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María Jesús Molina Cimadevila
OPTIMIZACIÓN DEL MANEJO DE COLONIAS DE
RATONES MODIFICADOS GENÉTICAMENTE
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OPTIMIZACIÓN DE LA GESTIÓN DE COLONIAS DE RATONES
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OPTIMIZACIÓN DE LA GESTIÓN DE COLONIAS DE RATONES
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OPTIMIZACIÓN DE LA GESTIÓN DE COLONIAS DE RATONES
6 EUROS/JAULA/MES
IN 39%
UMH 44%
PROYECTOS 17%
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OPTIMIZACIÓN DE LA GESTIÓN DE COLONIAS DE RATONES
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MEDIDAS PARA OPTIMIZAR EL USO DE RATONES
•Formación
•Seminario. Materiales en la intranet •Curso de gestión de colonias
•Programa de criopreservación
•Asesoramiento •Penalizaciones económicas
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IMPORTANCIA DEL FONDO GENÉTICO
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FONDO GENÉTICO
Neuron. 1997 Oct;19(4):755-9. Mutant mice and neuroscience: recommendations concerning genetic background. Banbury Conference on genetic background in mice. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9354323
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CONSANGUÍNEOS INBRED
•Homocigotos en el 98 % de sus genes • Prácticamente genéticamente idénticos • Se mantienen con cruces hermano-hermana •Adecuados como fondo genético de ratones modificados genéticamente
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INBRED
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NO- CONSANGUÍNEOS OUTBRED
• Genéticamente diversos • Para mantener su diversidad genética es necesario mantener al menos 20 parejas criando al azar • No son adecuados como fondo de ratones modificados genéticamente
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OUTBRED
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OUTBRED
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FONDO GENÉTICO
http://jaxmice.jax.org/support/husbandry/breeding-considerations.html
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FONDO GENÉTICO
http://phenome.jax.org/
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FONDO GENÉTICO
http://phenome.jax.org/
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FONDO GENÉTICO
http://phenome.jax.org/
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FONDO GENÉTICO COMO CAMBIAR EL FONDO GENÉTICO DE UNA LÍNEA
LÍNEAS COISOGÉNICAS
N10 99.8%
X
X
X
N2 Porcentaje de genoma de la cepa donante 50%
N3 75%
N5 94%
Porcentaje de genoma de cepa donante= 1- (1/2)n-1
Mouse Genetics, Concepts and Applications Lee M. Silver Oxford University Press 1995
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FONDO GENÉTICO COMO CAMBIAR EL FONDO GENÉTICO DE UNA LÍNEA
LÍNEAS COISOGÉNICAS
X
X
X
N2: 3 MESES
N3: 6 MESES
N5: 15 MESES
N10: 30MESES
SPEED CONGENICS
15 meses
Mouse Genetics, Concepts and Applications Lee M. Silver Oxford University Press 1995
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FONDO GENÉTICO
A partir de N10
Si el alelo no es letal Si el alelo es letal
X
CREAR LÍNEA HOMOCIGOTA CONTINUO BACKCROSSING
CRUCE HERMANO X HERMANA A A
A A A
1/4 1/2 1/4
A A
A A
A A
A A
A A
A X
A
1/2 1/2
X
X
Mouse Genetics, Concepts and Applications Lee M. Silver Oxford University Press 1995
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NOMENCLATURA LÍNEAS COISOGÉNICAS
Nn Ff
n-1 generaciones de backcrossing f generaciones de cruce hermano-hermana
N15 F8
14 generaciones de backcrossing 8 generaciones de cruce hermano-hermana
Mouse Genetics, Concepts and Applications Lee M. Silver Oxford University Press 1995
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DATOS REPRODUCTIVOS BÁSICOS
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REPRODUCCIÓN
•Pubertad 6-8 semanas •Gestación 19-21 días •Destete 21-28 días •Tamaño de camada 2-12 crías (muy dependiente de cepa) •Reemplazo de reproductores 7-8 meses de edad. •Estro postparto
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REPRODUCCIÓN
3semanas 3semanas
Nace la primera camada Celo postparto
GESTACIÓN GESTACIÓN LACTANCIA
Nace la segunda camada Celo postparto
Destete de la primera camada
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REPRODUCCIÓN
Mes y medio Destete de ratones de 3 semanas
Mes y medio Destete de ratones de 3 semanas
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REPRODUCCIÓN
Mes y medio Destete de ratones de 3 semanas
Destete de ratones de 3 semanas
3 semanas
Destete de ratones de 3 semanas
3 semanas
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REPRODUCCIÓN
CRUCE
Mes y medio
3 semanas
3 semanas
3 semanas
3 semanas
3 semanas
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SUSTITUCIÓN DE REPRODUCTORES
•Reemplazar a los reproductores antes de que decline su eficiencia reproductiva, y siempre si: No producen camadas dentro de los 60 dias del cruce o desde su última camada Producen camadas pero no destetan en 2-3 camadas. •Tener reproductores de distintas edades en la colonia •Cruzar reproductores pronto. •Usar machos expertos con hembras jóvenes.
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SISTEMAS DE CRÍA DE RATONES
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CRÍA DE RATONES TRANSGÉNICOS
COLONIA DE STOCK/MANTENIMIENTO
COLONIA EXPERIMENTAL
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4 meses !NO MÁS!
MANTENIMIENTO DE TRANSGÉNICOS COLONIA DE STOCK
HOMOCIGOSIS
COSTE ECONÓMICO: 12-18 euros/mes
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MANTENIMIENTO DE TRANSGÉNICOS COLONIA DE STOCK
HOMOCIGOSIS
COSTE ECONÓMICO: 18 euros/mes
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MANTENIMIENTO DE TRANSGÉNICOS COLONIA DE STOCK
HETEROCIGOSIS
COSTE ECONÓMICO: 12 euros/mes
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CRÍA DE RATONES TRANSGÉNICOS
COLONIA DE STOCK/MANTENIMIENTO
COLONIA EXPERIMENTAL
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COLONIA EXPERIMENTAL
¿CUANTOS CRUCES NECESITO?
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•¿ Cuántos animales necesito? •¿Con qué frecuencia? •¿De qué género? •¿De qué genotipo?
Nº de cruces
COLONIA EXPERIMENTAL
¿CUANTOS CRUCES NECESITO?
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COLONIA EXPERIMENTAL
¿CUANTOS CRUCES NECESITO?
Para C57BL/6J
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COLONIA EXPERIMENTAL
¿CUANTOS CRUCES NECESITO?
http://helixweb.nih.gov/CAMP/ Hoffert, Condinional Allele Mouse Planner (CAMP): software to facilitate the planning and design of breeding strategies involving mice with conditional alleles. Transgenic Res. 2011 Aug 26. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21870117
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FECUNDACIÓN IN VITRO
+
Hormonación y obtención de ovocitos (20:00 h.)
Obtención de esperma
4-6 hembras/ sesión 1 macho transgénico/ sesión
Fecundación in vitro
100-200 embriones de 2 células (en función de la línea)
Transferencia de embriones
30-50 ratones
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CRIOPRESERVACIÓN
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PROGRAMA DE CRIOPRESERVACIÓN
+
Hormonación y obtención de ovocitos (20:00 h.) Obtención de esperma
4-6 hembras/ sesión 1 macho transgénico/ sesión
Fecundación in vitro
100-200 embriones de 2 células (en función de la línea)
Congelación lenta
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PROGRAMA DE CRIOPRESERVACIÓN
•ANEXO DE CRIOPRESERVACIÓN
•APORTAR 2-4 MACHOS (HETEROCIGOSIS), A SER POSIBLE QUE HAYAN SIDO PADRES.
•COSTE ECONÓMICO: 300 euros /línea
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PROGRAMA DE CRIOPRESERVACIÓN
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Dr. Lluis Montoliu
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Dr. Lluis Montoliu
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ESTANDARIZACIÓN DE PROTOCOLOS DEL COMITÉ
ÉTICO
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PROTOCOLOS ESTANDARIZADOS BLOQUE ANESTESIA PNT A.1 ANESTESIA INHALATORIA PNT A.2 ANESTESIA CON KETAMINA MEDETOMIDINA … BLOQUE QUIRÚRGICOS PNT Q. 1 CUIDADOS PERIOPERATORIOS PNT Q.2 ELECTROPORACIÓN IN UTERO PNT Q.3 CRANEOTOMÍA ... INCORPORA UNA EVALUACIÓN DE LA SEVERIDAD DEL PROCEDIMIENTO SEGÚN LA NUEVA DIRECTIVA EUROPEA.
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