ANLISIS DE LAS PROTENASCONSIDERACIONESGENERALES

PROTENASSON COMPONENTES ABUNDANTES EN TODAS LAS CLULAS.

CASI TODAS (EXCEPTO LAS DE ALMACENAMIENTO) SON IMPORTANTES PARA LAS FUNCIONES BIOLGICAS Y/O LA ESTRUCTURA CELULAR.

LAS PROTENAS DE LOS ALIMENTOS SON MUY COMPLEJAS.

COMPOSICIN DE LAS PROTENASESTN CONSTITUDAS POR: HIDRGENO, CARBONO, NITRGENO, OXGENO Y AZFRE.

LOS BLOQUES DE CONSTRUCCIN DE LAS PROTENAS SON 20 -AMINOCIDOS.

LAS UNIONES ENTRE RESIDUOS DE AMINOCIDOS EN UNA PROTENA SON ENLACES PEPTDICOS.

COMPOSICIN DE LAS PROTENASEL NITRGENO ES EL ELEMENTO MS DISTINTIVO PRESENTE EN LAS PROTENAS.

GENERALMENTE LAS PROTENAS RICAS EN AMINOCIDOS BSICOS CONTIENEN MS NITRGENO.

SIN EMBARGO, EL CONTENIDO DE NITRGENO EN VARIAS PROTENAS ALIMENTICIAS VARA DE 13.4 19.1% DEBIDO A LA VARIACIN EN LA COMPOSICIN DE AMINOCIDOS ESPECFICA DE LAS PROTENAS.

CLASIFICACIN DE LAS PROTENASCOMPOSICIN

ESTRUCTURA

FUNCIN BIOLGICA

PROPIEDADES DE SOLUBILIDAD

COMPLICACIONES EN ELANLISIS DE PROTENASCARACTERSTICAS FSICO QUMICAS DE LOS ALIMENTOS SIMILARES A LOS DE LAS PROTENAS

FUENTES DE NITRGENO NO PROTICOAMINOCIDOS LIBRESPEQUEOS PPTIDOSCIDOS NUCLICOSFOSFOLPIDOSAZCARES AMINASPORFIRINAALGUNAS VITAMINAS

FUENTES DE NITRGENONO PROTICOALCALOIDESCIDO RICOUREAIONES DE AMONIO

OTROS MACROCOMPONENTES DE LOS ALIMENTOS QUE PUEDEN INTERFERIR CON EL ANLISIS DE PROTENASLPIDOS

CARBOHIDRATOS

MTODOS DESARROLLADOS PARA MEDIR EL CONTENIDO PROTICOFUNDAMENTOS:DETERMINACIONES DE NITRGENOENLACES PEPTDICOSCIDOS AROMTICOSABSORTIVIDAD UV DE LAS PROTENASGRUPOS AMINO LIBRESPROPIEDADES DE DISPERSIN DE LA LUZCAPACIDAD DE ADHESIN DE COLORANTES

IMPORTANCIA DEL ANLISISDE PROTENASDETERMINACIN DE ACTIVIDAD BIOLGICA. EJEMPLO: PECTINASAS DURANTE LA MADURACIN DE FRUTOS.INVESTIGACIN SOBRE PROPIEDADES FUNCIONALES. EJMPLO: GLIADINA Y GLUTENINAS PARA LA ELABORACIN DEL PAN.ETIQUETAMIENTO NUTRICIONAL

NECDESIDAD DEL ANLISIS DE PROTENASCONTENIDO PROTICO TOTALCOMPOSICIN DE AMINOCIDOSCONTENIDO DE ALGUNA PROTENA PARTICULAR EN UNA MEZCLACONTENIDO PORTECO DURANTE EL AISLAMIENTO Y PURIFICACIN DE UNA PROTENANITRGENO NO PROTICOVALOR NUTRITIVO DE UNA (DIGESTIBILIDAD, BALANCE PROTICO)

CONTENIDO PROTICOEN LOS ALIMENTOSPRODUCTOS LCTEOS LECHE ENTERA 3.5%LECHE DESHIDRATADA DESGRASADA 35.9% QUESO CHEDDAR 25%

HUEVOS 12.9%

CONTENIDO PROTICO EN LOS ALIMENTOSCARNES RES, BISTEAK, MAGRO CON GRASA 28.6%PUERCO, MAGRO CON GRASA, DESHUESADO 17.1%PECHUGA DE POLLO 27.3%PESCADO BACALAO COCINADO 28.5%ATN EN ACEITE ENLATADO 24.2%

CONTENIDO PROTICO EN LOS ALIMENTOSCEREALES ARROZ, INTEGRAL, CRUDO 7.5% ARROZ REFINADO, CRUDO 6.7%HARINA DE TRIGO INTEGRAL 13.3%HARINA DE MAZ 7.8%SPAGHETTI, SECO 12.5%ALMIDN DE MAZ 0.3%

CONTENIDO PROTICO ENLOS ALIMENTOSFRUTAS Y VEGETALES PAPA ENTERA, CRUDA 1.6% ESPRRAGOS VERDES 2.5% TAPIOCA 0.6%FRIJOLES, SECOS, TODAS LAS VARIEDADES 22.3%SOYA SECA 34.1%

CONTENIDO PROTICO EN LOSALIMENTOSFRUTAS Y SEMILLAS MANZANA ENTERA, CRUDA 0.2%

ALMENDRAS ENTERAS 18.6%

MTODOS DE DETERMINACINDE PROTENASMTODO DE KJELDAHLMTODO DE BIURETMTODO DE LOWRYMTODO DEL CIDO BICINCONNICO (BCA)MTODO DE ABSORCIN UV A 280nmMTODO DE ADHESIN DE COLORANTEMTODO DE BRADFORDMTODO DE LA NINHIDRINAMTODO TURBIDIMTRICO

MTODO DE KJELDAHL(JOHANN KJELDAHL, 1883)DIGESTIN CON H2SO4 CON LA ADICIN DE PERMANGANATO DE POTASIO PARA COMPLETAR LA OXIDACIN Y CONVERSIN DEL NITRGENO A SULFATO DE AMONIO.

NEUTRANLIZACIN DE LA DIGESTA DILUIDA, SEGUIDA DE UNA DESTILACIN EN UN VOLUMEN CONOCIDO DE CIDO ESTNDAR CON UN CONTENIDO DE IODURO DE POTASIO E YODATO.

TITULACIN DEL YODO LIBERADO CON TIOSULFATO DE SODIO ESTNDAR

MODIFICACIONES PARA EL MEJORAMIENTO DEL MTODO DE KJELDAHLSE HAN AADIDO CATALIZADORES COMO: Hg, Cu, Se, Ti AL H2SO4 PARA LOGRAR UNA DIGESTIN COMPLETA. EL DIXIDO DE SELENIO Y EL SULFATO DE COBRE EN PROPORCIN 3:1 SON MUY EFECTIVOS EN LA DIGESTIN.

MODIFICACIONES PARA EL MEJORAMIENTO DEL MTODO DE KJELDAHLEL SULFATO DE POTASIO SE UTILIZA PARA AUMENTAR EL PUNTO DE EBULLICIN DEL CIDO SULFRICO PARA ACELERAR LA DIGESTIN.

EL SULFURO O TIOSULFATO DE SODIO SE AADEN A LA DIGESTA DILUIDA PARA AYUDAR A LIBERAR EL NITRGENO DEL Hg EL CUAL TIENDE A ADHERIR AMONIO.

MODIFICACIONES PARA EL MEJORAMIENTO DEL MTODO DE KJELDAHLEL AMONIACO SE DESTILA DIRECTAMENTE EN UNA SOLUCIN DE CIDO BRICO Y ES SEGUIDO DE UNA TITULACIN CON UN CIDO ESTNDAR.

SE UTILIZAN LA COLORIMETRA Y LA CROMATOGRAFA INICA PARA DETERMINAR EL CONTENIDO DE NITRGENO POSTERIOR A LA DIGESTIN.

PROCEDIMIENTO GENERALY REACCIONESDIGESTIN

EL SULFATO DE AMONIO NO VOLTIL SE FORMA DE LA REACCIN DEL NITRGENO Y EL CIDO SULFRICO.

DURANTE LA DIGESTIN SE LIBERA EL NITRGENO PROTICO PARA FORMAR IONES DE AMONIO.

EL CIDO SULFRICO OXIDA LA MATERIA ORGNICA Y SE COMBINA CON EL AMONIO FORMADO.

DIGESTINLOS ELEMENTOS CARBONO E HIDRGENO SE CONVIERTEN EN DIXIDO DE CARBONO Y AGUA

NEUTRALIZACIN Y DESTILACINLA MUESTRA DIGERIDA SE DILUYE CON AGUA.

SE AADE EL LCALI QUE CONTIENE TIOSULFATO DE SODIO PARA NEUTRALIZAR AL CIDO SULFRICO.

EL AMONACO FORMADO SE DESTILA EN UNA SOLUCIN DE CIDO BRICO QUE CONTIENE LOS INDICADORES AZL DE METILENO Y ROJO DE METILO.

REACCIONES DE LANEUTRALIZACIN Y LA DESTILACIN(NH)2SO4+ 2NaOH 2NH3+Na2SO4+2H2O

NH3+ H3BO3 NH4 + H2BO3- (cido brico) (in borato)

REACCIONES DE LATITULACINEL ANIN BORATO (PROPORCIONAL A LA CANTIDAD DE NITRGENO) SE TITULA CON HCl ESTANDARIZADO:

H2BO3- + H+ H3BO3

CLCULOS

MOLES DE HCl = MOLES DE NH3 = MOLES DE NITRGENO EN LA MUESTRA

FUNCIN DEL BLANCO EN LA DETERMINACIN DE PROTENASSE DEBE UTILIZAR UN BLANCO CON REACTIVOS PARA SUSTRAER EL NITRGENO REACTIVO DEL NITRGENO DE LA MUESTRA.

N HCl = NORMALIDAD DEL HCl EN MOLES /1000 mLVOL. CIDO CORREGIDO = mL DE CIDO ESTNDAR PARA LA MUESTRA) (mL DE CIDO ESTNDAR PARA EL BLANCO)14 = PESO ATMICO DEL NITRGENO

%N = N HCl X VOLUMEN DE CIDCORR. g. DE MUESTRA X 14g N2 X 100 MOL

FACTORSE UTILIZA UN FACTOR DE CONVERSIN DE % DE N2 A % DE PROTENA CRUDA.LA MAYORA DE LAS PROTENAS CONTIENEN 16% DE N2EL FACTOR DE CONVERSIN ES: 6.25 (100/16 = 6.25)

%N2 X 6.25 = %PROTENA

%N2 = %PROTENA 0.16

FACTORES DE CONVERSINPARA ALGUNOS ALIMENTOSALIMENTO %N2PROTENA FACTORHUEVO O 16 6.25CARNE, MAZ LECHE 15.7 6.38TRIGO 18 5.7SOYA 17.51 5.71AVENA 17.15 5.83

PROCEDIMIENTOS ALTERNATIVOS DE DESTILACIN Y TITULACINNESSLERIZACINNH4OH + 2HGI2+ 2KI + 3KOH NH4Hg2I +7KI + 4H2O ( rojo-naranja, 440nm)

RPIDO Y FCIL PERO EL IODURO DIMERCRICO DE AMONIO ES COLOIDE Y EL COLOR ES INESTABLE

PROCEDIMIENTOS ALTERNATIVOS DE DESTILACIN Y TITULACINMEDICIN DEL pH POSTERIOR A LA DESTILACIN EN UN VOLUMEN CONOCIDO DE CIDO BRICO

MEDICIN DIRECTA DEL AMONACO, MEDIANTE EL MTODO DE CROMATOGRAFA INICA

VENTAJAS DEL MTODO DE KJELDAHLAPLICABLE A TODO TIPO DE ALIMENTOSRELATIVAMENTE SIMPLEBARATOPRECISOES EL MTODO OFICIAL PARA MEDIR EL CONTENIDO DE PROTENA CRUDA

DESVENTAJAS DEL MTODODE KJELDAHLMIDE EL NITRGENO ORGNICO TOTAL, NO SLO EL NITRGENO PROTICOCONSUME MUCHO TIEMPO (AL MENOS 2 HORAS PARA COMPLETARSE)PRECISIN MS POBRE QUE EL MTODO DE BIURETUSA REACTIVOS CORROSIVOS

DETERMINACIN DE PROTENAS POR EL MTODO DE BIURETFUNDAMENTO

AL FORMAR COMPLEJOS LOS IONES CPRICOS CON LOS ENLACES PEPTDICOS DE LAS PROTENAS SE PRODUCE UN COLOR VIOLETA-MORADO BAJO CONDICIONES ALCALINAS.

LA ABSORBANCIA DEL COLOR PRODUCIDO ES LEDO A 540nm.

LA INTENSIDAD DEL COLOR (ABSORBANCIA) ES PROPORCIONAL AL CONTENIDO PROTICO DE LA MUESTRA.

PROCEDIMIENTO PARA ELMTODO DE BIURET5 mL DE REACTIVO DE BIURET SE MEZCLA CON 1mL DE SOLUCIN PROTICA (1-10 mg DE PROTENA/mL).

EL REACTIVO INCLUYE SULFATO DE COBRE, NaOH, Y TARTRATO DE SODIO Y POTASIO EL CUAL SE UTILIZA PARA ESTABILIZAR EL IN COBRE EN LA SOLUCIN ALCALINA

PROCEDIMIENTO PARA ELMTODO DE BIURETDESPUS DE REPOSO A TEMPERATURA AMBIENTE DURANTE 15 A 30 MINUTOS, SE LEE LA ABSORBANCIA A 540nm CONTRA UN BLANCO CON SLO REACTIVO.

SI LA REACCIN NO ES CLARA DEBE CENTRIFUGARSE LA MUESTRA PREVIO A LA LECTURA DE LA ABSORBANCIA

PROCEDIMIENTO PARA ELMTODO DE BIURETSE DEBE ELABORAR UNA CURVA ESTNDAR DE CONCENTRACIN VS ABSORBANCIA UTILIZANDO ALBMINA DE SUERO DE BOVINO (BSA) PARA COMPARACIN CON LA MUESTRA BAJO ESTUDIO

VENTAJAS DEL MTODO DE BIURETMENOS CARO QUE EL MTODO DE KJELDAHLRPIDO (SE PUEDE COMPLETAR EN MENOS DE 30 MINUTOS)ES EL MTODO MS SIMPLE DE ANLISIS DE PROTENASNO ES FRECUENTE ENCONTRAR DERIVACIONES DE COLORPOCAS SUBSTANCIAS NO PROTICAS INTERFIEREN CON LA REACCIN DE BIURETNO DETECTA N2 DE FUENTES NO PROTICAS O NO PEPTDICAS

DESVENTAJAS DEL MTODO DEBIURETNO ES MUY SENSIBLE COMPARADO CON EL MTODO DE LOWRYREQUIERE DE AL MENOS 2 A 4 mg DE PROTENA POR PRUEBALAS CONCENTRACIONES ALTAS DE SALES DE AMONIO INTERFIEREN CON LA REACCIN PUEDE OCURRIR OPALESCENCIA EN LA SOLUCIN FINAL SI ESTN PRESENTES ALTAS CONCENTRACIONES DE LPIDOS O CARBOHIDRATOSDEBE ESTANDARIZARSE EL COLOR MEDIANTE CANTIDADES DE PROTENA CONOCIDAS

MTODO DE LOWRYFUNDAMENTO COMBINA LA REACCIN DE BIURET CON LA REDUCCIN DEL REACTIVO DE FENOL FOLIN-CIOCALTEAU (CIDO FOSFOMOLBDICO-FOSFOTNGSTICO) POR LOS RESIDUOS DE TIROSINA Y TRIPTOFANO DE LAS PROTENAS. EL COLOR AZULOSO DESARROLLADO ES LEDO A 750nm (ALTA SENSIBILIDAD PARA UNA CONCENTRACIN PROTICA BAJA) O A 500nm (ALTA SENSIBILIDAD PARA UNA CONCENTRACIN PROTICA ALTA)

VENTAJAS DEL MTODO DE LOWRYMUY SENSIBLEMENOS AFECTADO POR LA TURBIDEZ DE LA MUESTRA MS ESPECFICO QUE LA MAYORA DE LOS OTROS MTODOSRELATIVAMENTE SIMPLESE PUEDE COMPLETAR EN 1 A 1.5 HORAS

DESVENTAJAS DEL MTODO DELOWRYEL COLOR VARA CON DIFERENTES PROTENAS (MS QUE EL MTODO DE BIURET)

EL COLOR NO ES ESTRICTAMENTE PROPORCIONAL A LA CONCENTRACIN DE PROTENAS

LA SACAROSA, LPIDOS, BUFFERS FOSFATO, MONOSACRIDOS Y HEXOAMINAS INTERFIEREN CON LA REACCIN

LAS ALTAS CONCENTRACIONES DE AZCARES REDUCTORES, SULFATO DE AMONIO Y COMPUESTOS CON SULFHIDRILO INTERFIEREN CON LA REACCIN

MTODO DEL CIDO BICINCONNICO (BCA)FUNDAMENTO SE BASA EN EL PRINCIPIO DE QUE LAS PROTENAS REDUCEN LOS IONES CPRICOS A IONES CUPROSOS BAJO CONDICIONES ALCALINAS. LOS IONES CUPROSOS REACCIONAN CON EL BCA (VERDOSO) PARA FORMAR UN COLOR MORADO. EL COLOR FORMADO ES PROPORCIONAL AL CONTENIDO PROTICO DE LA MUESTRA

VENTAJAS DEL MTODO DEL CIDO BICINCONNICO (BCA)SENSIBILIDAD COMPARABLE A LA DEL MTODO DE LOWRY (0.5mg a 10mg)

LA MEZCLA EN UN PASO ES MS FCIL QUE EN EL MTODO DE LOWRY

EL REACTIVO ES MS ESTABLE QUE EL REACTIVO DE LOWRY

LAS SALES DE BUFFER Y DETERGENTE NO INICO NO INTERFIEREN CON LA REACCIN

LAS CONCENTRACIONES DEL MEDIO DE REACTIVOS DESNATURALIZANTES NO INTERFIEREN (GUANIDINA 4M-HCl O UREA 3M)

DESVENTAJAS DEL MTODO DELCIDO BICINCONNICO (BCA)EL COLOR NO ES ESTABLE CON EL TIEMPO. SE NECESITA CONTROLAR CUIDADOSAMENTE EL TIEMPO ENTRE EL ANLISIS Y LA LECTURA EN ABSORBANCIA.

LOS AZCARES REDUCTORES INTERFIEREN CON LA REACCIN.

ALTAS CONCENTRACIONES DE SULFATO DE AMONIO INTERFIEREN CON LA REACCIN.

LA RESPUESTA EN LA ABSORBANCIA NO ES LINEAL

MTODO DE ABSORCIN EN ULTRAVIOLETA A 280nmFUNDAMENTO

LAS PROTENAS MUESTRAN UN FUERTE GRADO DE ABSORCIN A 280nm EN UV, PRINCIPALMENTE DEBIDO PRINCIPALMENTE A LOS RESIDUOS DE TRIPTOFANO Y LA TIROSINA DE LAS PROTENAS. YA QUE LAS CONCENTRACIONES DE ESTOS AMINOCIDOS EN LAS PROTENAS ES FRANCAMENTE CONSTANTE SE PUEDE UTILIZAR LA ABSORBANCIA A 280nm PARA ESTIMAR LA CONCENTRACIN DE PROTENAS USANDO LA LEY DE BEER

MTODO DE ABSORCIN EN ULTRAVIOLETA A 280nmFUNDAMENTO DADO QUE CADA PROTENA TIENE UNA COMPOASICIN NICA DE AMINOCIDOS AROMTICOS, EL COEFICIENTE DE EXTINCIN (E280) O SU ABSORTIVIDAD MOLAR (Em) DEBEN SER DETERMINADOS PARA PROTENAS INDIVIDUALES PARA LA ESTIMACIN DEL CONTENIDO PROTICO

VENTAJAS DEL MTODO DE ABSORCIN EN UV (280nm)MTODO RPIDO Y RELATIVAMENTE SENSIBLE (VARIAS VECES MS SENSIBLE QUE EL MTODO DE BIURET)NO EXISTE INTERFERENCIA DEL SULFATO DE AMONIO Y OTRAS SALES BUFFERMTODO NO DESTRUCTIVOUTILIZADO EN DETECCIN POST-COLUMNA DE LAS PROTENAS

DESVENTAJAS DEL MTODO DE ABSORCIN EN EL UV (280nm)LOS CIDOS NUCLICOS TAMBIN ABSORBEN EN LA REGIN DE 280nm EL CONTENIDO DE AMINOCIDOS AROMTICOS DIFIERE CONSIDERABLEMENTE EN VARIAS PROTENAS.LA SOLUCIN DEBE SER CLARA E INCOLORA. LA TURBIDEZ PUEDE PRODUCIR RESULTADOS ERRTICOSSE REQUIERE UN SISTEMA RELATIVAMENTE PURO PARA UTILIZAR ESTE MTODO

MTODOS DE DETERMINACIN DE PROTENAS POR ADHESIN DE UN COLORANTE

ADHESIN DE COLORANTE ANINICO

MTODO DE BRADFORD

ADHESIN DE COLORANTEANINICOFUNDAMENTO LA MUESTRA PROTICA SE MEZCLA CON UNA CANTIDAD EXCESIVA CONOCIDA DE UN COLORANTE ANINICO EN UNA SOLUCIN BUFFER.

LAS PROTENAS SE UNEN AL COLORANTE PARA FORMAR UN COMPLEJO INSOLUBLE.

ADHESIN DE COLORANTEANINICOFUNDAMENTO SE MIDE EL COLORANTE NO ADHERIDO, SOLUBLE POSTERIOR A LA EQUILIBRACIN DE LA REACCIN Y LA REMOCIN DEL COMPLEJO INSOLUBLE POR CENTRIFUGACIN Y FILTRACIN. EL COLORANTE NO ADHERIDO EST INVERSAMENTE RELACIONADO AL CONTENIDO PROTICO DE LA MUESTRA

ADHESIN DE COLORANTEANINICOFUNDAMENTO

PROTENA + EXCESO DE COLORANTE COMPLEJO PROTENA-COLORANTE INSOLUBLE + COLORANTE NO ADHERIDO SOLUBLE

COLORANTES UTILIZADOS EN ESTE MTODOCIDO SULFNICO ANINICO NARANJA CIDO 12 NARANJA G NEGRO AMIDO 10B

UNEN GRUPOS CATINICOS DE LOS RESIDUOS BSICOS DE AMINOCIDOS (IMIDASOL DE LA HISTIDINA, GUANIDINA DE LA ARGININA Y EL GRUPO -AMINO DE LA LISINA) Y EL GRUPO LIBRE TERMINAL AMINO DE LAS PROTENAS.

VENTAJAS DEL MTODO DE ADHESIN DE COLORANTE ANINICOMTODO RPIDO (15 MINUTOS O MENOS)BARATORELATIVAMENTE EXACTO PARA EL ANLISIS DE PROTENAS EN ALIMENTOSPUEDE UTILIZARSE PARA ESTIMAR LOS CAMBIOS EN EL CONTENIDO DE LISINA DISPONIBLE DE LOS CEREALES DURANTE SU PROCESAMIENTO.

VENTAJAS DEL MTODO DE ADHESIN DE COLORANTE ANINICO

NO UTILIZA REACTIVOS CORROSIVOSNO MIDE NITRGENO NO PROTICOMS PRECISO QUE EL MTODO KJELDAHL

DESVENTAJAS DEL MTODO DE LA ADHESIN DEL COLORANTE ANINICOLAS PROTENAS DIFIEREN EN SU CONTENIDO DE AMINOCIDOS BSICOS DIFIEREN EN SU CAPACIDAD DE ADHESIN DEL COLORANTE

SE NECESITA ELABORAR CURVA DE CALIBRACIN

MUCHOS COMPONENTES NO PROTICOS TAMBIN SE PUEDEN ADHERIR AL COLORANTE (ALMIDN), METALES (Ca O P) Y CAUSAR ERRORES EN LOS RESULTADOS

MTODO DE BRADFORDFUNDAMENTO

EL AZL BRILLANTE G-250 COOMASSIE SE ADHIERE A LA PROTENA, EL COLORANTE SE TORNA DE ROJIZO A AZULADO YE L MXIMO DE ABSORCIN DEL COLORANTE CAMBIA DE 465 A 595nm. EL CAMBIO EN LA ABSORBANCIA A 595nm ES PROPORCIONAL A LA CONCENTRACIN DE PROTENA EN LA MUESTRA.

VENTAJAS DEL MTODO DE BRADFORDMTODO RPIDO (LA REACCIN SE PUEDE COMPLETAR EN 2 MINUTOS)

REPRODUCIBLE

SENSIBLE (MUCHO MS QUE EL MTODO DE LOWRY)

NO EXISTE INTERFERENCIA DE CATIONES COMO K+, Na+, Y Mg+

VENTAJAS DEL MTODO DE BRADFORDNO EXISTE INTERFERENCIA DEL SULFATO DE AMONIO

NO EXISTE INTERFERENCIA DE LOS POLIFENOLES NI CARBOHIDRATOS COMO LA SACAROSA

MIDE PROTENA O PPTIDOS CON UNA MASA MOLECULAR APROXIMADAMENTE IGUAL O MAYOR DE 4 000 DALTONS

DESVENTAJAS DEL MTODO DE BRADFORDEL COMPLEJO PROTENA-COLORANTE FORMADO PUEDE UNIRSE A LAS CELDAS DE CUARZO

EL COLOR VARA CON DIFERENTES TIPOS DE PROTENAS.

LA PROTENA ESTNDAR DEBE SELECCIONARSE CON MUCHO CUIDADO

INTERFERENCIA CON DETERGENTES.

MTODO DE LA NINHIDRINAFUNDAMENTO

AL SER HERVIDOS EN UN BUFFER A UN pH DE 5.5 EN PRESENCIA DE NINHIDRINA E HIDRINDANTINA, LOS AMINOCIDOS, AMONACO, Y LOS GRUPOS AMINO PRIMARIOS, ORIGINAN UN COLOR MORADO RUHEMANN

VENTAJA DEL MTODO DE LA NINHIDRINA

MTODO RELATIVAMENTE RPIDO SI SE COMPARA CON EL MTODO DE KJELDAHL

DESVENTAJAS DEL MTODO DE LA NINHIDRINALA PRESENCIA DE PEQUEAS CANTIDADES DE AMINOCIDOS, PPTIDOS, AMINAS PRIMARIAS, Y AMONACO OCASIONA UNA SOBREESTIMACIN DEL CONTENIDO PROTICO

BAJA PRECISIN

EL COLOR VARA CON LA DIFERENTE COMPOSICIN DE AMINOCIDOS

SE NECESITA ELABORAR UNA CURVA ESTNDAR EN CADA ANLISIS