Segunda parte - Laboratorio de Genética Molecular...DESTRUCCIÓN DE TEJIDO CONECTIVO Y HUESO...

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CURSO DE MICROBIOLOGÍA Alta especialidad en implantología Segunda parte Dra. Laurie Ann Ximénez-Fyvie Mtra. Adriana Patricia Rodríguez-Hernández Laboratorio de Genética Molecular División de Estudios de Posgrado e Investigación Facultad de Odontología, UNAM

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CURSO DE MICROBIOLOGÍA Alta especialidad en implantología

Segunda parte

Dra. Laurie Ann Ximénez-Fyvie Mtra. Adriana Patricia Rodríguez-Hernández

Laboratorio de Genética Molecular División de Estudios de Posgrado e Investigación

Facultad de Odontología, UNAM

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Antígenos

LPS

Citocinas

MPMs

CAMBIOS CLÍNICOS

RETO MICROBIANO

S.I. Innato

S.I. Humoral

RESPUESTA INMUNOLÓGICA

DESTRUCCIÓN DE TEJIDO CONECTIVO

Y HUESO

FACTORES EXÓGENOS

FACTORES ENDÓGENOS

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Moléculas iniciadoras

Endotoxinas Bacterianas: •LPS (Gram -) •AT y/o ALT (Gram +) •Peptidoglicano (Gram - y +)

Moléculas mediadoras

Citocinas: •TNF •IL-1α •IL-1β •IL-1ra •IL-6 •IL-8 •LT α •IL-12 •IL-10

Lisis Bacteriana LPS Proteína de Adherencia de los LPS (PAL)

Complejo LPS-PAL

CD14

+

Macrófagos, Monocitos, Neutrófilos

Producción de TNFα, TNFβ, IL-1α, IL-1β, IL-ra, IL-6, IL-8, IL-12, FAP, etc.

Activación del Complemento

Producción de Prostaglandinas y

Leucotrienos

Activación de la Cascada de la Coagulación

Activación de Células Endoteliales, Fibroblastos y Osteoclastos Producción de MMPs

DESTRUCCIÓN DE TEJIDO CONECTIVO Y HUESO

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Socransky & cols. J Clin Periodontol 1998

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Socransky & cols. J Clin Periodontol 1998

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DIFERENCIACIÓN DE ESPECIES SUBGINGIVALES

PATÓGENOS

BENÉFICOS

A. actinomycetemcomitans P. gingivalis T. forsythia T. denticola

PATÓGENOS PUTATIVOS

C. rectus P. intermedia P. nigrescens S. noxia E. nodatum P. micra F. nucleatum E. corrodens S. intermedius

Actinomyces sp. (A. naeslundii, A. israelii) Streptococcus sp. (S. sanguinis, S. oralis) Capnocytophaga sp. (C. sputigena, C. gingivalis) Veillonella sp. (V. parvula, V. atypica)

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ENFERMEDADES PERIODONTALES DESTRUCTIVAS

AUMENTO DE

ESPECIES PATÓGENAS

DISMINUCIÓN DE

ESPECIES BENÉFICAS

FACTORES DEL

HUESPED

FACTORES

AMBIENTALES + + +

A. actinomycetemcomitans T. forsythia T. denticola P. gingivalis P. intermedia F. nucleatum P. nigrescens

A. viscosus C. ochracea S. oralis S. sanguinis A. naeslundii V. parvula C. gingivalis

Factores genéticos Enfermedades sistémicas

Tabaquismo Stress

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COMPOSICIÓN MICROBIOLÓGICA SUBGINGIVAL EN SALUD Y ENFERMEDAD

PERIODONTAL

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CARACTERÍSTICA CLÍNICAS DE LA POBLACIÓN

Periodontitis (n=44) Media ± EEM Rango

Sanos (n=20) Media ± EEM Rango

Edad (años) *** No. dientes faltantes *** Género (% mujeres) Profundidad de bolsa (mm) *** Nivel de inserción (mm) ***

44.9 ± 1.7

3.5 ± 0.3

61.4

3.9 ± 0.2

4.2 ± 0.2

31-75

0-8

2.3-7.4

2.7-9.0

27.5 ± 1.3

1 ± 0.3

45

2 ± 0.03

2 ± 0.03

22-51

0-4

1.7-2.3

1.7-2.3

% de sitios con: Acumulación de placa *** Enrojecimiento gingival *** Sangrado al sondeo *** Supuración ***

51.9 ± 5.7

27.5 ± 5.3

47 ± 3.9

6.1 ± 1.3

0-100

0-100

4.5-100

0-36.9

11.7 ± 3.7

3.6 ± 2.2

2.7 ± 1.1

0 ± 0

0-72

0-38

0-22.7

0

*** p < 0.001 prueba de Mann-Whitney Ximenez-Fyvie, et al. J Periodontol 2006

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OBJETIVO

Definir y comparar la composición microbiológica de la placa dentobacteriana subgingival en sujetos mexicanos periodontalmente sanos y con periodontitis crónica

Ximenez-Fyvie, et al. J Periodontol 2006

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MICROBIOLÓGICA CLÍNICA

Detección y cuantificación de 40 especies bacterianas utilizando la técnica de “checkerboard” para hibridaciones DNA-DNA

28 muestras de placa subgingival de cada paciente (sitios MV)

•P.B. (x 2, mm) •N.I. (x 2 mm) •Acumulación de Placa (0/1) •Enrojecimiento gingival (0/1) •Sangrado al Sondeo (0/1) •Supuración (0/1)

En 168 sitios de cada paciente (6 sitios por diente)

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ESPECIES EVALUADAS Especie Cepa Especie Cepa

Aggregatibacter actinomycetemcomitans * Parvimonas micra 33270

Actinomyces georgiae 49285 Neisseria mucosa 19696

Actinomyces israelii 12102 Porphyromonas endodontalis 35406

Actinomyces naeslundii stp. 1 12104 Porphyromonas gingivalis 33277

Actinomyces odontolyticus 17929 Prevotella intermedia 25611

Actinomyces viscosus 43146 Prevotella melaninogenica 25845

Campylobacter gracilis 33236 Prevotella nigrescens 33563

Campylobacter rectus 33238 Propionibacterium acnes 6919

Campylobacter showae 51146 Selenomonas artemidis 43528

Capnocytophaga gingivalis 33624 Selenomonas noxia 43541

Capnocytophaga ochracea 27872 Streptococcus anginosus 33397

Capnocytophaga sputigena 33612 Streptococcus constellatus 27823

Corynebacterium matruchotii 14266 Streptococcus gordonii 10558

Eikenella corrodens 23834 Streptococcus intermedius 27335

Eubacterium saburreum 33271 Streptococcus mitis 49456

Eubacterium sulci 35585 Streptococcus oralis 35037

Fusobacterium nucleatum ** Streptococcus sanguinis 10556

Fusobacterium periodonticum 33693 Tannerella forsythia 43037

Gemella morbillorum 27824 Treponema denticola 35405

Leptotrichia buccalis 14201 Veillonella parvula 10790

* serotipos a: 43717 y b: 43718 ** subespecies nucleatum: 25586, polymorphum: 10953 y vincenti: 49256

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11 12 13 14 15 16 17 21 22 23 24 25 26 27 31 32 33 34 35 36 37 41 42 43 44 45 46 47 105 106

SONDAS DE DNA

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2

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10

12

14

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05

Salud Periodontitis

RESULTADOS

Cuentas Bacterianas Promedio (n=1,617 muestras)

* p < 0.05 *** p < 0.001 Prueba U de Mann-Whitney

Ximenez-Fyvie, et al. J Periodontol 2006

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RESULTADOS

Proporción Promedio (n=1,617 muestras)

0

2

4

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10

12

14

16

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A. v

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DN

A

Salud Periodontitis

** p < 0.01 *** p < 0.001 Prueba U de Mann-Whitney

Ximenez-Fyvie, et al. J Periodontol 2006

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* p < 0.05 *** p < 0.001 U de Mann Whitney

Salud periodontal (n= 20)

Periodontitis crónica (n= 44)

31.73

9.26

6.806.32

14.83

6.32

3.43

21.31

8.48

5.94

7.02

16.55

15.76

2.57

22.91 20.77

***

*

No agrupados

Actinomyces Otros

Ximenez-Fyvie, et al. J Periodontol 2006

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NI ≤ 3 mm (n=390)

23.13

8.12

6.27

7.6111.85

6.64

24.26

0.83

NI 4-5 mm (n=464)

19.89

7.95

4.24

5.49

15.80

15.50

20.20

1.66

** p < 0.01 *** p < 0.001 Kruskal-Wallis

Periodontitis crónica

NI ≥ 6 mm (n=224)

12.63

5.07

3.64

3.74

21.3426.43

20.18

2.03

**

*** ***