UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA RIOJADEPARTAMENTO ACADÉMICO DE CIENCIAS APLICADAS A LA PRODUCCIÓN AL AMBIENTE Y EL URBANISMO.CARRERA: INGENIERÍA AGRO INDUSTRIAL – INGENIERIA EN ALIMENTOSCÁTEDRA: MICROBIOLOGIA INDUSTRIALPROF. TITULAR : ING. SERGIO MANUEL MORENOPROF. ADJ. : ING. VIVIANA NOEMI MALDONADOAÑO 2010 – 2º CUATRIMESTRE

TRABAJO PRACTICO Nº 1 – PREPARACION DE MATERIAL DE LABORATORIO DE

MICROBIOLOGIA

Objetivo principal:Que el alumno tome contacto con el material y aprenda las técnicas básicas de preparación del mismo, así como también del medio de cultivo y esterilización.

Objetivos secundarios.

- Adquirir experiencia en el manejo de equipos de esterilización y aplicar métodos de desinfección y esterilización empleando distintos agentes físicos 

- Preparación y fraccionamiento de caldo y agar comúnmente utilizados en un laboratorio de microbiología.

- Esterilización de caldo y agar por autoclave.- Preparación y esterilización de material de vidrio por estufa.

Materiales:Autoclave EstufaAlgodónProbetasVaso de PrecipitadosTijeraHilo LoneroPapel de envolver blancoMecheroErlenmeyersPipetasPipeteroTubo de cultivoCajas de PetryMarcador indelebleAgua destiladaMedios de cultivo liquido y sólido. Preparación de pipetas:

- Tomar al menos 15 pipetas limpias (10 de 1 ó 2 ml y 5 de 10 ó 5 ml).- Colocares un trozo de algodón en el extremo superior con la ayuda de un

alambre de forma tal que no quede muy apretado ni tampoco suelto.- Colocarlas en un pipetero vacío.- Rotular el pipetero indicando volumen de las pipetas y fecha.

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INGENIERIA AGRO INDUSTRIAL – MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL___________________________________________________________________________________

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- Colocar la tapa del pipetero dejando los orificios abiertos

Preparación de Cajas de Petry- Tomar una caja de petry y colocarla sobre el papel para envolver- Envolver según la técnica que el docente explicará- Llevar a estufa de esterilización

Preparación de frascos - Tomar un frascos y envolver con la ayuda de un hilo la boca con la tapa

puesta- Envolver el frasco así tapado según la técnica que el docente explicará- Llevar a estufa de esterilización.

Preparación de medios de cultivo.- Leer atentamente la formula de los medios y calcular la cantidad de medio

necesario para preparar 250 ml.- Pesar en balanza digital en un baso de precipitado- Agregar la cantidad de agua necesaria- Si es necesario llevar a mechero hasta disolución- Medir pH.- Fraccionar en tubos de cultivo 10 ml de medio liquido y 10 ml de medio

sólido.- Acondicionar para su esterilización en auto clave (20min. 121 ºC)- Guardar en heladera hasta su utilización.

MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN Calor húmedo (autoclave)

Procedimiento

Verificar el nivel de agua del autoclave asegurando que el mismo se encuentre a la altura de la tapa de la base. Si fuera necesario reponer el agua con agua destilada.

Verificar que la junta esté en buenas condiciones, sin roturas ni grietas. Ante la posibilidad de un mal cierre de la misma proceder a su reemplazo.

Colocar la carga a esterilizar o descontaminar dentro del autoclave en forma ordenada y en recipientes de forma tal que ningún objeto quede suelto dentro de la misma y dejando un espacio no menor a 5 centímetros entre dichos elementos y el borde superior del autoclave.

Colocar en el interior de la carga un control térmico de esterilización (ya sea químico y/o biológico). Ubicar los controles en aquellos lugares donde considere más difícil el acceso al vapor.

Cerrar la tapa superior del autoclave y ajustar las mancuernas con las manos y de a pares enfrentados. Nota: No ajustar las mancuernas del autoclave empleando objetos como palos, caños, etc. La tapa está diseñada para ser cerrada con la fuerza de las manos.

Verificar que la espita esté abierta. En caso contrario abrirla.

TRABAJO PRACTICO Nº 1

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Abrir la llave de paso de gas y encender el mechero.

Regular la entrada de aire para que la llama del mechero sea máxima controlando que la totalidad del mismo esté encendido.

Cuando de la boca de la espita se observe la salida de vapor en forma continua, proceder a cerrar la espita.

Una vez alcanzada la presión de trabajo (1,2atm, 121ºC) regular la llave de gas de manera tal que la presión se mantenga en dicho valor.

Mantener a temperatura y presión constantes durante 15 minutos si se trata de medios de cultivo y 30 minutos si se trata de material de vidrio o decontaminación. Verificar periódicamente que se mantengan dichas condiciones.

Transcurridos los el tiempo indicado proceder a cerrar la llave de gas.

Una vez que la presión halla alcanzado el valor 0 atm. proceder a abrir la espita permitiendo que se igualen las presiones interior y exterior.

Colocarse los guantes de amianto.

Liberar las mancuernas y proceder a abrir la tapa del autoclave, cuidando alejar el rostro de la boca del autoclave.

Verificar se disponga de lugar para descargar el contenido del autoclave.

Retirar los elementos del interior del autoclave.

Si se hubieran derramado elementos en el interior del autoclave, proceder a su vaciado y limpieza utilizando agua, detergente y esponja.

Colocar la tapa de manera tal que cubra la boca del autoclave.

  Calor seco (Estufa de esterilización)

1- Preparación del material a hornear.2- Carga del horno.3- Control hasta llegar a la temperatura de esterilización.4- Control del tiempo de esterilización.5- Apagado, enfriado y apertura del horno. Se esterilizarán materiales que no puedan ser autoclavados y/o que resistan altas temperaturas. Incineración por llamaFlameado de la boca de botellas, frascos y tubos y en la esterilización y decontaminación del ansa que se emplea para transferir cultivos bacterianos.

TRABAJO PRACTICO Nº 1