s Pneumoniae Aspectos Microbiologicos
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Lic. Edgar Gonzales EscalanteLic. Edgar Gonzales EscalanteTECNÓLOGO MÉDICOTECNÓLOGO MÉDICO
Instituto Nacional de Salud del Instituto Nacional de Salud del NiñoNiño
• Streptococcus pneumoniae: es la bacteria lider en la infección en todo el mundo– Colonización asintomatica
– Infecciones comunes (otitis media, …)
– Infeciones que amenazan la vida (sepsis, meningitis, …)
• A pesar de la introducción de los medicamentos antimicrobianos durante las últimas décadas, sigue siendo una amenaza significativa para la salud
No invasiva otitis (25-50%) sinusitis Bronquitis
recurrente
Invasiva neumonia sepsis meningitis
Neumonia neumocócica
ALTA MORTALIDAD1ra Causa de muerte en enfermedades infeciosas
En 2002: 2,1 millones de muertes por neumonía neumocócica, que 1,5 en niños menores de cinco años de edad
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<2 2-4 5-9 10-14 15-24 25-34 35-44 45-54 55-64 65-74 >75
Age groups (years)
Annual rate of PID per 100,000
• Exclusivamente patógeno humano
• Parte de la flora microbiana normal del tracto respiratorio superior
• Transmisión: por las secreciones de gota
• Patrón temporal: invierno-primavera
Colonización del tracto respiratorio
Replicación en la nasofaringe
Extención a zonas adyacentes
neumonia otitis media sinusitis
meningitisSangre
• Inicialmente fue denominado “microbio septicémico de la saliva” por Pasteur y Micrococcus pasteuri por Sternberg en 1881, año en el cual ambos investigadores lo aislaron por primera vez.
• En 1886, este microorganismo fue denominado neumococo por Fraenkel debido a que causaba enfermedad pulmonar.
• Posteriormente, según sugerencia de Weichselbaum, en 1920, fue denominado Diplococcus pneumoniae debido a su morfología,
• En 1974, en la octava edición del Manual de Bacteriología de Bergey, el neumococo fue denominado Streptococcus pneumoniae (Chester 1901), denominación aún vigente.
• Streptococcaceae: cocos Gram positivos, anaerobios facultativos, catalasa negativa y citocromo-oxidasa negativa.
• Alfa-hemolíticos en sangre de carnero
• Encapsuladas, con morfología de diplococos lanceolados, con 0,5 a 1,25 μm de diámetro, arregladas en pares o en cadenas cortas (división en un plano), inmóviles, no formadores de esporas.
Agar Sangre de Carnero Agar Chocolate
Siembra por dispersión agotamiento
Incubación:◦Temperatura:
35ºC◦Tiempo: 24 -48 h◦Requerimiento :
CO2 5%
• La variante morfológica más frecuentemente aislada en personas infectadas es la forma “lisa” de Griffith, que se presenta encapsulada, con los márgenes lisos y cuyas colonias tienen una apariencia de tipo mucosa.
• Fue precisamente Griffith, quien, en 1928, puso de manifiesto que la cápsula es el principal factor de virulencia. Mediante la inoculación a ratones de neumococos encapsulados (estirpe lisa) y no capsulados (estirpe rugosa), encontró que los animales tratados con la forma encapsulada morían, mientras que la inyección de la estirpe rugosa era inocua.
• Las colonias jóvenes de neumococo y del estreptococo viridans α-hemolítico aparecen levantadas; sin embargo, después de 24 a 48 horas, el centro de las colonias de neumococos se vuelve deprimido, mientras las colonias de estreptococo viridans conservan su apariencia
La optoquina (hidrocloruro de etilhidrocupreína)
susceptible en bajas concentraciones (5μg o menos)
La optoquina puede inhibir otros α-hemolíticos , pero en concentraciones altas.
Incubación 20-24 hs 35°C y 5% CO2
5μg
10mm
6mm
5μg
DISCO 6 mm
S: ≥ 14 mm = S. pn
9-13 mm= P. Solubilidad
DISCO 10mm
S: ≥ 16 mm = S. pn< 16 mm = P. Solubilidad
17 mm
Las sales de bilis (desoxicolato y el taurocolato de sodio) tienen la capacidad de lisar S. pneumoniae, cuando en solución se adicionan a una suspensión de microorganismos (suspensión realizada a partir de un cultivo fresco de S. pneumoniae de 18- 24 horas en agar sangre ovina al 5%).
S. pneumoniae produce enzimas autolíticas que son las responsables de la característica umbilicada de la colonia en cultivos viejos. La adición de la solución de sales de bilis a la suspensión de la bacteria, acelera el proceso de lisis; proceso asociado con la disminución de la tensión superficial entre el medio y la membrana celular bacteriana.
Solubilidad en bilis
0.5 McFarland
0.25 mL
0.25mLSS 0.25 mL desoxicolato sodio 2%
INCUBACIÓN35°C/ 2h
Manual de Laboratorio para la identificacion y prueba de susceptibilidad a los antimicrobianos. CDC, Atlanta, Georgia.2004
Identificación de S. pneumoniae
Cultivo puro
Identificación de Streptococcus pneumoniae
Solubilidad en bilis
INTERPRETACIÓN
INHIBICIÓN DE LA TURBIDEZ S. pneumoniae
1 gota desoxicolato al 10%
Desaparición de la colonia
10 min
¿Que hacemos si esta con antibióticos? Si es positivo al gram y no crece el cultivo
Por 6 proteínas de unión a penicilina (PBP): Mutaciones del ADN por uso indiscriminado
de ATB Incorporación de genes de S. viridans
(faringe) R a Penicilina: PBPs 2X, 2B, IA R a Cefotaxima: PBPs 2X, IA Operón Mur-MN codifica R a Penicilina
(Tomasz A, Corso A y col.: Drug Resist. 1998)
Alteración sitio blanco (MLS) por metilación del ribosoma (Resistencia a eritromicina, azitromicina, claritromicina, lincosamidas y estreptograminas)
Mecanismo de eflujo (M) (Resistencia a eritromicina, azitromicina y claritromicina)
Modificación en el sitio blanco:
DNA girasa, topoisomerasa
Total 2007 2008 2009
Sangre 42 13 16 11
Vagina 26 14 5 5
Respiratorios 21 4 8 9
Líquidocefalo-raquideo
14 4 7 3
Orina 9 1 5 2
Total 112 36 41 30
Nombre del antibiótico
Puntos de corte
N° %R %I %S %NS
Cloramfenicol S >= 21 110 18.2 0 81.8
Eritromicina 16 - 20 114 22.8 4.4 72.8
Oxacilina S >= 20 109 0 0 52.3 47.7
Trimetoprima/Sulfametoxazol
16 - 18 88 55.7 5.7 38.6
Vancomicina S >= 17 129 0 0 96.1 3.9