Pruebas especiales para el estudio de anemias en hematología

UAPUniversidad Alas Peruanas

Facultad de Ciencias de la Salud Escuela Académica Profesional de Tecnología Médica

II CURSO DE AUTOMATIZACIÓN EN LABORATORIO CLÍNICO Y ANATOMÍA

PATOLÓGICA

Ponente: Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.

TEMA: Pruebas especiales para el estudio de anemias en Hematología

ANEMIASSe define como la disminución de la

concentración de Hb que va acompañado de un descenso del valor de

Hto.

VARONES < 13 g/l

MUJERES < 12 g/l

MENORES DE14 AÑOS < 11 g/l

LA OMS CONSIDERA ANEMIA:

Lic. T.M Silvia Bohytrón Rosario.

PRUEBAS DE ORIENTACIÓN DE DIAGNÓSTICO DE ANEMIAS

RECUENTOS CELULARES GR.

GB., PLAQUETAS,

ÍNDICES ERITROCITARIOS: VCM, HCM,CCM

ESTUDIO DE LÁMINA

PERIFÉRICA.

RECUENTO DE RETICULOCITOS.

Anemia regenerativa

Anemia arregenerativa.


HEMOGRAMA Y RECUENTO DE RETICULOCITOS

• Informa sobre el estado general de las células de la sangre:

Eritrocitos. Leucocitos. Concentración de plaquetas.



ANEMIA ARREGENERATIVA

La médula ósea es incapaz de producir hematíes

por lesión de la célula madre.

Alteración de la maduración eritroblástica.

RETICULOCITOS : Disminuidos.



1) Desaparición de las células progenitoras de hematíes o de todas las líneas medulares granulocitos y plaquetas

anemia aplástica por:

Tóxicos industriales (benceno), drogas (cloranfenicol, dipirona, radiaciones ionizantes) y de causa

desconocida (anemia aplástica primaria).

La médula ósea es incapaz de producir hematíes por

lesión de la célula madre.



2) Las células eritropoyéticas son normales pero

no reciben material suficiente para producir

eritrocitos.

Alteración de la maduración eritroblástica.



El aspirado medular muestra aspectos de los eritrocitos y

destaca la presencia de un síndrome mieloproliferativo,

linfoproliferativo o metástasis neoplásica.

La biopsia ósea es obligada ante sospecha de aplasia o

mielofibrosis.

ANEMIAS MEGALOBLÁSTICA


Obedecen a la carencia de ciertos factores indispensables para la síntesis del ácido

desoxirribonucleico . Debido al déficit de vitamina B12 y ácido fólico.

Puede acompañarse de leucopenia y/o plaquetopenia.


Médula ósea megaloblástica: Hipercelularidad . Se observa aumento de la eritropoyesis. Megaloblatos con disociación núcleo – citoplasma. También se observan hipersegmentación de neutrófilos.

SERIE ROJA• Eritrocitos : disminuidos.• Hipercromía.• Macrocitosis.

SERIE BLANCA

• Hipersegmentación de neutrófilos.• Aumento del tamaño de los

leucocitos.• Leucopenia.

PLAQUETAS• Trombocitopenia.• Macroplaquetas.

Contantes corpusculares

• VCM: Aumentado.• HCM: Aumentado..• CHCM: Normal.

Vitamina B12: Disminuido.

Ácido fólico: Disminuido.

LDH: Aumentado.

Bilirrubina sérica:Aumentado.

Bioquímica


Lám

ina

perif

éric

a

ANEMIAS FERROPÉNICAS


Obedece casi siempre a la pérdida persistente de pequeñas cantidades de hierro.

Suelen aparecer en el curso de procesos inflamatorios o neoplasias


Frotis de sangre periférica en la anemia ferropénica. Eritrocitos pequeños (microcitosis) y pálidos (hipocromía), con leucocitos y plaquetas normales.

SERIE ROJA

• Eritrocitos: Disminuidos. • Anisocitosis.• Hipocromía.• Microcitosis.

SERIE BLANCA

• Normal

PLAQUETAS • Normal.

Contantes corpusculares

• VCM: Disminuido.• HCM: Disminuido.• CHCM: Disminuido.

Hierro sérico: Disminuido.

Transferrina: Aumentado.

Ferritina: Disminuido.

Bioquímica


Lám

ina

perif

éric

a

ANEMIA REGENERATIVA

• Aumento de la eritropoyesis que intenta

compensar el déficit de hemoglobina .

• Obedece a dos causas : hemorragia y hemólisis .


RETICULOCITOS:Aumento

ANEMIA HEMOLÍTICA

Es una manifestación común la destrucción y/o remoción

de los glóbulos rojos de la circulación antes de que se

cumpla su vida media de 120 días.



• Hiperbilirrubinemia, predominio de la fracción indirecta no conjugada.

• Aumento de la LDH sérica con predominio de las isoenzimas LD1 y LD2.

• Disminución de la haptoglobina plasmática o ausencia total de la misma.

• Acortamiento de la vida media eritrocitaria.

ANEMIA REGENERATIVAHemolítica


Anemias Hemolíticas Congénitas

Membranopatías • Esferocitosis hereditaria. (Minkowsky Chauffard)• Eliptocitosis congénita.• Estomatocitosis congénita.• Acantocitosis congénita (Abetalipoproteinemias).

Enzimopatías • Deficiencia de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa.• Déficit de piruvato kinasa.• Otras enzimopatías.

Hemoglobinopatías • Hemoglobinopatía S (anemia drepanocítica o de células falciformes). • Disminución de la síntesis de globina (talasemias).

Defectos en alguno de los componentes estructurales de

la membrana.

GR obtiene energía en forma de ATP mediante la degradación de la glucosa

(glucólisis) la escases de enzimas que intervienen en la glucólisis puede dar lugar a que el GR carezca de energía suficiente para mantener sus funciones intactas.

Alteraciones congénitas de la hemoglobina en una de sus cadenas polipeptídicas

dando lugar a la formación de numerosas hemoglobinas anormales.


Esferocitosis.

MEMBRANOPATÍAS

PRUEBAS DE LABORATORIO PARA MENBRANOPATÍAS


FRAGILIDAD OSMÓTICA

PRUEBA DE HAM - DACIE

PRUEBA DE SACAROSA



• Valora la resistencia de los eritrocitos a soluciones de presión

osmótica decreciente (hipotónicas) en condiciones constantes de Ph y

temperatura.

• Esta prueba evalúa la capacidad que tiene los glóbulos rojos de

soportar un incremento de su contenido acuoso.

• En condiciones normales un eritrocito puede aceptar sin hemolizarse

una entrada de agua de 70% como máximo.


Reactivos:

Solución hipotónica 0.9%

tamponado a pH 7.4.


1. Se suspenden los eritrocitos en soluciones de hipotonía creciente de CINa.

2. Los eritrocitos aumentan su volumen por la penetración de agua para equilibrar la presión osmótica con la del medio.

3. La célula se vuelve esférica y al alcanzar un volumen crítico se rompe.


Nº de tubo

ml. De solución salina al 9% tamponada

ml. De agua destilada

Concentración de la solución (%)

1 3,8 1,2 0,76

2 3,6 1,4 0,72

3 3,4 1,6 0,68

4 3,2 1,8 0,64

5 3,0 2,0 0,60

6 2,8 2,2 0,56

7 2,6 2,4 0,52

8 2,4 2,6 0,48

9 2,2 2,8 0,44

10 2,0 3,0 0,40

11 1,8 3,2 0,36

12 1,6 3,4 0,32

13 1,4 3,6 0,28

14 1,2 3,8 0,24

15 1,0 4,0 0,20

16 0,8 4,2 0,16

PRUEBA

DE HAM – DACIE



En los eritrocitos normales, la acción lítica del

complemento no se desarrolla ni siquiera en

Presencia de suero acidificado , pero en los E-HPN basta

una pequeña disminución del pH

del medio para que dicha acción se desarrolle y

sobrevenga la hemólisis.

PRINCIPIO


PRUEBA DE HAM – DACIE

• Existe una enfermedad en la que los hematíes hemolizan cuando son

incubados en presencia del propio suero o un suero compatible

previamente acidificado. Esta enfermedad se le conoce con el nombre de

HPN en ella existe una alteración adquirida de la membrana.

• En los hematíes normales la acción lítica del complemento no se desarrolla

ni aún en presencia de suero acidificado, pero en los hematíes con HPN

basta una pequeña disminución del Ph para que dicha acción se desarrolle y

sobrevenga hemólisis.

Citrato de sodio


MÉTODO

Para la realización de Ham – Dacie se dispone de 5 tubos de hemólisis que se enumerar del 1 – 5.

1 2 3 4 5

Suero paciente 0,5 ml. 0,5 ml.

Suero paciente control 0,5 ml.

0,5 ml.

0,5 ml.

En el tubo 3 se introduce a Baño maria a 56ºC por 30 minutos.

Hcl 0,2 N a Tº ambiente 50 ul. 50 ul. 50 ul.

Suspensión de GR al 50% de hematíes lavados.

50 ul. 50 ul. 50ul. 50 ul. 50 ul.

Agitar suavemente todos los tubos y colocar a baño maría 37ºC por 1 hora. Centrifugar y observar hemólisis en los tubos 2 y 5


INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

• En condiciones normales no debe observarse hemólisis en ningún tubo.

• Existe HPN si hay hemólisis en los tubos 2 y 5.

PRUEBA

DE LA SACAROSA



PRUEBA DE LA SACAROSA

• Consiste en situar los hematíes problemas en un medio de

baja fuerza iónica .

• Ejm: solución de sacarosa. En este medio, los eritrocitos tienden a fijar el complemento por lo que los glóbulos rojos presentes tienen una sensibilidad anormalmente alta al complemento y lisarse.

Citrato de sodio


Suero Fisiológico Tubo control Tubo problema

Suero fisiológico 0,9 ml.Solución sacarosa 0,9 ml. 0,9 ml.

Sangre control 0,1 ml.Sangre problema 0,1 ml. 0,1 ml.

Agitar suavemente los tubos. Dejar en reposo a una Tº ambiente 3 minutos.

Centrifugar a 2000 rpm por 5 minutos.



• La prueba de la sacarosa sale positiva en la HPN.

• Esta prueba es menos específica que la de Ham – Dacie para el diagnóstico de la HPN, pero en cambio es más sensible y más rápida .


Glóbulo rojo obtiene energía en forma de ATP mediante la degradación de la glucosa (glucólisis) la escasez de

enzimas que intervienen en la glucólisis puede dar lugar a que el GR carezca de energía suficiente para mantener sus

funciones intactas.

ENZIMOPATIAS

Este déficit puede afectar a la vía de Embden – Meyerhof.

Carencia de piruvitoquinasa (PK).Carencia de glucosa – 6 fosfato deshidrogenasa.


Crisis hemolíticas a

consecuencia de sustancias

oxidantes como la de algunos

medicamento antipalúdicos,

antipiréticas, analgésicos, etc.

En determinados alimentos como

las habas (favismo).

Esto origina un acumulo de

peróxido de hidrógeno(H2O2) en el

interior de los eritrocitos.

La oxidación de la hemoglobina hace que se

precipite y formen cuerpos de Heinz.

ENZIMOPATÍAS


HEMOGLOBINOPATIAS

Son alteraciones cualitativas y cuantitativas de la globina, secundarias a mutaciones genéticas

ydan lugar a la formación de hemoglobinas

anormales.Son transmitidas por herencia.


Se debe al reemplazo de una glutamina por una valina en las cadenas polipeptídicas

beta.

HEMOGLOBINA SSe produce la llamada anemia

drepanocítica a la transformación de los eritrocitos

en células falciformes es favorecida por la disminución

del pH y por la hipoxia.

Es típica de la raza negra y puede ser descubierta mediante la electroforesis de

Hb.


Hemoglobina S.


Se producen por defectos genéticos, hay una

disminución de la síntesis de las cadenas alfa.

TALASEMIAS

Mientras que en las beta talasemias se encuentra

disminución de la síntesis de cadenas beta.


Frotis de sangre periférica de un paciente con Talasemia beta mayor. Se observa eritrocitos en diana, hipocrómicos y microcíticos.


DATOS DE LABORATORIO

• Microcitosis e hipocromía• Anisocitosis, dianocitosis,

poiquilocitosis y esquistocitos.• Moderada reticulocitosis• Hierro sérico : Normal.


HEMOGLOBINOPATÍASELECTROFORESIS DE HEMOGLOBINA

Es una técnica que sirve para separar las

moléculas en función de su carga eléctrica

cuando se aplica una corriente eléctrica,

las moléculas cargadas negativamente

(aniones) se desplazan hacia el electrodo

positivo (ánodos).



Como las cadenas polipeptídicas de la globina en

medio básico adquieren una carga eléctrica

negativa, las hemoglobinas se van desplazando

progresivamente hacia el ánodo.



Como las cadenas polipeptídicas de la globina en

medio básico adquieren una carga eléctrica

negativa, las hemoglobinas se van desplazando

progresivamente hacia el ánodo.

Al cabo de cierto tiempo las moléculas se

agrupan entre sí y adoptan aspectos de banda.



• Permite detectar anomalías hemoglobínicas . • La hemoglobinosis se detecta en la

electroforesis debido a la aparición de bandas anormales. Este es el caso de anemias falciformes y de hemoglobina C.


Se debe a la acción de autoAc* que se adhiere a la membrana de

los eritrocitos.

ANEMIAS HEMOLÍTICAS AUTOINMUNES

Si los anticuerpos funcionan en combinación con el complemento

producen una hemólisis directa de los hematíes pero si actúan solos forman unos aglutinados de glóbulos rojos y

son hemolizados.

Los anticuerpos se dividen de acuerdo a su temperatura óptima: calientes (termolisinas)y fríos que pueden ser a su vez hemolisantes

(criolisinas) o aglutinantes (crioaglutinantes).

La aparición de estos anticuerpos es de causa desconocida. Pero algunos antiC* acompañan a colagenosis.

Ejm: Lupus Eritematoso y enfermedades malignas (Leucemia

linfática crónica).


TEST DE COOMBS


Pone de manifiesto la presencia de anticuerpos incompletos

fijados a la membrana eritrocitaria y que causa la

hemólisis.

La prueba de Coombs esta indicada siempre que exista sospecha clínica

de hemolisis por mecanismo inmune (AHAI), anemia hemolítica

medicamentosa, enfermedad hemolítica del recién nacido y

reacción hemolítica postransfunsional .

Cuando la prueba de Coombs es positiva debe investigarse la naturaleza del autoanticuerpo existente IGG o IGM.

TEST DE COOMBS


Hora de despertarse…

¡Muchas Gracias!

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