MEdios de Cultivo y Siembra2016

8/18/2019 MEdios de Cultivo y Siembra2016

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MEDIOS DE CULTIVO


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Conocer los medios

de cultivo

Aplicar fisiología alcultivo de

microorganismosen el laboratorio

Identificar mediode cultivo – métodode siembra

Recordar técnicasde tinción enmicrobiología

OBJETIVOS


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Principios de cultivomicrobiológico

Facilitar el crecimiento y el aislamiento de lasbacterias presentes en una muestra clínica.

Determinar qué bacterias entre las que se

desarrollan tienen más probabilidades de ser lascausantes de la infección y cuales son sus posiblescontaminantes o colonizadores.

Obtener un desarrollo suciente de las bacterias

de importancia clínica para permitir suidenticación y su caracterización.

CULTIVO PURO

CULTIVO MIXTO CULTIVO CONTAMINADO


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DEFINICIÓN

Sustrato sólido, líquido o semisólido que contienetodos los nutrientes necesarios para el crecimiento ydesarrollo de los gérmenes.

Fuentes de energía, carbono, nitrógeno, fósforo,azufre y varios minerales.

pH

Luz

Temperatura

Esterilidad absoluta (salvo excepciones)

Recipientes adecuados


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Es importante destacar que la transición exitosa de un microorganismo in

vivo a un ambiente in vitro va a depender de: Disponibilidad de nutrientes esenciales

Condiciones ambientales adecuadas

pH

Temperatura

Oxígeno y CO2

Presión

Luz


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Clasificación de los medios de

cultivo según consistencia

SEMISÓLIDOS

LÍQUIDOS

SÓLIDOS


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MEDIOS SÓLIDOS


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semisólido


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Caldo nutritivo

Caldos de enriquecimiento

Caldos revitalizadores


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Clasificación de los medios

de cultivo según utilización

Selectivo ydiferencial

Nutritivo

Enriquecimiento


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Contienen nutrientes que favorecen eldesarrollo de la mayoría de losmicroorganismos sin requerimientosespeciales de cultivo.

No promueven el crecimiento de ningúnagente en particular

MEDIOS NUTRITIVOS


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MEDIOS DEENRIQUECIMIENTO

Contienen nutrientes específicosrequeridos para el crecimiento depatógenos que pueden estar presentessolo o con otras especies de bacterias en

la muestra de un paciente

Se utilizan para favorecer el desarrollode un patógeno determinado a partir deuna mezcla de microorganismosmediante el uso de especificidad de

nutrientes

En general, son medios líquidos


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MEDIOS SELECTIVOS

Contienen uno o más agentes que inhiben elcrecimiento de los microorganismos que no sequieren estudiar

Agentes inhibidores: colorantes, salesbiliares, alcoholes, ácidos y antibióticos


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MEDIOS DIFERENCIALES

Contienen un factor o factores que permite que lascolonias de una especie o un tipo bacteriano exhibanciertas características metabólicas o de cultivo quepuedan utilizarse para diferenciarlas de otrasbacterias que crecen en el mismo agar


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MEDIOS ESPECIALES

MEDIOS CROMÓGENOS

MEDIOS DE TRANSPORTE

MEDIOS DE CONSERVACIÓN


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Sustancias cromogénicas:

- Son productos químicos de síntesis que son incoloroscuando se unen a sustratos naturales por enlaces que sonhidrolizados por enzimas microbianas específicas.

- Cuando la enzima microbiana hidroliza el enlace, selibera el compuesto cromogénico, que adquiere un colorintenso.

- Ejemplo: Cromo agar (agentes uropatógenos), se poneen evidencia la actividad enzimática de la B- glucoronidasao B- galactosidasa de las bacterias formándose colonias dediferentes colonias según la especie.

- Identificación presuntiva, haciendo innecesaria larealización de pruebas bioquímicas.


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Medios para bacterias no exigentes

- agar

- extracto de carne

- peptona

- NACL

- leche descremada (congelar cepas)

NORMATIVA ISP, entregar


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CONTROL DE CALIDAD

ElControl de Calidaden la preparación y evaluaciónde los medios de cultivo es considerado como unaesencial y buena práctica de laboratorio, necesaria paramantener el nivel y la ejecución de cualquier técnica

microbiológica.

Proceso continuo que se extiende desde las materiasprimas ; a través del productor hasta el producto finalutilizado en los diferentes departamentos de análisis ydiagnóstico microbiológico.


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▪Recuperación o supervivencia de los microorganismos de interés

(Productividad) ▪Inhibición o suspensión de los microorganismos nodeseados. (Selectividad) ▪ Propiedades bioquímicas(diferenciales y

diagnósticas) ▪Propiedades físicas (por ejemplo, pH, Volumen) ▪Sea estéril .... etc.

El Jefe inmediato responsable del área * Deberá analizar mensualmente los resultados de las pruebasrealizadas por el responsable del departamento de control de calidad * Evaluará el cumplimiento de objetivos a través de los resultados


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PRUEBAS FUNCIONAMIENTO Para evaluar cada lote de medio de cultivo que searecibido en el laboratorio, se emplean cepas patrones

(ATCC) de varios géneros y especies de acuerdo almedio de cultivo a analizar. El control del funcionamiento consistirá encomprobar:

capacidad del medio de recuperar un bajonúmero de los microorganismos más sensiblespara los que ha sido preparado.

capacidad de inhibir un alto número de losmicroorganismos que deben ser inhibidos encaso de los medios selectivos y

diferenciar los microorganismos para los que hasido diseñado en caso de los medios diferenciales.


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RECONSTRUCCIÓN DEL MEDIO DECULTIVO

DESHIDRATADO

• Cumplir con las instrucciones de preparación del medio de cultivoindicado en la etiqueta del envase

• Cumplir con los procedimientos técnicos de fórmulas enviadas porel cliente

• Utilizar agua destilada de calidad

• Determinar el pH del M de C

•

Esterilización del medio de cultivo• Procedimiento escrito

• Control de esterilidad del Medio de Cultivo


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AGAR INFUSION DE CARNE


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MEDIO DE LOWENSTEINJENSEN


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AGAR SANGRE


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DEFECTO

Apelmazamiento del Producto deshidratado

El valor de pH no coincide Con el indicado

ERRORES EN LA PREPARACIÓN

Apelmazamiento del producto deshidratado

El envase no fue cerrado correctamente después de suuso.

El envase permaneció abierto por largo rato. El producto sobrepasó la fecha de vencimiento.

El valor de pH no coincide con el indicado

• No fue empleada agua destilada• El medio fue sobrecalentado durante su preparación•

El Ph no fue determinado correctamente• El medio estaba vencido.


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Aparición de turbiedad o precipitados:

El medio preparado perdió agua por evaporación

El medio se calentó en exceso El medio no se calentó lo suficiente.

No fue empleada la cantidad del medio o suplemento recomendada.

El color del medio no coincide con el indicado:

El medio fue sobrecalentado durante su preparación.

El pH no fue ajustado correctamente.

El recipiente empleado estaba sucio.

Los azúcares contenidos en el medio se caramelizaron


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El gel se obtiene más blando que lo característicopara el medio:

No fue garantizada la disolución total del agar durante lapreparación del medio. No fue empleada la cantidad del medio recomendada o se añadióagua en exceso.

El crecimiento de los microorganismos es pobre:

El medio fue sobrecalentado El valor del pH no fue ajustado correctamente.

La adición de suplementos al medio se efectuó a excesivatemperatura. El medio no fue mezclado correctamente.


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El crecimiento de los microorganismos es atípico:

Quedaron residuos de sustancias inhibidoras delcrecimiento no deseables, en los recipientes donde sepreparó o distribuyó el medio.

El medio de cultivo fue preparado de manera incorrecta.

El producto sobrepasa la fecha de vencimiento.


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MÉTODOS DESIEMBRA Y

AISLAMIENTO


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SIEMBRA

Sembrar o inocular es introducirartificialmente una porción de muestra

(inóculo) en un medio adecuado, con el finde iniciar un cultivo microbiano, para sudesarrollo y multiplicación. Una vezsembrado, el medio de cultivo se incuba a

una temperatura adecuada para elcrecimiento (37°C).


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Las reglas fundamentales para efectuar la

siembra exigen:

Se efectúe en un medio asépticamenteLos medios de cultivo y el instrumental a utilizarestén estériles.

Se manipule lo necesario.Se trabaje fuera de toda corriente de aire. De serposible utilizando un mechero.


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MEDIO SOLIDO EN CAJA DE PETRI Siembra por inmersión: se coloca el inóculo en una placa o caja de Petri

y sobre el mismo se vierte el medio de cultivo previamente fundido. Estemétodo se utiliza para microorganismos aerobios.

Siembra en doble capa: se procede de la misma manera que porinmersión. Una vez solidificado el medio se vierte una cantidad extra demedio necesaria para cubrir la capa anterior (generalmente 10 ml. aprox.).

Este método se utiliza para microorganismos anaerobios facultativos ymicroaerofílicos.

Siembra en superficie: se vierte sobre una placa de Petri el medio decultivo fundido, se deja solidificar y se coloca sobre la superficie el inóculo.Con ayuda de una espátula de y se extiende el inóculo hasta su absorción

total por el medio de cultivo. Este tipo de siembra se recomienda paramicroorganismos aerobios estrictos.

Siembra en estría: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivofundido y se deja solidificar.


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MEDIO SOLIDO EN TUBO DEENSAYE

El medio de cultivo se vierte en tubo y se colocainclinado para que gelifique de esta manera.


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Microbiología, Prescott́s


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Microbiología, Prescott́s


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Los métodos de siembra se utilizan

para inocular por distintosmétodos sobre un medio de cultivoapropiado una muestra que

contenga bacterias con el fin dereproducirlas para aumentar elnúmero de individuos de lapoblación y formar colonias en elcaso de medios sólidos.


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Siembra por

aislamiento


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TÉCNICAS DE SIEMBRI. Siembra con rastrillo

II. Siembra con asa de cultivo

- Diseminación en superficie- Agotamiento en superficie

- Tubos en superficie

- Tubos en profundidad o picada

III. Siembra con tórula


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Figura 12: Siembra con rastrilloManual de microbiología 2011, U. Mayor


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Siembra de diseminación ensuperficie

Manual de microbiología 2011, U

Mayor


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Siembra semi-cuantitativa deagotamiento en superficie.

Manual de microbiología 2011, U Mayor


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Siembra por picadura.

Manual de microbiología 2011, U Mayor


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CONTEO BACTERIANO

En caja de Petri: Arroja el total de células viablesen el cual forma colonias.

Por turbiedad: Las bacterias se multiplican,torna un tono turbio. (espectrofotómetro)


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LECTURA DE LAS PLACAS CUANDOSE REPRODUCEN LAS BACTERIAS


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La identificación presuntiva o preliminar de unabacteria se basa en la morfología colonial, para ellose forma en cuenta las siguientes características:

Elevación:Plana, bajo convexa, convexa rugosa,crateriforme y convexa y cóncava.

Bordes:liso, dentado, ondulado, lobulado, cremado,ciliado y ramosa (mas común liso).

Superficie:Lisa y Rugosa

Forma:Circular, ondulada y obulada.


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Tamaño: puntiforme, pequeña, mediana ygrande.

Transmisión de la luz:opaca o translucida.Reflexión de la luz:Mate y Brillante. Aspecto:Húmedo y Seco.Consistencia:Butirosa (brillante, húmeda ytranslucida), Mucoide (como moco), Vitrea (opaca,seco) y seca (si es dura).

Pigmento:Color (rojas, verdes, etc.) y olor.


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