Protocolo Orac-fl Mieles
-
Upload
mrrmwordpress -
Category
Documents
-
view
10 -
download
0
Transcript of Protocolo Orac-fl Mieles
PROTOCOLO ORAC-FL
MIEL
1. Preparación de extractos de miel:
- Pesar 1g de muestra de miel y agregar 3g de agua destilada.
- Poner en el ultra sonido el tiempo que sea necesario para homogeneizar la mezcla.
- Preparar una colección de 5 eppendorf, para cada extracto, agregando los siguientes
volúmenes de miel y de buffer.
V miel [uL] V buffer [uL]
Eppendorf 0 0 1000
Eppendorf 1 40 960
Eppendorf 2 80 920
Eppendorf 3 120 880
Eppendorf 4 160 840
Eppendorf 5 200 800
2. Preparación de Fluoresceína:
- tomar una masa de Fluoresceína entre 1 mg y 5 mg, agregar 1mL de buffer, homogeneizar en
“vortex”.
- de la solución preparada en el paso anterior tomar 2[uL] y poner en un segundo eppendorf,
agregar 998 [uL] de buffer y homogeneizar en “vortex”
-Finalmente agregar un volumen de solución de Fluoresceína del segundo eppendorf a un
matraz aforado de 10 [mL].
masa [mg] C1 [M] C2 [M] V. Alícuota [uL]
3. Preparación de AAPH (3mL):
- tomar aproximadamente 117.06 mg del compuesto.
- agregar un volumen de buffer determinado por la siguiente ecuación:
𝑉𝑏𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟 = 𝑋[𝑚𝑔] × 0,02563[𝑚𝐿
𝑚𝑔]
4. Preparar la celda:
- Agregar 200 [uL] de agua a las celdas de las orillas.
- Agregar los 150 [uL] de solución de Fluoresceína.
- Agregar los 25 [uL] de extracto de miel.
- Calentar en BioTek durante 7 minutos hasta 40°C.
- Agregar 25 uL de solución de AAPH recién preparada a cada una de las celdas.
5. Registro de celdas:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
A Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua
B Agua Agua
C Agua Agua
D Agua Agua
E Agua Agua
F Agua Agua
G Agua Agua
H Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua
6. Observaciones: .............................................................................................................................
…………………………………………………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………………………….........................
…………………………………………………………………………………………………………………………………………………
Fecha:
Horas de Trabajo:
Camilo Maliqueo Gabriela Maturana
masa [mg] V. Buffer [mL]