Proyecto de educación, artes, ciencias y tecnología...

REVISTA BOLETÍN BIOLÓGICA Nº 34 - AÑO 9 - 2015 pág. 16

Introducción

En este artículo, compartimos un proyecto de indagacióncientífica que nace en la asignatura Problemática Ambiental elaño 2012 y se desarrolló hasta el 2014, con alumnos de 4° y 5° Añodel Bachillerato orientado en Turismo del Instituto María Auxiliadora(IMA) de la ciudad de Puerto Santa Cruz, provincia de Santa Cruz,Patagonia Argentina. A partir de la enseñanza de contenidoscurriculares vinculados al desarrollo sustentable de poblacionesnaturales objeto de explotación comercial surge el interés deinvestigar aquellos aspectos relevantes que hacen a lasustentabilidad de los recursos pesqueros propios de la zona.Focalizamos el estudio en la población del Róbalo Patagónico(Eleginops maclovinus, Cuvier y Valenciennes 1830), especie ícticaque abunda en el estuario del Río Santa Cruz y que sustenta unaimportante actividad de pesca artesanal de pequeña escala en laregión.

A partir de la lectura de trabajos de investigación, los alumnoscomenzaron a estudiar aspectos del hábitat y las característicasgenerales de la biología de la especie, llamándoles la atención laevidencia científica del comportamiento hermafrodita de algunassubpoblaciones del róbalo del Canal de Beagle en Tierra del Fuegoy se preguntaron, si el róbalo de Santa Cruz tendría acaso el mismocomportamiento reproductivo. Surge de esta manera, el interés delos jóvenes en desentrañar el misterio que envuelve elcomportamiento biológico del róbalo, puesto que esteconocimiento es fundamental para una acertada gestión de lapesca comercial, ya que las especies que cambian de sexopueden ser particularmente susceptibles a la sobreexplotacióndebida a la pesca selectiva por tamaños.

En primer lugar, emprendimos una búsqueda bibliográfica acercade antecedentes sobre la existencia de otras poblaciones deróbalo en las cuales se ha comprobado la presencia de este tipode hermafroditismo particular y sus implicancias para la necesariaconservación del recurso. De este modo, de acuerdo a labibliografía consultada, encontramos que se puede indagarrespecto del tipo de distribución de frecuencias de tallas (longitudtotal) que presenta la población a estudiar, así como el análisishistológico de las gónadas (testículos y ovarios). Estas se presentancomo las dos metodologías principales que pueden arrojar luzsobre el asunto.

RELATANDO EXPERIENCIAS DIDÁCTICAS

por Luis Pellanda, Antonela Britez,Ailén Serrano Iglesias, Eugenia Barría,

Leonardo Bayó[email protected]

Proyecto de educación, artes, ciencias y tecnología:Investigación del hermafroditismo secuencial del

Róbalo Patagónico del estuario del Río Santa Cruz

Luis Alejandro Pellanda es Lic. Cs.Biológicas por la Universidad CAECE.

Desde 1997 y hasta la actualidad,desempeña en Puerto Santa Cruz comoBiólogo Investigador de la Subsecretaría

de Pesca y Actividades Portuarias.En la actualidad en el ámbito docentees Profesor Titular de Química y Biología

de 1º, 2° y 3° año y Profesor Titular deProblemática Ambiental de 4º año del

Bachillerato Orientado y Coordinador deCampos de Conocimiento del área de

Ciencias Naturales y Tecnología delColegio Secundario del Instituto María

Auxiliadora.

Antonela Britez, Ailén Serrano Iglesias,Eugenia Barría y Leonardo Bayón son

alumnos de secundaria, egresados 2014del Bachillerato Orientado del Instituto

María Auxiliadora de Puerto Santa Cruz yalumnos expositores del proyecto de

ciencias “Investigación delhermafroditismo secuencial del Róbalo

Patagónico del estuario del Río SantaCruz”.


En consecuencia, alumnos y profesor en formaconjunta comenzamos a elaborar un plan deacción estableciendo como primer objetivoobtener datos significativos sobre la biología delróbalo en aras de advertir aspectos de sucomportamiento reproductivo y su impacto en lapesca artesanal. La semilla echa raíces. Por lotanto, el motor de todo proceso de indagacióncientífica, la curiosidad, pone en marcha en losestudiantes el anhelo de saber más y poder llegara presentar con éxito el proyecto en la FeriaNacional de Educación, Artes, Ciencias yTecnología en 2014. Se logra de esta forma,incentivar el gusto por las ciencias y la aplicaciónde la metodología científica para resolvercuestiones que implican el manejo sustentable deun recurso natural no renovable. Asimismo,interpretar que el manejo ecosistémico implica lainterrelación entre varias disciplinas científicas yque a partir del uso apropiado de herramientasinformáticas y de la tecnología es posible generarla capacidad de responder a algunas de lashipótesis que plantea la investigación científica adesarrollar.

El trabajo que presentamos es continuación delproyecto “Hiamouch, Una MisteriosaTransformación” iniciado en el año 2012 ypresentado en la Feria Nacional de Educación,Artes, Ciencias y Tecnología del año 2013. Antelos logros alcanzados en esa instancia, decidimosseguir adelante con la investigación durante elaño 2014 con el fin de obtener datos significativosque permitan comprobar la hipótesis planteadade la existencia de hermafroditismo secuencial enla población de róbalos del estuario del río SantaCruz.

Cabe mencionar que presentamos este proyectocon éxito, en el mes de julio de 2014, en la VIIExpociencias Latinoamericana, ESI AMLAT 2014,organizada por la Red Nacional de ActividadesJuveniles en Ciencia y Tecnología, reconocidopor el Movimiento Internacional para el RecreoCientífico Y Técnico (MILSET) en la ciudad deMedellín, Colombia (Figura 1) y en el PrimerEncuentro de Jóvenes Investigadores organizadopor la Universidad Mariana de la ciudad de SanJuan de Pasto, Colombia en la modalidad devideoconferencia (Figura 2).

Otra actividad más que satisfactoria durante2014, ha sido la asistencia de los alumnos delgrupo de investigación al Laboratorio deEcología, Fisiología y Evolución del Centro Australde Investigaciones Científicas (CADIC)-CONICET(Ushuaia) dirigido por el Dr. Daniel Fernández endonde realizaron una pasantía en técnicas deestudio histológico de tejido gonadal de peces ymantuvieron una videoconferencia con losdoctores Jorge Calvo y Elba Morriconidescubridores del hermafroditismo del róbalo delCanal Beagle, Tierra del Fuego. Posteriormente,participamos en la Feria Nacional de Educación,Artes, Ciencia y Tecnología realizada enTecnópolis (Villa Martelli, Provincia de BuenosAires) el 14 de noviembre de 2014 obteniendo el1er puesto a nivel nacional en el área de CienciasNaturales para escuelas secundarias. Además, el

Figura 3. Reconocimiento al mérito y esfuerzo académico delos alumnos expositores: Ailén Serrano Iglesias, Eugenia Barría,Antonela Britez y Leonardo Bayón, por el Honorable ConcejoDeliberante de Puerto Santa Cruz, en el año 2014. Proyectodeclarado de interés educativo y comunitario. Foto: CarlosValdez.

Figura 1. Alumnos del equipo de Proyectos de Ciencias delInstituto María Auxiliadora de la ciudad de Puerto Santa Cruzde Argentina, en la Feria de Ciencias Internacional (FCI) enMedellín, Colombia.

Figura 2. Alumnos expositores en la videoconferencia del 1°Encuentro Internacional de Jóvenes Investigadores,Universidad Mariana, San Juan de Pasto, Colombia, 2014. Foto:Luis A. Pellanda.


proyecto ha sido declarado de interés educativoy comunitario por el Honorable ConcejoDeliberante de Puerto Santa Cruz segúnresolución N°34/14 (2014) (Figura 3).

La investigación empero no ha terminado,queda en el ánimo de los alumnos que siguieronhasta el final el proceso, la voluntad de encontraraún mayores certezas de este tipo decomportamiento sexual en este pez tancarismático para la región santacruceña.

El róbalo de Santa Cruz: Enigmático tantoen su biología como en su pesca

Cabe destacar que tomamos como objeto deestudio, la población de peces del estuario del ríoSanta Cruz, el cual posee una extensión deveinticinco kilómetros en todo su recorrido,formando un canal de dos kilómetros, sobre cuyosmárgenes se asienta nuestra localidad: PuertoSanta Cruz (Figura 4). Nos enfocamosparticularmente en la población del róbalopatagónico (Eleginops maclovinus) por ser unaespecie de importancia económica a nivelregional sujeta a explotación comercial yrepresentar un importante recurso turístico queadquiere particular relevancia durante la FiestaRegional del Róbalo que se realiza durante el mesde enero en esta ciudad.

Dado que existe evidencia científica de queciertas poblaciones de róbalo manifiestan uncomportamiento hermafrodita y que estas songeneralmente consideradas más vulnerables alimpacto de la explotación pesquera que lasespecies de sexos separados (Schaaf &Huntsman, 1994), nos preguntamos si el róbalo delestuario del río Santa Cruz es tambiénhermafrodita y a partir de allí, pensamos contribuiren el futuro a su conservación y manejosustentable.

Características del róbalo

El róbalo patagónico es un pez óseo del ordenPerciforme, Suborden Notothenioidei (grupodominante de la fauna antártica), pertenecientea la familia Eleginopidae, única especie en estadistribución, debido a sus característicasparticulares en la morfología, hábitat ydistribución geográfica, que los diferencian de losdemás Perciformes.

Además, es comercialmente explotado en variaspartes de su rango de distribución, siendo esta,una de las familias con mayor distribuciónlatitudinal. Otra característica es que viveexclusivamente en el área norte de laconvergencia Antártica, desde el Canal deBeagle (54º S) hasta la provincia de Buenos Aires(39º S) en el Océano Atlántico y Valparaíso (33º S)hasta Punta Arenas, en el Océano Pacífico. Es unpez que incursiona en las aguas poco profundasde estuarios y bahías, dada sus capacidadesadaptativas ante las diferentes amplitudestérmicas, con hábitos bento-demersales, que seencuentran tróficamente vinculados con lascomunidades bentónicas.

En los aspectos reproductivos, comparte con lamayoría de los peces la fecundación externa queconsiste en la liberación de ovas y esperma alagua donde se produce la fertilización peroexisten evidencias de que ciertas poblacionesmanifiestan un comportamiento hermafrodita. Enel caso particular de esta especie, se trata de untipo especial de comportamiento sexual llamadoprotandria o hermafroditismo secuencial. Laprotandria ocurre cuando alguno o todos losindividuos funcionan primero como machos yposteriormente en su ciclo vital exclusivamentecomo hembras. Cuando los tejidos germinales delmacho degeneran, el desarrollo del tejidogerminal de la hembra comienza. Pequeñasproporciones de tejido de la hembra no funcional

Figura 4. Área deestudio de lapoblación depeces del Estuariodel Río Santa Cruz,sobre cuyasmárgenes seasienta la ciudaddel mismo nombre.Fuente: GoogleMap 2010.


(oogonias, oocitos) podrían estar presentes,entremezclados con los tejidos germinales delmacho. La existencia de un distribución defrecuencias de tallas bimodales sería unaevidencia de este tipo de hermafroditismosecuencial.

Una población de peces es un recurso renovableen la medida en que el potencial reproductivode la especie se conserve en un nivel adecuado.La administración de un stock pesquero requierede la estimación de algunos parámetrospoblacionales de manera tal que aportenconocimiento científico que contribuya amantener su sustentabilidad. El rol de lareproducción en los peces – como en todos losorganismos – es la perpetuación de la especie.De suspenderse este proceso, la consecuenciainevitable sería el colapso de la población y laconsecuente extinción. La reproducción es unproceso que involucra una serie de cambiossomáticos y fisiológicos, manifestándose, por eldesarrollo de las gónadas y culminando cuandose produce el desove, liberándose así las célulasreproductoras. Luego, se inicia en formainmediata la primera etapa con la formación delhuevo o cigoto. Razón por la cual, elconocimiento de estos cambios en las glándulassexuales a través del tiempo, revisten muchaimportancia y permiten comprender la biologíareproductiva de la especie que es un aspectofundamental en el proceso de evaluación de unapoblación para que su explotación seasustentable.

En vistas de estas características, la búsquedabibliográfica nos llevó a encontrar el trabajo deSadovy y Chapiro (1987) cuyos estudiosestablecen los criterios para la identificación dehermafroditismo en peces y el trabajo de JorgeCalvo, Elba Morriconi y otros (1992), investigadoresdel CADIC-CONICET de Ushuaia, quienesseñalaron por primera vez la existencia dehermafroditismo secuencial en las poblaciones deróbalo del Canal de Beagle, Argentina (Calvo, etal., 1992; Panozo, 1996; Brickle et al., 2005). De ahíque, basándonos en estos criterios; distribución defrecuencias de tallas y análisis histológico degónadas, planteamos la metodología. Para ello,realizamos muestreos en el año 2012, 2013 yefectuamos una pasantía técnica en el periodocomprendido entre el 7 al 12 de septiembre de2014, en histología de peces en el Laboratorio deEcología, Fisiología y Evolución de OrganismosAcuáticos del (CADIC) con el Dr. en CienciasBiológicas Daniel Fernández, Jefe de estelaboratorio y discípulo del Dr. Jorge Calvo (Figura5). Esto nos posibilitó acceder a nuevosconocimientos en la materia y a una tecnologíacientífica superior aplicada al conocimiento delhermafroditismo en peces. Durante esta estadía,tuvo lugar una videoconferencia con Jorge Calvoy su esposa, la Dra. Elba Morriconi, quienes desdela ciudad de Córdoba nos aconsejaron y guiaronen nuestra investigación.

En otro orden, la metodología aplicada nosconvocó a estudiar en conjunto con los alumnos

de 5° año, contenidos vinculados a Informáticatales como manejo de planillas de cálculo,construcción de gráficos estadísticos(histogramas, análisis de Kolmogorov-Ivanov,índice gonadosomático) y construcción depresentaciones Power Point, Movie Maker yPublisher de Microsoft (edición de folletos dedifusión y concientización). Desde el área deMatemática, aprender la teoría estadística depequeñas muestras, construcción y análisis dehistogramas de frecuencias y variables talescomo la como moda, mediana, distribuciones defrecuencias, Lenguas Extranjeras e Inglés a partirde la lectura e interpretación de textos científicosy la traducción de folletería nos posibilitaron lacomprensión lectora. A partir de ProblemáticaAmbiental, pudimos relacionar y comprender losaspectos que hacen al manejo sustentable de laspoblaciones naturales de los ecosistemas marinos.

Nuestra investigación prosigue a partir de losresultados obtenidos de nuevas observaciones delos preparados histológicos de gónadas de róbaloque hemos dejado en el laboratorio del Dr. DanielFernández. Este lo realizará el Técnico DanielAureliano del CADIC-CONICET manteniéndonosen contacto permanente para poder analizar enforma conjunta los avances del trabajo a lo largode este año y afirmar la evidencia estadística delhermafroditismo del róbalo de Puerto Santa Cruz,en la etapa que presentamos.

La importancia de conservar el recursopesquero

Tal como lo planteamos en la introducción, sibien es apasionante el conocimiento de labiología reproductiva de esta especie, surge elinterés de los jóvenes en dilucidar elcomportamiento biológico del róbalo. Dichoconocimiento es fundamental para una acertadagestión de la pesca comercial, en tanto lasespecies que cambian de sexo pueden serespecialmente susceptibles a la sobreexplotacióndebida a la pesca selectiva por tamaños.

Figura 5. Alumnos en el laboratorio de Ecología, Fisiología yEvolución de Organismos Acuáticos del CADIC. El primero a laderecha es el Jefe del laboratorio el Dr. en Ciencias BiológicasDaniel Fernández. Foto: Luis A. Pellanda.


Pesca artesanal sustentable en Puerto Santa Cruz

El estuario del río Santa Cruz es el hábitat de unimportante número de especies tales como elróbalo, la palometa pintada, el pejerrey delAtlántico, la trucha de río, cardúmenes desardinetas, y moluscos tales como: mejillones,cholgas y vieyras, entre otros.

El sector pesquero artesanal de Puerto SantaCruz, que incluye la ordenación, captura,procesamiento y comercialización depoblaciones ícticas, constituye una importantefuente de alimentos, ingresos, empleo yesparcimiento para la población. Las pesqueríasartesanales de pequeña escala representan parala región, un importante factor de desarrollo.

Para preservar el recurso pesquero para lasfuturas generaciones es necesario contribuir aldesarrollo sustentable de pesquerías, aún depequeña escala. Conocer el ambiente en el cualse desarrollan las especies que forman el recursoacuático es de vital importancia al momento dedefinir estrategias para proceder a su capturasostenida.

El róbalo como alimento de valor regional

El alimento regional como patrimonio culturalaporta identidad a los pueblos y se convierte enun recurso para lograr el posicionamiento de losproductos elaborados en Puerto Santa Cruz. Es asíque, en Puerto Santa Cruz se extrae ycomercializa róbalo fresco y se elaboranartesanalmente distintos derivados del mismotales como salados, ahumados, conservas, y unagran variedad de platos regionales y de calidadgourmet exquisitamente preparados a partir deeste recurso natural del estuario.

Un plato elaborado con róbalo del estuario dePuerto Santa Cruz transmite a quien lo consumeconceptos como su origen patagónico, laconservación del medioambiente en su etapaextractiva, sus propiedades alimenticiasasociadas a las bondades de la región y lascostumbres y tradiciones expresadas en la cocinade quienes habitan este pueblo; y presenta alvisitante un producto final impregnado de aromasy sabores de esta Tierra haciendo aún másatractiva turísticamente, a nuestra localidad.

Manos a la obra: ¿Cómo trabajamos?

Para el desarrollo del trabajo, nos centramos enróbalos extraídos del estuario por los pescadoresartesanales con una muestra representativa de lapoblación; a partir del relevamiento ypresentación científica de los datos biológicosque surgen de los muestreos a campo: muestreode tallas, peso total entero, determinación delsexo, extracción de gónadas y análisishistológicos de las mismas. Después, concebimosel procesamiento estadístico de los datosbiométricos de longitud total, peso total entero,sexo y proporción de sexos en la muestra

volcando sus datos a planillas de cálculo Excel ya partir de sus herramientas de análisis de datos,construimos los correspondientes histogramas defrecuencias y pruebas de contrastación dehipótesis estadísticas. Realizamos también elconjunto de operaciones que caracterizan a latécnica histológica del tejido gonadal de losejemplares muestreados para proceder a suanálisis en busca de la presencia de célulasintersexos.

Para cumplir con esta metodología, nosorganizamos en tareas en el aula y en tareas acampo. Las tareas a campo las ejecutamos acontra turno y se dividieron en un taller demuestreo de peces (Figura 6) y otro, de análisishistológico de gónadas. El taller de muestreo depeces se efectuó en el laboratorio del colegio y elde análisis histológico se hizo en el año 2013 en elLaboratorio de Patología del Hospital SeccionalDr. Eduardo Canosa de Puerto Santa Cruz y en el2014 en el Laboratorio de Ecología, Fisiología yEvolución del CADIC dependiente del CONICETen la ciudad de Ushuaia.

Es con posterioridad a la lectura específica sobreel tema, cuando los alumnos advierten que laobtención de una distribución de frecuencias detallas bimodal podría indicar la existencia dehermafroditismo. Por ende, una vez obtenidosejemplares de róbalo provenientes de lascapturas comerciales de pescadores artesanalesde la zona, establecimos un día y horario paraproceder al muestreo estadístico de los pescadoslo que generó gran expectativa entre losestudiantes. Para medir la longitud de los peces(talla) construyeron en el laboratorio sus propiosictiómetros. Iniciamos así, la primera tarea queconsistió en el muestreo a campo de losparámetros biométricos importantes de losejemplares tales como la longitud total, el pesototal entero, la determinación del sexo y laobservación macroscópica de las gónadas.

Con posterioridad, la tarea con los pescados laefectuamos en el laboratorio del colegio. Es dedestacar, el entusiasmo de los alumnos al poder

Figura 6. Taller de muestreo de peces en el laboratorio delIMA, 2014. Foto: Luis A. Pellanda.


tomar conocimiento en forma directa deaspectos morfológicos del róbalo tales como sutamaño, color, forma corporal, característicasexternas así como de los órganos internos delanimal (Figura 7). La posibilidad de realizardisecciones les abre aún más el campo deexperimentación, al poder conocer en directocómo se encuentra organizado el sistemareproductor de los peces óseos, cómo son susgónadas, qué tamaño tienen, qué color, ademásde acceder al contenido estomacal y tratar deidentificar su alimentación.

Posteriormente, todos los datos y observacionesquedaron asentados en las planillas de muestreocorrespondientes. Estas, pronto fueron transcriptasa la planilla de cálculo en el laboratorio deinformática. Los jóvenes asimilaroninmediatamente la importancia y objetivo derealizar la construcción de los histogramas defrecuencias de talla ya que la existencia de unadistribución de frecuencias bimodal estaríaindicando evidencia de hermafroditismo en estapoblación de róbalo. El manejo estadístico deestas muestras les permitió de igual forma, advertirla importancia que tienen para el estudio de unapoblación silvestre los datos de longitud, peso,sexo y desarrollo sexual.

La asistencia de la mayoría del grupo tanto altaller de muestreo como al de análisis histológicoen el hospital, fue excelente y las preguntassumamente indagadoras de aquellos aspectosque aún no les eran claros en relación a lahipótesis de trabajo planteada. Del mismo modo,advirtieron igualmente que el análisis histológicoes fundamental para poder encontrar en lospreparados indicios de la existencia de individuostransicionales, es decir, que presentaran tantotejido masculino como tejido femenino.

Materiales y métodos

Durante el desarrollo de la indagaciónexaminamos un total de 156 róbalos en unperíodo de tres muestreos durante los meses de

abril y junio de 2012, junio de 2013 y septiembrede 2014. En todos los casos, los peces provinieronde las capturas de los pescadores artesanales enel estuario mediante la utilización de líneas depesca de tres anzuelos y dos redes de enmalle de120 milímetros de malla total estirada (Figura 8).La mayoría de ellos, fueron procesados entre 24 a48 horas luego de su extracción del marconservándolos en frío hasta la ejecución de lastoma de muestras en el laboratorio.

A cada uno de los ejemplares, le registramos lalongitud total (LT) al centímetro inferior medianteel uso de un ictiómetro, el peso total entero (PT)expresado en gramos y el peso de las gónadas(sólo en los muestreos del mes de septiembre de2014) mediante el uso de una balanza deprecisión electrónica de lectura digital marcaUWE OM.6000 con capacidad mínima 10g ymáxima de 6Kg con el fin de poder calcular elÍndice Gonadosomático (IGS) como indicadormacroscópico del grado de maduración sexualusando la relación: IGS = (Peso gónada x 100) /Peso Entero (peso total del ejemplar).

Los datos de longitud total, los sometimos a untratamiento estadístico de pequeñas muestrasconsistente en la construcción de histogramas dela distribución de frecuencias de talla (%) ydeterminación de valores tales como media,moda, frecuencia, valor máximo, valor mínimo,rango. Para el estudio de las distribuciones defrecuencia de tallas de los individuos por sexo, sedeterminó, por medio de la Regla de Sturges(Recuadro 1) el número y el tamaño del intervalode clase, considerando el tamaño de la muestra(N) y las tallas máximas y mínimas de losejemplares analizados.

Número de clases = 1 + 3,322 x log (N)Intervalo de clases = (Talla máxima – Talla

mínima) / número de clasesDonde N = tamaño de la muestra.

La construcción de los histogramas y el cálculode las variables estadísticas a partir de los datosde campo, las realizamos con el auxilio de la

Figura 7. Taller de muestreo de peces en el laboratorio delIMA, 2014. Foto: Luis A. Pellanda.

Figura 8. Róbalos para muestreo. En todos los casos fueronobtenidos de la captura de pescadores artesanales delestuario. Foto: Luis A. Pellanda.


Herramienta Análisis de Datos de la Planilla deCálculo Excel 2010 de Microsoft. Utilizamos laprueba no paramétrica de Kolmogorov-Smirnov(Test K-S) para comparar las distribuciones defrecuencias de talla de hembras y machos asícomo para las distribuciones de frecuencias detalla de la población para cada localidad demuestreo y época (Recuadro 2). El paqueteestadístico XLSTAT versión 2014.4.09 Addinsoftposibilitó realizar las comparaciones de lasdistribuciones de frecuencias de talla. En todos loscasos se consideró un nivel de significancia de α= 0.05.

Con el fin de obtener muestras de tejido sexualque pudieran luego, ser estudiadas almicroscopio; las gónadas de los individuos de losmuestreos de 2012, 2013 y 2014 fueron extraídasenteras y fijadas en formol al 10% para su posterioranálisis histológico. Luego deshidratamosporciones de cada una de las gónadas, lasincluimos en parafina (muestreos de 2012) y enparaplast (muestreos de 2014) para realizar cortesde 5-6 µm de espesor y las teñimos conhematoxilina-eosina de Groat (Recuadro 3). Loscortes histológicos fueron realizados con unmicrótomo rotativo marca Micron modelo HM 340E. Una vez listos los preparados histológicos de las

Regla de Sturges

“En estadística descriptiva esta regla es muy utilizadacuando se quiere realizar un histograma de frecuenciasya que con ella se calcula el número de clases (ointervalos) necesarios para representar fielmente losdatos. Hoy, con el uso del ordenador, se hace menosconocida ya que es el propio ordenador el que seencarga de calcular el número de intervalos. Dehecho, en R, la función hist tiene el parámetro breaks =“Sturges” por defecto, aunque siempre podemosmodificar este parámetro”.

Fuente: Si Poisson levantara la cabeza…Un blog de estadística. Reglade Sturges (2015). Recuperado el 10 de marzo de 2015 de:https://fdesnedecor.wordpress.com/2014/08/05/regla-de-sturges/

Prueba no paramétrica de Kolmogorov-Smirnov

Se utiliza para dos muestras en escala ordinal.

Ecuación: DMAX = | F1AO – F2AO |

Donde, DMAX = Diferencia máxima.

F1AO = Frecuencia acumulada observada paramuestra uno.

F2AO = Frecuencia acumulada observada paramuestra dos.

Para tomar decisiones, se calcula valor crítico dediferencia máxima al nivel de alfa = 0.05 y paradeterminar la significancia estadística, se usa laecuación: D (.05) = 1.36 / √[(N1+N2)/N1N2], donde, 1.36es una constante y N1 = tamaño de la muestra 1, N2 =tamaño de la muestra 2”.

Fuente: Guillen, A., Badii, M. H, Abreu J. L. y H. Rodríguez (2013).Modelos Estadísticos Paramétricos y No Paramétricos para dosMuestras. Daena: International Journal of Good Conscience, 8(3), pp.92-102. ISSN 1870-557X

Preparación de cortes histológicos

Proceso de deshidratación:

- Luego de lavar las gónadas con agua, se disponenen frascos con alcohol al 70% durante una hora.- Deshidratación en alcohol 96% durante una hora.- Deshidratación en alcohol 100% durante una hora.- Se colocan las muestras en Benceno durante una

hora para eliminar restos de alcohol.

Proceso de inclusión:

Cada fragmento de gónada se introduce en un frascode vidrio y se cubre al ras con paraplast quedando así,durante 24 horas en una estufa a una temperaturaconstante de 60°C. Luego de este período, se llena porcompleto los frascos con paraplast. Después de unahora y media aproximadamente, las muestrasgonadales ubicadas en la estufa con paraplast seretiran para realizar un cambio de este último y secolocan nuevamente en la estufa durante una horamás y se logra así una mayor evaporación de tóxicos,en este caso benceno, para generar una mayoradhesión de la muestra gonadal al paraplast.

Seguidamente, se retiran de a una de la estufa y secolocan en cubitos de papel realizadosartesanalmente (estos reemplazan a las cubeteras dehielo). Finalizando este proceso, los 18 cubos quecontienen las muestras gonadales y paraplast se dejanenfriar durante media hora en una de las instalacionesdel CADIC.

Finalmente los bloques de paraplast, se retiran de loscubos de papel. Se moldean los bloques de maneraque puedan ser adheridos a los tacos de maderautilizando un mechero Bunsen, una espátula y doscuchillos. Al concluir con los 18 tacos se los deja secardurante 14 horas. El siguiente paso implica desgastar lostacos de paraplast y ablandarlos en agua para luegoproceder al corte histológico con el micrótomo.

Proceso de tinción:

Una vez que se montan los cortes histológicos en losportaobjetos se realiza el proceso de tinción de losmismos siguiendo el siguiente protocolo:- Xilol I durante tres minutos.- Xilol II durante tres minutos.- Alcohol 100% durante tres minutos.- Colodium-eter 50% - Alcohol 50% entre cinco y diez

minutos.- Se dejan escurrir y secar los cortes durante segundos.- Alcohol 96% - Formol 10% durante tres minutos.- Se lavan los cortes en agua destilada durante tres

minutos.- Hematoxilina durante un minuto.- Se lavan los cortes en agua corriente durante diez

minutos.- Se lavan en agua destilada durante tres minutos.- Eosina durante tres minutos.- Se sumergen los cortes rápidamente en Alcohol 96%.- Alcohol I 100% durante dos o tres minutos.- Alcohol II 100% durante dos o tres minutos.- Alcohol-Xilol durante dos o tres minutos.- Xilol durante dos o tres minutos.- Se ubican en Bálsamo de Canadá sobre el

portaobjetos para luego colocar el cubreobjetospreviamente lavado con Alcohol-Xilol.

REC

UADR

O1

REC

UADR

O2

RECUA

DRO3


gónadas, las lecturas en el año 2012 lasejecutamos con un microscopio óptico confuente de luz eléctrica de baja resolución. Entanto, las lecturas de los preparados de 2014 lasefectuamos con un microscopio de mayorresolución, DM 2500 con resoluciones de 5X, 10X0.40, 20X/0,50, 40X, 100X/1,25 oil marca Laica conregulador de fluorescencia y exposición. Lasimágenes las digitalizamos utilizando el programaLeica versión 4.3.0.

¿Qué nos dicen los datos y resultados delanálisis estadístico?

Tal como se señala líneas arriba, la existencia deuna distribución de frecuencias bimodal en loshistogramas estaría indicando evidencia dehermafroditismo en esta población de róbalo porlo cual presentamos a continuación los valores defrecuencias de tallas de las muestras de los años2012, 2013 y 2014.

Muestreos del año 2012

Como observamos en la figura 9, la distribuciónde frecuencias de tallas de la población mostróuna distribución bimodal. Como se ha observadopara poblaciones de peces hermafroditas laexistencia de hembras más grandes que losmachos sería evidencia de hermafroditismo. Eneste sentido es importante destacar que nuestrosanálisis muestran que las hembras poseen unatalla media de 54,91 cm (N=34), en tanto losmachos mostraron una longitud media de 51,52cm (N=29) (Figura10).

El análisis estadístico de Kolmogorov-Smirnovaplicado a las distribuciones de frecuencias detalla de los muestreos de 2012 y de 2014 demostróla existencia para ambas muestras de unadistribución de tallas bimodal (Dmax= 0,97 y Dmax= 0,97 respectivamente para p>0,05).

Muestreos de junio de 2013

La distribución de frecuencias de talla de lapoblación muestra una distribución bimodal. Elanálisis estadístico aplicado a los ejemplaresmachos muestreados en este período denota unatalla media de 37,69 cm para un total de 28individuos. Mientras que para las hembras la tallamedia fue de 45,15 cm (N=6) (Figura 11).

Muestreos de septiembre de 2014

La distribución de frecuencias de tallas para elmuestreo de 2014 mostró un distribución bimodal.La aplicación de los cálculos estadísticos a lospeces estudiados durante este período indicaque la talla media estuvo en 37,11 cm para losindividuos machos (N=12). En tanto que lalongitud total media fue de 45,15 cm para lashembras (N=25) (Figura 12).

La aplicación del Test de Kolmogorog-Smirnovmostró una diferencia significativa entre las

Figura 10. Distribución de frecuencias de talla de individuosmachos y hembras de E. maclovinus del estuario del Río SantaCruz. Muestreos de los meses de abril y junio de 2012.

Figura 11. Distribución de frecuencias de talla de ejemplaresmachos y hembras de E. maclovinus del estuario del Río SantaCruz. Muestreos del mes de junio de 2013.

Figura 9. Distribución de frecuencias de talla bimodal por añode muestreo de E. maclovinus del estuario del río Santa Cruz.


distribuciones de frecuencias de talla de lashembras en comparación de la distribución defrecuencias de talla de los machos (p ≤ 0.05).

Los principales resultados obtenidos ypresentados en los gráficos y tablas, no mostrarondiferencias significativas (p>0,05) y se ajustaron auna distribución de tallas bimodal como es deesperar en una población de peces que presentaun comportamiento hermafrodita. Al aplicar elTest de Kolmogorov-Smirnov, observamos unadiferencia significativa entre las tallas de losejemplares hembras y las tallas de los ejemplaresmachos para los muestreos del mes deseptiembre de 2014. El hecho de que las hembraspresentan siempre tallas significativamentesuperiores a las de los machos, denota lo que seespera generalmente en el caso de una especiehermafrodita protándrica.

Análisis histológicos

Al mismo tiempo, para aumentar el grado decerteza sobre el hermafroditismo del róbalorealizamos el análisis histológico de 18 gónadasde un total de 48 individuos capturados duranteel mes de septiembre en la desembocadura delestuario al mar. Calculamos el índicegonadosomático (IGS), se determinó el grado dedesarrollo sexual y se realizó la descripciónmacroscópica de testículos y ovarios.

Para la observación macroscópica de lasgónadas de róbalo, utilizamos la clasificación delas fases de madurez gonadal por observaciónmacroscópica de Everson, 1977; Kock yKelelrman, 1991 (Tabla Nº1). Es así que,determinamos la presencia de individuos enestadio I inmaduros, ovarios pequeños, sinovocitos visibles e individuos en estadio II endesarrollo con ovarios más grandes, granulosos,ovocitos muy pequeños, visibles a la lupa.Observamos algunos ejemplares con sexosindiferenciados y otros con gónadas biendesarrolladas lo que sugiere un estadio maduro(Figuras 13 y 14). De acuerdo a la clasificación delas fases de madurez gonadal por observaciónmacroscópica que presentamos en la Tabla 1, lamayoría de las gónadas observadas seencuentran en Fase II en desarrollo y en Fase IV,Maduro.

Por su parte, las microfotografías pudieronmostrar la presencia de estructuras celularessexuales de machos y hembras con diferentesgrados de desarrollo sexual (Figura 15). El IGS =0,67 (solo muestreo de septiembre de 2014),ofrece una idea de la época de reproducción

Tabla 1. Fase de madurez sexual. Descripción macroscópica.

Figura 12. Distribución de frecuencias de talla de individuosmachos y hembras de E. maclovinus del estuario del Río SantaCruz. Muestreos del mes de septiembre de 2014.

Figura 13. a) El testículo de róbalo es un órgano par, alargadoy unido a la pared dorsal de la cavidad celómica por tejidomesodérmico. b) de forma lobular y color blanquecino. Estáintegrado por lóbulos separados por tejido conjuntivo,rodeados a su vez por una membrana basal continua quedivide el testículo en dos compartimentos. Fotos: AntonelaBritez.

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del róbalo dentro del estuario. Es así que, el gradode desarrollo sexual de los ejemplaresexaminados a partir de la observaciónmacroscópica y microscópica de sus órganossexuales y el IGS calculado, nos permiten teneruna primera aproximación al período estacionalde la época reproductiva de la especie entre losmeses de abril a septiembre de cada año.

Aun así, no detectamos células intersexuales o deindividuos de transición con presencia de oocitosy tejido testicular lo que sería evidencia de laexistencia de hermafroditismo en la población depeces estudiada. Razón por la cual, el análisishistológico continúa en proceso en el Laboratoriode Ecología, Fisiología y Evolución del (CADIC)dependiente del CONICET de la ciudad deUshuaia.

Figuras 14. a) Ovario de color rosado, es un órgano par, alargado y unido a la pared dorsal del celoma por el mesovario. De élparte un corto oviducto que se continúa con el extremo caudal de la gónada y que termina en la papila urogenital. Es dedestacar que en el ciclo anual del ovario, se presentan las fases de ovogénesis, ovulación y puesta. b) El ovario durante laovogénesis es de mayor tamaño y con una tonalidad rojiza o amarillenta, debida al abundante vitelo de los ovocitos. Fotos:Antonela Britez.

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a b

c d

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Referencias en la siguiente página.


Algunas conclusiones

Las distribuciones de frecuencias de tallabimodales obtenidas, muestran evidencia de laexistencia de hermafroditismo secuencial(protandria) del róbalo patagónico (Eleginopsmaclovinus, Cuvier y Valenciennes, 1830) delestuario del Río Santa Cruz tal como ha sidoseñalado por otras investigaciones parapoblaciones de la misma especie en el Canal deBeagle, Chile e Islas Malvinas. Las diferenciassignificativas observadas en cuanto al tamañomayor de las hembras en comparación con losmachos en los muestreos, también sugieren laexistencia de este tipo de comportamiento sexualen la especie Eleginops maclovinus del estuariodel río Santa Cruz posee por lo tanto, unaestrategia reproductiva muy diferente al resto deotros nototénidos que se han desarrollado enaguas de la Antártida lo que estaría sugiriendo almismo tiempo, una diferente historia evolutivapara estos peces de aguas más templadas.

Tal como señalamos líneas arriba, hemos podidodeterminar el grado de desarrollo sexual de losejemplares examinados y tener una aproximaciónal período estacional de la época reproductivade la especie que estaría entre los meses de abrila septiembre de cada año.

Al mismo tiempo, los resultados que se obtengandel análisis histológico en proceso en el

laboratorio del CADIC, nos permitiránintercambiar conclusiones acerca de laevidencia estadística observada delhermafroditismo de Eleginops maclovinus delestuario del Río Santa Cruz. Estos brindarán mayorcerteza a nuestra hipótesis.

Más allá del interés científico de interpretarcorrectamente la estrategia sexual de lasespecies, este comportamiento reproductivo esde particular importancia ya que estáestablecido que las especies hermafroditas sonmás vulnerables a la presión de pesca que lasespecies de sexos separados. Este conocimientoes fundamental para una acertada gestión de lapesca comercial, ya que las especies quecambian de sexo pueden ser particularmentesusceptibles a la sobreexplotación debida a lapesca selectiva por tamaños. Es decir, las artes depesca en general se centran en los individuos másgrandes de la población ejerciendo más presiónsobre ellos (más mortalidad). En una especie en laque los individuos que cambian de sexo con losaños (y tamaño), como es el caso del róbalo,puede desembocar en que uno de los sexos sevea especialmente afectado, disminuyendo suproporción a niveles ciertamente peligrosos.

Por esta razón es que decidimos realizar unapropuesta de Ordenanza Municipal dirigida alHonorable Concejo Deliberante de nuestralocalidad con el propósito de establecer criterios

Figura 15. a) Organización histológica del testículo maduro.Lóbulos, espermatocitos, 20x. b) Organización histológica deltestículo. Conductos seminiferos. 20x. c) Organizaciónhistológica del testículo maduro. Conductos seminíferos.Espermatogonias. 20x. d) Organización histológica deltestículo. Espermatogonias. 20x. e) Estructura celular de ovariomaduro. Oocitos maduros. 20x. f) Estructura celular ovariomaduro, gránulo de vitelo (vg). 20x. g) Estructura celular deovario maduro. Vacuola (v), oocito (o). 20X. Todas sontinciones hematoxilina-eosina. La escala de cada fotorepesenta 100 µm. Fotos: Ailén Serrano Iglesias.

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Referencias Bibliográficas

Brickle, P., Arkhipkin A. & Laptikhovsky V. (2005). Reproductivestrategy of a primitive temperate notothenioid Eleginopsmaclovinus. Journal of fish biology, 66(4), 1044-1059.

Calvo, J., Morriconi, E. Rae, A. & San Roman, N. A (1992).Evidence of protandry in subantartic notothenioid Eleginopsmaclovinus (Cuv. y Val., 1830) from the Beagle Channel(Argentina). Journal of Fish Biology, 40(2), 157-164.

Everson, I. (1977). The living resources of the Southern Ocean.Rome: FAO/UN Development Programme, 156 pp.

Guillen, A., Badii, M. H, Abreu J. L. y Rodríguez, H. (2013).Modelos Estadísticos Paramétricos y No Paramétricos para dosMuestras. Daena: International Journal of Good Conscience,8(3), 92-102. ISSN 1870-557X

Honorable Concejo Deliberante. Municipalidad de PuertoSanta Cruz. (2014). Resolución N° 34/14.

Kock, K. H. y Kelelrman, A. (1991). Review: Reproduction inAntartic notothenioid fish. Antartic Science, 3 (2), 125-150.

Ley Nacional 14346 - Malos Tratos y Actos de crueldad a losanimales, Sancionada el 27/IX/1954; promulgada el 27/X/1954;y publicada en el Boletín Oficial el 5/XI/1954 - Código Penal.Recuperada el 10 de marzo de 2015 de:http://www.animanaturalis.org/p/1387.

Sadovy, Y. & Shapiro, D. (1987). Criteria for the diagnosis ofhermaphroditism in fishes. Copeia, 1987(1), 136-156.

Schaaf, G. R. & Huntsman, W. E. (1994). Simulation of theimpact of fishing on reproduction of protogynous grouper, theGrasby. North American Journal of Fisheries Management, 14,41-52.

Si Poisson levantara la cabeza… Un blog de estadística.Regla de Sturges (2015). Recuperado en marzo de 2015 de:https://fdesnedecor.wordpress.com/2014/08/05/regla-de-sturges/

RELATANDO EXPERIENCIAS DIDÁCTICASSi usted es docente y/o investigador y desea difundir su trabajo en esta sección, contáctese con

María Teresa Ferrero, responsable de la misma. ([email protected])

prácticos para la conservación yaprovechamiento sustentable del principalrecurso pesquero de Santa Cruz: el róbalopatagónico. En vista de ello nos hemos propuestoconsensuar con los concejales de Puerto SantaCruz aquellos aspectos a tener en cuenta para elconcurso de pesca de las doce horas del róbaloque se realiza en nuestra localidad durante el mesde enero de cada año y para la actividad depesca artesanal.

Imaginamos, por ejemplo, que se puedan regularlos tamaños de captura de ejemplares de róbalo,devolver los peces vivos al mar con el menordaño posible y recomendar el uso de redes otrasmallos con un tamaño de malla apropiadocomo para no extraer sistemáticamente aquellosindividuos más grandes que debido alhermafroditismo presente serían casi todoshembras y esto significaría disminuir el potencialreproductivo de la especie.

Una herramienta para poder lograr esto es elestablecimiento de límites de captura mínima ymáxima que pueden ayudar a proteger a losindividuos inmaduros y a los más grandes y viejosde la población. Aún más, creemos que la pescadebería estar limitada a ciertas áreas protegidasdel estuario o establecer zonas de vedareproductiva y cupos de captura.

Dada la amplia distribución geográfica de E.maclovinus, tanto en las costas del Pacífico comodel Atlántico, es importante llevar adelanteinvestigaciones histológicas de los ciclosreproductivos en otras partes de esa distribuciónasí como avanzar en el análisis histológico de lasmuestras de tejido gonadal del róbalo delestuario de Puerto Santa Cruz. Estos estudiosserían importantes para otorgar mayor certeza anuestro descubrimiento a la vez que arrojar más

luz al hecho de si se trata de un fenómeno local osi este tipo de hermafroditismo es la estrategiareproductiva usual de la especie.

Por último, queremos dejar expresado que enninguna etapa de nuestra investigación semaltrató, injurió o se dañaron voluntariamente lospeces a los que pudimos acceder para el estudioen un todo de acuerdo con lo expresado en laLey 14.346 (1954).

Agradecimientos

Queremos expresar nuestro agradecimiento porsu predisposición, tiempo y enseñanza delproceso histológico para obtener los preparadosde gónadas de róbalo al Dr. en CienciasBiológicas Daniel Fernández y al Técnico DanielAureliano del Laboratorio de Ecología, Fisiología yEvolución de Organismos Acuáticos del CADIC-CONICET quienes nos han recibido y tratado demanera muy cordial durante nuestra pasantía enel centro de investigaciones científicas. Tambiéna las profesoras, Analía Álvarez, FernandaCardozo y Melisa Gasparri quienes nos explicaronaspectos importantes que sirvieron para elaborarmejor nuestro trabajo. A los directivos del InstitutoMaría Auxiliadora, el profesor Marcelo Ferrari y laHermana Marta Riccioli por el acompañamiento yapoyo durante la investigación. Al pescadorartesanal de Puerto Santa Cruz, Sr. Tomás Torrespor proveernos de los pescados para nuestrotrabajo y sus conocimientos en el arte de filetear ypor último a nuestras familias que siempre nosapoyaron en todo para poder realizar nuestrainvestigación.

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