Presentación de PowerPoint · Rosa Fuentes Isabel Olivares Cecilio López-Galindez María Pernas...
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Un escape en el epítopo EL9 en gp160 conduce a la progresión clínica en un
paciente LTNP HLA* B1402 tras 27 años de control
Ana Moyano, Nuria Pedreño, Oscar Blanch-Lombarte, Laura Tarancón, Tamara Alvaro, Concepción Casado, Isabel Olivares, Ezequiel Ruiz-
Mateos, Cecilio López-Galíndez, Julia G. Prado, María Pernas*.
GeSIDA 2019
Antecedentes
Control virológico
Control inmunológico
Progresión clínica en pacientes infectados por VIHCO 10
GeSIDA 2019
Antecedentes
Control por la respuesta de los linfocitos T CD8 citotóxicos (CTL)
Respuesta
GAGEscape
Fitness
Nuevas mutacione
Fitness
Respuesta
ENV EscapeFitness
CO 10
GeSIDA 2019
Antecedentes
%CD4 %CD8
Pendiente -0.7827 ± 0.1495 1.148 ± 0.2355
pValor < 0.0001 0,0001
r2 0,6037 0,5692
Pendiente -2.484 ± 0.2951 2.828 ± 0.6002
pValor 0,0002 0,0033
r2 0,9219 0,7872
VIH + 1986
Via de transmisión UDVI
Polimorfismos genéticos
asociados al control de
VIH-1
Características del
paciente
∆32pb en CCR5 Heterocigoto
Mutación V64L en CCR2 Negativo
Promotor de HLA-C Heterocigoto
HLA-B HLA-B44*03 y B14*02
CO 10
GeSIDA 2019
Objetivos
¿por qué se pierde el control tras 27 años de infección?
Factores virológicos.
Factores inmunológicos.
Respuesta T CD8
¿Emergencia de mutantes de escape en EL9 ?
¿Impacto sobre la fitness viral?
CO 10
GeSIDA 2019
Métodos y Resultados
Estudio de la evolución viral a lo largo del seguimiento del paciente
Análisis de la evolución viral Estimación de la diversidad Estimación de la divergencia (distancia al Ancestro Común más Reciente) Cálculo de mutaciones sinónimas/no sinónimas si ns/sin > 1 indica que la evolución está condicionada por la presión inmune
OR 10
EL9
GeSIDA 2019
Métodos y ResultadosOR 10
96
81
91
99
99
85
86
100
100
100
86
98
98
99
99
88
94
100
95
100
91 10097
85
86
98
88
100
100
0.0
01
AB1
B2
Análisis filogenético de la región c2-V5
Distribución de poblaciones virales durante el seguimiento
13 añosGeSIDA 2019
Evolución glo
Métodos y Resultados
Existe mayor número de mutaciones no sinónimas que sinónimas en la envuelta selección positiva En gag hay mayor número de mutaciones sinónimas Selección neutral (al azar)
18 20 22 24 26 28 30 32
0.05
0.10
0.15
Years after diagnosis
Ge
ne
tic
dis
tan
ce Env C2-V5dn
ds
18 20 22 24 26 28 30 32
0.05
0.10
0.15
Years after diagnosis
Dis
tan
ce t
o M
RC
A
Env c2-v5ds
dn
16 18 20 22 24 26 28 300.00
0.02
0.04
0.06
0.08
0.10
Years after diagnosis
Ge
ne
tic
dis
tan
ce
Gagds
dn
16 18 20 22 24 26 28 300.00
0.02
0.04
0.06
0.08
0.10
Years after diagnosis
Dis
tan
ce t
o M
RC
A
Gagds
dn
Diversidad
Divergencia
OR 10
Estudio de la evolución viral durante el seguimiento
AB
1B
2
-5
0
5
1 0
1 5
Me
an
div
ers
ity
wit
hin
gro
up
s
<0.0001
<0.0001
AB
1B
2
0
5
1 0
1 5
Me
an
dis
tan
ce
to
MR
CA
<0.0001
<0.0001
Evolución de las variantes Análisis de selección en gag y env de la variante B2GeSIDA 2019
Métodos y ResultadosMutaciones en los epítopos inmunoddominantes para el HLA B*1402
OR 10
B
V clone (date)
A-42(09-2005) DRFYKTLRA
B2-7(03-2004) .........
B2-8(03-2004) .........
B2-43(09-2005) .........
B2-46(09-2005) .........
B2-49(09-2005) .........
B2-51(09-2005) .........
B2-42(06-2006) .........
B2-47(06-2006) .........
B2-5(06-2006) .........
B2-6(06-2006) .........
B2-7(06-2006) .........
B2-5(05-2010) .........
B2-7(05-2010) .........
B2-6(05-2010) .........
B2-43(05-2011) .........
B2-44(05-2011) .........
B2-46(05-2011) .........
B2-47(05-2011) .........
B2-48(05-2011) .........
B2-49(05-2011) .........
B2-50(05-2011) .........
B2-51(05-2011) .........
B2-12(10-2013) .........
B2-5(10-2013) .........
B2-6(10-2013) .........
B2-7(05-2011) .........
B2-8 (05-2011) .........
B2-17(04-2015) ....R....
B2-7(04-2015) .........
B2-26(12-2015) .........
B2-27(12-2015) .........
B2-42(12-2015) .........
B2-43(12-2015) .........
B2-53(12-2015) .........
B2-59(12-2015) .........
B2-62(12-2015) .........
B2-8(12-2015) .........
A 58
8
59
2
V clone(date)
A-1 (04-2006) ERYLKDQQLL
B1-4(03-2004) ...V......
B1-3(04-2006) ........R.
B2-3 (05-2011) ........R.
B2-1 (05-2011) ........R.
B2-11(05-2012) ........R.
B2-10(05-2012) ........R.
B2-4 (05-2012) ........R.
B2-8 (05-2012) ........R.
B2-7 (05-2012) ........R.
B2-6 (05-2012) ........R.
B2-5 (05-2012) ........R.
B2-8 (05-2012) ........R.
B2-6 (05-2012) ........R.
B2-10(10-2014) ........R.
B2-12(10-2014) ........R.
B2-14(10-2014) ........R.
B2-11(10-2014) ....R...R.
B2-20(10-2014) ....R...R.
B2-15(10-2014) ....R...R.
B2-3 (10-2014) ....R...R.
B2-10(12-2015) ....R...R.
B2-51(12-2015) ....R...R.
B2-45(12-2015) ....R...R.
B2-42(12-2015) ....R...R.
A
B
B1
B2
EL9 wt
EL9 592R
EL9 588R 592R
DA9 (wt)GeSIDA 2019
Métodos y ResultadosMutaciones en los epítopos inmunoddominantes para el HLA B*1402
OR 10
B
V clone (date)
A-42(09-2005) DRFYKTLRA
B2-7(03-2004) .........
B2-8(03-2004) .........
B2-43(09-2005) .........
B2-46(09-2005) .........
B2-49(09-2005) .........
B2-51(09-2005) .........
B2-42(06-2006) .........
B2-47(06-2006) .........
B2-5(06-2006) .........
B2-6(06-2006) .........
B2-7(06-2006) .........
B2-5(05-2010) .........
B2-7(05-2010) .........
B2-6(05-2010) .........
B2-43(05-2011) .........
B2-44(05-2011) .........
B2-46(05-2011) .........
B2-47(05-2011) .........
B2-48(05-2011) .........
B2-49(05-2011) .........
B2-50(05-2011) .........
B2-51(05-2011) .........
B2-12(10-2013) .........
B2-5(10-2013) .........
B2-6(10-2013) .........
B2-7(05-2011) .........
B2-8 (05-2011) .........
B2-17(04-2015) ....R....
B2-7(04-2015) .........
B2-26(12-2015) .........
B2-27(12-2015) .........
B2-42(12-2015) .........
B2-43(12-2015) .........
B2-53(12-2015) .........
B2-59(12-2015) .........
B2-62(12-2015) .........
B2-8(12-2015) .........
A 58
8
59
2
V clone(date)
A-1 (04-2006) ERYLKDQQLL
B1-4(03-2004) ...V......
B1-3(04-2006) ........R.
B2-3 (05-2011) ........R.
B2-1 (05-2011) ........R.
B2-11(05-2012) ........R.
B2-10(05-2012) ........R.
B2-4 (05-2012) ........R.
B2-8 (05-2012) ........R.
B2-7 (05-2012) ........R.
B2-6 (05-2012) ........R.
B2-5 (05-2012) ........R.
B2-8 (05-2012) ........R.
B2-6 (05-2012) ........R.
B2-10(10-2014) ........R.
B2-12(10-2014) ........R.
B2-14(10-2014) ........R.
B2-11(10-2014) ....R...R.
B2-20(10-2014) ....R...R.
B2-15(10-2014) ....R...R.
B2-3 (10-2014) ....R...R.
B2-10(12-2015) ....R...R.
B2-51(12-2015) ....R...R.
B2-45(12-2015) ....R...R.
B2-42(12-2015) ....R...R.
A
B
B1
B2
EL9 wt
EL9 592R
EL9 588R 592R
DA9 (wt)Respuesta frente a los epítopos homólogos
05/2012
GeSIDA 2019
ResultadosCambios inmunidadd asociados la respuesta T CD8
Respuesta frente al epítopo wt disminuye con el tiempo Calidad de la respuesta frente a EL9 env cambia antes y
después de la pérdida de control y es diferente en DA9 gag
OR 10
POLIFUNCIONALIDAD1g/ml
Nov 2006
May 2
010
May 2
011
Sep 2
015
Oct 2
0150
200
400
600
800
1000EL9
DA9EL9 592R
IFN
SF
C p
er
millio
n P
BM
C
Jun 2
006
Nov 2006
May 2
010
May 2
011
Oct 2
014
April 2
015
Oct 2
015
Dec 2015
0
1
2
3EL9EL9 592REL9 588R 592RDA9
2g/ml
% IF
N
+ C
D8 s
pecif
ic T
-cells
ELISPOT
Citoinmunomarcaje
GeSIDA 2019
Métodos y resultadosImpacto de la mutación K588R sobre la capacidad replicativa
Obtención de pseudovirus
PseudoVirus
InfecciónLuciferasa
RLU
L592R
Mutagénesis
L592RK588R
L592R
L592R +
K588R 0
5×105
1×106
1.5×106
Un
idad
es r
ela
tiv
as
de
lu
z (R
LU
)
P=0.019
El doble mutante presenta un incremento de 6 veces la capacidad replicativa del mutante L592R
Ensayo de capacidad replicativa en células TZM
OR 10
GeSIDA 2019
I. Paciente muestra una respuesta inmuno-dominante frente al epítopo EL9.
II. A pesar de que el mutante de escape L592R es mayoritario en la población viral, el
paciente es capaz de controlar la infección.
III. Pérdida de respuesta frente EL9 se asocia con la selección del doble mutante L592R+
588R con mayor capacidad replicativa.
IV. Existe una importante contribución de la respuesta T citotóxica frente a EL9 en el control
del VIH-1 en este paciente.
ConclusionesOR 10
GeSIDA 2019
@riscomunica
Entidades financiadoras
Ana MoyanoNuria PedreñoTamara AlvaroConcepción CasadoRosa FuentesIsabel OlivaresCecilio López-GalindezMaría Pernas
Julia Garcia-Prado Oscar Blanch
Carmen RodriguezJorge del RomeroMar Vera
Laura TarancónEzequiel Ruiz Mateos
GeSIDA 2019