Phytophthora palmivora obtenidos en la Zona...
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Caracterización morfológica y patogénica de aislamientos de Phytophthora palmivora obtenidos en la Zona Norte Introducción La Pudrición del cogollo (PC) causada por Phytophthora palmivora ha venido incrementándose en los últimos tres años en la Zona Norte de Colombia, alcanzando niveles altos de incidencia y severidad en focos. La forma como se manifiesta la enfermedad en las diferentes zonas es variable, motivo por el cual este estudio tiene como objetivo caracterizar morfológica y patogénicamente los aislamientos de P. palmivora obtenidos de palmas afectadas por esta patología en la Zona Norte. Metodología La caracterización morfológica se realizó mediante la siembra de los aislamientos CPPhZN-01, CPPhZN-02 y CPPhZN-03 en medios de cultivo agar V8 (AV8) y agar zanahoria (AZ) en los cuales se determinó el patrón cultural y la tasa de crecimiento. Se realizó la morfometría de los esporangios y las clamidosporas mediante de observaciones al microscopio de luz. La patogenicidad in vitro de cada aislamiento se realizó mediante inoculaciones en foliolos inmaduros de palma de aceite con una alícuota de 20 μl de una suspensión de 20.000 zoosporas/ml. En los folíolos se midió la longitud de las lesiones inducidas a las 48, 72 y 96 horas después de inoculación (DDI) y se cuantificó las estructuras en la zona de avance en seis campos de observación al microscopio 96 h DDI. Resultados En cuanto al patrón cultural los aislamientos CPPhZN-01 y CPPhZN-03 presentaron colonias estrelladas en los medios evaluados (Figura 1A), a diferencia del aislamiento CPPhZN-02 el cual mostró un patrón ligeramente radiado en el medio AV8 (Figura 1B). Figura 1. Patrón cultural de las colonias de P. palmivora en AV8 A. Patrón de CPPhZN-01y CPPhZN-03 . B. Patrón de CPPhZN-02. A B Figura 2. Tasa de crecimiento (mm/día) de los aislamientos de P. palmivora en los medios AZ y AV8. Aislamiento Esporangio Papila Pedicelo Largo (μm) Ancho (μm) L/A Largo (μm) Ancho (μm) L/A Largo (μm) CPPhZN-01 53,1 ± 7,5 33,2 ± 4,6 1,6 ± 0,2 6,5 ±1,4 7,2 ±1,1 0,9 ±0,2 3,9 ±1,0 CPPhZN-02 55,3 ±8,1 36,9 ± 6,1 1,5 ± 0,1 5,9 ±1,1 7,6 ±1,5 0,8 ±0,1 4,4 ±1,4 CPPhZN-03 65,3 ± 8,3 36,1 ± 4,9 1,8 ± 0,2 5,0 ±1,6 8,5±1,3 0,6 ±0,1 3,9 ± 1,0 Tabla 1. Morfometría de los esporangios de aislamientos de P. palmivora. n=50 Aislamiento Clamidospora Diámetro (μm) Mínimo Máximo Promedio CPPhZN-01 22,5 42,5 33,0±4,2 CPPhZN-02 25 45,1 36,2±5,3 CPPhZN-03 25 45,8 33,8±4,2 Tabla 2. Morfometría de las clamidosporas de aislamientos de P. palmivora. Referencias • ERWIN, D. C.; RIBEIRO, O. K. 1996. Phythophtora Diseases Wordwide. APS Press. The American Phytopathological Society. St. Paul, Minnesota. 562 p. • MARTÍNEZ, G.; SARRIA, G. A.; TORRES, G. A.; VARÓN, F. 2010. Phytophthora palmivora es el agente causal de la Pudrición del cogollo de la palma de aceite. Palmas 31 (No. Especial), 334 – 344. • SARRIA, G. A.; TORRES, G. A.; VELEZ, D.; RODRIGUEZ, J.; NOREÑA, C.; VARÓN, F.; COFFEY, M.; ELLIOTT, M.; MARTINEZ, G. 2008. Caracterización morfológica y molecular de Phytophthora palmivora agente causal de las lesiones iniciales de la Pudrición del cogollo (PC) de la palma de aceite en Colombia. Fitopatología colombiana 32 (2):39 – 44. Conclusiones El crecimiento de los aislamientos fue más rápido en el medio AZ, cubriendo el total de la superficie de la caja Petri 96 horas después de la siembra, con tasas de crecimiento entre 14 y 21 mm/día (Figura 2). Predominaron los esporangios ovoides (Figura 3), con promedios de longitud de 57,9 μm, ancho de 35,4 μm y relación largo/ancho de 1,6 μm, papilas de 5,8μm de longitud, 6,6μm de ancho y 0,7μm de relación largo/ancho y pedicelo de 4,1 μm de longitud (Tabla 1). Las clamidosporas presentaron un diámetro que varió entre 24,1μm y 44,5μm (Tabla 2), estos valores coinciden con el rango registrado para P. palmivora por Erwin y Ribeiro (1996), Martínez et al., 2010, Sarria et al., 2008. n=50 A C B Figura 4. Lesiones inducidas 96 horas después de la inoculación. A. CPPhZN-01. B. CPPhZN-02. C. CPPhZN-03. C B A Figura 3. Estructuras de P. palmivora. A y B. Esporangios. C. Clamidospora. En las inoculaciones in vitro, todos los aislamientos evaluados fueron patogénicos en foliolos inmaduros de palma de aceite, se observaron diferencias en la longitud de la lesión con promedios entre 17,87 y 45,39 mm (Figuras 4 y 5). Respecto al número de estructuras cuantificadas se registraron promedios de 5 esporangios y 1 clamidospora por campo microscópico, en 120 observaciones por aislamiento (Figura 6). Figura 5. Longitud de las lesiones inducidas por los aislamientos de P. palmivora. 0 5 10 15 20 25 CPPhZN-01 CPPhZN-02 CPPhZN-03 Tasa de crecimiento (mm/dias) Aislamientos Tasa de crecimiento AZ AV8 0 10 20 30 40 50 60 48 72 96 Longitud de lesión (mm) Horas después de la inoculación Virulencia in vitro CPPhZN-01 CPPhZN-02 CPPhZN-03 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 CPPhZN-01 CPPhZN-02 CPPhZN-03 N° de estructuras 96 hddi Cuantificación de estructuras 96 hddi Esporangios Clamidosporas Figura 6. Cuantificación de esporangios y clamidosporas por campo microscópico, 96 hddi. • Se observaron diferencias entre los aislamientos evaluados tanto en el aspecto morfométrico como patogénico. • El aislamiento CPPhZN-02 mostró mayor longitud de lesión y mayor producción de esporangios. Luisa Guzmán Sánchez, Franky Zúñiga Pérez, Francia Varón, Greicy Sarria Villa Programa de Plagas y Enfermedades –Área Fitopatología, [email protected]; [email protected]; Corporación Centro de Investigación en Palma de Aceite, Cenipalma
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Caracterización morfológica y patogénica de aislamientos de Phytophthora palmivora obtenidos en la Zona Norte
Introducción
La Pudrición del cogollo (PC) causada por Phytophthora palmivora havenido incrementándose en los últimos tres años en la Zona Norte deColombia, alcanzando niveles altos de incidencia y severidad en focos.La forma como se manifiesta la enfermedad en las diferentes zonas esvariable, motivo por el cual este estudio tiene como objetivocaracterizar morfológica y patogénicamente los aislamientos de P.palmivora obtenidos de palmas afectadas por esta patología en la ZonaNorte.
Metodología
La caracterización morfológica se realizó mediante la siembra de losaislamientos CPPhZN-01, CPPhZN-02 y CPPhZN-03 en medios de cultivoagar V8 (AV8) y agar zanahoria (AZ) en los cuales se determinó el patróncultural y la tasa de crecimiento. Se realizó la morfometría de losesporangios y las clamidosporas mediante de observaciones almicroscopio de luz.
La patogenicidad in vitro de cada aislamiento se realizó medianteinoculaciones en foliolos inmaduros de palma de aceite con una alícuotade 20 μl de una suspensión de 20.000 zoosporas/ml. En los folíolos semidió la longitud de las lesiones inducidas a las 48, 72 y 96 horasdespués de inoculación (DDI) y se cuantificó las estructuras en la zonade avance en seis campos de observación al microscopio 96 h DDI.
Resultados
En cuanto al patrón cultural los aislamientos CPPhZN-01 y CPPhZN-03presentaron colonias estrelladas en los medios evaluados (Figura 1A), adiferencia del aislamiento CPPhZN-02 el cual mostró un patrónligeramente radiado en el medio AV8 (Figura 1B).
Figura 1. Patrón cultural de las colonias de P. palmivora en AV8 A. Patrón de
CPPhZN-01y CPPhZN-03 . B. Patrón de CPPhZN-02.
A B
Figura 2. Tasa de crecimiento (mm/día) de los aislamientos de P. palmivora en los
medios AZ y AV8.
Aislamiento
Esporangio Papila Pedicelo
Largo
(µm)
Ancho
(µm)L/A
Largo
(µm)
Ancho
(µm)L/A
Largo
(µm)
CPPhZN-01 53,1 ± 7,5 33,2 ± 4,6 1,6 ± 0,2 6,5 ±1,4 7,2 ±1,1 0,9 ±0,2 3,9 ±1,0
CPPhZN-02 55,3 ±8,1 36,9 ± 6,1 1,5 ± 0,1 5,9 ±1,1 7,6 ±1,5 0,8 ±0,1 4,4 ±1,4
CPPhZN-03 65,3 ± 8,3 36,1 ± 4,9 1,8 ± 0,2 5,0 ±1,6 8,5±1,3 0,6 ±0,1 3,9 ± 1,0
Tabla 1. Morfometría de los esporangios de aislamientos de P. palmivora.
n=50
Aislamiento
Clamidospora
Diámetro (µm)
Mínimo Máximo Promedio
CPPhZN-01 22,5 42,5 33,0±4,2
CPPhZN-02 25 45,1 36,2±5,3
CPPhZN-03 25 45,8 33,8±4,2
Tabla 2. Morfometría de las clamidosporas de aislamientos de P. palmivora.
Referencias
• ERWIN, D. C.; RIBEIRO, O. K. 1996. Phythophtora Diseases Wordwide. APS Press. The American Phytopathological Society. St. Paul, Minnesota. 562 p.
• MARTÍNEZ, G.; SARRIA, G. A.; TORRES, G. A.; VARÓN, F. 2010. Phytophthora palmivora es el agente causal de la Pudrición del cogollo de la palma de aceite. Palmas 31 (No. Especial), 334 – 344.
• SARRIA, G. A.; TORRES, G. A.; VELEZ, D.; RODRIGUEZ, J.; NOREÑA, C.; VARÓN, F.; COFFEY, M.; ELLIOTT, M.; MARTINEZ, G. 2008. Caracterización morfológica y molecular de Phytophthora palmivora
agente causal de las lesiones iniciales de la Pudrición del cogollo (PC) de la palma de aceite en Colombia. Fitopatología colombiana 32 (2):39 – 44.
Conclusiones
El crecimiento de los aislamientos fue más rápido en el medio AZ,cubriendo el total de la superficie de la caja Petri 96 horas después de lasiembra, con tasas de crecimiento entre 14 y 21 mm/día (Figura 2).
Predominaron los esporangios ovoides (Figura 3), con promedios delongitud de 57,9 µm, ancho de 35,4 µm y relación largo/ancho de 1,6µm, papilas de 5,8µm de longitud, 6,6µm de ancho y 0,7µm de relaciónlargo/ancho y pedicelo de 4,1 µm de longitud (Tabla 1). Lasclamidosporas presentaron un diámetro que varió entre 24,1µm y44,5µm (Tabla 2), estos valores coinciden con el rango registrado para P.palmivora por Erwin y Ribeiro (1996), Martínez et al., 2010, Sarria et al.,2008.
n=50
A CB
Figura 4. Lesiones inducidas 96 horas después de la inoculación. A. CPPhZN-01. B. CPPhZN-02. C. CPPhZN-03.
CBA
Figura 3. Estructuras de P. palmivora. A y B. Esporangios. C. Clamidospora.
En las inoculaciones in vitro, todos los aislamientos evaluados fueron patogénicos en foliolosinmaduros de palma de aceite, se observaron diferencias en la longitud de la lesión conpromedios entre 17,87 y 45,39 mm (Figuras 4 y 5). Respecto al número de estructurascuantificadas se registraron promedios de 5 esporangios y 1 clamidospora por campomicroscópico, en 120 observaciones por aislamiento (Figura 6).
Figura 5. Longitud de las lesiones inducidas por los aislamientos de P. palmivora.
0
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CPPhZN-01 CPPhZN-02 CPPhZN-03
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Horas después de la inoculación
Virulencia in vitro
CPPhZN-01 CPPhZN-02 CPPhZN-03
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CPPhZN-01 CPPhZN-02 CPPhZN-03
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Cuantificación de estructuras 96 hddi
Esporangios Clamidosporas
Figura 6. Cuantificación de esporangios y clamidosporas por campo microscópico, 96 hddi.
• Se observaron diferencias entre los aislamientos evaluados tanto en el aspectomorfométrico como patogénico.
• El aislamiento CPPhZN-02 mostró mayor longitud de lesión y mayor producción deesporangios.
Luisa Guzmán Sánchez, Franky Zúñiga Pérez, Francia Varón, Greicy Sarria VillaPrograma de Plagas y Enfermedades –Área Fitopatología, [email protected]; [email protected];
Corporación Centro de Investigación en Palma de Aceite, Cenipalma
