Cultivo y conservacin de los microorganismos

Historia Composicin de los microorganismos y componentes

celulares Composicin qumica de una clula procariota Requerimientos nutricionales Clasificacin de los microorganismos por sus

requerimientos nutricionales Concepto y clasificacin de los medios de cultivo

HISTORIA Brefeld (miclogo), aisl y cultiv esporas de hongos en medios slidos realizados a base de gelatina.

El ao 1878, Lister populariz un mtodo enfocado al cultivo puro basado en diluciones seriadas en un medio lquido.

Koch realiz sus investigaciones utilizando en un primer momento rodajas de patata como soporte nutritivo slido, pero no tard en recurrir al caldo de carne lquido, diseado por Loeffler, al que, en 1881, aadi gelatina, logrando un medio slido transparente ideal para la observacin de la morfologa macroscpica de las colonias microbianas.

Walter Hesse ( mdico alemn) introduce el agar-agar (polisacrido extrado de algas rojas) como solidificante.

En 1887 un ayudante de Koch llamado Petri, comienza a utilizar placas de cristal planas, que se llaman desde entonces placas de Petri.

Beijerinck y Winogradsky, que desde de 1888 realizaron sus investigaciones sobre las bacterias quimioauttrofas (utilizacin de nitrgeno y azufre sobre todo) tuvieron gran importancia en el desarrollo de los medios selectivos y de enriquecimiento.

En 1892 Wrtz impuls el uso de los medios diferenciales, incorporando indicadores de pH a la composicin de ciertos medios con lo cual se poda observar la produccin de cidos en la fermentacin en ciertos microorganismos.

HISTORIA

Composicin de los microorganismos La clula:

Obtiene la mayora de las pequeas molculas del ambiente

Las macromolculas son sintetizadas en el interior de la clula

Dentro de la clula se sintetizan molculas pequeas de las sustancias obtenidas del ambiente.

La masa total est formada de 4 tipos de tomos: carbono, oxgeno, hidrgeno y nitrgeno.

En menor cantidad : fsforo, calcio, magnesio, azufre, fierro, zinc, manganeso, cobre, molibdeno, cobalto y tungsteno.

Principales componentes celulares

El agua constituye aproximadamente el 94-98% del peso de una clula

Peso seco principalmente de macromolculas: protenas cidos nucleicos (DNA y RNA) lpidos carbohidratos.

Requerimientos de Nitrgeno: N2, NH4+, NO3-, NO2-, aminocidos. Requerimiento de Azufre: aminocidos, So, SO4-2

Requerimientos de Fsforo: PO4-2

Requerimientos de macro y micronutrientes: Macronutrientes (10-3 a 10-4 M); Ca, Na, K, Mg Micronutrinetes (10-5 a 10-6 M) ; Cu, Zn, Mn, Mo, Cr, Fe, etc.

Requerimiento de factores de crecimiento

Requerimientos de los microorganismos

Prototrofa

Auxotrofa

Composicin qumica de una clula procariota

a Los datos son de Neidhardt, F.C. y col (eds).1996. Escherichia coli y Salmonella typhimurium-Cellular and Molecular Biology, 2a, ed, ASM; b Peso seco de una clula de E. coli creciendo activamente (2.8 x 10-13 g); c Asumiendo que la peptidoglicana y el glucgeno son los polisacridos mayoritarios presentes; d Existen diversas clases de fosfolpidos; de cada uno de ellos se presentan muchas formas debido a la variabilidad de los cidos grasos entre las especies y las condiciones de crecimiento.

Molcula Peso seco (%)b

Molculas por clula

Clases diferentes

Total de macromolculas Protenas Polisacridos Lpidos DNA RNA Total de monmeros Aminocidos y precursores Azcares y precursores Nucletidos y precursores Iones inorgnicos

96 55 5

9.1 3.1 20.5 3.5 0.5 2

0.5 1

24,610,000 2,350,000

4,300 22,000,000

2.1 255,500

~2,500 1,850

2c 4d 1

~650 ~350 ~100 ~50

~200 18

Total 100

Requerimientos nutricionales Las sustancias en el ambiente utilizadas por los organismos

para el anabolismo y el catabolismo se denominan nutrientes. Nutriente. Sustancia requerida por los organismos para la

sntesis de materiales celulares y para la generacin de energa y que es obtenida del ambiente

Los nutrientes se pueden dividir en dos clases: Macronutrientes, los que se requieren en grandes cantidades. Micronutrientes, aquellos que se necesitan en pequeas cantidades.

Funciones de algunos nutrientes para sntesis de macromolculas o estructuras como generadores de energa sin ser directamente incorporados al

material celular algunos nutrientes pueden jugar los dos papeles.

Macronutrientes en la naturaleza y en los medios de cultivo

Elemento Forma habitual del nutriente en el ambiente

Forma qumica utilizada en medios de cultivo

Carbono

Oxgeno Nitrgeno

Fsforo Azufre

Potasio Magnesio

Sodio Calcio Hierro

CO2, Compuestos orgnicos

H2O, Compuestos orgnicos NH3, NO3-, N2, Compuestos

orgnicos nitrogenados Compuestos orgnicos

PO43- H2S, SO42-, Compuestos

orgnicos azufrados, sulfuros metlicos (FeS, CuS, ZnS, NiS,

etc.) K+ en solucin o como sal

Mg2+ en solucin o como sal Na+ en solucin o como sal Ca+ en solucin o como sal

Fe2+ o Fe3+ en solucin o como FeS, Fe(OH)3, u otras sales

Glucosa, malato, acetato, piruvato, extracto de levadura, peptona, etc.

H2O, Compuestos orgnicos Inorgnicos: NH4CL, (NH4) SO4, KNO3, N2

Orgnicos: aminocidos, bases nitrogenadas de nucletidos, compuestos con nitrgeno

KH2PO4, Na2HPO4 Na2SO4, Na2S2O7 Na2S, Compuestos orgnicos

azufrados

KCl, KH2PO4 MgCl2, MgSO4

NaCl CaCl2

FeCl2, FeSO4, soluciones de Fe quelado con EDTA o citrato

Micronutrientes necesarios para los microorganismos Elemento Funcin Celular

Cromo

Cobalto Cobre

Manganeso

Molibdeno

Nquel

Selenio Tungsteno

Vanadio Zinc

Hierro

Requerido por los mamferos en el metabolismo de la glucosa, no se conoce algn microorganismo que lo requiera Vitamina B12, Transcarboxilasa (bacterias del cido lctico) Lo requieren como cofactor algunas protenas implicadas en la respiracin (citocromo c oxidasa), la fotosntesis (plastocianina) y las destoxificacin de radicales libres (superxido dismutasa) Varias enzimas lo requieren como cofactor. Por ejemplo, la superxido dismutasa, la fotoliasa del fotosistema II. Presente en enzimas que contienen flavina. Tambin presente en la nitrogenasa, nitrato reductasa, sulfito oxigenasa, DMSO y TMAO reductasas, formato deshidrogenasas, etc. La mayora de las hidrogenasas, coenzima F430 de las metangenas, deshidrogenasa de monxido de carbono, ureasa, etc. Formato deshidrogenasa, selenocistena Formato deshidrogenasas, oxotransferasas de termoflicos Vanadio nitrogenasa, bromoperoxidasa Anhidrasa carbnica, alcohol deshidrogenasa, DNA y RNA polimerasas y protenas que se unen al DNA Citocromos, catalasas, peroxidasas, protenas con hierro y azufre (ferredoxina), oxigenasas, nitrogenasas

Las cuatro principales macromolculas que constituyen a los microorganismos: Protenas cidos nucleicos Lpidos Carbohidratos

Constituyentes de los microorganismos

Requerimientos de los microorganismos

De acuerdo con los requerimientos de energa y carbono, los microorganismos se clasifican en:

Fotoauttrofos (luz + CO2) Fotohetertrofos (luz + compuestos qumicos) Quimioauttrofos (compuestos qumicos + CO2) Quimiohetrertrofos (compuestos qumicos)

Definicin de medio de cultivo

Sustrato o solucin de nutrientes en donde se cultivan microorganismos en un laboratorio. Es la imitacin de las condiciones favorables para el desarrollo de los microorganismos.

Fuente de carbono Fuente de nitrgeno Fuente de energa Agua Sales minerales Factores de crecimiento

Requerimientos de un medio de cultivo

Etapas para la preparacin de medios de cultivo

Lquidos

Pesar

Solubilizar

Envase

Esterilizacin

Pruebas de funcionalidad

Slidos

Pesar

Mezclar

Calentar para solubilizar

Envase

Esterilizacin

Solidificacin

Pruebas de esterilidad

Adicin de substancias termolbiles

estriles Prueba de esterilidad

Tipos de medios de cultivo por su composicin qumica

En microbiologa se usan dos grandes grupos de medios de cultivo: Qumicamente definidos

se preparan aadiendo agua destilada a cantidades precisas de compuestos orgnicos o inorgnicos altamente purificados. Por ello se conoce la composicin qumica exacta.

Indefinidos o complejos Emplean lisados de casena, de carne, de soya, de levadura o

cualquier otra sustancia altamente nutritiva (qumicamente indefinida) como por ejemplo la sangre, el suero, jugos de verduras, frutas etc. Entonces los medios complejos no se conoce con precisin la composicin qumica ni la cantidad exacta de cada uno de los nutrientes.

Ejemplos de medios de cultivo por su composicin qumica

Medios definidos

Medio E de Vogel y Bonner.

Medio de Knop Medio de Fowell para

ascosporas

Medios complejos o indefinidos

BHI Gelosa sangre Caldo nutritivo Medio PDA Medio Luria Bertani Medio Baird Parker

Tipos de medios de cultivo por su consistencia Lquidos Slidos o semislidos

poseen adems agentes solidificantes que pueden ser agar, gelatina slica gel. El agar proviene de las algas rojas Gelidium, Gracilaria, Acanthopeltis, Ceramium y Pterocladia y qumicamente es un polmero de azcares que posee interesantes propiedades que lo hacen ideal para el cultivo de una gran variedad de microorganismos. Se funde a altas temperaturas (87oC) y solidifica a 40-45oC. Adems no es degradado por la mayora de las bacterias. Se usa a una concentracin del 1.5-2%

La gelatina tiene el inconveniente de que se lica a temperaturas relativamente bajas y muchos microorganismos la utilizan como fuente de carbono y nitrgeno. Se utiliza a una concentracin del 5-10%.

La slica gel se emplea para algunos microorganismos que se inhiben en presencia de agar.

Tipos de medios de cultivo por su uso

Los medios de cultivo dependiendo de su uso pueden ser: Simples Enriquecidos Selectivos Diferenciales De enriquecimiento De transporte

Medios Simples

Los medios simples son medios comunes, que slo tienen un tipo de infusin o extracto adems de otros componentes. Son medios para fines generales porque mantienen el crecimiento de muchos microorganismos que no son muy exigentes.

Ejemplos: la gelosa nutritiva, el PDA, el caldo simple o caldo nutritivo.

Medios Enriquecidos Constituidos por algunas sustancias que los hacen ms

nutritivos. En estos medios puede crecer una gran variedad de microorganismos. Sangre Suero plasma extractos nutritivos (levadura, carne)

Ejemplos: el BHI, gelosa sangre, medio Eugon, gelosa chocolate, agar Columbia, medio Infusin de hgado, etc.

Ejemplos de medios enriquecidos

Gelosa sangre

Medios Selectivos Favorecen el crecimiento de microorganismos particulares debido a que poseen un inhibidor o sustancia especfica, que nos permite escogerlos o seleccionarlos.

Agentes Inhibidores: Las sales biliares o los colorantes como la fucsina bsica, el cristal violeta, la eosina o el verde brillante permiten el crecimiento de las bacterias Gram negativas, mientras que inhiben el crecimiento de las Gram positivas.

Incubndolos con nutrientes que puedan utilizar de forma especfica. Un medio que contenga celulosa ser efectivo para aislar bacterias que digieran celulosa o bien la adicin de sustancias tales como el NaCl o la sacarosa a concentraciones relativamente altas lograr el propsito de aislar microorganismos definidos.

Ejemplos de medios selectivos son el agar EMB (Eosina Azul de Metileno), agar ENDO, agar MacConkey, S-110, SS, gelosa Rosa de Bengala, agar Biggy, agar Verde Brillante, etc.

Distinguen, separan, diferencian grupos distintos de bacterias e incluso permiten una identificacin tentativa de los microorganismos segn sus caractersticas metablicas.

Ejemplos de medios diferenciales son el Gelosa sangre, SS (Salmonella-Shigella), agar MacConkey, agar Baird-Parker, agar XLD, agar Vogel Johnson, Citrato de Simmons, LIA, Kligler, Verde Brillante, etc. Ntese que algunos de estos medios son adems selectivos.

Medios diferenciales

Sustancias que lo hacen selectivo (rojo neutro y cristal violeta) que permitirn el crecimiento de bacterias Gram - y diferencial (lactosa) que definir entre aquellos microorganismos que fermentan la lactosa (colonias rojas) de los que no pueden utilizar este azcar (colonias incoloras, amarillas o blancas).

MacConkey: medio selectivo y diferencial

Agar Sal manitol (ASM), medio selectivo y diferencial

Desarrollan microorganismos capaces de crecer en concentraciones de NaCl del 7.5%, adems diferencia a aquellos que fermentan el manitol provocando el vire del indicador de pH (rojo de fenol) de rojo a amarillo.

Medio de gelosa sangre: enriquecido y diferencial

Gelosa sangre, medio de cultivo enriquecido y diferencial

El medio de gelosa sangre medio enriqucido que estimula el crecimiento de microorganismos denominados fastidiosos, adems permite diferenciar la capacidad de las bacterias de utilizar los eritrocitos

la parcial llamada alfa (), hemlisis total o beta () no utilizan a los eritrocitos y que no

provocan ningun cambio en el medio y se conoce como hemlisis gamma ().

SS ejemplo de un medio selectivo y diferencial

En esta imagen se observa el desarrollo de tres tipos de colonias crecidas en medio SS (Shigella-Salmonella). Las colonias rojas pertenecen a bacterias capaces de fermentar la lactosa (Lac+), las incoloras son bacterias que no fermentan este azcar (Lac-) y las negras son las que producen cido sulfhdrico (H2S).

Medios de enriquecimiento Enriquecer significa, en este caso, proporcionar al

microorganismo que se desea aislar todos los elementos nutritivos necesarios para que alcance su ptimo crecimiento.

Se usan para aumentar el nmero relativo de organismos de un tipo en relacin al total. Por ejemplo, enriquecer un patgeno minoritario particular presente en una muestra altamente contaminada con otros microorganismos irrelevantes desde el punto de vista mdico.

Ejemplos de estos medios son: caldo tetrationato de Meller, caldo selenito de sodio, caldo selenito, caldo urea, caldo tioglicolato, agua peptonada, Monsur, etc.

Consiste en ajustar las condiciones de cultivo para seleccionar el microorganismo que nos interesa aislar.

Ejemplo 1: Nos interesa aislar bacterias fotoauttrofas. Tomamos un matraz con agua y sales y lo incubamos a la luz, de manera que crezcan las bacterias fotoauttrofas.

Ejemplo 2: Queremos aislar bacterias quimiolittrofas del azufre; ponemos azufre, CO2 como fuente de carbono (disuelto en agua) e incubamos en la oscuridad para eliminar fotoauttrofos.

Para incubar enterobacterias como Enterobacter hay que incubar a 37, mientras que para incubar otra enterobacteria, E. coli, hay que incubar a 45

Tcnicas de enriquecimiento

Medios de transporte

Se utilizan para el transporte de diversas muestras biolgicas evitando la muerte de los microorganismos de inters.

Su composicin permite la viabilidad de los microorganismos pero no permite su multiplicacin

Ejemplos de estos medios son los medios de Stuart, de agua peptonada para Vibrio, Cary y Blair, Glicerol-Solucin Salina, Amies y Douglas, Hajna, Caldo de Fildes etc.

Aislamiento y Seleccin

Uso de procedimientos que permiten la seleccin y aislamiento de solo aquellos microorganismos de inters, entre una gran poblacin microbiana.

Seleccin Primaria (Primoaislamiento).

Seleccin Secundaria (Resiembra).

TCNICAS DE AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS

FUENTE

NATURAL CULTIVO SUELO AGUA AIRE SUPERFICIES ALIMENTOS BIOTA NORMAL HUMANA PRODUCTOS BIOLGICOS

TUBO PLACA MATRZ GARRAFN FERMENTADOR CULTIVO CELULAR

TCNICAS COMUNES DE AISLAMIENTO

ESTRA CRUZADA (CUALITATIVA)

DILUCIONES CUALITATIVA Y CUANTITATIVA CULTIVO PURO O AXNICO

IDENTIFICACIN

CONSERVACIN

PREPARACIN DE LA MUESTRA

Presin de seleccin

Factores Nutricionales. pH. Atmsfera (Oxgeno). Temperatura. Osmolaridad y Aw. Inhibidores. Potencial Redox

Aislamiento permiten obtener cultivos axnicos a partir de cultivos mixtos

Mtodos Cualitativos Estria Cruzada ECONMICO, RPIDO, POCO MATERIAL, FCIL.

AISLAMIENTO EN PLACA POR ESTRA CRUZADA

Consiste en: cargar el asa con la muestra y hacer estras paralelas

en la cuarta parte de la superficie de la placa; se quema el asa, se enfra, se gira la placa aprox. 45 se vuelve a estriar tocando 3 4 veces el rea

sembrada inicialmente y cubriendo otro cuarto de placa.

Por ltimo sin quemar el asa, se estra el resto de la superficie sin sembrar

AISLAMIENTO EN PLACA POR ESTRA CRUZADA

Mtodos Cuantitativos Dilucin y Dispersin con varilla acodada

MS TARDADO, MS CARO, MS ADIESTRAMIENTO TCNICO, MS MATERIAL

Aislamiento por dilucin en medio slido

Tcnica de dispersin en superficie: 1) Se colocan 0.1 mL de la dilucin de la muestra con

pipeta estril en el centro de la placa y se distribuye con un varilla de vidrio acodada estril

Tcnica de diluciones y vaciado en placa:

1) Se coloca 1 mL de la muestra en una placa estril vaca, en el centro de la misma. Sobre ella se vierte 12-15 mL del medio de cultivo fundido a una temperatura de 45C, luego se incorpora el inculo girando la placa en una superficie horizontal movindola 6 veces en el sentido de las manecillas del reloj, 6 en sentido antihorario, 6 veces de arriba abajo y 6 de izquierda a derecha.

Aislamiento por dilucin en medio slido

TCNICA DE LAS DILUCIONES

2) Tambin se puede preparar las diluciones

directamente en tubos de agar fundido a temperatura

de 45C, se agita por rotacin entre las manos y se vierte en cajas de Petri

estriles.

COLONIA BACTERIANA

CRECIMIENTO DE MICROORGANISMOS PROVENIENTES DE UNA CLULA , UN GRUPO DE ELLAS O UNA ESPORA EN UN MEDIO SLIDO.

EL TRMINO UTILIZADO CUANDO SE DETERMINA LA CANTIDAD POR UNIDAD DE VOLUMEN ES EL DE:

UNIDAD FORMADORA DE COLONIA (UFC) / mililitro o gramo

UNA COLONIA TIENE ORGANISMOS QUE COMPARTEN CARACTERSTICAS GENOTIPICAS Y FENOTIPICAS YA QUE PROVIENEN DE LA MISMA CLULA

LAS COLONIAS AISLADAS CON DIFERENTES CARACTERSTICAS FENOTPICAS, ES DECIR CON DIFERENTES CARACTERSTICAS MORFOLGICAS, SE PUEDEN DISTINGUIR DEBIDO A QUE CADA GRUPO FILOGENTICO DE MICROORGANISMOS TIENE CARACTERSTICAS PECULIARES QUE SE VEN INFLUENCIADAS POR LAS CONDICIONES DEL MEDIO DE CULTIVO (TCNICA CUALITATIVA).

LA ESTIMACIN DEL NMERO DE MICROORGANISMOS CULTIVABLES PRESENTES EN UNA MUESTRA (TCNICA CUANTITATIVA) SE PUEDE CALCULAR MEDIANTE LA SIGUIENTE ECUACIN:

UFC/ml

UFC=Unidades Formadoras de Colonias

Cuenta de Colonias. Escoger la dilucin que tenga entre 25 y 250 colonias. Aplicar la formula:

10-9 10-10

10-8 10-7 10-6

Escherichia coli

CLCULOS

V (diluyente) + V (muestra) = V (total) 9mL + 1mL = 10mL

Se divide entre el volumen de la muestra

9mL + 1mL = 10mL 1mL 1mL

Dilucin 1:10

AISLADAS DE 25-250

EJEMPLO: DILUCIN: 10-8 ALCUOTA: 0.1mL NCOL. : 198 (cumple el intervalo de 25-250) UFC/mL = 198.5 (1/0.1mL) (1/ 10-8) 10-8 UFC/mL = 198.5 X 10 X 108 UFC/mL = 198.5 X 109 UFC/mL = 19.8510

UFC/mL = 1.985X1011

Diluciones en tubo: Nmero Ms Probable Tcnica estadstica se basa:

mientras es mayor el nmero de bacterias en una muestra debe realizarse una dilucin mayor para reducir la densidad hasta un punto en donde no quede ninguna bacteria capaz de crecer en una serie de tubos.

El mtodo del NMP es muy til:

cuando los microorganismos que se cuentan no son capaces de crecer en medio slidos, como es el caso de la bacterias nitrificantes quimioauttrofas

tambin es til cuando el crecimiento de las bacterias en un medio lquido y diferencial se utiliza para identificar ciertos microorganismos.

TCNICA DEL NMERO MS PROBABLE (NMP)

Clasificacin de Bacterias

Bacterias Aerobias

Aquellas capaces de crecer con la concentracin de oxgeno que existe en la atmsfera (21%).

Sistema enzimtico de desintoxicacin de radicales libres del metabolismo del oxgeno.

Radicales libres: H2O2, O2-, OH., O2. Enzimas contenidas en las bacterias

aerobias. Catalasa, peroxidasa, Superxido dismutasa

Relacin de los microorganismos con el oxgeno

Microorganismos aerobios: El oxgeno acta como aceptor final de electrones en la respiracin aerbica. Existen dos grupos de organismos aerobios:

Aerobios estrictos: Requieren oxgeno en concentraciones similares a la atmosfrica (20%)

Aerobios microaeroflicos: Requieren oxgeno en concentraciones inferiores a las atmosfricas; 5-10%. Presentan enzimas como la hidrogenasa, que son activas a las presiones parciales de oxgeno. La hidrogenasa proporciona energa para el crecimiento. En concentraciones atmosfricas, la hidrogenasa no es activa y por ende la clula no crece y muere.

Microorganismos anaerobios: Son aquellos organismos que no requieren el oxgeno: Anaerobios facultativos: Crecen en ausencia y presencia de

oxgeno, pero crecen mejor con oxgeno. En ausencia realizan la fermentacin y en presencia, la respiracin aerbica.

Anaerobios estrictos: Aquellos que, no slo no requieren el oxgeno, sino que su presencia los destruye. Su metabolismo no requiere oxgeno, y realizan fermentacin o respiracin anaerbica.

Anaerobios aerotolerantes: Aquellos que no requieren oxgeno pero lo toleran; no mueren en su presencia. Son microorganismos fermentativos y se diferencian de los facultativos en que no crecen ms en presencia del oxgeno.

Relacin de los microorganismos con el oxgeno

Formas txicas del oxgeno

Metabolismo Productos No hay rutas Muerte Txicos detoxificantes bacteriana O2- OH. O2. H2O2

Bacteria aerobia

Bacteria anaerobia

O2 Metabolismo Productos Rutas Productos Txicos detoxificantes no txicos O2- 1. Superxido H2O OH. dismutasa O2 O2. 2. Catalasa H2O2 3. Peroxidasa

O2

Relacin de los microorganismos con el oxgeno

Grupo Requerimiento de O2

Metabolismo Ejemplo Hbitat

Aerobios:

Obligados Si Respiracin aerbica

Micrococcus luteus Piel, polvo

Facultativos No Respiracin aerbica y anaerbica, fermentacin

Escherichia coli Intestino

Microaeroflicos Si, baja tensin

Respiracin aerbica

Spirillum volutans Lagos

Anaerobios:

Aerotolerantes No Fermentacin Streptococcus pyogenes

Tracto respiratorio

Obligados Letal Fermentacin, repiracin anaerbica

Methanobacterium formicicum

Diverso

Cultivo de microorganismos aerobios En cajas de Petri sobre medios slidos. La superficie del medio

de cultivo est en contacto con el oxgeno atmosfrico, luego no hay ningn problema para cultiva este tipo de microorganismos.

En medio lquido, el microorganismo crece en la disolucin, donde la concentracin de oxgeno es menor y disminuye en funcin del crecimiento del microorganismo. Para evitar esa disminucin de oxgeno, utilizamos dos recursos:

Agitacin Adicin de aire u O2 estril mediante burbujeo.

Cultivo de microorganismos anaerobios estrictos

En medio lquido, aadimos al medio de cultivo agentes reductores que toman el O2 disuelto en el agua y forman H2O. Estos agentes son: cistena, tiglicolato.

Caldo tioglicolato: medio reductor. Contiene un indicador de xido-reduccin (Resazurina), la cual cuando est oxidada es de color rojo e incolora cuando est reducida. Contiene agar en pequeas concentraciones (0.5%), dndole

consistencia semislida, previene el movimiento de los organismos inoculados y de la introduccin de oxgeno.

Otra forma para cultivar en medios lquidos es bombeando un gas inerte (N2) libre de O2, mediante burbujeo.

Tcnicas de cultivo de anaerobios

Caldo carne cocida (extracto de corazn de bovino) con sello de nujol. Agente reductor; aminocidos azufrados de la carne.

Medio Leche-Fierro con sello de nujol. Agente reductor; Fierro. Sustrato e indicador; Leche.

Jarra de anaerobiosis. Sistema de sustitucin de oxgeno de la jarra por CO2 e H2.

Cmara de anaerobiosis: Cmara hermtica saturada con gas libre de oxgeno como el nitrgeno o el hidrgeno.

Cultivo de anaerobios en medio slido

En medio slido, se emplean jarras de anaerobiosis o jarras de Gas Pak. Su tamao es similar al de un termo. En su interior se colocan las cajas de Petri invertidas. El recipiente se cierra con una tapa hermtica. En la parte inferior hay un agente desecante (slica gel) y en la tapa se encuentra el catalizador (Pd). Para conseguir la anaerobiosis, introducimos sobres generadores de anaerobiosis, que contienen Na2CO3 y NaBH4. Al aadir agua al sobre, se libera H2 y CO2.

Cultivo y conservacin de los microorganismosHISTORIAHISTORIAComposicin de los microorganismosPrincipales componentes celularesNmero de diapositiva 6Composicin qumica de una clula procariotaRequerimientos nutricionalesMacronutrientes en la naturaleza y en los medios de cultivoMicronutrientes necesarios para los microorganismosConstituyentes de los microorganismosNmero de diapositiva 12Nmero de diapositiva 13Definicin de medio de cultivoRequerimientos de un medio de cultivoNmero de diapositiva 16Tipos de medios de cultivo por su composicin qumicaEjemplos de medios de cultivo por su composicin qumicaTipos de medios de cultivo por su consistenciaTipos de medios de cultivo por su usoMedios SimplesMedios EnriquecidosEjemplos de medios enriquecidosMedios SelectivosMedios diferencialesMacConkey: medio selectivo y diferencial Agar Sal manitol (ASM), medio selectivo y diferencialMedio de gelosa sangre: enriquecido y diferencialGelosa sangre, medio de cultivo enriquecido y diferencialSS ejemplo de un medio selectivo y diferencialNmero de diapositiva 31Medios de enriquecimientoNmero de diapositiva 33Medios de transporteNmero de diapositiva 35Nmero de diapositiva 36Presin de seleccinNmero de diapositiva 38Nmero de diapositiva 39AISLAMIENTO EN PLACA POR ESTRA CRUZADANmero de diapositiva 41Nmero de diapositiva 42Nmero de diapositiva 43Aislamiento por dilucin en medio slidoAislamiento por dilucin en medio slidoTCNICA DE LAS DILUCIONESNmero de diapositiva 47Nmero de diapositiva 48Nmero de diapositiva 49Nmero de diapositiva 50Nmero de diapositiva 51Nmero de diapositiva 52Diluciones en tubo: Nmero Ms ProbableTCNICA DEL NMERO MS PROBABLE (NMP)Nmero de diapositiva 55Bacterias AerobiasRelacin de los microorganismos con el oxgenoRelacin de los microorganismos con el oxgenoFormas txicas del oxgenoRelacin de los microorganismos con el oxgenoCultivo de microorganismos aerobiosCultivo de microorganismos anaerobios estrictosTcnicas de cultivo de anaerobiosCultivo de anaerobios en medio slido