Praktika/Práctica: Extracción de ADN humano

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File/Fitxategia: Fecha/Data: 17/05/2023 Página 1 de 6 Biología/biologia

OBJETIVOSGenerales

1. Aplicar los conceptos, leyes, teorías y modelos aprendidos a situaciones reales y cotidianas.

2. Utilizar con cierta autonomía destrezas investigativas, tanto documentales como experimentales (plantear problemas, formular y contrastar hipótesis, realizar experiencias, etc.), reconociendo el carácter de la ciencia como proceso cambiante y dinámico.

3. Desarrollar actitudes que suelen asociarse al trabajo científico tales como la búsqueda de información exhaustiva, la capacidad crítica, la necesidad de verificación de los hechos, el cuestionamiento de lo obvio y la apertura ante nuevas ideas.

4. Explicar expresiones “científicas” del lenguaje cotidiano según los conocimientos biológicos adquiridos, relacionando la experiencia diaria con la científica.

5. Comprender la naturaleza de la biología y sus limitaciones, así como sus complejas interacciones con la tecnología y la sociedad, valorando la necesidad de trabajar para lograr una mejora de las condiciones de vida actuales.

Específicos

1. El objetivo fundamental de esta práctica es utilizar unas sencillas técnicas para poder extraer el ADN de un tejido animal y por el aspecto que presenta confirmar su estructura fabrilar.

2. A partir de la longitud enorme de las fibras también se confirma que en el núcleo el ADN se encuentra replegado.

3. Realizar una tinción específica de ADN (con un colorante básico) y observar al microscopio las fibras de ADN.

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FUNDAMENTO TEÓRICOLa extracción de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de

que los iones salinos son atraídos hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolución y posterior extracción de la célula. Se empieza por lisar (romper la membrana plasmática) las células mediante un detergente, vaciándose su contenido molecular en una disolución tampón en la que se disuelve el ADN. En ese momento, el tampón contiene ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN, carbohidratos, proteínas y otras sustancias en menor proporción. Las proteínas asociadas al ADN, de gran longitud, se habrán fraccionado en cadenas más pequeñas y separado de él por acción del detergente. Sólo queda, por tanto, extraer el ADN de esa mezcla de tampón y detergente, para lo cual se utiliza alcohol etílico.

MATERIAL NECESARIO

Material general de laboratorio

Un vaso de precipitados. (250 ml) Un tubo de ensayo Una probeta Una varilla de vidrio Balanza digital Papel de filtro Un portaobjetos Un cubreobjetos Microscopio

Productos químicos y reactivos

Células de la mucosa bucal. Detergente líquido para vajillas (Mistol) Cloruro sódico. Alcohol etílico de 96º. Bicarbonato cálcico. Agua destilada. Azul de metileno.

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PROCEDIMIENTO1. Preparar el tampón con los siguientes ingredientes:

120 ml de agua, si es posible destilada y si no mineral. No usar agua del grifo.

1,5 g de sal de mesa, preferiblemente pura. 5 g de bicarbonato sódico. 5 ml de detergente líquido.

2. Poner un poco de agua en un vaso y enjuagarse la boca para eliminar restos de alimentos. Luego con ayuda de la lengua y la saliva arrastrar el mayor número posible de células de descamación de la mucosa bucal.

3. Mezclar en un tubo de ensayo 1 ml de saliva con 5 ml del tampón y agitar suavemente para no producir espuma.

4. Colocar 5 minutos en un baño de agua a 37º C para acelerar el proceso.

5. Añadir, poco a poco, la misma cantidad de alcohol que la que añadiste entes de disolución tampón; inclinando el tubo y vertiendo sobre la pared para que no mezclen las dos partes.

6. Agitando suavemente el tubo de ensayo, veremos cómo aparecen unos filamentos blancos disueltos en el alcohol.

7. Introducir una varilla de vidrio en la parte del alcohol haciéndola rotar, siempre, en la misma dirección, haciendo que se adhieran los filamentos blancos que se observan.

8. Pon una porción de esos filamentos en un portaobjetos, y añádele una gota de azul de metileno.

9. Cubre la preparación con un cubreobjetos y obsérvala al microscopio con un objetivo de 40.

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INFORME DE LABORATORIO

¡Felicidades! ¡Acabas de completar la extracción de tu ADN!

Ahora que has extraído exitosamente tu ADN, estás listo para contestar las siguientes preguntas.

¿Por qué hemos utilizado detergente?

¿Para qué hemos utilizado el cloruro sódico? ¿Y bicarbonato?

El alcohol es menos denso que el agua, por lo que flota en la parte superior. Debido a que se han formado dos capas separadas, el ADN y el resto de materia orgánica tienden a separarse. ¿Quién se queda en la capa acuosa, la del fondo? ¿Y en la capa superior, el alcohol?

¿Qué es esa cosa pegajosa?

¿La cosa blanca y pegajosa es ADN puro o una mezcla de ácidos nucleicos?

¿Por qué decimos que el azul de metileno es un colorante específico para el ADN?

¿Por qué crees que es necesario dejar libres los núcleos?

Al añadir un detergente se produce un medio hipertónico. ¿Que efecto tiene dicho medio en las membranas del núcleo?

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