UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE TECNOLOGIA MEDICA ESPECIALIDAD DE LABORATORIO CLINICO Y ANAT. PATOLOGICA LIC. TRIGOSO AVALOS WILSON E. CTMP 6226

UNIVERSIDAD ALAS PERUANASFACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUDESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE TECNOLOGIA MEDICA ESPECIALIDAD DE LABORATORIO CLINICO Y ANAT. PATOLOGICA

LIC. TRIGOSO AVALOS WILSON E.CTMP 6226AO DE LA INTEGRACION NACIONAL Y EL RECONOCIMIENTO DE NUESTRA DIVERSIDAD

BIOQUMICA IIFUNCION HEPATICA NORMALLa sangre procedente del intestino y del pncreas alcanza al hgado a travs del sistema venoso porta

Transportando los bioelementos necesarios para sntesis de protenas, azcares para el almacenamiento de energa y hormonas para regular la produccin de glucosa.

Centro de sntesis de: protenas plasmticas, lpidos endgenos, lipoprotenas (colesterol), factores de la coagulacin y glucgeno/glucosa.

FUNCION HEPATICA NORMALMetabolizacin de las drogas liposolubles (compuestos potencialmente txicos)

Componente fundamental del Sistema Reticuloendotelial y las clulas de Kupffer: constituyen principal dentro de defensa contra bacterias intestinales y de eliminacin de los complejos antgeno-anticuerpo

Centro de almacenamiento: energa en forma de glucgeno, de hierro y vitaminas (A, D y B12).

Localizacin de las enzimas hepatocelularesSe localizan en distintos sitios del hepatocito Diferentes patrones de liberacinDistintos mecanismos de dao

ALTASTcLDHASTmFALGGTGGT5 -NTPRUEBAS DE DAO HEPATICOEnzimas que reflejan dao celularLas enzimas citoplasmticas y mitocondrialesDao irreversible en la membrana celular (acompaa a la muerte celular)Marcadores: ALT, AST, LDH

Enzimas que reflejan dao canalicularLas enzimas canalicularesAcumulacin de cidos biliares en la obstruccin canalicularMarcadores: GGT, FAL, 5 NENFERMEDADES HEPATICASAGUDASAsintomticas en su mayora. Elevacin de la bilirrubina conjugada (ictericia)Causas: Hepatitis aguda u obstruccin del tracto biliar (ictericia colestsica u obstructiva)

CRONICASInfeccin crnica por VHB o VHC.HemocromatosisEnfermedad de WilsonHepatitis AutoinmuneCirrosisCarcinoma hepatocelularLesiones ocupantes de espacioConsideraciones GeneralesFundamentos y caractersticasInterpretacinPERFILCOLESTASICOGENERALIDADESLA SECRECIN BILIAR Involucra complejos mecanismos. Formacin de bilis (hepatocito).Modificacin en los conductillos y conductos biliares.Excretada en el intestino.

INTERFERANCIA: de los mecanismo a cualquier nivel y por diferentes causas

Consecuencia: COLESTASIS. 1956, Hans PopperLas alteraciones que esta produce, independientemente de la etiologa, son la disminucin del flujo biliar y la acumulacin en el hgado (con aumento en la sangre) de sustancias normalmente excretadas por la bilis.Sndrome clnico-humoral, caracterizada por prurito, ictericia, elevacin de las enzimas colestsicas (fosfatasa alcalina, gamma-glutamil-transferasa y 5-nucleotidasa).Existe un impedimento de la secrecin biliar y defectos en la secrecin de aniones orgnicos.GENERALIDADESDEFINICIONSNDROME RESULTANTE DE TRASTORNOSFormacin, secrecin o drenajeBilis al Intestino.Alteraciones morfolgicas, fisiolgicas y clnicas.

PROCESO BIOQUIMICO: incremento de la fraccin hepatobiliar de la FAL, GGT, 5-NT, cidos biliares y colesterol entre otros.

MANIFESTACIONES CLINICAS: ictericia, prurito, xantelasmas, etc.CLASIFICACIONPueden ser:Intrahepticas / Extrahepticas. Ictricas / Anictricas.Agudas / Crnicas.

Universalmente aceptada: Normas de Estandarizacin para las enfermedades del Hgado y de Va biliar (1994).INTRAHEPATICAEXTRAHEPATICAAlteraciones hepatocelulares de los canalculos biliares o de los pequeos conductillos.Alteraciones de los conductos biliares.

ETIOPATOGENIAColestasis Extraheptica: Obstruccin parcial o total de los conductos biliares (por litiasis, tumores benignos o malignos, extrechez inflamatoria, parasitos, etc).

Colestasis Intraheptica: resultado de fallas en los hepatocitos para secretar cantidades adecuadas de bilis (por injuria viral, hepatitis, drogas, alcohol o toxinas endgenas y exgenas). Destruccin progresiva de los conductillos biliares (Cirrosis biliar primaria).Colestasis congnita (Colestasis intraheptica familiar progresiva: CIFP)

ETIOPATOGENIACaractersticas de Laboratorio de la ColestasisLos hallazgos comunes a todas las formas de Colestasis son:

Aumento de la bilirrubina conjugada.Aumento de la Fosfatasa Alcalina.Aumento de la Gamma-glutamil-transferasa.Aumento de la 5-Nucleotidasa.Aumento del colesterol total, cidos biliares, aparicin de bilirrubinuria.

La obstruccin del rbol biliar es la causa mas comn del desarrollo de ictericia.

Con menor frecuencia, la obstruccin intraheptica generalizada (mecnica o funcional) puede producir ictericia.

La ictericia colestsica u obstructiva va acompaada de prurito (opiceos endgenos).

El prurito normalmente precede al desarrollo de la ictericia.Caractersticas de Laboratorio de la ColestasisSe desarrolla gradualmente un de las enzimas canaliculares (FAL GGT)GGT alcanza valores anormales antes que FAL totalObstruccin extraheptica o dao en conducto biliar intraheptica ( ambas)Se produce de bilirrubina conjugada (ictericia severa en obstruccin total) remisinFraccin de bilirrubina (BD) es similar en la Hepatitis y la Obstruccin (no distingue entre dao heptico y Colestasis)Obstruccin extraheptica transitorio de enzimas citoplasmaticas (similares al dao hepatocelular agudo) remisin a los 10 das aprox.

Caractersticas de Laboratorio de la ColestasisPATRONES DE COLESTASISTIPOLOCALIZACION DE LA OBSTRUCCIONALTFAL (ALP)BILICAUSASBilirrubinostasisHepatocitoNNElev.Sepsis, NPT, esteroidessexualesHepatitisColestsicaCanalicularElev.Elev.Elev.Dao inducido por drogas, deficiencia de AAT neonatalDaoDuctalConductos biliaresIntrahepticosN Lig. Elev.Elev.NLig. Elev.Cirrosis Biliar PrimariaColangitis Esclerosante PrimariaObstruccin CompletaConductos biliaresExtrahepticosElev. *Elev. +Elev. +Cncer pancreticoPiedras en el conducto biliar.ALT: Alanina aminotransferasa; ALP: Fosfatasa alcalina; Bili: Bilirrubina; NPT: Nutricin parenteral total; AAT: 1-antitripsina.* Puede aumentar transitoriamente al comenzar la obstruccin.+ Aumenta gradualmente con la obstruccin y es normal al principio de la misma.

Distincin entre Dao Heptico y ColestasisCARACTERDAO HEPATOCELULARCOLESTASISALT> 10 x LSR en la mayora de las formas, persiste durante semanas.Aumento transitorio > 10 x LSR en la obstruccin completa, disminuye rpidamenteALP< 3 x LSR en la mayora de las formas> 3 x LSR en la mayora de las formas, normal en la obstruccin tempranaGGTNormalmente < 5 x LSR Normalmente > 5 x LSR, puede ser menor en la obstruccin tempranaBILI50 % a 80% de reaccin directa50 % a 80% de reaccin directaTPNormal o ligeramente elevada en la mayora de las formasNormal en la mayora de las formas; puede aumentar en la obstruccin prolongadaAnlisis de ImgenesConducto s normalesConductos anormales en la obstruccin completaLSR: Lmites superiores de referencia5 NUCLEOTIDASA (EC 3.1.3.5)5 ribonucleosido fosfohidrolasa o NTP5 NUCLEOTIDASAEs una fosfatasa especfica con un peso molecular de aproximadamente 70 kDa.Acta nicamente sobre nucletidos (ATP Y GTP).Implicada en la produccin de adenosina extracelular, la absorcin de nutrientes y la proliferacin celular.Ampliamente distribuida en el cuerpo (SNC, testculos, pulmn, aorta, hipfisis), unida a membranas celulares (como la ALP, GGT).La 5 NT de plasma deriva principalmente del hgado.IMPORTANCIA CLNICAUn aumento de la 5 NT en suero puede ser debido a causas Extrahepticas (clculos o tumores ocluyendo el conducto biliar) o Intrahepticas (Colestasis, cirrosis biliar, infiltracin neoplasia del hgado).Contribuye a diferenciar el Incremento de fosfatasas a nivel Heptico, Intestinal u seo. 5 NT no esta comprometida en el metabolismo seo ni en el de la mucosa intestinal.En enfermedades del sistema hepatobiliar la actividad de la 5 NT aumenta paralelamente a la ALP.

5 NUCLEOTIDASALa 5 NT cataliza la desfosforilacin de AMP (adenosina 5 monofosfato)

Mxima actividad de 5 NT a pH: 7.5 (alcalino)

A este pH el AMP tambin es hidrolizado inespecficamente por las fosfatasas alcalinas

AMP + H2O Adenosina + Pi

5 nucleotidasa ( y ALP)5 nucleotidasaNi 2+Ni 2+Ni 2+ inhibicion competitivaPDETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD DE LA 5 NUCLEOTIDASAMtodo Enzimtico Cintico de Puntos Mltiples

AMP + H2O Adenosina + PiAdenosina + Pi Iosina + AmonioAmonio + 2-oxoglutarato + NADH Glutamato + NAD

La velocidad de formacin de NAD, el cual produce disminucin de la absorbancia a 340 nm, es directamente proporcional a la velocidad de formacin de adenosina y por lo tanto de la actividad de la 5-Nucleotidasa.

5 nucleotidasaADAGLDH5-NT produce la hidrlisis de adenosin 5-monofosfato (AMP)formando adenosina y fosfato inorgnico (Pi)

La adenosin desaminasa (ADA) desamina la adenosina, produciendo inosina y in amonio (NH4+)

En una reaccin acoplada catalizada por L-glutamato deshidrogenasa (GLDH), el amonio reacciona con 2-oxoglurato en presencia de Nicotinamida-adenina-dinucletido reducido (NADH)

para formar glutamato y NAD.

DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD DE LA 5 NUCLEOTIDASACausas de resultados anormalesComo ocurra con la GGT, la 5-NT normalmente se utiliza para determinar si los niveles de ALP tiene origen heptico u seo.Los niveles elevados de 5-NT se deben a trastornos colestsicos; sin embargo, la hepatitis aguda produce un ligero incremento.La 5-NT presenta niveles altos en el carcinoma ovrico y en la artritis reumatoide.La mayora de los agentes quelantes (como el EDTA), inhiben la actividad enzimtica.FOSFATASA ALCALINA (EC 3.1.3.1)FOSFATASA ALCALINA (ALP)La ALP representa a una familia de enzimas codificadas por diferentes genes.Las formas mas abundante de ALP estn codificadas por un nico gen en el cromosoma 1; produce la isoenzimas no especifica de tejido que se encuentra en rin, hgado y hueso.Dos genes del cromosoma 2 codifican la ALP de origen placentario e intestinal; otro la isoenzima denominada de clulas germinales o semejante a la placentaria (placental-like).

En las clulas la ALP se encuentra fundamentalmente unida a membranas.Los hepatocitos producen ALP heptica, unida a la superficie canalicular.Los osteoblastos producen ALP de hueso, implicada en la escisin del pirofosfato, un inhibidor de la mineralizacin sea.Las clulas del epitelio intestinal producen ALP intestinal, se libera al intestino despus de la ingestin de comidas grasas.

FOSFATASA ALCALINA (ALP)IMPORTANCIA CLINICADiferentes mecanismos de liberacin de ALP desde las clulas (distintas formas de ALP plasmtica).Se observa en suero una forma de ALP heptica; cuando existe dao hepatobiliar se pueden observar tanto el producto normal como la forma unida a membrana.La vida media de las isoenzimas de ALP vara unas de otras, conocer los niveles aumentados para evaluar la tasa de eliminacin: intestino, minutos; hueso, un da; hgado, tres das; placenta, siete das. La variacin diaria de ALP total oscila entre el 5% - 10%.

FOSFATASA ALCALINA (ALP)Mtodo de Referencia: Bowers yMcCombPunto Final Colorimtrico

p-nitrofenilo + H2O p-Nitrofenol + HPO42- + 2H+

p-NFp p-NfenolpH: 10.2 (alcalino)

La ALP hidroliza el p-NFp para formar el cromgeno amarillo p-Nfenol. El incremento en la absorbancia a 415nm es proporcional a la actividad de la fosfatasa alcalina.

DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD DE LA FOSFATASA ALCALINAALPALPMg ++Son las enfermedades del Hgado y Hueso.Los trastornos que causan Colestasis producen elevacin de ALP con mayor frecuencia que los trastornos Hepatocelulares.La actividad osteoblstica aumentada (enfermedad de Paget, osteosarcoma, tumores metastsicos y enfermedades metablicas de hueso) incrementa la isoenzima de hueso.Aumento de la ALP intestinal son normales en pacientes con diabetes, fallo renal y cirrosis.Causas de resultados anormalesConsideraciones GeneralesFundamentos y caractersticasInterpretacinPERFILPANCREATICO

GRACIAS POR SU ATENCION