L11: Reacciones complejas y mecanismos de las reacciones químicas
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REACCIONES
FEBRILES
• SON PRUEBAS DONDE SE DETECTAN ANTICUERPOS EN EL SUERO DEL PACIENTE, ESTÁN DISEÑADAS PARA DETECTAR AQUELLOS ANTÍGENOS QUE PRODUCEN CUADROS QUE CURSAN CON FIEBRE
OBJETIVOIdentificar Ab, Ag si es que estos
se conocen
Observar su cantidad
Contacto con huésped en el pasado
IMPORTANCIA: DETECCIÓN DE LOS ANTICUERPOS ESPECÍFICOS PRODUCIDOS EN EL CURSO DE CADA UNA DE ESTAS PATOLOGÍAS:
Salmonella
Brucella
Rickettsia
SALMONELOSIS • LAS SALMONELLAS SE CONSIDERAN PATÓGENOS
ENTÉRICOS OBLIGADOS. LOS ALIMENTOS Y EL AGUA CONTAMINADOS SON LOS MECANISMOS DE TRANSMISIÓN. LA ENFERMEDAD PUEDE PRESENTARSE COMO GASTROENTERITIS, SEPTICEMIA CON LESIONES EN DIVERSOS ÓRGANOS O FIEBRE TIFOIDEA
BRUCELOSIS • LA BRUCELOSIS SE PRESENTA EN LA MAYORÍA DE LOS CASOS CON ANOREXIA, FIEBRE, DECAIMIENTO Y ESCALOFRÍOS, PUDIENDO APARECER LUEGO COMPLICACIONES IMPORTANTES COMO SON LAS ÓSEAS Y NEUROPSÍQUICAS
RICKETTSIA
• AMPLIA GAMA DE PADECIMIENTOS TRANSMITIDOS POR VECTORES COMO PIOJOS, PULGAS Y GARRAPATAS, CUYO CUADRO CLÍNICO SE CARACTERIZA POR FIEBRE ELEVADA, EXANTEMA Y VASCULITIS.
FUNDAMENTO DEL MÉTODO
EL SUERO DEL PACIENTE SE PONE EN CONTACTO CON ANTÍGENOS ESPECÍFICOS. EN ESTE CASO SE UTILIZAN SUSPENSIONES DE SALMONELLAS O BRUCELLAS MUERTOS. SI LA MUESTRA CONTIENE LOS ANTICUERPOS CORRESPONDIENTES SE PRODUCIRÁ UNA AGLUTINACIÓN VISIBLE MACROSCÓPICAMENTE
REACTIVOS PROVISTOS• ANTÍGENOS FEBRILES SALMONELLA: SUSPENSIÓN EN SOLUCIÓN
SALINA CON CONSERVANTES APROPIADOS, CONTENIENDO LOS SIGUIENTES ANTÍGENOS BACTERIANOS: • - ANTÍGENOS PARATYPHOID A (SALMONELLA, ANTÍGENO FLAGELAR A).• - ANTÍGENOS PARATYPHOID B (SALMONELLA, ANTÍGENO FLAGELAR B). • - ANTÍGENOS TYPHOID H (SALMONELLA, ANTÍGENO FLAGELAR D). • - ANTÍGENOS TYPHOID O (SALMONELLA, ANTÍGENO SOMÁTICO D).
Para detección de fiebre tifoidea es la REACCIÓN DE WIDAL.
• SUSPENSIÓN DE ANTÍGENOS BACTERIANOS (BRUCELLA ABORTUS, CEPA 1119-3) EN SOLUCIÓN FISIOLÓGICA CON CONSERVANTES APROPIADOS. LA CONCENTRACIÓN CELULAR DE LOS ANTÍGENOS SE ENCUENTRA ENTRE EL 4 Y EL 6%. LAS BACTERIAS UTILIZADAS SE ENCUENTRAN EN FASE LISA.
Para detección de fiebre ondulante es la REACCIÓN DE HUDDLESON.
Antígenos Febriles Brucella:
ANTÍGENOS FEBRILES CONTROLES:
• - CONTROL POSITIVO: DILUCIÓN DE SUERO HUMANO INACTIVADO POSITIVO. • - CONTROL NEGATIVO: DILUCIÓN DE SUERO HUMANO NEGATIVO.
REACTIVOS NO
PROVISTOS• SOLUCIÓN FISIOLÓGICA.REACCIÓN DE WEIL-FELIXSe basa en la capacidad del suero del paciente infectado por Rickettsias para aglutinar ciertas
cepas de Proteus
INSTRUCCIONES PARA SU USO
Agitar vigorosamente antes de su
empleo
Llevar a temperatura
ambiente
Los reactivos se proveen listos para
usar
Los reactivos son para uso diagnóstico
“in vitro”
Utilizar los
reactivos guardand
o las precaucio
nes habituale
s
PRECAUCIONES
ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO
• REACTIVOS PROVISTOS: ESTABLES EN REFRIGERADOR (2-10° ), HASTA LA FECHA DE VENCIMIENTO INDICADA EN LA CAJA.
Suero
Recolección
Aditivos
Sustancias
interferentes
conocidas
Estabilidad e instrucciones
de almacenamie
nto
Muestra
Placa de vidrio y
micropiopetas
Varilla y cronómetro
MATERIAL REQUERIDO
Tubos de hemólisis
PROCEDIMIENTO(EN PLACA Y TUBO)
TÉCNICA RÁPIDA EN PLACA
Colocar en una placa:
50 μl de suero + 50 μl de
suspensión de Ag.
Mezclar y agitar en forma circular
durante 2 minutos
Observar la presencia o ausencia de aglutinación.
TITULACIÓN RÁPIDA EN PLACA
Dividir una placa
en sectores y rotular
Colocar 80, 40, 20, 10 y 5 μl de suero
(0.04ml)Repetir para
control positivo y negativo.
Colocar 1 gota de
Ag previamen
te homogene
izado.
TITULACIÓN RÁPIDA EN PLACA
Mezclar utilizand
o una varilla
distinta.
Agitar la placa
durante 2 minutos en
forma circular
Observar la
aglutinación.
MÉTODO DE AGLUTINACIÓN EN TUBO
1) NUMERAR SIETE TUBOS DEL UNO AL SEIS Y UN TESTIGO (T) PARA CADA ANTÍGENO.
2) ADICIONAR 0.9 ML DE SOLUCIÓN SALINA AL TUBO 1 Y 0.5 A LOS RESTANTES
3) AGREGAR 0.1 ML DE SUERO PROBLEMA AL TUBO 1. MEZCLAR Y PASAR 0.5 ML AL TUBO DOS Y ASÍ SUCESIVAMENTE HASTA EL 6 ELIMINANDO 0.5ML DE ESTA ULTIMA DILUCIÓN. OBTENEMOS DILUCIONES 1:10, 1:20, 1:40, 1:80, 1:160 Y 1:320.
MÉTODO DE AGLUTINACIÓN EN TUBO
4) ADICIONAR 0.3 ML DE ANTÍGENO DILUIDO PREVIAMENTE 1:20 CON SOLUCIÓN SALINA EN CADA TUBO.
5) AGITAR E INCUBAR EN BAÑO MARÍA.6) TOMAR DOS O TRES TUBOS A LA VEZ, AGITARLOS
LIGERAMENTE FRENTE UNA FUENTE DE LUZ QUE ILUMINE LAS PARTÍCULAS BUSCANDO SEDIMENTACIÓN DE GRUMOS.
VALORES DE REFERENCIA
1:40 – 1:80 Sospechosos
de Enfermedad
Mayor de 1:80
acompañados de
sintomatología clínica:
Considerarse probatorios
Mayores 1:320
Concluyentes
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
• SUSTANCIAS INTERFERENTES:
Individuos Inmunizados por vacuna tifoidea
Reacciones inespecíficas para pacientes con
influenza, enfermedad hepática crónica y consumidores de
narcóticos
Antígenos de Brucella pueden dar reacciones cruzadas en individuos
vacunados contra cólera