto al tipo de fuente de carbono que se le proporcione Para este caso en especial la cepa de Aniper esporuld mejor en Harina de Yuca A termus en M e l a z a B m i a m en Harinri de Trigo y T harzinnum en Harina de Yuca

------Esttuiaa - - h - - i s o s (lE5) han demostrado que la concentracidn de Nieeno prwente en el mampio de cup170 ejerce una influencia directa en el nuacutemero de conidiosporas producidas por Thurzjmm par 10 que era necesario seleccionar la relacioacuten CN oacuteptima para cada cepa y para cada sustrato

la composicioacuten de l o s medios de cultivo utilizados para llevar a cabo este estudio estb presentados en las tablas I 11 I11 y IV Se utilizaron 4 diferentes relaciones CN estas fueron de 101424 y 40 empleanda UM mezcla de 23 panes de Sulfato de Amonio y 13 parte de h a toanando- 128 g de carbono como base de caacutelculo y tiempos de incubacioacuten de 7 y 14 dias l o s experimentos se realizaron en matraces de 250 ml

Ln relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despueacutes de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Anigw son mostrados en la tabla X

h datos obtenidos para Aniger nos indican que cuardo se emplea Harina de Yuca en concentracich de 40 gl y la reiaci6n CN estaacute entre 10 y 40 no es un factor determinante en la conidiogeacutenesis ya que esporula de rnanera similar entre estos r a n g o s para l o s medio a base de Harina de Trigo la CN entre 40 y 24 es donde mejm esporulacidn se obtiene

r 5 3 2 - A s m i l ~ s t

h relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de espomlaci6n obtenidos aespuk de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Rtemxs son mostradrx en la tabla XI

Lns medios de cultivo con 14 dias de incubacidn presentan el mayor ntUnero de conidiospwas a una relaci6n CN de 14 con excepcih de l o s medios con Sacarosa que mostramn en todos l o s cc~sos un compm-tamiento muy pobre con respecto al n h de conidias producidas Los mejores Ie se log-amn con Harina de Yuca y M e l a z a con una relacidn CN de-14 para 14 dias de incubacidn

Lo relaci6n que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despuds de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para B b s s i a n a son mostrados en la tabla XII

b Ie logrados para B b n s s i m e son muy similares entre si es decir no cambian significativamente l o s Ie para l o s cultivos con 14 dias de inmbacidn son bastante altos siendo el medio de cultivo con una relaci6n CN de 14 y Melaza como fuente de carbono ei queposee el mejor Ie con un tiempo de incuhcidn de 14 dias BI esta cepa se ve su capacidad de adaptacioacuten con respecto a l a s anteriores para crecer en Sackrosa

~ r

27 534- Psnicilliue sp

kiaeiampi que exiate entre 1- necG~-edt-~vcv - y h rendimientos de esparulaciOacutentilde-6btenidos despds de 7 -_Fl4 dias de cultivo en matraces para FbnciIlium sp son mostrados en la tabla XILI

_

La relacidn CN entre 10 y40 no tiene una influencia directa en la conidioghnesis de esta cepa sin embargo se dbeewa una tendencia a la disminucioacuten del N de conidiospcwas producidas en los cultivos con 14 dias de incubacih Los mayores Ie se lcgrarcm con los medios de cultivo a bnse de Harina de Yuca y Harina de Trigo

La relaci6n que existe entre la composiciiquestn quiacutemica del medio de cultivo y l a s rendimientos de esporulaci6n obtenidos desples de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Thurzzanum son mostrados en la tabla XIV

Las resultados obtenidos 1x1s mestran unatendencia hacia la obtencioacuten del m y m Ie en rangos de CN de 10 a 14 y estudios hechos par Raussos (1985) sohre el efecto de la concentraci6n de Nitriquestgeno en la oanidiogdnesis de Thaniunum pnmporcionaron una CN optima de 14 utilizando Harina de Yuca corno fuente de curbno

Sin embxqo pura una CN de 3253 obtiene un Ie para 7 dias --de incubacidn de Q16x1On9 cmparando este resultado con el resultado obtenido en mi estudio encuentro que a una CN de 40 para 7 diQs de incubacibn tengo un Ie de 132xlO-9 esto es 13 veces mamp por lo que es dificil comparar estos datos en l o s resultados obtenidos se obsewa una tendencia para los cultivos con 14 dias de incubacidn de disminuir el Ie confarme aumenta la relacidn CN y para l a s cultivos con 7 dias se observn lo contrario Los Ie mus altos se logran con l o s medios de cultivo a base de Harinu de Yuca y Melaza

536- Conclusiones

Las cepas estudiadas eSp0IWlUn dependiendo del tipo de fuente de carbono la fuente de carbono y su naturaleza tiene m infiuencia directa en la conidiogeacutenesis de l o s hongos f ilamentosos que la concentracioacuten de nitrdgeno sin embargo es recamendable la adlcidn ae nitdgeno entre l o s rargos de CN de 10 a 4 0

Para disminuir l o s costos de pmduccioacuten de conidiosporas hay que optimizar los medics de cultivo nacer la seleccioacuten de una h e m fuente de carbono para cada cepa y trhjar en rangos de CN de 14 a 4 0

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
                                          • -- A
                                          • --
                                          • I I S
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                                          • I I
                                          • M
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I I I Ie I

I SUsrRAm CN I

I

I c- 7 DIAS

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 509xl0^9 I I I I

I I 1 I

Harina de Trigo 14 367X1^9 I I I

I I I I

Melaza 14 424x10-9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 16Ox10^8 I I I I

522- d t ~ 1 7 9 ~ ~

Eh la tabla VI se muestran l o s Ie obtenidos para A termus -utiliZando__las 4 fuentes de carbono antes mencionadas El Ie mas alto se encmtroacute en el medio de cultivo con M e l a z a seguido de la Yprina de Yuca y Trigo y por uacuteltimo la Sacarosa d t m u s es utilizado en lo s procesos de aprovechamiento de eubproductos de la industria cantildeera en cuba (meollo y bagazo) (Blanco bpez Villarl968) Esta cepa estaacute adaptada a l o s procesos de la industria cuntildeera de c u b a por lo que se esperariacutea que espurulara mejor en Melaza tal como ocurrioacute

TXBLA VI- Indices de espwulacibn para dtwreus utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa como fuente de carbono para tiempos de incubacidn de 7 dias y relacioacuten CN de 14

I I I Ie I

I SUsrRAm CN I I I I I I 7 DIAS I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 60x10n9 I I I

Harina de pigo 14 403xlO-9

I I I

1 I I I

I I I I

M e l a z a 14 612xlOA9 I I I I

I I I I

Sacarosa 14 S40~107 1 I I

211

523- Bbassi= 1

Las resulta- 5e rem en la t ~ ~ h ~ f - - - ~ ~ - - ~ ~ e se -obtwo en el medio con Harina de Trigo m i d o de la H a r i n a de Yuca Melnza y Sacarosa Se puede obeervar que 1 0 s Ie amp altos se logran con los sustratos amiluceos que tal vez puedan ser mamp facilmente utilizados por el microoqanimno debido a l - v e s o de gelatinizacioacuten que Wren

524- Penicillium sp

Los resultados se muestran en la tabla VIII Los mayores le se alcanzaron con las Harims de Yuca y Trigo con respecto a los atros dos sustratos Se observoacute una mayor produccioacuten de micelio en los sustratos amilaceos lo que podria justificar la produccibn maacutes alta de conidias

525- Thnmianum

LBS resultados se reportan en la tabla XI Estudios hechos par Raussos (1985) demostraron la capacidad de Thanianum en la produccidn de ami la s a s utilizando almidoacuten cam0 fuente de carbono pesto que la harim de yuca y la harina de trigo son sustratos amilacecs se esperariacutea una produccioacuten impcortante de esporras tal COQLO sucedioacute para la harina de yuca y no asi para la harina de trigo Con respecto a la s a c m a el Ie tan bajo que se obtuvo con relacidn a la melaza pede ser debido a todos los compuestos que se encuentran en las m e l a z a s

c TABLA VI1- Inlices de esparcllacibn para Bhssiana utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo M e i u z a y Sacarosa axno fuente de carbono para tiempos de incubacioacuten de 7 dias y relacion CN de 14

I I I

I I I Ie I

Summ CN I I

1 I I I

I I

1 I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 1 8 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

7 DIAS

Harina de Pigo 14 702~10~9 I I I I

I I I

Melaza 14 217~10~9 I I I I

I I I I

Sacarosa i 14 8 5 8 ~ 1 0 ~ 6 I I I I

r

I I

I Ie 1

I Summ CN I

I 1 i I

I I 7 DIAS

I I I I

I 1 I I

Harina de Yuca 14 142x10^10 I I I I

I I I I

Harina de Pigo 14 832xlO-9 1 1 I I

I I I I

M e l a z a 14 293~10~9

I I I

Sacarosa 14 103x10n9

I I I I

I I I I

m IX-Indices de espauulacian para Thamianum utilizando Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa corno fuente de carbono para tiapos de incubacich de 7 dim y relacioacuten CN de 14

I I I I

I -

1 I Ie I

I Summ CN I

I I 7 D I A S t I I I

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 11ox1On1O I I I I

I I I I

Harina de Trigo 14 12Ox10-9 I I I I

I I I I

M e l a z a 14 875~10~9 I I I I

I

Sacarosa I

I i I

14 11Ox10^8 I I I

526- Conclusiones

Varios autores han demostrado la importancia de la fuente de carbono sobre la conidiogenesis de hongos f ilamentosos (Vezina y co11965 Martinelli1976) en este estudio se pudo observar que cada cepa tiene caracteristicas fisiolcjgicas de esporulacidn propias con respecto al tipo de fuente de carbono que se le proporcione Para este caso en especial la cepa de Aniper esporuld mejor en Harina de Yuca A termus en M e l a z a B m i a m en Harinri de Trigo y T harzinnum en Harina de Yuca

------Esttuiaa - - h - - i s o s (lE5) han demostrado que la concentracidn de Nieeno prwente en el mampio de cup170 ejerce una influencia directa en el nuacutemero de conidiosporas producidas por Thurzjmm par 10 que era necesario seleccionar la relacioacuten CN oacuteptima para cada cepa y para cada sustrato

la composicioacuten de l o s medios de cultivo utilizados para llevar a cabo este estudio estb presentados en las tablas I 11 I11 y IV Se utilizaron 4 diferentes relaciones CN estas fueron de 101424 y 40 empleanda UM mezcla de 23 panes de Sulfato de Amonio y 13 parte de h a toanando- 128 g de carbono como base de caacutelculo y tiempos de incubacioacuten de 7 y 14 dias l o s experimentos se realizaron en matraces de 250 ml

Ln relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despueacutes de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Anigw son mostrados en la tabla X

h datos obtenidos para Aniger nos indican que cuardo se emplea Harina de Yuca en concentracich de 40 gl y la reiaci6n CN estaacute entre 10 y 40 no es un factor determinante en la conidiogeacutenesis ya que esporula de rnanera similar entre estos r a n g o s para l o s medio a base de Harina de Trigo la CN entre 40 y 24 es donde mejm esporulacidn se obtiene

r 5 3 2 - A s m i l ~ s t

h relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de espomlaci6n obtenidos aespuk de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Rtemxs son mostradrx en la tabla XI

Lns medios de cultivo con 14 dias de incubacidn presentan el mayor ntUnero de conidiospwas a una relaci6n CN de 14 con excepcih de l o s medios con Sacarosa que mostramn en todos l o s cc~sos un compm-tamiento muy pobre con respecto al n h de conidias producidas Los mejores Ie se log-amn con Harina de Yuca y M e l a z a con una relacidn CN de-14 para 14 dias de incubacidn

Lo relaci6n que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despuds de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para B b s s i a n a son mostrados en la tabla XII

b Ie logrados para B b n s s i m e son muy similares entre si es decir no cambian significativamente l o s Ie para l o s cultivos con 14 dias de inmbacidn son bastante altos siendo el medio de cultivo con una relaci6n CN de 14 y Melaza como fuente de carbono ei queposee el mejor Ie con un tiempo de incuhcidn de 14 dias BI esta cepa se ve su capacidad de adaptacioacuten con respecto a l a s anteriores para crecer en Sackrosa

~ r

27 534- Psnicilliue sp

kiaeiampi que exiate entre 1- necG~-edt-~vcv - y h rendimientos de esparulaciOacutentilde-6btenidos despds de 7 -_Fl4 dias de cultivo en matraces para FbnciIlium sp son mostrados en la tabla XILI

_

La relacidn CN entre 10 y40 no tiene una influencia directa en la conidioghnesis de esta cepa sin embargo se dbeewa una tendencia a la disminucioacuten del N de conidiospcwas producidas en los cultivos con 14 dias de incubacih Los mayores Ie se lcgrarcm con los medios de cultivo a bnse de Harina de Yuca y Harina de Trigo

La relaci6n que existe entre la composiciiquestn quiacutemica del medio de cultivo y l a s rendimientos de esporulaci6n obtenidos desples de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Thurzzanum son mostrados en la tabla XIV

Las resultados obtenidos 1x1s mestran unatendencia hacia la obtencioacuten del m y m Ie en rangos de CN de 10 a 14 y estudios hechos par Raussos (1985) sohre el efecto de la concentraci6n de Nitriquestgeno en la oanidiogdnesis de Thaniunum pnmporcionaron una CN optima de 14 utilizando Harina de Yuca corno fuente de curbno

Sin embxqo pura una CN de 3253 obtiene un Ie para 7 dias --de incubacidn de Q16x1On9 cmparando este resultado con el resultado obtenido en mi estudio encuentro que a una CN de 40 para 7 diQs de incubacibn tengo un Ie de 132xlO-9 esto es 13 veces mamp por lo que es dificil comparar estos datos en l o s resultados obtenidos se obsewa una tendencia para los cultivos con 14 dias de incubacidn de disminuir el Ie confarme aumenta la relacidn CN y para l a s cultivos con 7 dias se observn lo contrario Los Ie mus altos se logran con l o s medios de cultivo a base de Harinu de Yuca y Melaza

536- Conclusiones

Las cepas estudiadas eSp0IWlUn dependiendo del tipo de fuente de carbono la fuente de carbono y su naturaleza tiene m infiuencia directa en la conidiogeacutenesis de l o s hongos f ilamentosos que la concentracioacuten de nitrdgeno sin embargo es recamendable la adlcidn ae nitdgeno entre l o s rargos de CN de 10 a 4 0

Para disminuir l o s costos de pmduccioacuten de conidiosporas hay que optimizar los medics de cultivo nacer la seleccioacuten de una h e m fuente de carbono para cada cepa y trhjar en rangos de CN de 14 a 4 0

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
                                          • -- A
                                          • --
                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
                                          • M
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211

523- Bbassi= 1

Las resulta- 5e rem en la t ~ ~ h ~ f - - - ~ ~ - - ~ ~ e se -obtwo en el medio con Harina de Trigo m i d o de la H a r i n a de Yuca Melnza y Sacarosa Se puede obeervar que 1 0 s Ie amp altos se logran con los sustratos amiluceos que tal vez puedan ser mamp facilmente utilizados por el microoqanimno debido a l - v e s o de gelatinizacioacuten que Wren

524- Penicillium sp

Los resultados se muestran en la tabla VIII Los mayores le se alcanzaron con las Harims de Yuca y Trigo con respecto a los atros dos sustratos Se observoacute una mayor produccioacuten de micelio en los sustratos amilaceos lo que podria justificar la produccibn maacutes alta de conidias

525- Thnmianum

LBS resultados se reportan en la tabla XI Estudios hechos par Raussos (1985) demostraron la capacidad de Thanianum en la produccidn de ami la s a s utilizando almidoacuten cam0 fuente de carbono pesto que la harim de yuca y la harina de trigo son sustratos amilacecs se esperariacutea una produccioacuten impcortante de esporras tal COQLO sucedioacute para la harina de yuca y no asi para la harina de trigo Con respecto a la s a c m a el Ie tan bajo que se obtuvo con relacidn a la melaza pede ser debido a todos los compuestos que se encuentran en las m e l a z a s

c TABLA VI1- Inlices de esparcllacibn para Bhssiana utilizardo Harina de Yuca Harina de Trigo M e i u z a y Sacarosa axno fuente de carbono para tiempos de incubacioacuten de 7 dias y relacion CN de 14

I I I

I I I Ie I

Summ CN I I

1 I I I

I I

1 I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 5 1 8 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

7 DIAS

Harina de Pigo 14 702~10~9 I I I I

I I I

Melaza 14 217~10~9 I I I I

I I I I

Sacarosa i 14 8 5 8 ~ 1 0 ~ 6 I I I I

r

I I

I Ie 1

I Summ CN I

I 1 i I

I I 7 DIAS

I I I I

I 1 I I

Harina de Yuca 14 142x10^10 I I I I

I I I I

Harina de Pigo 14 832xlO-9 1 1 I I

I I I I

M e l a z a 14 293~10~9

I I I

Sacarosa 14 103x10n9

I I I I

I I I I

m IX-Indices de espauulacian para Thamianum utilizando Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa corno fuente de carbono para tiapos de incubacich de 7 dim y relacioacuten CN de 14

I I I I

I -

1 I Ie I

I Summ CN I

I I 7 D I A S t I I I

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 11ox1On1O I I I I

I I I I

Harina de Trigo 14 12Ox10-9 I I I I

I I I I

M e l a z a 14 875~10~9 I I I I

I

Sacarosa I

I i I

14 11Ox10^8 I I I

526- Conclusiones

Varios autores han demostrado la importancia de la fuente de carbono sobre la conidiogenesis de hongos f ilamentosos (Vezina y co11965 Martinelli1976) en este estudio se pudo observar que cada cepa tiene caracteristicas fisiolcjgicas de esporulacidn propias con respecto al tipo de fuente de carbono que se le proporcione Para este caso en especial la cepa de Aniper esporuld mejor en Harina de Yuca A termus en M e l a z a B m i a m en Harinri de Trigo y T harzinnum en Harina de Yuca

------Esttuiaa - - h - - i s o s (lE5) han demostrado que la concentracidn de Nieeno prwente en el mampio de cup170 ejerce una influencia directa en el nuacutemero de conidiosporas producidas por Thurzjmm par 10 que era necesario seleccionar la relacioacuten CN oacuteptima para cada cepa y para cada sustrato

la composicioacuten de l o s medios de cultivo utilizados para llevar a cabo este estudio estb presentados en las tablas I 11 I11 y IV Se utilizaron 4 diferentes relaciones CN estas fueron de 101424 y 40 empleanda UM mezcla de 23 panes de Sulfato de Amonio y 13 parte de h a toanando- 128 g de carbono como base de caacutelculo y tiempos de incubacioacuten de 7 y 14 dias l o s experimentos se realizaron en matraces de 250 ml

Ln relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despueacutes de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Anigw son mostrados en la tabla X

h datos obtenidos para Aniger nos indican que cuardo se emplea Harina de Yuca en concentracich de 40 gl y la reiaci6n CN estaacute entre 10 y 40 no es un factor determinante en la conidiogeacutenesis ya que esporula de rnanera similar entre estos r a n g o s para l o s medio a base de Harina de Trigo la CN entre 40 y 24 es donde mejm esporulacidn se obtiene

r 5 3 2 - A s m i l ~ s t

h relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de espomlaci6n obtenidos aespuk de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Rtemxs son mostradrx en la tabla XI

Lns medios de cultivo con 14 dias de incubacidn presentan el mayor ntUnero de conidiospwas a una relaci6n CN de 14 con excepcih de l o s medios con Sacarosa que mostramn en todos l o s cc~sos un compm-tamiento muy pobre con respecto al n h de conidias producidas Los mejores Ie se log-amn con Harina de Yuca y M e l a z a con una relacidn CN de-14 para 14 dias de incubacidn

Lo relaci6n que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despuds de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para B b s s i a n a son mostrados en la tabla XII

b Ie logrados para B b n s s i m e son muy similares entre si es decir no cambian significativamente l o s Ie para l o s cultivos con 14 dias de inmbacidn son bastante altos siendo el medio de cultivo con una relaci6n CN de 14 y Melaza como fuente de carbono ei queposee el mejor Ie con un tiempo de incuhcidn de 14 dias BI esta cepa se ve su capacidad de adaptacioacuten con respecto a l a s anteriores para crecer en Sackrosa

~ r

27 534- Psnicilliue sp

kiaeiampi que exiate entre 1- necG~-edt-~vcv - y h rendimientos de esparulaciOacutentilde-6btenidos despds de 7 -_Fl4 dias de cultivo en matraces para FbnciIlium sp son mostrados en la tabla XILI

_

La relacidn CN entre 10 y40 no tiene una influencia directa en la conidioghnesis de esta cepa sin embargo se dbeewa una tendencia a la disminucioacuten del N de conidiospcwas producidas en los cultivos con 14 dias de incubacih Los mayores Ie se lcgrarcm con los medios de cultivo a bnse de Harina de Yuca y Harina de Trigo

La relaci6n que existe entre la composiciiquestn quiacutemica del medio de cultivo y l a s rendimientos de esporulaci6n obtenidos desples de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Thurzzanum son mostrados en la tabla XIV

Las resultados obtenidos 1x1s mestran unatendencia hacia la obtencioacuten del m y m Ie en rangos de CN de 10 a 14 y estudios hechos par Raussos (1985) sohre el efecto de la concentraci6n de Nitriquestgeno en la oanidiogdnesis de Thaniunum pnmporcionaron una CN optima de 14 utilizando Harina de Yuca corno fuente de curbno

Sin embxqo pura una CN de 3253 obtiene un Ie para 7 dias --de incubacidn de Q16x1On9 cmparando este resultado con el resultado obtenido en mi estudio encuentro que a una CN de 40 para 7 diQs de incubacibn tengo un Ie de 132xlO-9 esto es 13 veces mamp por lo que es dificil comparar estos datos en l o s resultados obtenidos se obsewa una tendencia para los cultivos con 14 dias de incubacidn de disminuir el Ie confarme aumenta la relacidn CN y para l a s cultivos con 7 dias se observn lo contrario Los Ie mus altos se logran con l o s medios de cultivo a base de Harinu de Yuca y Melaza

536- Conclusiones

Las cepas estudiadas eSp0IWlUn dependiendo del tipo de fuente de carbono la fuente de carbono y su naturaleza tiene m infiuencia directa en la conidiogeacutenesis de l o s hongos f ilamentosos que la concentracioacuten de nitrdgeno sin embargo es recamendable la adlcidn ae nitdgeno entre l o s rargos de CN de 10 a 4 0

Para disminuir l o s costos de pmduccioacuten de conidiosporas hay que optimizar los medics de cultivo nacer la seleccioacuten de una h e m fuente de carbono para cada cepa y trhjar en rangos de CN de 14 a 4 0

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
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                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
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                                          • I I S
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I I

I Ie 1

I Summ CN I

I 1 i I

I I 7 DIAS

I I I I

I 1 I I

Harina de Yuca 14 142x10^10 I I I I

I I I I

Harina de Pigo 14 832xlO-9 1 1 I I

I I I I

M e l a z a 14 293~10~9

I I I

Sacarosa 14 103x10n9

I I I I

I I I I

m IX-Indices de espauulacian para Thamianum utilizando Harina de Yuca Harina de Trigo Melaza y Sacarosa corno fuente de carbono para tiapos de incubacich de 7 dim y relacioacuten CN de 14

I I I I

I -

1 I Ie I

I Summ CN I

I I 7 D I A S t I I I

I I I I

I I I I

Harina de Yuca 14 11ox1On1O I I I I

I I I I

Harina de Trigo 14 12Ox10-9 I I I I

I I I I

M e l a z a 14 875~10~9 I I I I

I

Sacarosa I

I i I

14 11Ox10^8 I I I

526- Conclusiones

Varios autores han demostrado la importancia de la fuente de carbono sobre la conidiogenesis de hongos f ilamentosos (Vezina y co11965 Martinelli1976) en este estudio se pudo observar que cada cepa tiene caracteristicas fisiolcjgicas de esporulacidn propias con respecto al tipo de fuente de carbono que se le proporcione Para este caso en especial la cepa de Aniper esporuld mejor en Harina de Yuca A termus en M e l a z a B m i a m en Harinri de Trigo y T harzinnum en Harina de Yuca

------Esttuiaa - - h - - i s o s (lE5) han demostrado que la concentracidn de Nieeno prwente en el mampio de cup170 ejerce una influencia directa en el nuacutemero de conidiosporas producidas por Thurzjmm par 10 que era necesario seleccionar la relacioacuten CN oacuteptima para cada cepa y para cada sustrato

la composicioacuten de l o s medios de cultivo utilizados para llevar a cabo este estudio estb presentados en las tablas I 11 I11 y IV Se utilizaron 4 diferentes relaciones CN estas fueron de 101424 y 40 empleanda UM mezcla de 23 panes de Sulfato de Amonio y 13 parte de h a toanando- 128 g de carbono como base de caacutelculo y tiempos de incubacioacuten de 7 y 14 dias l o s experimentos se realizaron en matraces de 250 ml

Ln relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despueacutes de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Anigw son mostrados en la tabla X

h datos obtenidos para Aniger nos indican que cuardo se emplea Harina de Yuca en concentracich de 40 gl y la reiaci6n CN estaacute entre 10 y 40 no es un factor determinante en la conidiogeacutenesis ya que esporula de rnanera similar entre estos r a n g o s para l o s medio a base de Harina de Trigo la CN entre 40 y 24 es donde mejm esporulacidn se obtiene

r 5 3 2 - A s m i l ~ s t

h relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de espomlaci6n obtenidos aespuk de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Rtemxs son mostradrx en la tabla XI

Lns medios de cultivo con 14 dias de incubacidn presentan el mayor ntUnero de conidiospwas a una relaci6n CN de 14 con excepcih de l o s medios con Sacarosa que mostramn en todos l o s cc~sos un compm-tamiento muy pobre con respecto al n h de conidias producidas Los mejores Ie se log-amn con Harina de Yuca y M e l a z a con una relacidn CN de-14 para 14 dias de incubacidn

Lo relaci6n que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despuds de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para B b s s i a n a son mostrados en la tabla XII

b Ie logrados para B b n s s i m e son muy similares entre si es decir no cambian significativamente l o s Ie para l o s cultivos con 14 dias de inmbacidn son bastante altos siendo el medio de cultivo con una relaci6n CN de 14 y Melaza como fuente de carbono ei queposee el mejor Ie con un tiempo de incuhcidn de 14 dias BI esta cepa se ve su capacidad de adaptacioacuten con respecto a l a s anteriores para crecer en Sackrosa

~ r

27 534- Psnicilliue sp

kiaeiampi que exiate entre 1- necG~-edt-~vcv - y h rendimientos de esparulaciOacutentilde-6btenidos despds de 7 -_Fl4 dias de cultivo en matraces para FbnciIlium sp son mostrados en la tabla XILI

_

La relacidn CN entre 10 y40 no tiene una influencia directa en la conidioghnesis de esta cepa sin embargo se dbeewa una tendencia a la disminucioacuten del N de conidiospcwas producidas en los cultivos con 14 dias de incubacih Los mayores Ie se lcgrarcm con los medios de cultivo a bnse de Harina de Yuca y Harina de Trigo

La relaci6n que existe entre la composiciiquestn quiacutemica del medio de cultivo y l a s rendimientos de esporulaci6n obtenidos desples de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Thurzzanum son mostrados en la tabla XIV

Las resultados obtenidos 1x1s mestran unatendencia hacia la obtencioacuten del m y m Ie en rangos de CN de 10 a 14 y estudios hechos par Raussos (1985) sohre el efecto de la concentraci6n de Nitriquestgeno en la oanidiogdnesis de Thaniunum pnmporcionaron una CN optima de 14 utilizando Harina de Yuca corno fuente de curbno

Sin embxqo pura una CN de 3253 obtiene un Ie para 7 dias --de incubacidn de Q16x1On9 cmparando este resultado con el resultado obtenido en mi estudio encuentro que a una CN de 40 para 7 diQs de incubacibn tengo un Ie de 132xlO-9 esto es 13 veces mamp por lo que es dificil comparar estos datos en l o s resultados obtenidos se obsewa una tendencia para los cultivos con 14 dias de incubacidn de disminuir el Ie confarme aumenta la relacidn CN y para l a s cultivos con 7 dias se observn lo contrario Los Ie mus altos se logran con l o s medios de cultivo a base de Harinu de Yuca y Melaza

536- Conclusiones

Las cepas estudiadas eSp0IWlUn dependiendo del tipo de fuente de carbono la fuente de carbono y su naturaleza tiene m infiuencia directa en la conidiogeacutenesis de l o s hongos f ilamentosos que la concentracioacuten de nitrdgeno sin embargo es recamendable la adlcidn ae nitdgeno entre l o s rargos de CN de 10 a 4 0

Para disminuir l o s costos de pmduccioacuten de conidiosporas hay que optimizar los medics de cultivo nacer la seleccioacuten de una h e m fuente de carbono para cada cepa y trhjar en rangos de CN de 14 a 4 0

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
                                          • -- A
                                          • --
                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
                                          • M
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------Esttuiaa - - h - - i s o s (lE5) han demostrado que la concentracidn de Nieeno prwente en el mampio de cup170 ejerce una influencia directa en el nuacutemero de conidiosporas producidas por Thurzjmm par 10 que era necesario seleccionar la relacioacuten CN oacuteptima para cada cepa y para cada sustrato

la composicioacuten de l o s medios de cultivo utilizados para llevar a cabo este estudio estb presentados en las tablas I 11 I11 y IV Se utilizaron 4 diferentes relaciones CN estas fueron de 101424 y 40 empleanda UM mezcla de 23 panes de Sulfato de Amonio y 13 parte de h a toanando- 128 g de carbono como base de caacutelculo y tiempos de incubacioacuten de 7 y 14 dias l o s experimentos se realizaron en matraces de 250 ml

Ln relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despueacutes de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Anigw son mostrados en la tabla X

h datos obtenidos para Aniger nos indican que cuardo se emplea Harina de Yuca en concentracich de 40 gl y la reiaci6n CN estaacute entre 10 y 40 no es un factor determinante en la conidiogeacutenesis ya que esporula de rnanera similar entre estos r a n g o s para l o s medio a base de Harina de Trigo la CN entre 40 y 24 es donde mejm esporulacidn se obtiene

r 5 3 2 - A s m i l ~ s t

h relacioacuten que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de espomlaci6n obtenidos aespuk de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Rtemxs son mostradrx en la tabla XI

Lns medios de cultivo con 14 dias de incubacidn presentan el mayor ntUnero de conidiospwas a una relaci6n CN de 14 con excepcih de l o s medios con Sacarosa que mostramn en todos l o s cc~sos un compm-tamiento muy pobre con respecto al n h de conidias producidas Los mejores Ie se log-amn con Harina de Yuca y M e l a z a con una relacidn CN de-14 para 14 dias de incubacidn

Lo relaci6n que existe entre l o s medios de cultivo y l o s rendimientos de esporulacidn obtenidos despuds de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para B b s s i a n a son mostrados en la tabla XII

b Ie logrados para B b n s s i m e son muy similares entre si es decir no cambian significativamente l o s Ie para l o s cultivos con 14 dias de inmbacidn son bastante altos siendo el medio de cultivo con una relaci6n CN de 14 y Melaza como fuente de carbono ei queposee el mejor Ie con un tiempo de incuhcidn de 14 dias BI esta cepa se ve su capacidad de adaptacioacuten con respecto a l a s anteriores para crecer en Sackrosa

~ r

27 534- Psnicilliue sp

kiaeiampi que exiate entre 1- necG~-edt-~vcv - y h rendimientos de esparulaciOacutentilde-6btenidos despds de 7 -_Fl4 dias de cultivo en matraces para FbnciIlium sp son mostrados en la tabla XILI

_

La relacidn CN entre 10 y40 no tiene una influencia directa en la conidioghnesis de esta cepa sin embargo se dbeewa una tendencia a la disminucioacuten del N de conidiospcwas producidas en los cultivos con 14 dias de incubacih Los mayores Ie se lcgrarcm con los medios de cultivo a bnse de Harina de Yuca y Harina de Trigo

La relaci6n que existe entre la composiciiquestn quiacutemica del medio de cultivo y l a s rendimientos de esporulaci6n obtenidos desples de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Thurzzanum son mostrados en la tabla XIV

Las resultados obtenidos 1x1s mestran unatendencia hacia la obtencioacuten del m y m Ie en rangos de CN de 10 a 14 y estudios hechos par Raussos (1985) sohre el efecto de la concentraci6n de Nitriquestgeno en la oanidiogdnesis de Thaniunum pnmporcionaron una CN optima de 14 utilizando Harina de Yuca corno fuente de curbno

Sin embxqo pura una CN de 3253 obtiene un Ie para 7 dias --de incubacidn de Q16x1On9 cmparando este resultado con el resultado obtenido en mi estudio encuentro que a una CN de 40 para 7 diQs de incubacibn tengo un Ie de 132xlO-9 esto es 13 veces mamp por lo que es dificil comparar estos datos en l o s resultados obtenidos se obsewa una tendencia para los cultivos con 14 dias de incubacidn de disminuir el Ie confarme aumenta la relacidn CN y para l a s cultivos con 7 dias se observn lo contrario Los Ie mus altos se logran con l o s medios de cultivo a base de Harinu de Yuca y Melaza

536- Conclusiones

Las cepas estudiadas eSp0IWlUn dependiendo del tipo de fuente de carbono la fuente de carbono y su naturaleza tiene m infiuencia directa en la conidiogeacutenesis de l o s hongos f ilamentosos que la concentracioacuten de nitrdgeno sin embargo es recamendable la adlcidn ae nitdgeno entre l o s rargos de CN de 10 a 4 0

Para disminuir l o s costos de pmduccioacuten de conidiosporas hay que optimizar los medics de cultivo nacer la seleccioacuten de una h e m fuente de carbono para cada cepa y trhjar en rangos de CN de 14 a 4 0

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
                                          • -- A
                                          • --
                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
                                          • M
Page 33: MATRICULA: 83323133.

~ r

27 534- Psnicilliue sp

kiaeiampi que exiate entre 1- necG~-edt-~vcv - y h rendimientos de esparulaciOacutentilde-6btenidos despds de 7 -_Fl4 dias de cultivo en matraces para FbnciIlium sp son mostrados en la tabla XILI

_

La relacidn CN entre 10 y40 no tiene una influencia directa en la conidioghnesis de esta cepa sin embargo se dbeewa una tendencia a la disminucioacuten del N de conidiospcwas producidas en los cultivos con 14 dias de incubacih Los mayores Ie se lcgrarcm con los medios de cultivo a bnse de Harina de Yuca y Harina de Trigo

La relaci6n que existe entre la composiciiquestn quiacutemica del medio de cultivo y l a s rendimientos de esporulaci6n obtenidos desples de 7 y 14 dias de cultivo en matraces para Thurzzanum son mostrados en la tabla XIV

Las resultados obtenidos 1x1s mestran unatendencia hacia la obtencioacuten del m y m Ie en rangos de CN de 10 a 14 y estudios hechos par Raussos (1985) sohre el efecto de la concentraci6n de Nitriquestgeno en la oanidiogdnesis de Thaniunum pnmporcionaron una CN optima de 14 utilizando Harina de Yuca corno fuente de curbno

Sin embxqo pura una CN de 3253 obtiene un Ie para 7 dias --de incubacidn de Q16x1On9 cmparando este resultado con el resultado obtenido en mi estudio encuentro que a una CN de 40 para 7 diQs de incubacibn tengo un Ie de 132xlO-9 esto es 13 veces mamp por lo que es dificil comparar estos datos en l o s resultados obtenidos se obsewa una tendencia para los cultivos con 14 dias de incubacidn de disminuir el Ie confarme aumenta la relacidn CN y para l a s cultivos con 7 dias se observn lo contrario Los Ie mus altos se logran con l o s medios de cultivo a base de Harinu de Yuca y Melaza

536- Conclusiones

Las cepas estudiadas eSp0IWlUn dependiendo del tipo de fuente de carbono la fuente de carbono y su naturaleza tiene m infiuencia directa en la conidiogeacutenesis de l o s hongos f ilamentosos que la concentracioacuten de nitrdgeno sin embargo es recamendable la adlcidn ae nitdgeno entre l o s rargos de CN de 10 a 4 0

Para disminuir l o s costos de pmduccioacuten de conidiosporas hay que optimizar los medics de cultivo nacer la seleccioacuten de una h e m fuente de carbono para cada cepa y trhjar en rangos de CN de 14 a 4 0

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
                                          • -- A
                                          • --
                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
                                          • M
Page 34: MATRICULA: 83323133.

1 I I I le I

MEDIO SLlSIRAm CN

I I I I 7 I 14 I

I I I I 1 I

I I I I I

I 1 I I I I

I

I 1 I 10 4 6 5 ~ 1 0 ~ 9 464x10-9 I I I I I I

I I Y 1 I I 2 I 14 5 09xl0-9 484~10-9 I I U I I I I

I 3 C 24 475X10-9 521x10-9 I I I I

I 1 A I I I I

I 4 I 40 47l~lO-9 568xlO-9

I I I I I I

I

I I I I

I 1 I 10 24lxlO-8 44~lO-8

I

I 1 I I I I

I I S 1 I I I

I I A I I I I

I 2 I C 14 16ox10^8 736xlO-8 I A 1 I

I 1 R I I I

I 3 I O 24 I 217xlO-8 937x10-7

I I A I I I I 4 40 215X10-8 28ox10 8 I I I I I

I 1 I 10 236~10-9 19OxlO 9 I I T I I I I

I I I I I

I 2 I R 14 367~10~9 294xlO-9

I

I I S I c I I

I I I I I I

-

I I 1 I I I

I I I I I I I

3 I 24 460~10-9 304x10-9 I I G I I I I I I 1 I

I 4 I O 40 4W10-9 290x10A9 I I I I I I

I I I I I 1

1 I 10 30xlO-9 467xlO-9

I I M I I 1 I

I 2 I E 14 424xlO-9 5Ox1On9

I I I I I I

I L I I I I

I I A I I I I

I 3 I Z 24 6 4 5 ~ 1 0 ~ 9 519xlO-9 I I A I I 1 I

I I t I I

I 4 I 40 233xJO-9 378xlO-9 I I 1 I I

2

- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

I 2 I U 14 560xlO-9 875X10-9 I I I

I I C I I I

I I

I

I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

I

I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

I I I I

I I I

I 1

I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

I I A I I I

I

I

I 2 I C 14 9 4OX1OA7 806x10-7 I

3 - I I

I

A - - I I I

R I~ I 1

O 24 16Ox1On8 rf 501x10 7 I I S I I I I

I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

I 4 I

I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

I I I

I I I I

I I I I

40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
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                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
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                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
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                                        • 1 T
                                        • I
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                                          • I Y
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- I I I I I

MEDIO EUXFAm CN

I I I Ie I

I I

I I I I I I

1 I I 1 7 I 14 I

I I I I I

I I I I I I

I 1 I

I I

I I

10 566x10-9 618~10-9 1 I I I

1 I I I Y -

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I 3 I 24 207xlO-9 5 m O - 9 I I A I I I

I I I I

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I

I 4 I 40 33lxIO-9 707~lO-9 I I I

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I 1 I 10 191X1OA8 108x10 8 I I S I I

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I I A l I I I

I 4 I 40 674X10-7 263xlO-7 I I I I

1 I I I I

I

I 1 1 10 587xlO-9 106x109 I 1 T I I I I

I I I I I - I 2 I R 14 4O3x1On9 203~lO-9 1 I I I I I I I I I I

I 3 24 13OxlO^9 16XlO-9 I I G I I I I

I I I I I

4 I O 40 526X1OA9 i75~10-9 I I I I I 1 I 10 658~lO-9 829xlO-9

I I I

I 2 I

I I

I I

I 3 I

I I

I I

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I I

E 14 612~10~9 589~10~9 L I I I A I

Z 24 8Ox1Oa9 953x10-9 A

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40 i em-10-9 452xlO-9 I I I I

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

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I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

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I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

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1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

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I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

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I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

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I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

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I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

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I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

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I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

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I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

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I I I I I I

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I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

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I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

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I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

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I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
                                          • -- A
                                          • --
                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
                                          • M
Page 36: MATRICULA: 83323133.

Tabia =I- h-oduccidn B bassiarma en l o s medios m

I 1 I I - I

- I I 1 Ie I

MEDIO ID CN I

I

I

I I I I I

I I I 7 I 14 I

I I I 1 I I

I I I I 1

I 1 I 10 302xlO-9 4 46x10A9

I I Y I I I

I 2 I 14 518x10-9 218xlO-9 I U I 1 I I

I 3 I C 24 729X10-9 545x10-9

I I I 1 I I

1 I I I 1 I

I I I I I I

1 I A I I I I 4 I 40 638x10-9 69Ox10-9 I I I I I

I 1 I 10 234x108 423xlO-9 I I I I 1 I

I 1 S I I I

I A I I I I

I 2 I C 14 858x10^0 l 96x10-9 I I A I I I I

I R I I I I ~

I 3 I O 24 25Ox109 236xlO-9 I I S I P I I I

I I A I I I I

I 4 I 40 36lxlO-8 16O~lO-9 I I I I I I I I I I

I 1 I 10 173X10-9 243xlO-9 I I T I I I I

I I I I I I

l 2 I R 14 1 - 02x10-9 23ox109 I I t I I

I 1 I I I I I

I 3 I 24 l 28x10-8 215x10-9 I I G I I I I I I I I

I 4 1 O 40 148x10A8 237~10~9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 22xlO-9 74ox109

I I M I I I I

I 2 I E 14 217~10~9 125~10-10

I I I I I I

I I L I I 1 I

A l I I I I I

I 3 I Z 24 733xlO-9 i 617~l0~9 I 1 A I 1 I

I I I I I I

I I I I I I

i

I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

I I L A I

i I I I

I I I

I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

- ~ - __

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
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                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
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                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
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                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
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I I - -

I I

I I Ie I

MEDIO SlJEmAm CN I I

I I I I I I

I 1 1 I 7 I 14 I

I I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 105xl010 89Ox10-9 I I Y I I I I

I 2 I U 14 142x10A10 78lxlOA9

I I C 1 I I I

I 3 1 24 lOxlOAIO 771~10~9 I f A I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I I I I I I

I 4 I 40 88lxlO-9 lOlxlO-lO I I I I I

I I I I I I

I 1 I 10 194Xlo-9 1mo-9 I I S I I I I

I I A I I

I 2 I C 14 103xl09 986~10~8 I 1 - - - - A -1 I I I

R I 1 - I

I 3 e O 24 140xlO-9 274~10-8 I I S I I I I

I I A I I 1 4 40 108x10A9 114xlO-8

I 1 I 10 943xlO-9 7O9xlOA9 I I T I I I I

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I I I I I I

I I I I I I

I 2 I R 14 832~10-9 725xlO-9 I I I I I I

I I I I I I I I 3 I 24 885xlO-9 724xlO-9 I 1

1 I I I I 1 G I I I I

I 4 O 40 8-54x1Oa9 59210-9 I I I I I I

I I I I I I 1 I 10 357~10~9 49lxlO-9 I I I I I I

I I I I I M I 2 I E 14 293r10A9 247x10-9 I

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I 3 I Z 24 271XlO-9 1 88x10-9

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MEDIO SUSlRAlD CN

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I I I I 7 I 14 I I I I

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I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

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24 118x1010 14x1010

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I

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I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

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24 427~10~9 122~lO-9

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I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

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I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
                                          • -- A
                                          • --
                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
                                          • M
Page 38: MATRICULA: 83323133.

y IV ~ ~ -

I I --I

MEDIO SUSlRAlD CN

I I

I gt

- ~

~ - I

I

I

I I I

I Ie

I ~ I I I

I I I I 7 I 14 I I I I

I I Y

I I I I I

I 1 I 10 1 ampdOa10 15X1Oa1O

I 2 I U 14 llxlOa10 143x1010

I I I I

I I I

I I

I I

24 118x1010 14x1010

I I I

I

I

I I C I I

3 I I A

I

I I I

I I

I 4 I 40 132dOa10 108x1010

I 1 I 10 25Ox1Os9 180~l0~8

I 2 C 14 11Ox1Oa8 8Ox108

I 3 I o 24 267X1Om9 48x10-9

I 4 I 4 0 542~lO-9 298x10a9

1 10 1 09x109 675x10s9

I 2 I R 14 12Cb~lO9 475x10-9

1 I

I I

I I

I I

I I

I I

I I S 1 I

I I A I

I I R I

I S I I I A I

I I I I

I A I I I

I I

- - I

- I

I 1

I I

I I I

I I

I I I

I

I

I T I I I I I I

I 3 I

I I I I

I I I

24 427~10~9 122~lO-9

I

I I

I I

I I I 1

I I M I

I I A 3 I I

4

I G I I I I I I

I 4 O 40 467~10~9 236~10~9

I 1 I 10 420~10~9 678~10~9

I 2 I E 14 875~10~9 688~10-9

1 I I I

I I

I I I

I L I I I

I I I

I Z 24 845x10-9 624xlO-9 I A l

I I

4ci 67hcl09 672X1OA9

I I

I I

I I I I

DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
                                          • -- A
                                          • --
                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
                                          • M
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DISOOS

Para la rewlizacioacuten de estas cirkticas he utilizado los siguientes medios de cultivo para Anigwe1 medio N3 de la tabla IV para A tarrrslat el medio NO2 de la tabla IV para Ehssiana el medio N3 de la tabla I para Amicillium sp el medio 2 de la tabla I y para Thanianum el d i o 1 de la tabla I Las cirkticas se realizaron a l o s 4 6 6 y 10 dias de incubacibn porr no contar can mamp esparuladore~

541- Anigr

figura N7 y podemos apreciar que despueacutes del 7 dia el Ie se mantiene en 43 x 109 e s p m a s g r de sustrato

Lrw resultadas 96 mestran en fonm de higtogramae en la

Espomladar N 1 4 dia Ie - 25~10~ espgr S S

Espoaulador N 2 5 dia Ie - 26x109 espgr SR3

Espomlador N 3 6 dia Ie - 43~10~ espgr SPS

ospoaulador N 4 7 dia Ie =-4 =O9 espgr SPS ~

-

542- A t

Lrw resultados se ampestran en forma de histogramas en la figura N8 Solo se mportan 3 datos ya que se presento un problema de contamimcioacuten en un esparuladm intuyo que desplds del 8 dja el Ie puede aumentar

Espawlador N 1 4 dia Ie - 72OxlOe e s p g r SPS

rspmUladar N 2 6 dia fe = 137~10~ espgr SPS

Espcrruladar N 3 8 dia Ie - 219x109 espgr SPS

543- Bhssiana

Lrxs resultados se muestran en fonna de histogramas en la figura N9 Bta cineacutetica d un compmtamiento que se oberva en la mayoriacutea de los homos que es el de disminuir el nuacutemero de esporas despueacutes de cierto tiempo para esta cepa el mayor le se determina a l o s 6 dias de inLmhciOacuten postericamente empieza a disminuir el Ie

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
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                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
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                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
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                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
                                          • M
Page 40: MATRICULA: 83323133.

EbpomlaaCrr N 2 6 dia Ie - 1 4 1 ~ l O ~ ~ eepgr sps

Ebporuladar N 3 8 dia Ie - 57Ox1O9 espgr SPS

Espuladar N 4 10 dia Ie - 4 3 0 ~ 1 0 ~ eepgr Sps

544- Penicillium sp

L m resultados 88 muestran en farma de histograms en la figura N10 Ih esta cepa se obeerva el mayor rendimiento a lce 10 dias sin embnryo este fe es muchiacutesimo mas alto que el obtenido a los 8 dias esto 1x)8 indica que la determinaciOacuten de los tiempos de incubacioacuten son importantes para poder obtener el maya- rnimero de conidimpmas

Bpomlador N 1 4 dia Ie - 267x109 espgr SPS

Elsparulador N 2 6 dia Ie = 365x109 espgr sps

P g p a r u l a d a r N 3 8 dia Ie = 35Ox1O9 espgr SPS

Ebporu1ado-r N 4 10 dia Ie-= 4 8 3 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS -

545- ThumiarzLlm

Las resultad- se muestran en farma de histogramas en la figura N10 Ie obtenidos son significativamente altos el tiempo de incubacih Oacuteptimo para esta cepa es de 10 dias y se oberva una clara tenjlencia en el aumento del Ie de los 4 dias a los 10 dias

~poruladar N 1 4 dia Ie = 966~10~ espgr SPS

Esporuladar N 2 6 dia Ie = 1 5 6 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Espomladar N 3 8 dia Ie = 175~10~~ espgr SPS

Fsporuladar N 4 10 dia Ie = 2 1 0 ~ 1 0 ~ ~ espgr SPS

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
                                          • -- A
                                          • --
                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
                                          • M
Page 41: MATRICULA: 83323133.

Figura F80 Produccioacuten de cor l id iosporas de Aterreus cultivado sobre e l medio P 2 de la tabla IV en m fermentador de d i s c o s

T

20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
                                          • -- A
                                          • --
                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
                                          • M
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20

I e 16

109

12

8

4

-

4 t7 -a lo Dias Figura Fng Produccioacuten de conidiosporas de Bbassiana c u l t i v a d o sobre el -medio EQ 3 de -la tabla I en un - fermentador de discos

-50

1

5

4

2

546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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I t I

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
                                          • -- A
                                          • --
                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
                                          • M
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546- Conclusiones

El estudio de la fisiologiacutea de esporulacidn de estas cepae m ha permitido apreciar la influencia de l o s siguientes paraacutemetros ampe la pmduccidn de canidiosporas tipo de fuente de carbono relacion CN con sustratos complejos tiempo de incubaci6n Las cineacuteticas en espomladores de discos puede ser una excelente herramienta para observar el efecto de la aireacidn y determinar l o s tiempos optimos de espouulacioacuten Para Aniger a partir del 7 dia se obtiene la cantidad mds impartante de conidiosparas para Atenwp a partir del 8 dia se obtiene la mayor cantidad de midiosporas para Bhssiane aprtir del 6 dia se obsewa la mayor cant idad de conidiosporas despueacutes de este dia la cantidad disminuye pnra Amicillim sp y ThanianuIo el mayor mimero de conidias se logra a los 10 dias de innibacioacuten

- ~ ~ 1 _I_

55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
                                          • -- A
                                          • --
                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
                                          • M
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55 PRXXJCCICN -ARADA DE O=INIDIQSPORAS ENIRE

m tase a l o s datos dbtenidos en l a s cineacutetlcas de espomlacidn realizadas en el fermentador de discos para cada una de las cepas se establecid una ComparaciOacuten entre el Ie alcanzados en matraces y los fermentad- para l a s especies de Aspmyillus l a s cineacuteticas se llevaron hasta l o s 8 dias y para Bhssiana Penicillium s p y Thanianum se llevaron hasta l o s 10 dias por lo que la comparacioacuten se llevara a cabo entre 7 y 8 dias para l o s dspersil l u s y entre 10 y 14 dias para las tres sobrantes las tablas XIV y XV nos muestran estos resultados

Eh Is tabla X I V podemos ver una disminucioacuten en el Ie para los cultivos en fermentador de discos en comparacioacuten con l o s cultivos en matraces esto se puede deber a lo siguiente los fermentadores se aireaban con un flujo de 4 lh de aire seco este aire puede causar una disminucioacuten en la humedad del medio de cultivo y de esta forma influenciar de manera negativa la conidiogeacutenesis Ahora bien si comparamos l o s resultados obtenidos para l a s cepas de Penicil 1 ium sp y T haniarnrm que se encuentran expresados en la tabla XV obsenramos un incremento en el nuacutemero de conidias producidas y una dismimcioacuten en el tiempo dc-incubacidn para los cultivos en fermentador con respecto a los matraces si bien para Bbassiana se ve un mewr rimem de conidias en 10 dias de incubacidn creo que una vez que se llegue a l o s 14 dias de incubacioacuten en fermentador este nuacutemero seraacute igual o mayor a l a s conidias producidas en matraces

Tabla XV FkmducciOacuten comparada de conidiosporas de R n j g w y A t e r r e ~ ~ s en fermentador de discos y matraz Et-len Eyer de 250 ml para tiempos de incubcioacuten de 7 dias en matraces y 8 dias en fermentador a

I I I

I I Ie

Matraz Fermentaaor I I I I

I I I

A niger 645~109 4 3 0 ~ 1 0 ~ 9 I I I I

I I I I

A terreus 612xlO-9 i 219~10^9 I I I I

r

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
                                          • -- A
                                          • --
                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
                                          • M
Page 45: MATRICULA: 83323133.

Tabla -M - produccioacuten comparada cie conidiosporw de B m i a n a

Fenicill ium sp y Thatknum enti-eacute fekntador de discos y matraz elen meyer de 250 ml para tiempos de incubacioacuten de 14 dias en matraces y 10 dias en femntador

I 1

I I

I

Ie I

C P A I 1 I

I I I I

I Matraz Fermentador I I I

I I I

I

I

B bassiana 545xlO-9 43QX10-9 I I I

I I I

Penicillium sp 781xlO-9 483x10^10 I I I

I I I

I

I

I

I

T harzianm 15x10^10 21ox1010 I I I I

La natura 1 eza de estos hornos es aerobia en un 100 por lo que uramptudio mds proturd0 sotre el efecto del aire-en relacidn con el tiempo de innibacioacuten sow la conidiogeacutenesis se debe de realizar para tener una mayor eficiencia en el nuacutemero de esporas producidas

40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
                                          • -- A
                                          • --
                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
                                          • M
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40

Este informe estariacutea incompleto si no se reportarm en siacutentesis los medias y condiciones de cultivo para cada una de las cepas A partir de las t a b l a s X XI XII XI11 y XIV y de l a s cidticas en espomladores se recopilan l a s condiciones 6ptimas de cultivo obtenidas para la producciOacuten de coniaiosporas de cada uno de los honga filament- estudiados y en las tablas XVII XVIII XIX XX y XXI se reporta esta siacutentesis

Tabla XVI1- cordiciones Oacuteptimas de producciOacuten de conidiospwas de Anigeren un fermentador de discos de 2 It

OCIMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Melaza 5470 g

Urea 038 g

Asar 1500 g

PH 56

CN 24

c

EXERILIZACION Autoclave a 121C 30 min

IIKCULACION 35 x 10 conidiosporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacidn 4 lth Tiempo 7 dias

RExxgtLEcCION DE coUIDIospQRAs Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERo TOTALDE EspoRAs 471 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE -CION 430 X lo9 conidiospr-asg

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
                                          • -- A
                                          • --
                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
                                          • M
Page 47: MATRICULA: 83323133.

Tabla XVII1- cordiciones optimas de produccioacutefi de conidiosporas de A terreus en un f ementador de discos de 2 It

00HPOSICION DEL MEDIO E m0

5470 g

287 g

065 g

1-00 g

2-00 g

1500 g

1000 m1

56

S4

CANEDAD DE MEDIOppoR DE 2 LITROS 300 m1

E333ULIzACIoN Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 -5 x loe amidiosporas

IKUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacioacuten 4 Rh Tiempo 7 dias

500 m1 de destilada

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO TOTAL DE EspoRAs 36 X loLo conidiosporas femntador

INDICE DE EspoRuLACIofu 219 X lo9 conidiosporasg

Tabla XIX- condiciones amptimas de produccioacuten de conidiceparas de Bhssampma en un fermentadrrr de discos de 2 It

CXMKSICION DEL MEDIO DE CULTIVO

Harina de Yuca 4 o g

Urea 038 g

cac12 1-00 g

map04 200 g

Asua 1000 m1

CN 24

GNlTDAD DE MEDIO POR DE 2 LITROS 300 m1 F

-CION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 3 5 x loa midiosporas INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C)

Aireacioacuten 4 lth Tiempo 7 dias

FEDLEXXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteacuteri 1

adicionada de Tween 80 (01)

NUMERO lWlL DE EspoRAs 17 X lo1 conidiosporas fementador

INDICE DE EspoRuLACION 141 X lozo conidiosporasg

42

43

-

Tabla XX- Condiciones Oacuteptlmas de produccioacuten de conidiospas de Penicillium sp en un fermentador de discos de 2 It

ooHpo5ICIoN DEL MEDIO DE CULTNO

Harina de Yuca 4000 g

CaCh 100 g

Asua 1000 m1

pH 56

CN 14

c3wTmAD DE MEDIO POR DE 2 LITRC6 300 ILiexcl F

E7ERIUZACION Autoclave a 121C 30 min

INXULACION 35 x loe conidiosporas

INCLIBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25-C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEXION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada esteri 1

adicionada de fieen 80 (01)

NUMBXI DE EspoRAs 483 X loxo conidiosporas fermentador

INDICE DE EspoRuLACION 4 O2 X lo9 conidiosporasg

4 4 f

I-

~ -~ - ~

Tabla m- condiciones Oacuteptimas de prduccidn de conidiosparas de T haniaraum en un femntadm de discos de 2 1 t

COMWGICION DEL WED10 DE mTIV0

Harina de Yuca 4-00 g

urea cac12

091 g

100 g

200 g

1500 g

100 m1

56

CN 14

C A N I l D A D D E M E D I O P o R ~ D E 2 ~ 300ml

ETEULJZACION Autoclave a 121C 30 min

INOCULACION 35 x loe conidiceporas

INCUBACION Temperatura de Laboratorio (15 - 25C) Aireacion 4 lth Tiempo 7 dias

REDXEEION DE CONIDIOSPORAS Agregar 500 m1 de agua desti lada estdri 1

adicionada de neen 80 (01)

NUMERO lWIAL DE EspoRAs 252 X lox1 conidiosparas fermentador INDICE DE ESPORULACION 21 X loxo conidiosporasg

_

t

El estudio de la fisiologiacutea de espomlacioacuten en relacioacuten a la produccioacuten cuantitativa de conidiosporas para la pmduccidn masiva de midiosporas de las principales especies de hongos filamentoso9 utiliza- en los procesos de FFls nos permitioacute concluir lo siguiente

- Lxw horgos estydiados presentan diversas marfologias en su sistema de reproduction y diversos tamantildeos de espmas

- De los sustratos empleados no todos son adecuados para la pmduccioacuten de conidiosporas

-El mismo medio de cultivo a identicas cordiciones nos produce un ampem muy diferente de conidiospoacas para cada m de l o s hongos

- Un medio de cultivo optimizado para m a cepa no es 6ptimo para otras cepas

- El aire seco en los espomladores ejerce una influencia negativa en la esporulacih de estos hongos

- Es necesario conocer la fisiologih de esporulacick para -

poder obtener henos rendimientos de conidiosporas y asi tener inoculcs suficientes para los procesos de FMS e

- Lu relacioacuten CN en los rangos empleados (10 14 24 y 4 0 ) no tiene una influencia directa en la conidiogeilesis de estos hoqos

algunoe pmceaoe de Fmmntacidn en Medio Soacutelido (M) se utilizan l o s minmwganisaPbs Aspryiiius nigwr A s p a r y i I I u s temms ampwnmt-ia -im Fbncillium sp y Pichcdarrpa hanimuu procesos se inician a partir de idculos de concentrad- de esporas can fxlenas caracteristicas de viabil idamp Para lograr t e r n grandes cantidades de esparas e s necesario que eea sobre mstratos atundantes par lo que w necesario estuiiar la fisiologh de est- horgos en diferentes medios y condiciones de cultivo para su optimizacioacuten

Lrw experimntoe se llevamn a cabo en matraces mlen Heyer de 250 m1 con 20 m1 de medio de cultivo amplido de diferente compoeicidn en cuanto a a) Fuente de carbono (Harina de Yuca Harina de P i g o Melaza y S a - ) b) Relacioacuten CN (1014 y 4 0 ) se estableciemn tiempos de incubaci6n de 7 y 14 dias La inoculacioacuten Be loa medias se hizo con 2 x lo7 esporasgr de sustrato y ee incubaron a temperatura ambiente Posteriormente se realizaron cineacuteticas de espomlacioacuten con 1- mejores medios de cultivo

De l o s -sustratos-empleados los que mejores rendimientos aportan son los medios hechos a base de Harina de Yuca y Melaza Lus resuk$ados se reportan en base al Indice de espawlacidn (Ie - N de esparasgr de sustrato)

46

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  • 1 IrnCCIrn GIJEFK
  • 11 ANAZISIS BI8LIWIZ
    • 21 Fisiologia de crecimiento
      • 211 Las etapas fisiologicas de crecimiento
        • 22 Fisiologia de espomlacion
        • 23 Prduccion de espor as
        • 24 Usos de las espor as
          • 9mIVB
          • MrnIAL Y m
            • 42 Medios de cultivo
              • 421 Medios de conservation
              • 422 Medios de esprulacion
              • Falacion de los medi os
                • 43 Condiciones de cultivo
                  • 431 Inoculacion
                  • 432 Q-ecimiento y espomlacion
                  • 44 i KE-waces Erlen kyer de 25C mi
                    • 45 Cceecha y cuenta de espr as
                      • reproduccioacuten
                        • 511 Ani ger
                        • 512 At errstls
                        • 513 Bhtssiam
                        • 514 Fenicillium sp
                        • 515 Thani anum
                        • 516 Conclusiones
                          • 52 Seleccioacuten de la fuente de carbono
                            • 521 Anip
                            • 522 Aterrrstts
                            • 523 3htssiana
                            • 524 Penici1lium sp
                            • 525 Thami anum
                            • 526 Conclusiones
                              • 53 Seleccioacuten de la relacioacuten CN
                                • 531 Ani gw
                                • 532 At erreus
                                • 533 Bhssim
                                • 534 Pencillium sp
                                • 533 Thami anum
                                • 536 Conclusiones
                                  • esporulador de discos
                                    • 541 Ani gar
                                    • 542 Atam
                                    • 544 Penici1lirmr sp
                                    • 545 Thnnianum
                                    • 546 Conclusiones
                                      • fermentador matraz
                                      • VI mzus10m GElmWs
                                      • 111 mwm4
                                      • Medio
                                      • Cgl)
                                      • Harim de
                                      • Yuca 40 40 40 I 4
                                      • I I
                                      • I 1 I
                                      • cac12
                                      • I t
                                      • Ag8r 15
                                      • 1
                                      • I CN
                                      • I I I
                                      • I I U
                                      • 1 A
                                      • I S
                                      • I A
                                      • I A
                                      • I I S
                                      • I T
                                      • I I I 1
                                      • I M
                                      • I L
                                      • I I A
                                      • I I A
                                      • I I t
                                        • MEDIO EUXFAm CN
                                        • I
                                        • I C
                                        • S
                                        • I I
                                        • A l
                                        • I
                                        • 1 I I I
                                        • 1 T
                                        • I
                                          • MEDIO SlJEmAm CN
                                          • I Y
                                          • I C
                                          • I S
                                          • -- A
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                                          • I I S
                                          • I I T
                                          • I I
                                          • M
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