Mixomatosis en liebre ibérica - fundacionartemisan.com · liebre ibérica 20 de julio – 30 de...
Transcript of Mixomatosis en liebre ibérica - fundacionartemisan.com · liebre ibérica 20 de julio – 30 de...
Mixomatosis en liebre ibérica
20dejulio– 30denoviembre
Dra.MontserratAgüeroGarcíaDirectoraLaboratorioCentraldeVeterinaria-SanidadAnimal(LCV-SA)
S.GSanidadeHigieneAnimalyTrazabilidad
PrimerforoenfermedadesdelaFaunaSilvestre4diciembre2018,Madrid
MIXOMATOSIS
Enfermedad de los conejos causado por un poxvirus (virus de mixoma). No zoonótica.
Se propaga principalmente de forma mecánica por medio de las pulgas y mosquitos.También puede difundirse de forma directa.
Dos formas:- Clásica: produce nódulos cutáneos que aparecen primero en la zona de infección, con
inflamación alrededor de los ojos y genitales, y se desarrollan lesiones cutáneassecundarias. Al mismo tiempo puede haber una inmunosupresión grave que permitela aparición de infecciones bacterianas secundarias, por lo que son comunes los signosde neumonía. La muerte por neumonía es frecuente.
- Mixomatosa: respiratoria sin lesiones cutáneas.
Laliebreessusceptible,perocasinuncadesarrollalaenfermedad.
http://en.citizendium.org/images/9/97/Leporipoxvirus
Familia: PoxviridaeGénero: Leporipoxvirus
• Virus con envuelta de gran tamaño (250nmdiámetro, 300nm longitud)
• Genoma ADN doble cadena no segmentadode gran longitud (160.000 nt) consecuencias terminals repetidas invertidas(TIR) en ambos extremos, que codifica poraprox.170 proteínas, 12 de ellas en las TIR
• Cepa Lausanne prototipo del virus europeo,1er genoma completo secuenciado de virusmixoma
VIRUSDELMIXOMA
Viruses 2015, 7(3),1100-1112;doi:10.3390/v7031100
La semana del 20 de julio de 2018 como consecuencia del programa de vigilanciapasiva de fauna silvestre, la Junta de Andalucía, recibió la notificación demortalidades anormales en liebres en distintos cotos de caza en los municipios deMontalbán, y de Fernán Núñez (Córdoba), hallándose ejemplares en el campo enun estado moribundo, con signos de ceguera, debilidad y desorientación.
1ER CASODEMIXOMATOSISENLIEBREENESPAÑA
ANALISISENLCV• VirusdeLiebreparda(PCR) NEGATIVO• Enfermedadhemorrágica(PCR) NEGATIVO• Tularemia (PCRycultivo) NEGATIVO• Virusdemixoma (PCR) POSITIVO
25-7-2018BAZO,PULMÓN,PÁRPADODE2LIEBRESIBÉRICAS
Cavadini etal;Vaccine 28(2010)5414–5420Primers M071F/R(amplicon nt 67229-67700)
L1 L2 CE+ CA+CA- CE- M
471pb
1ER CASODEMIXOMATOSISENLIEBREENESPAÑA
ANALISISENLCV (Continuación)
• Secuenciaciónamplicón • ComparaciónconGenBank (Blast)
• AislamientoencélulasRK13
ü ECPalas48hü Confirmaciónpor
PCR
ORGANIZACIÓNMUNDIALDELASANIDADANIMAL
Códigosanitarioparalosanimalesterrestres Obligaciónnotificarenfermedademergente
MUESTRASANALIZADASMIXOMATOSISENLCV
8liebresmuertasencotodeCórdoba
27-7-2018BAZO,PULMÓN,HÍGADO,RIÑÓN
PÁRPADO
ANALISISENLCV• VirusdeLiebreparda(PCR) NEGATIVO• Enfermedadhemorrágica(PCR) NEGATIVO• Tularemia (PCRycultivo) NEGATIVO• Virusdemixoma (PCR)
ü Bazo
ü Higado POSITIVOü Pulmónü Riñónü Párpado
CE- B CE+Pa CE+ CA- MH P R
25julio-30noviembre:928muestrasde255animales(239liebre,15conejo,1hurón)
30/07/2018 Montilla (Campiña Sur)
Córdoba31/07/2018
Baena, Guadajoz y Campiña EstePosadas (Vega del Guadalquivir)
03/08/2018 Jaén (Campiña de Jaén) Jaén
CRONOLOGÍACASOSMIXOMATOSISLIEBREIBÉRICA
CRONOLOGÍACASOSMIXOMATOSISLIEBREIBÉRICA
07/08/2018 Belmonte Cuenca
CRONOLOGÍACASOSMIXOMATOSISLIEBREIBÉRICA
13/08/2018 TomellosoCiudad Real
17/08/2018ValdepeñasManzanaresLucena (Subbética) Córdoba
CRONOLOGÍACASOSMIXOMATOSISLIEBREIBÉRICACRONOLOGÍACASOSMIXOMATOSISLIEBREIBÉRICA
CRONOLOGÍACASOSMIXOMATOSISLIEBREIBÉRICA
24/08/2018
MadridejosToledoQuintanar de la
OrdenVillanueva de los Infantes Ciudad Real
CRONOLOGÍACASOSMIXOMATOSISLIEBREIBÉRICA
CRONOLOGÍACASOSMIXOMATOSISLIEBREIBÉRICA
29/08/2019
La Roda AlbaceteAntequera (Antequera) Málaga
Linares (Sierra Morena/Campiña Jaén)Jaén
Andújar (Sierra Morena/Campiña Jaén)
31/08/2019 Marchena (Serranía Sudoeste) Sevilla
CRONOLOGÍACASOSMIXOMATOSISLIEBREIBÉRICA
CRONOLOGÍACASOSMIXOMATOSISLIEBREIBÉRICA
04/09/2018 Villarrobledo Albacete
06/09/2018 Calzada de Calatrava Ciudad Real
CRONOLOGÍACASOSMIXOMATOSISLIEBREIBÉRICA
CRONOLOGÍACASOSMIXOMATOSISLIEBREIBÉRICA
12/09/2018 Toledo Toledo
14/09/2018Almodovar del Campo Ciudad RealMora Toledo
CRONOLOGÍACASOSMIXOMATOSISLIEBREIBÉRICA
CRONOLOGÍACASOSMIXOMATOSISLIEBREIBÉRICA
21/09/2018Malagón Ciudad RealSanta Fé (Vega de Granada) Granada
CRONOLOGÍACASOSMIXOMATOSISLIEBREIBÉRICA
CRONOLOGÍACASOSMIXOMATOSISLIEBREIBÉRICACRONOLOGÍACASOSMIXOMATOSISLIEBREIBÉRICA
25/09/2018Navalcarnero Madrid
Don Benito Badajoz
CRONOLOGÍACASOSMIXOMATOSISLIEBREIBÉRICA
16/10/2018Albacete Albacete
Altiplano (Jumilla) Murcia
17/10/2018 Alcalá de Henares Madrid
19/10/2018 Higueruela Albacete
CRONOLOGÍACASOSMIXOMATOSISLIEBREIBÉRICA
24/10/2018
Almadén Ciudad Real
Alcaraz
AlbaceteElche de la Sierra
Balazote
26/10/2018 Pastrana Guadalajara
CRONOLOGÍACASOSMIXOMATOSISLIEBREIBÉRICA
06/11/2018
Málaga Málaga
Almonte Huelva
Campiña Cádiz
Lerma Burgos
CRONOLOGÍACASOSMIXOMATOSISLIEBREIBÉRICA
12/11/2018Landete
CuencaMotilla del Palancar
13/11/2018
Talavera de la Reina
ToledoOcañaTorrijosLos NavalmoralesMontalbán TeruelAriza ZaragozaÉcija (La Campiña) Sevilla
Villarejo de Salvanés Madrid
15/11/2018
Mora de Rubielos TeruelRincón de Ademuz ValenciaTarancón CuencaAranjuez Madrid
CASOSMIXOMATOSISLIEBREIBÉRICA
CCAA Provincia Comarcaganadera Total
CastillaLaMancha
Albacete
Albacete 2Alcaraz 3Almansa 6Balazote 1CasasIbáñez 3ElchedelaSierra 1Hellín 3Higueruela 6LaRoda 9Villarrobledo 1
CiudadReal
Almadén 1AlmodóvardelCampo 5CalzadadeCalatrava 5Malagón 5Manzanares 7Piedrabuena 2Tomelloso 8Valdepeñas 9VillanuevadelosInfantes 3
Cuenca
Belmonte 7Landete 3MotilladelPalancar 4Tarancón 1
Guadalajara Pastrana 3
Toledo
LosNavalmorales 1Madridejos 4Mora 4Ocaña 4QuintanardelaOrden 6TalaveradelaReina 2Toledo 13Torrijos 3
CCAA Provincia Comarcaganadera Total
Andalucía
Cádiz Campiña 1
Córdoba
Baena,GuadajozyCampiñaEste 5Montilla(CampiñaSur) 15Montilla(CampiñaSur)yLucena(Subbética) 1Posadas(VegadelGuadalquivir) 3
Granada SantaFé(VegadeGranada) 1Huelva Almonte(EntornodeDoñana) 2
Jaén
Andujar(SierraMorena/CampiñaJaén) 2Jaén(CampiñadeJaén) 4Linares(SierraMorena/CampiñaJaén) 8SantiestebandelPuerto(ElCondado) 1Úbeda(LaLoma) 1
MálagaAntequera(Antequera) 14Málaga(GuadahorceOriental) 1
SevillaÉcija(LaCampiña) 1Marchena(SerraníaSudoeste) 4
AragónTeruel
Montalbán 1MoradeRubielos 2
Zaragoza Ariza 1
CCAA Provincia Comarcaganadera TotalCastillayLeón Burgos Lerma 1Com.Valenciana Valencia RincóndeAdemuz 1Extremadura Badajoz DonBenito 5
Madrid Madrid
AlcaládeHenares 2Aranjuez 1Navalcarnero 1Villarejo deSalvanés 1
Murcia Murcia Altiplano(Jumilla) 1Noroeste (Caravaca) 1
Total:217
CASOSMIXOMATOSISLIEBREIBÉRICA
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
NºdeLiebresconfirmadasporAlgetemediantePCR
AISLADOSMIXOMATOSISLCV
Provincia Especie AislamientoCórdoba Liebre PositivoCórdoba Liebre PositivoJaén Liebre Positivo
Málaga Liebre PositivoSevilla Liebre PositivoGranada Liebre PositivoMálaga Conejo PositivoCádiz Liebre EnprocesoHuelva Liebre EnprocesoCuenca Liebre Positivo
CiudadReal Liebre PositivoToledo Liebre PositivoAlbacete Liebre PositivoToledo Conejo PositivoToledo Conejo Positivo
Guadalajara Liebre PositivoValencia Conejo PositivoCastellón Conejo PositivoBadajoz Liebre PositivoMadrid Liebre PositivoMurcia Liebre PositivoBurgos Liebre EnprocesoZaragoza Liebre Enproceso
Objetivoaislarvirusde:• 1ercasodemixomatosisenliebre
encadaprovinciaafectada• Todoslosconejospositivosde
zonasafectadas(pocoscasos)
MEDIDASADOPTADAS
- Comunicación a los Servicios Veterinarios Oficiales, de Medio Natural y de Cazade las CCAA afectadas.
- Información y reunión con organizaciones de Caza y de Medio Natural.
- Cese de autorización de traslocaciones de conejos y liebres silvestres procedentesde las áreas afectadas.
- Recomendación a guardas forestales, ganaderos, cazadores y demás personasque realicen actividades en el campo que notifiquen cualquier sospecha demortalidad anormal o presencia de síntomas o lesiones compatibles con laenfermedad en liebres, comunicando estos sucesos a los Servicios VeterinariosOficiales, quienes investigarán las sospechas y en caso necesario tomar muestraspara su envío al laboratorio.
- Estudios del genoma de la cepa de virus de mixoma, en los que actualmente en elLCV de Algete se encuentra trabajando en la secuenciación parcial de los aisladosen diferentes regiones.
MEDIDASADOPTADASSGSHAT
MEDIDASADOPTADAS
- Comunicación a los Servicios Veterinarios Oficiales, de Medio Natural y de Cazade las CCAA afectadas.
- Información y reunión con organizaciones de Caza y de Medio Natural.
- Cese de autorización de traslocaciones de conejos y liebres silvestres procedentesde las áreas afectadas.
- Recomendación a guardas forestales, ganaderos, cazadores y demás personasque realicen actividades en el campo que notifiquen cualquier sospecha demortalidad anormal o presencia de síntomas o lesiones compatibles con laenfermedad en liebres, comunicando estos sucesos a los Servicios VeterinariosOficiales, quienes investigarán las sospechas y en caso necesario tomar muestraspara su envío al laboratorio.
- Estudios del genoma de la cepa de virus de mixoma, en los que actualmenteen el LCV de Algete se encuentra trabajando en la secuenciación parcial delos aislados de diferentes regiones.
MEDIDASADOPTADASSGSHAT
ESTUDIODELGENOMADEVIRUSMIXOMADETECTADOENLIEBRES
¿Porquésehaproducidoelaumentodesuceptibilidad y/opatogenicidadalainfecciónporelvirusdemixomatosisenliebres?
• Cambios en el virus (p.ej.,mutaciones que alteren elrango de huésped…)???
• Cambios en el huésped (p.ej.,situaciones de inmunosupresiónpor tóxicos…)???
Aproximacióninicial
El LCV inicia la secuenciación ycomparación de 5 genes del virus, enaislados de liebre y conejos de lasáreas afectadas e históricos(El gen M071 empleado en PCRdiagnóstico es idéntico al virus clásico)
D.JoséAlbertoViñuelas delaFuente,directordelCentrodeInvestigaciónApícolayAgroambientaldeMarchamalo (CIAPA),nossolicitamuestrasdelosanimalesdiagnosticadosparainiciarunestudioenestesentido
ESTUDIODELGENOMADEVIRUSMIXOMADETECTADOENLIEBRES
Seleccióndegenesparasecuenciación,basadoenlostrabajos:
GenessecuenciadosenLCVØ M004L/R(747pb)Ø M036L(2224pb)Ø M148R(2212pb)Ø M029L(347pb)Ø M156R(308pb)
ESTUDIODELGENOMADEVIRUSMIXOMADETECTADOENLIEBRES
GenM004R/L(747pb)
No≠tamaño
Posición (nt ) gen m004R/L referida a MV Lu (AF170726)
Identificación 541-544 571 993 1038Lu(AF170726)m148R TGTT T A CC-GALICIA-2009
C-PAIS VASCO-2015C-PAIS VASCO-2015C-GALICIA-2015C-PAIS VASCO-2015C-CATALUÑA-2015C-CATALUÑA-2016C-CATALUÑA-2016 C-CATALUÑA-2017C-CATALUÑA-2017C-C.LEON 2017 C-CATALUÑA-2017C-CATALUÑA-2018C-CATALUÑA-2018L-ANDALUCIA-2018CORDOBA
T
L-ANDALUCIA-2018CORDOBA
T
L-ANDALUCIA-2018JAEN
T
L-ANDALUCIA-2018CORDOBA
T
L-C.MANCHA-2018 T
L-C.MANCHA-2018 T
L-C.MANCHA-2018 T
L-C.MANCHA-2018 Delección 4nt T
L-C.MANCHA-2018 C-C.MANCHA-2018C-CAMPOLCV-2018 GC-C.MANCHA-2018 TC-VALENCIA-2018 C TC-C.MANCHA-2018
Nocambiosqueaparezcanentodoslosvirusdeliebreynoenvirusdeconejo
ESTUDIODELGENOMADEVIRUSMIXOMADETECTADOENLIEBRES
GenM029L(563pb)
Nocambiosqueaparezcanentodoslosvirusdeliebreynoenvirusdeconejo
No≠tamaño
Posición (nt ) gen M029L referida a MV Lu (AF170726)Identificación 81 126 172 314
Lu(AF170726)m148R C G G CC-GALICIA-2009 TC-PAIS VASCO-2015 TC-PAIS VASCO-2015 TC-GALICIA-2015 TC-PAIS VASCO-2015 A TC-CATALUÑA-2015 TC-CATALUÑA-2016 TC-CATALUÑA-2016 C-CATALUÑA-2017 AC-CATALUÑA-2017 AC-C.LEON 2017 C-CATALUÑA-2017 A TC-CATALUÑA-2018 TC-CATALUÑA-2018 TL-ANDALUCIA-2018CORDOBA
A
L-ANDALUCIA-2018CORDOBA
A T
L-ANDALUCIA-2018JAEN
A T
L-ANDALUCIA-2018CORDOBA
A T
L-C.MANCHA-2018 A T
L-C.MANCHA-2018 A T
L-C.MANCHA-2018 A T
L-C.MANCHA-2018 A T
L-C.MANCHA-2018 A TC-C.MANCHA-2018 A TC-CAMPOLCV-2018 TC-C.MANCHA-2018 TC-VALENCIA-2018 TC-C.MANCHA-2018 A T
ESTUDIODELGENOMADEVIRUSMIXOMADETECTADOENLIEBRES
GenM0148R(2212pb)
Nocambiosqueaparezcanentodoslosvirusdeliebreynoenvirusdeconejo
Posición (nt ) gen m148R referida a MV Lu (AF170726)Identificación 184 222 361 520 753 912 955 1177 1369 1426 1580 1924
Lu(AF170726)m148R A G G G A C G C C T G AC-GALICIA-2009 AC-PAIS VASCO-2015 G T CC-PAIS VASCO-2015 G T CC-GALICIA-2015 G T CC-PAIS VASCO-2015 AC-CATALUÑA-2015 G A T CC-CATALUÑA-2016 A GC-CATALUÑA-2016 C-CATALUÑA-2017 A GC-CATALUÑA-2017 A GC-C.LEON 2017C-CATALUÑA-2017 A GC-CATALUÑA-2018 AC-CATALUÑA-2018 G A T CL-ANDALUCIA-2018CORDOBA
A G T A
L-ANDALUCIA-2018CORDOBA
A G T A
L-ANDALUCIA-2018JAEN
A G T A
L-ANDALUCIA-2018CORDOBA
A G T A
L-C.MANCHA-2018 A G T A
L-C.MANCHA-2018 A G T A
L-C.MANCHA-2018 A G T A
L-C.MANCHA-2018 A G T A
L-C.MANCHA-2018 C-C.MANCHA-2018C-CAMPOLCV-2018 G T CC-C.MANCHA-2018 A G T C AC-VALENCIA-2018 C TC-C.MANCHA-2018
No≠tamaño
ESTUDIODELGENOMADEVIRUSMIXOMADETECTADOENLIEBRES
GenM156R(511pb)
Nocambiosqueaparezcanentodoslosvirusdeliebreynoenvirusdeconejo
No≠tamaño
Posición (nt ) gen m156 referida a MV Lu (AF170726)Identificación 149 270
Lu(AF170726)m148R G CC-GALICIA-2009
C-PAIS VASCO-2015 TC-PAIS VASCO-2015 TC-GALICIA-2015C-PAIS VASCO-2015 AC-CATALUÑA-2015C-CATALUÑA-2016C-CATALUÑA-2016 C-CATALUÑA-2017C-CATALUÑA-2017C-C.LEON 2017 C-CATALUÑA-2017C-CATALUÑA-2018C-CATALUÑA-2018L-ANDALUCIA-2018CORDOBAL-ANDALUCIA-2018CORDOBAL-ANDALUCIA-2018JAENL-ANDALUCIA-2018CORDOBAL-C.MANCHA-2018
L-C.MANCHA-2018
L-C.MANCHA-2018
L-C.MANCHA-2018
L-C.MANCHA-2018
C-C.MANCHA-2018C-CAMPOLCV-2018C-C.MANCHA-2018C-VALENCIA-2018C-C.MANCHA-2018
ESTUDIODELGENOMADEVIRUSMIXOMADETECTADOENLIEBRES
GenM036L(2224pb)
Enprocesodecompletarlasecuenciación
M036L(2224pb)
3,4y5:Liebres6,7y8:Conejos
No≠tamaño
ESTUDIODELGENOMADEVIRUSMIXOMADETECTADOENLIEBRES
ComunicaciónpersonalhallazgoDres.K.Dalton&F.ParraU.Oviedo
¡¡Insercióndeaproximadamente3kbenelgenM009!!
ImagenenviadaporK.Dalton
Confirmarsiestainserciónestápresenteenotrosaisladosliebre
PropuestaalLCV
ESTUDIODELGENOMADEVIRUSMIXOMADETECTADOENLIEBRES
1:LCórdoba-M;2:LCórdoba-A;3:LCuenca-M;4:LCuenca-A; 5:LC.Real-M6:LC.Real-A;7:LBadajoz-M; 8:LBadajoz-A;9:CToledo-M;10:CToledo-A
1:CP.Vasco2015;2:CCataluña2016;3:CCataluña2017;4:LCataluña2018; 5:CCataluña2018;6:LCórdoba;7:LJaén; 8:LCuenca;9:LC.Real;10:LC-Real;11:LMálaga;12:LBadajoz;13:LMadrid;14:CMadrid2018;15:CToledo2018;16:CValencia2018-A;17:CToledo2018- A;18:CMálaga2018
1:CP.Vasco2015;2:LCórdoba;3:LJaén;4:LCuenca; 5:LC.Real;6:LC.Real ;7:LMálaga; 8:LBadajoz;9:LMadrid;10:LToledo;11:LToledo;12:CToledo2018;13:CGalicia2009;14:CGalicia2009(-1);15:CA-
Conejoanteriorjulio2018
Conejojulio-noviembre2018
Liebrejulio-noviembre2018
M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 M MCA+CA-
Resumen:• Todos los virus de conejo anteriores a
julio 2018 tienen fragmento 1,7 Kpb• Todos los virus de liebre jul-nov 2018
tienen fragmento aprox. 5 Kpb• Los virus de conejo silvestre jul-nov 2018
(n=9) tienen fragmento 1,7 Kpb excepto1 conejo de Toledo que tiene 5Kpb
GenM009(1,7-5Kpb)
ESTUDIODELGENOMADEVIRUSMIXOMADETECTADOENLIEBRES
Conclusiones:
Ø Los trabajos del grupo del Dr. Parra han permitidodeterminar que el virus detectado en liebres, durante losbrotes en España ocurridos desde julio 2018 hasta laactualidad, es diferente del virus que hasta ese momento hacirculado en la población de conejos en España, al menosen la región del genoma correspondiente al gen M009,donde contiene una inserción de gran tamaño
Ø Este grupo está preparando una publicación donde sedescribirá con detalle la naturaleza de la secuenciainsertada, en la que participará el LCV
Ø Se dispone por tanto de un marcador para diferenciar ambostipos de virus
PERSPECTIVASDEFUTURO
- Se ha iniciado un proyecto multidisciplinar financiado porLaboratorios Labiana y fundación ARTEMISA, en el que participan:Mº Agricultura (SGSHAT y LCV), Cresa, U. Oviedo, UCO y UCLM,coordinado por la SGSHAT, con los siguientes objetivos:
• Obtención de la secuenciación completa del virus (en procesopara 4 aislados de liebre de diferentes localizaciones y unaislado de conejo de CLM que presenta la inserción en M009).
• Estudios de patogenia con inoculaciones in vivo en animalario.
• Estudios de eficacia de las vacunas actuales frente a la nuevacepa, tanto en liebres como en conejos.
PERSPECTIVASDEFUTURO