Práctica 4: TECNICAS DE INOCULACIÓN DE PROTOZOARIOS

Para poder inocular y observar protozoarios y algunos de sus organelos, se tomó una muestra de agua de charco verdosa con vida, se hicieron algunas preparaciones en fresco con muestras de esta agua, estas se observaron con el microscopio y se identificó a que familia pertenecía el protozoario de la muestra que presento motilidad. Se inocularon en tres frascos por dos semanas, cada frasco con infusiones de (arroz, trigo y chícharo). Por último se observó en que medio crecieron más y se realizaron tinciones vitales para observar que organelos presentaban.

Resultados

Familia Ciliophora

Protozoario Tillina magna

Medio que prefirió Infusión de chícharo

Organelos

Análisis de resultados

Se buscó un charco con agua verdosa, olor a azufre y restos de materia orgánica para de él tomar ½ litro, esto con el objetivo de encontrar en esta protozoarios de vida libre.Nuestra agua no presento ningún rastro de vida, por lo que se le pidió a otro equipo que si había encontrado algo, un poco de su agua para trabajar con ella.

Ya que los protozoarios preferían estar en el fondo, todas las muestras que se tomaron con la pipeta Pasteur procuraron ser del fondo de la botella y se trató de evitar tomar materia orgánica junto con la muestra. Se colocó una gota de cada muestra tomada en un portaobjetos y se les puso encima un cubreobjetos, hecho esto se procedió a observar rápidamente en el microscopio con los aumentos de 10X y 40X ya que las preparaciones en fresco no duran mucho tiempo. Después de algunos intentos se consiguió observar motilidad por parte de algunos protozoarios, debido a que a estos no les agrada la luz, se tardaron en mostrar movimiento en lo que se encontró una cantidad de luz adecuada para enfocar adecuadamente y que no les disgustara tanto y se movieran.

Los protozoarios que se observaron presentaban cilios alrededor de toda su estructura casi esférica, por lo que pertenecen al grupo de los Ciliophora, con ayuda del manual de Microbiología se trató de identificar al protozoario que se observó, por su aspecto, forma y tamaño lo identificamos como Tallina magna, un protozoario ciliado y móvil.

Para su incubación, se prepararon tres infusiones, una con chícharo, una con arroz y otra con trigo. A tres frascos de gerber se les adiciono una tercera parte de su capacidad con el agua que tenía nuestra muestra con protozoarios, posteriormente se le agrego a cada frasco una tercera parte de su capacidad con una infusión distinta. Se taparon los frascos con una gasa en la parte superior para que se oxigenaran y se dejaron incubando en el laboratorio por una semana con baja luminosidad.

Al pasar la semana, se les hizo la primera revisión, tras realizar las preparaciones en fresco de cada frasco con el fin de ver si había un mayor desarrollo e incremento en la población, se notó que en el frasco con infusión de trigo no había crecimiento, en el frasco con infusión de arroz hubo un crecimiento ligero y en el frasco con infusión de chícharo si hubo un mayor desarrollo y cantidad de protozoarios, lo que nos indicó que estos habían preferido los nutrientes de esta infusión.

Nutrientes de la infusión de chícharo: antioxidantes, fibra, betacarotenos, lectina, hidratos de carbono,

vitaminas (C, A,E, B1 y B3), minerales (K, P, Na, Ca).

Nutrientes de la infusión de arroz:

Ácido fitíco, grasas saturadas, grasas monoinsaturadas, adenina, agua, guanina, alcohol, licopeno, cafeína, grasa, luteína, carbohidratos, proteínas, colesterol, purinas, quercetina, teobromina, fibra.

Nutrientes de la infusión de trigo: minerales (K, P, Mg, Fe, Zn), vitaminas (A, C, B1, B2, B3, B6, E), ácido fólico, grasas, agua.

Se les volvió a agregar más infusión a cada frasco, ya que por evaporación se había perdido algo durante la semana que se mantuvieron en incubación y se dejaron por otra semana en el laboratorio.

Al transcurrir la segunda semana, se procedió a observar algunos de sus organelos mediante tinciones vitales con 4 colorantes; Lugol (inclusiones de reserva), Verde de Janus (mitocondrias), Verde de metilo (núcleo) y Rojo neutro (vacuolas).Lamentablemente no se consiguió ver ninguno de los organelos debido a que no se consiguió observar a los protozoarios moviéndose, lo más probable es que ya habían muerto.

Conclusión

Se consiguió realizar adecuadamente la inoculación de protozoarios en tres medios distintos, los cuales eran infusiones de distintos vegetales. Así mismo se consiguió realizar preparaciones en fresco con nuestra muestra de agua y con ello observar e identificar al protozoario de la

muestra y decir a que familia pertenece. También se aplicaron los conocimientos teóricos aprendidos en clase para poder distinguir entre cada familia de protozoarios que hay y el uso de la técnica de tinción vital para observar los organelos de este grupo eucariótico.

BibliografíaManual de prácticas de microbiología

experimental (1515), F.Q, UNAM

Paginas consultadas por última vez el 06-09-14.

http://alimentos.org.es/nutrientes-arroz

http://www.achtli.com/node/365http://www.botanical-online.com/

propiedadestrigo.htm